JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokol, çevresel kirleticileri taramak için bir okuma olarak bir nükleer reseptöre bağlanan belirli bir floresan probun floresan polarizasyonunu kullanan yüksek verimli bir tarama sistemini tanımlar.

Özet

Çevrede artan seviyelerde bileşikler tespit edilmiş, yaygın kirliliğe neden olan ve insan sağlığı için risk oluşturan bileşikler tespit edilmiştir. Bununla birlikte, yüksek çevresel oluşumlarına rağmen, toksikolojik etkileri hakkında çok sınırlı bilgi vardır. Toksikolojik çalışmalara rehberlik etmek için yüksek verimli tarama (HTS) yöntemlerinin geliştirilmesi acildir. Bu çalışmada, çevresel kirleticilerin nükleer reseptörler üzerindeki bağlanma potansiyelini belirlemek için bir HTS sistemi kullanan bir reseptör-ligand bağlanma testi geliştirilmiştir. Test, belirli bir floresan probun floresan polarizasyonunu (FP) ölçerek bir mikroplaka okuyucu (yani çeşitli kimyasallar içeren 96 oyuklu bir plaka) kullanılarak gerçekleştirilir. Bu test dört bölümden oluşur: rekombinant vektörlerin inşası ve dönüşümü, reseptör proteininin ekspresyonu ve saflaştırılması (ligand bağlama alanı), reseptör-prob bağlanması ve kimyasalların reseptör ile rekabetçi bağlanması. İki çevresel kirleticinin, perflorooktansülfonik asit (PFOS) ve trifenil fosfatın (TPHP) peroksizom proliferatörle aktive edilen reseptör gama (PPARy) ile bağlanma potansiyeli, test prosedürünü göstermek için belirlendi. Son olarak, bu yöntemin avantaj ve dezavantajları ve potansiyel uygulamaları da tartışılmıştır.

Giriş

Çevrede ve insan vücudunda çok sayıda kimyasal madde yaygın olarak tespit edilmiştir ve bu da ekolojik çevre ve insan sağlığı üzerindeki etkileri konusunda önemli endişelere yol açmaktadır 1,2,3. Yüksek çevresel oluşumlarına rağmen, toksikolojik etkileri ile ilgili bilgiler azdır. Bu nedenle, kimyasal toksisitenin değerlendirilmesini kolaylaştırmak için yüksek verimli tarama (HTS) yöntemlerinin geliştirilmesi acildir.

Kimyasal toksisite değerlendirmesi için Tox21 ve ToxCast programlarında kullanılan HTS biyo-tahlillerigibi çeşitli yüksek verimli tarama (HTS) yöntemleri bildirilmiştir 4,5. Bu yöntemler, potansiyel toksik maddeleri hızlı bir şekilde tanımlayabilir ve kimyasal toksisite mekanizmaları hakkında değerli bilgiler sağlayabilir. Bununla birlikte, bu HTS biyo-tahlilleri esas olarak karmaşık ve pahalı olabilen hücre bazlı sistemlere dayanır. Ek olarak, kimyasal toksisite değerlendirmesi için yüksek verimli sıralama yöntemleri de kullanılmıştır, ancak kimyasalların yüksek verimli değerlendirmesinin elde edilmesi zor olmaya devam etmektedir6. Önceki çalışmalar, peroksizom proliferatörle aktive olan reseptör (PPAR)7,8,9, bisfenol A (BPA)10,11 ve partikül madde (PM)12 dahil olmak üzere çeşitli çevresel kirleticilerin bağlanma potansiyelini belirlemek için floresan polarizasyon (FP) tabanlı reseptör-ligand rekabetçi bağlanma testleri geliştirmiştir. 8,9,10,13, farnesoid X reseptörü (FXR)11,12 ve tiroid reseptörü (TR)14,15. Bu yaklaşım verimlidir, uygun maliyetlidir ve mekanik içgörüler sağlar.

