Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Özet

Burada, bir keçi bağırsağında histidinin membran taşınmasını gösteren ucuz ve tekrarlanabilir bir yöntem sunulmaktadır. Bu işlem, enterosit zarı boyunca sodyum gradyanı tarafından sağlanan histidin ve sodyum iyonlarının birlikte taşınmasıyla gerçekleşir. Bu yöntem, biyolojik zarlar boyunca çözünen madde hareketini daha iyi anlamak için deneyimsel öğrenme pedagojisinden yararlanır.

Özet

Histidin, aynı zamanda bağışıklık sistemi, pulmoner ventilasyon ve vasküler dolaşımda rol oynayan metabolitlerin öncüsü olan esansiyel bir amino asittir. Diyetteki histidinin emilimi, büyük ölçüde, enterositin apikal zarında bulunan Geniş nötr amino asit taşıyıcısı(B0AT) tarafından sodyuma bağlı nötr amino asit taşınmasına dayanır. Burada, histidinin bağırsak villus enterositleri tarafından lümenden emilimini keçi jejunal inverted keseleri kullanarak gösteriyoruz. Değişen konsantrasyonlarda sodyum ve histidine maruz kalan jejunal keseler, zamanın bir fonksiyonu olarak keselerin içindeki histidin konsantrasyonunu belirlemek için test edildi. Sonuçlar aktif histidin emilimini göstermektedir. Tuz konsantrasyonunun arttırılması, histidinin daha yüksek emilimine neden oldu, bu da keçi bağırsağı ters çevrilmiş keselerinde sodyum ve histidin emiliminin bir sempatik olduğunu düşündürdü. Bu protokol, amino asitlerin veya diğer metabolitlerin bağırsak hareketliliğini uygun modifikasyonlarla görselleştirmek için uygulanabilir. Bu deneyi, lisans öğrencilerinin membran taşınımı kavramını anlamalarına yardımcı olabilecek deneyimsel bir pedagojik araç olarak öneriyoruz.

Giriş

Biyolojik hücreler, hücre içi sitosollü hücre dışı içerikten ayıran bir zar lipid çift tabakası ile çevrilidir. Membran, çözünen maddelerin1 hareketini düzenleyen yarı geçirgen bir bariyer görevi görür. Biyolojik zarlar boyunca taşıma, bir çözünen maddenin konsantrasyonu ve yükü dahil olmak üzere çeşitli faktörlere bağlı olan bir çözünen maddenin geçirgenlik katsayısından etkilenir. Genel olarak, çözünen maddeler üç mekanizma kullanarak zar boyunca hareket eder (Şekil 1): Pasif difüzyon, kolaylaştırılmış difüzyon ve aktif taşıma2. Basit difüzyon, çözünür, yü....

Protokol

Tüm adımlarla birlikte protokolün tamamı, Şekil 4'te şematik bir diyagram olarak gösterilmiştir. Yöntem, sıçan bağırsakları8 kullanılarak yapılan önceki bir çalışmadan uyarlanmıştır. Deney, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada kullanılan örnekler ticari bir satıcıdan temin edilmiştir.

DİKKAT: Bu deney sırasında eldiven giyin.

1. Ters Jejunum keselerinin hazırlanması

  1. Keçi jejunumunu ön işlemden geçirin ve temizleyin.
    1. Taze kurban edilmiş sağlıklı bir keçinin bağır....

Temsili Sonuçlar

Histidinin bağırsak villusları tarafından ters çevrilmiş keselerin lümenine emilmesi yoluyla histidinin bağırsak hareketliliğini göstermek için deneysel iş akışı Şekil 4, Tablo 1 ve Tablo 2'de gösterilmektedir. Üç bağımsız deney düzeneği gerçekleştirildi ve temsili veriler Şekil 6'da sunuldu.

Verilen deneysel koşullar altında, Pauly'nin r.......

Tartışmalar

Membran taşınımı, temel veya uygulamalı tüm büyük biyolojik bilim disiplinlerinin lisans öğrencilerine öğretilen en temel kavramlardan biridir. Geleneksel olarak, zarlar arasındaki hareket, radyoaktif izotoplarla etiketlenmiş metabolitler kullanılarak görselleştirilmiştir. Ancak, bu yöntemler son derece tehlikelidir ve öğretme veya öğrenme için uygun değildir. Deneyimsel öğrenme, bu tür karmaşık kavramları anlamak için en iyi pedagojik teknik olsa da, alty.......

Açıklamalar

Yazarların rekabet eden finansal çıkarları veya diğer çıkar çatışmaları yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Delhi Üniversitesi, Sri Venkateswara Koleji, Biyokimya Bölümü tarafından desteklenmiştir. Yazarlar laboratuvar personeline destekleri için teşekkür eder.

....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL Microcentrifuge TubesTARSONS500020
10 mL Test TubesBOROSIL9800U04
50 mL Sterile Falcon TubesTARSONS546041
500 mL BeakerBOROSIL10044977
500 mL Conical FlaskBOROSIL691467
D-GlucoseSRL42738
Digital SpectrophotometerSYSTRONICS2710
EthanolEMSURE1009831000
FinpipettesTHERMOFISHER4642090
Glass Stirrer RodBOROSIL9850107
L-Histidine SRL17849
NaClSRL41721
Nitrile GlovesKIMTECH112-4847
Petri Dish TARSONS460090
Phosphate Buffered Saline (ph 7.4)SRL95131
Pipette TipsABDOSP10102
Sodium CarbonateSRL89382
Sodium Nitrate SRL44618
Sodium Phosphate Dibasic (anhydrous)SRL53046
Sodium Phosphate Monobasic (anhydrous)SRL22249
Sulphanilic Acid SRL15354

Referanslar

  1. Nelson, D. L., Cox, M. M. . Lehninger Principles of Biochemistry. , (2017).
  2. Stillwell, W. Membrane Transport. An Introduction to Biological Membranes. , (2013).
  3. Fick, A. V.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

This article has been published

Video Coming Soon

Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz

Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.