Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Burada, bir keçi bağırsağında histidinin membran taşınmasını gösteren ucuz ve tekrarlanabilir bir yöntem sunulmaktadır. Bu işlem, enterosit zarı boyunca sodyum gradyanı tarafından sağlanan histidin ve sodyum iyonlarının birlikte taşınmasıyla gerçekleşir. Bu yöntem, biyolojik zarlar boyunca çözünen madde hareketini daha iyi anlamak için deneyimsel öğrenme pedagojisinden yararlanır.
Histidin, aynı zamanda bağışıklık sistemi, pulmoner ventilasyon ve vasküler dolaşımda rol oynayan metabolitlerin öncüsü olan esansiyel bir amino asittir. Diyetteki histidinin emilimi, büyük ölçüde, enterositin apikal zarında bulunan Geniş nötr amino asit taşıyıcısı(B0AT) tarafından sodyuma bağlı nötr amino asit taşınmasına dayanır. Burada, histidinin bağırsak villus enterositleri tarafından lümenden emilimini keçi jejunal inverted keseleri kullanarak gösteriyoruz. Değişen konsantrasyonlarda sodyum ve histidine maruz kalan jejunal keseler, zamanın bir fonksiyonu olarak keselerin içindeki histidin konsantrasyonunu belirlemek için test edildi. Sonuçlar aktif histidin emilimini göstermektedir. Tuz konsantrasyonunun arttırılması, histidinin daha yüksek emilimine neden oldu, bu da keçi bağırsağı ters çevrilmiş keselerinde sodyum ve histidin emiliminin bir sempatik olduğunu düşündürdü. Bu protokol, amino asitlerin veya diğer metabolitlerin bağırsak hareketliliğini uygun modifikasyonlarla görselleştirmek için uygulanabilir. Bu deneyi, lisans öğrencilerinin membran taşınımı kavramını anlamalarına yardımcı olabilecek deneyimsel bir pedagojik araç olarak öneriyoruz.
Biyolojik hücreler, hücre içi sitosollü hücre dışı içerikten ayıran bir zar lipid çift tabakası ile çevrilidir. Membran, çözünen maddelerin1 hareketini düzenleyen yarı geçirgen bir bariyer görevi görür. Biyolojik zarlar boyunca taşıma, bir çözünen maddenin konsantrasyonu ve yükü dahil olmak üzere çeşitli faktörlere bağlı olan bir çözünen maddenin geçirgenlik katsayısından etkilenir. Genel olarak, çözünen maddeler üç mekanizma kullanarak zar boyunca hareket eder (Şekil 1): Pasif difüzyon, kolaylaştırılmış difüzyon ve aktif taşıma2. Basit difüzyon, çözünür, yü....
Tüm adımlarla birlikte protokolün tamamı, Şekil 4'te şematik bir diyagram olarak gösterilmiştir. Yöntem, sıçan bağırsakları8 kullanılarak yapılan önceki bir çalışmadan uyarlanmıştır. Deney, kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada kullanılan örnekler ticari bir satıcıdan temin edilmiştir.
DİKKAT: Bu deney sırasında eldiven giyin.
1. Ters Jejunum keselerinin hazırlanması
Histidinin bağırsak villusları tarafından ters çevrilmiş keselerin lümenine emilmesi yoluyla histidinin bağırsak hareketliliğini göstermek için deneysel iş akışı Şekil 4, Tablo 1 ve Tablo 2'de gösterilmektedir. Üç bağımsız deney düzeneği gerçekleştirildi ve temsili veriler Şekil 6'da sunuldu.
Verilen deneysel koşullar altında, Pauly'nin r.......
Membran taşınımı, temel veya uygulamalı tüm büyük biyolojik bilim disiplinlerinin lisans öğrencilerine öğretilen en temel kavramlardan biridir. Geleneksel olarak, zarlar arasındaki hareket, radyoaktif izotoplarla etiketlenmiş metabolitler kullanılarak görselleştirilmiştir. Ancak, bu yöntemler son derece tehlikelidir ve öğretme veya öğrenme için uygun değildir. Deneyimsel öğrenme, bu tür karmaşık kavramları anlamak için en iyi pedagojik teknik olsa da, alty.......
Yazarların rekabet eden finansal çıkarları veya diğer çıkar çatışmaları yoktur.
Bu çalışma, Delhi Üniversitesi, Sri Venkateswara Koleji, Biyokimya Bölümü tarafından desteklenmiştir. Yazarlar laboratuvar personeline destekleri için teşekkür eder.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL Microcentrifuge Tubes | TARSONS | 500020 | |
10 mL Test Tubes | BOROSIL | 9800U04 | |
50 mL Sterile Falcon Tubes | TARSONS | 546041 | |
500 mL Beaker | BOROSIL | 10044977 | |
500 mL Conical Flask | BOROSIL | 691467 | |
D-Glucose | SRL | 42738 | |
Digital Spectrophotometer | SYSTRONICS | 2710 | |
Ethanol | EMSURE | 1009831000 | |
Finpipettes | THERMOFISHER | 4642090 | |
Glass Stirrer Rod | BOROSIL | 9850107 | |
L-Histidine | SRL | 17849 | |
NaCl | SRL | 41721 | |
Nitrile Gloves | KIMTECH | 112-4847 | |
Petri Dish | TARSONS | 460090 | |
Phosphate Buffered Saline (ph 7.4) | SRL | 95131 | |
Pipette Tips | ABDOS | P10102 | |
Sodium Carbonate | SRL | 89382 | |
Sodium Nitrate | SRL | 44618 | |
Sodium Phosphate Dibasic (anhydrous) | SRL | 53046 | |
Sodium Phosphate Monobasic (anhydrous) | SRL | 22249 | |
Sulphanilic Acid | SRL | 15354 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
ISSN 2578-2037
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır
Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz
Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.