Протокол спасения эмбрионов для межвидовой гибридизации в сквоше

Резюме

В статье описан протокол спасения эмбрионов для регенерации незрелых эмбрионов, полученных в результате межвидовой гибридизации Cucurbita pepo и Cucurbita moschata. Протокол может быть легко воспроизведен и станет важным ресурсом для программ разведения сквоша.

Аннотация

Межвидовая гибридизация в культурах Кукурбита (тыква) желательна для расширения генетической изменчивости и для интрогрессии полезных аллелей. Незрелые эмбрионы, полученные из этих широких скрещиваний, должны быть регенерированы с использованием соответствующих методов спасения эмбрионов. Хотя этот метод хорошо зарекомендовал себя для многих культур, подробное описание соответствующей методологии для кабачков, которая позволила бы его рутинное применение, отсутствует. Здесь мы опишем протокол спасения эмбрионов, полезный для межвидовой гибридизации C. pepo и C. moschata. Для выявления жизнеспособных комбинаций для спасения эмбрионов было выполнено 24 межвидовых скрещивания. Набор фруктов был получен из двадцати двух крестов, что указывает на 92% успеха. Однако большинство полученных плодов были партенокарпическими, с семенами, лишенными эмбрионов (пустые семена). Только одна перекрестная комбинация содержала незрелые эмбрионы, которые могли быть регенерированы с использованием базальных питательных сред растений. В общей сложности 10 эмбрионов были спасены из межвидового плода F₁ , и показатель успеха спасения эмбрионов составил 80%. Разработанный здесь протокол спасения эмбрионов будет полезен для межвидовой гибридизации в программах разведения сквоша.

Введение

Cucurbita (2n = 40) является очень разнообразным родом в семействе Cucurbitaceae, который содержит 27 различных видов, из которых пять одомашнены¹. Среди них Cucurbita moschata, C. pepo и C. maxima являются наиболее экономически важными во всем мире. В США C. moschata и C. pepo являются двумя наиболее важными видами в сельскохозяйственном производстве. C. pepo состоит из четырех подвидов (ovifera, pepo, fraternal и gumala), которые содержат как летние, так и зимние сортовые группы кабачков: кривошея, прямой шеи, желудя, гребешка, кокозель, кабачок, кабачки....

протокол

1. Посадка и опыление

ПРИМЕЧАНИЕ: Важно определить совместимые генотипы, гибридизация которых приведет к завязыванию плодов и производству жизнеспособных эмбрионов.

1. Условия посадки и техническое обслуживание
   1. Получение семян генотипов кабачков (сортов/приращений) для гибридизации (табл. 1).
   2. Заполните 50-ячейковые стартовые плоскости (ширина 25 см x длина 50 см) горшечной средой, дополненной полным удобрением NPK, содержащим 1,38 г/кг N, 1,38 г/кг P и 1,38 г/кг K.
   3. Посейте семена на глубину, равную их длине, и засыпьте горшечной средой. Поливайте квартиры, не создавая сто....

Результаты

Набор плодов и жизнеспособность семян
Первоначальное испытание было проведено для определения набора плодов и жизнеспособности семян в различных перекрестных комбинациях. Всего было выбрано 15 генотипов кабачков, четыре C. pepo и 11 C. moschata (таблица 1). Из 24 попы.......

Обсуждение

Существует два основных узких места для успешной межвидовой гибридизации между C. moschata и C. pepo: барьер перекрестной совместимости, который определяется реакцией генотипа на получение гибридных эмбрионов, и барьеры постоплодотворения, которые препятствуют развитию гибридных ?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
ampicillin	Fisher Scientific	BP1760-5
autoclave	Steris	AMSCO LAB 250
balance
cefotaxime	Sigma Alfrich	C 7039
centrifuge tubes (1.5 ml)	Sigma Alfrich	T9661
detergent
ethanol, 95%	Decon Labs	2805HC
forceps	VWR	82027-408
gellan gum	Caisson Laboratories	G024
growth chamber or illuminated shelf
laminar hood / biosafety cabinet	The Baker Company, Inc	Edgegard
masking tape	Uline	S-11735
media bottle
Murashige & Skoog Medium	Research Products International	M10200
NPK fertilizer (20-20-20)	BWI Companies, Inc	PR200
Osmocote Plus fertilizer	BWI Companie,s Inc	OS90590
Parafilm M	Sigma Alfrich	P7793
Petri dish (60 x 15 mm)	USA Scientific, Inc	8609-0160
plant pots	BWI Companies, Inc	NP4000BXL
plastic food containers, reused	Oscar Mayer	4470003330
plastic hang tags	Amazon	B07QTZRY6T
potting mix	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
seedling starter trays	BWI Companies Inc	GPPF128S4
syringe filter (0.22 um )	ExtraGene	B25CA022-S
trellis support	The Home Depot	2A060006
water bath