Bu çalışmada, küçük bir floresan probun floresan polarizasyonunun (FP) saptanmasına dayalı olarak reseptör-ligand bağlanma testi için protokol açıklanmaktadır. FP bazlı reseptör-ligand bağlanma testinin prensibi Şekil 1'de gösterilmiştir. Küçük bir floresan molekülü düzlem polarize ışık tarafından uyarıldığında, yayılan ışık hızlı moleküler rotasyon nedeniyle yüksek oranda depolarize olur. Bununla birlikte, izleyici daha büyük bir reseptöre bağlandığında, dönüşü yavaşlar. İzleyici büyük reseptöre bağlandığında yüksek bir FP değeri tespit edilirken, izleyici serbest olduğunda düşük bir FP değeri gözlenir. Peroksizom proliferatör ile aktive edilen reseptör gama (PPARγ), probun reseptöre bağlanması için saflaştırıldı. Probun reseptör ile bağlanması için rekabet etmek için rosiglitazon (Rosi), perflorooktansülfonik asit (PFOS) ve trifenil fosfat (TPHP) kullanıldı. PPARy'nin spesifik bir agonisti olan Rosi, reseptör rekabetçi bağlanma deneylerinde pozitif bir kontrol olarak kullanıldı. Ek olarak, PFOS ve TPHP daha önce geçmiş çalışmalarda PPARγ'nın zayıf agonistleri olarak tanımlanmıştır 8,9,10,11,12,13,14,15,16,17. Ayrıca, çevresel maruziyet için bilinen farklı yapısal bileşik kategorilerine aittirler ve insan popülasyonlarında nispeten yüksek tespit oranları ile dikkat çekicidirler. Bu bileşikler, rekabet bağlama testinin geniş uygulanabilirliğini daha da doğrulamak için kullanıldı. Prosedür dört adımdan oluşur: rekombinant vektörlerin inşası ve dönüşümü, reseptör proteininin ekspresyonu ve saflaştırılması (ligand bağlama alanı), reseptör-prob bağlanması ve kimyasalların reseptör ile rekabetçi bağlanması.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Rekombinant vektörlerin inşası ve dönüşümü

NOT: PPARγ, hedef genleri düzenleyen bir DNA bağlama alanı ve ligandlar tarafından aktive edilen bir ligand bağlama alanı içeren klasik bir nükleer reseptör yapısına sahip ligand'a bağımlı bir transkripsiyon faktörüdür. Ligand aktivasyonu üzerine, PPARγ başka bir nükleer reseptör olan retinoid X reseptörü (RXR) ile bir heterodimer oluşturur ve PPARy'nin yanıt elemanlarına bağlanır, böylece aşağı akış hedef genlerinintranskripsiyonunu düzenler 9,16.

  1. PPARγ-LBD için primerler tasarlayın (bakınız Tablo 1) ve PPARγ-LBD DNA segmentini çoğaltın (bakınız Tablo 2 ve Tablo 3).
  2. His×6 etiketli pET28a vektörünü, kısıtlama endonükleazları XhoI ve BamHI18 ile sindirerek doğrusallaştırın.
  3. Piyasada bulunan klonlama kitini kullanarak PPARγ-LBD DNA segmentini His×6 etiketli pET28a vektörüne klonlayın, bu da rekombinant plazmid pET28a-PPARγ-LBD-6×His18 ile sonuçlanır.
  4. Rekombinant ekspresyon plazmidi pET28a-PPARγ-LBD-6×His protein ekspresyonu için BL21 (DE3) Escherichia coli hücrelerineaktarın 18.
  5. Yetkili BL21 (DE3) hücrelerine 5 μL rekombinant vektör ekleyin, 30 dakika buz üzerinde inkübe edin, 45 s boyunca 42 ° C'de bir ısı şoku uygulayın, ardından hemen buza geri dönün.
  6. 900 μL LB ortamı ekleyin, 37 °C'de 1 saat (160-200 rpm) çalkalayın, ardından oda sıcaklığında 5 dakika boyunca ~3000 x g'da santrifüjleyin.
  7. Süpernatanı atın, bakteri peletini 100 μL LB ortamında yeniden süspanse edin ve katı bir ortama yayın. Plakaları ve kültürü 37 °C'de 12-16 saat ters çevirin.
  8. Sıralama, tanımlama ve müteakip protein ekspresyonu ve saflaştırma için tek tek kolonileri seçin.

2. Reseptör proteininin ekspresyonu ve saflaştırılması

  1. Dönüştürülmüş BL21 (DE3) hücrelerini, 100 μg / mL ampisilin ile desteklenmiş 200 mL LB ortamında, 37 ° C'de 1-2 saat boyunca bir orbital çalkalayıcı (230 rpm) üzerinde inkübe edin.
  2. OD600 , 10 μM izopropil β-D-1-tiyogalaktopiranosid (IPTG) ekleyerek 0.4-0.6 absorbans birimine ulaştığında hücreleri indükleyin ve 16 ° C'de 16 saat inkübe edin.
  3. Bakteriyel süspansiyonu toplayın ve 8000 × g, 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin.
  4. Hücreleri 20 μL çözünür lizis tamponunda (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazol, pH 8.0) parçalayın, 200 μL fenilmetilsülfonil florür (PMSF) ve 200 μL lizozim ekleyin. Bakteriyel peleti 5 mL'lik bir pipet kullanarak yeniden süspanse edin, ardından 20 dakika boyunca% 30 güçte sonikasyona devam edin.
  5. Nikel kolonunu dengelemek için kolon hacminin 5 katına eşit lizis tamponu ekleyin. Bu işlemi iki kez tekrarlayın ve bir kenara koyun.
  6. Bakteriyel süpernatan lizatı (CL) elde etmek için sonikasyonlu bakteriyel süspansiyonu 8000 × g'da 4 ° C'de 15 dakika santrifüjleyin.
  7. Akış (FT) elde etmek için CL'yi nikel kolonuna (protein adsorpsiyonu için) yükleyin.
  8. Yıkama elüatını (W1-W6) elde etmek için sütunu, sütun hacminin 5 katı yıkama tamponu (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazol, pH 8.0) ile yıkayın.
  9. Hedef proteini elüte etmek ve protein fraksiyonlarını (E1-E5) elde etmek için kolonu 1 mL elüsyon tamponu (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazol, pH 8.0) ile yıkayın.
  10. Her fraksiyondan (CL, FT, W1-W6 ve E1-E5) 20 μL'lik bir alikot alın ve Coomassie Brilliant Blue boyama ile SDS-PAGE18 kullanarak analiz edin. PPARγ-LBD, denatüre edici bir jel üzerinde 34.9 kDa'lık bir protein olarak çalışır.

3. Reseptör bağlanma testi

NOT: Bu testte, C1-BODIPY-C12, reseptör-ligand bağlanma sistemini kurmak için bölgeye özgü bir floresan probu olarak kullanıldı. PPAR için spesifik bir ligand olan C1-BODIPY-C12, C1 konumunda yağ asidine dahil edilen BODIPY floresan grubu ile yağ asidinin floresan bir analogudur.

  1. Saflaştırılmış insan PPARγ-LBD'yi Tris-HCl tamponunda (20 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 8.0) 1 nM ila 6400 nM konsantrasyon aralığına seyreltin. Ayrıca, C1-BODIPY-C12 probunu Tris-HCl tamponunda 50 nM'lik bir konsantrasyona seyreltin.
  2. Seyreltilmiş PPARγ-LBD çözeltisini (kuyu başına 55 μL) ve C1-BODIPY-C12 prob çözeltisini (kuyu başına 55 μL) 96 oyuklu siyah bir plakada karıştırın. Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
  3. Mikroplaka okuyucu ile floresan polarizasyonunu (FP) ölçün.
  4. FP değerlerini reseptör konsantrasyonuna göre çizin, istatistiksel ve grafik yazılımı kullanarak Hill eğim denklemi ile spesifik bağlamayı kullanarak eğriyi uydurun ve Kd değerini hesaplayın.

4. Rekabetçi bağlayıcı tahlil

NOT: Bu testte, reseptör bağlanması için 800 nM insan PPARγ-LBD ve 50 nM C1-BODIPY-C12 probu kullanıldı. Probun PPARy'ye bağlanması ile rekabet etmek için rosiglitazon (Rosi), trifenil fosfat (TPHP) ve perflorooktansülfonik asit (PFOS) kullanıldı.

  1. Tris-HCl tamponundaki üç bileşiği 0-200 μM arasında bir konsantrasyon aralığında seyreltin.
  2. Reseptör-prob bağlama çözeltisini, 800 nM insan PPARγ-LBD ve 50 nM C1-BODIPY-C12 probu nihai konsantrasyonu ile hazırlayın.
  3. Reseptör-prob bağlama çözeltisini (oyuk başına 55 μL) ve bileşik çözeltiyi (oyuk başına 55 μL) 96 oyuklu siyah bir plakada karıştırın. Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
  4. Mikroplaka okuyucu ile floresan polarizasyonunu (FP) ölçün.
  5. FP değerlerini ligand konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak çizin. Bir grafik ve analiz yazılımı tarafından işlenen sigmoidal modeli kullanarak rekabet eğrisinden her ligandın yarı maksimal inhibitör konsantrasyonunu (IC50) elde edin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

PPARγ-LBD'nin protein ekspresyonu ve saflaştırılması
PPARγ-LBD, BL21'de (DE3) histidin etiketli bir protein olarak heterolog olarak eksprese edildi. Protein, çözünür fraksiyonlarda tespit edildi ve saflaştırılmış PPARγ-LBD, SDS-PAGE üzerinde, proteinin tahmin edilen moleküler ağırlığı ile tutarlı olarak, yaklaşık 34.9 kDa'lık bir görünür moleküler ağırlığa sahip tek bir bant gösterdi (Şekil 2).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Floresan polarizasyonu (FP), yüzey plazmon rezonansı (SPR) ve nükleer manyetik rezonans (NMR), proteinler ve bileşikler19,20 arasındaki doğrudan bağlanma etkileşimlerini değerlendirmek için kullanılan yaygın tekniklerdir. FP, ilaç keşfi ve kimyasal tarama için moleküler etkileşimlerin araştırılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır 21,22,23.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 82103875) tarafından desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
C1-BODIPY-C12 ProbeThermo Fisher Scientific, China102209-82-3Binds to PPARγ-LBD and emits fluorescence.
Coomassie Brilliant Blue R-250Solarbio, China6104-59-2Stain the protein bands.
GraphPad prismDotmaticshttps://www.graphpad.com/features
imidazoleSolarbio, ChinaI8090Prepare buffers for the protein purification process.
Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranosideSolarbio, China367-93-1Induce the expression of PPARγ-LBD
Microplate readerBiotek , USASynergy H1 Detecting FP value
NaClShanghai Reagent7647-15-5Prepare buffers for the protein purification process.
NaH2PO4 · 2H2OShanghai Reagent13472-35-0Prepare buffers for the protein purification process.
Ni NTA Beads 6FFSmart-Lifesciences, ChinaSA005005Protein purification.
Origin 8.5 OriginLab, Northampton, MA, U.S.A.
Perfluorooctanesulfonic acid (PFOS)J&K Scientific Ltd, China1763-23-1The detected environmental pollutants
Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)Solarbio, ChinaP0100Inhibit protein degradation.
PPARγ-Competitor Assay KitThermo Fisher ScientificPV6136https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/PV6136
PPARγ-LBD Ligand Screening Assay KitCayman600616https://www.caymanchem.com/product/600616
Rosiglitazone (Rosi)aladdin, China122320-73-4The agonists of PPARγ
ShakerZHICHENG, ChinaZWY-211CBacterial culture expansion and induction of protein expression
Triphenyl phosphate (TPHP)Macklin, ChinaT819317The detected environmental pollutants
TrisSolarbio, ChinaT8230Prepare buffers for the protein purification process.
TryptoneOXOID Limited, ChinaLP0042BPrepare Lysogeny Broth (LB) medium.
Ultrasonic CleanerKimberly, ChinaLHO-1Disrupt the bacteria to achieve complete lysis
UreaSolarbio, ChinaU8020Prepare buffers for the protein purification process.
Yeast extractOXOID Limited, ChinaLP0021BPrepare Lysogeny Broth (LB) medium.

Referanslar

  1. Maddela, N. R., Ramakrishnan, B., Dueñas-Rivadeneira, A. A., Venkateswarlu, K., Megharaj, M. Chemicals/materials of emerging concern in farmlands: sources, crop uptake, and potential human health risks. Environ Sci Process Impacts. 24 (12), 2217-2236 (2022).
  2. Naidu, R., et al. Chemical pollution: A growing peril and potential catastrophic risk to humanity. Environ Int. 156, 106616(2021).
  3. Ryu, H., Li, B., De Guise, S., McCutcheon, J., Lei, Y. Recent progress in the detection of emerging contaminants PFASs. J Hazard Mater. 408, 124437(2021).
  4. Alofe, O., et al. Determining the endocrine disruption potential of industrial chemicals using an integrative approach: Public databases, in vitro exposure, and modeling receptor interactions. Environ Int. 131, 104969(2019).
  5. Bajard, L., et al. Endocrine disrupting potential of replacement flame retardants - Review of current knowledge for nuclear receptors associated with reproductive outcomes. Environ Int. 153, 106550(2021).
  6. Chen, Q., Chou, W. C., Lin, Z. Integration of toxicogenomics and physiologically based pharmacokinetic modeling in human health risk assessment of perfluorooctane sulfonate. Environ Sci Technol. 56 (6), 3623-3633 (2022).
  7. Li, C. H., Ren, X. M., Cao, L. Y., Qin, W. P., Guo, L. H. Investigation of binding and activity of perfluoroalkyl substances to the human peroxisome proliferator-activated receptor β/δ. Environ Sci Process Impacts. 21 (11), 1908-1914 (2019).
  8. Li, C. H., et al. Chlorinated polyfluorinated ether sulfonates exhibit higher activity toward peroxisome proliferator-activated receptors signaling pathways than perfluorooctanesulfonate. Environ Sci Technol. 52 (5), 3232-3239 (2018).
  9. Li, C. H., Shi, Y. L., Li, M., Guo, L. H., Cai, Y. Q. Receptor-bound perfluoroalkyl carboxylic acids dictate their activity on human and mouse peroxisome proliferator-activated receptor γ. Environ Sci Technol. 54 (15), 9529-9536 (2020).
  10. Li, C. H., Zhang, D. H., Jiang, L. D., Qi, Y., Guo, L. H. Binding and activity of bisphenol analogues to human peroxisome proliferator-activated receptor β/δ. Ecotoxicol Environ Saf. 226, 112849(2021).
  11. Zhang, D., et al. Binding activity and risk assessment of bisphenols toward farnesoid X receptor pathway: In vitro and in silico study. Sci Total Environ. 869, 161701(2023).
  12. Zhang, D., et al. Fine particulate matter disrupts bile acid homeostasis in hepatocytes via binding to and activating farnesoid X receptor. Toxicology. 506, 153850(2024).
  13. Li, C. H., Ren, X. M., Guo, L. H. Adipogenic activity of oligomeric hexafluoropropylene oxide (perfluorooctanoic acid alternative) through peroxisome proliferator-activated receptor γ pathway. Environ Sci Technol. 53 (6), 3287-3295 (2019).
  14. Qin, W. P., Li, C. H., Guo, L. H., Ren, X. M., Zhang, J. Q. Binding and activity of polybrominated diphenyl ether sulfates to thyroid hormone transport proteins and nuclear receptors. Environ Sci Process Impacts. 21 (6), 950-956 (2019).
  15. Ren, X. M., Li, C. H., Zhang, J. Q., Guo, L. H. Binding and activity of sulfated metabolites of lower-chlorinated polychlorinated biphenyls towards thyroid hormone receptor alpha. Ecotoxicol Environ Saf. 180, 686-692 (2019).
  16. Evans, N., et al. In vitro activity of a panel of per- and polyfluoroalkyl substances (PFAS), fatty acids, and pharmaceuticals in peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) alpha, PPAR gamma, and estrogen receptor assays. Toxicol Appl Pharmacol. 449, 116136(2022).
  17. Kim, S., et al. Triphenyl phosphate is a selective PPARγ modulator that does not induce brite adipogenesis in vitro and in vivo. Arch Toxicol. 94 (9), 3087-3103 (2020).
  18. Matsumoto, H., Haniu, H., Komori, N. Determination of protein molecular weights on SDS-PAGE. Methods Mol Biol. 1855, 101-105 (2019).
  19. Nguyen, H. H., Park, J., Kang, S., Kim, M. Surface plasmon resonance: A versatile technique for biosensor applications. Sensors (Basel). 15 (5), 10481-10510 (2015).
  20. Hu, J., Kim, J., Hilty, C. Detection of protein-ligand interactions by 19F nuclear magnetic resonance using hyperpolarized water. J Phys Chem Lett. 13 (17), 3819-3823 (2022).
  21. LeBlanc, E. V., Shekhar-Guturja, T., Whitesell, L., Cowen, L. E. Fluorescence polarization-based measurement of protein-ligand interaction in fungal cell lysates. Curr Protoc. 1 (1), e17(2021).
  22. Huang, X., Aulabaugh, A. Application of fluorescence polarization in HTS assays. Methods Mol Biol. 1439, 115-130 (2016).
  23. Seethala, R., et al. A rapid homogeneous fluorescence polarization binding assay for peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma using a fluorescein-tagged dual PPARalpha/gamma activator. Anal Biochem. 363 (2), 263-274 (2007).
  24. Hu, W., et al. Activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma and disruption of progesterone synthesis of 2-ethylhexyl diphenyl phosphate in human placental choriocarcinoma cells: Comparison with triphenyl phosphate. Environ Sci Technol. 51 (7), 4061-4068 (2017).
  25. Weatherman, R. V., Fletterick, R. J., Scanlan, T. S. Nuclear-receptor ligands and ligand-binding domains. Annu Rev Biochem. 68, 559-581 (1999).
  26. Khazaee, M., et al. Perfluoroalkyl acid binding with peroxisome proliferator-activated receptors α, γ, and δ and fatty acid binding proteins by equilibrium dialysis with a comparison of methods. Toxics. 9 (3), 45(2021).
  27. de Vera, I. M. S., et al. Synergistic regulation of coregulator/nuclear receptor interaction by ligand and DNA. Structure. 25 (10), 1506-1518.e4 (2017).
  28. Hendrickson, O. D., Taranova, N. A., Zherdev, A. V., Dzantiev, B. B., Eremin, S. A. Fluorescence polarization-based bioassays: New horizons. Sensors (Basel). 20 (24), 7132(2020).
  29. Liu, C., et al. Identification of a novel selective agonist of PPARγ with no promotion of adipogenesis and less inhibition of osteoblastogenesis. Sci Rep. 5, 9530(2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Y ksek Verimli TaramaBa lanma Afinitesievresel KirleticilerN kleer Resept rlerToksikolojik EtkilerResept r ligand Ba lanma DeneyiMikroplaka OkuyucuFloresan PolarizasyonRekombinant Vekt rlerResept r ProteiniPerflorooktans lfonik AsitTrifenil FosfatPeroksizom Proliferat rle aktive olan Resept r Gama

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır