Aşağı Akış Uygulamaları için Kuş Preovulatuar Folikül Granüloza ve Teka Hücre Katmanlarının Ayrılması

Özet

Burada, kuş preovulatuar foliküllerinde yumurta sarısı, granüloza hücreleri ve teka hücrelerini ayırmak için bir protokol açıklıyoruz. Bu hassas işleme, bu katmanların üreme işlevindeki rolüne ilişkin kritik araştırmalara olanak tanıyarak, gelişmiş tarımsal verim ve biyomedikal içgörüler için foliküler gelişim, hormonal düzenleme ve hastalık araştırmalarının anlaşılmasına yardımcı olur.

Özet

Yumurtacı tavuklar (yumurtlayan tavuklar) ve etlik piliç yetiştiricileri (et üreten tavuklar için damızlık hayvanlar), güvenilir bir protein kaynağı olarak dünyanın gıda arzı için çok önemlidir. Aynı zamanda insan üreme hastalıklarının incelenmesi için ortaya çıkan bir hayvan modelidir. Kanatlı hayvan araştırmaları alanı geliştikçe, yumurtacı tavuk ve broyler damızlık yumurtalıklarının sağlığı ve işlevi hem tarımsal hem de biyomedikal araştırmacılar için önemli bir çalışma noktası olacaktır. Ortaya çıkan bu ilginin ortaya çıkardığı zorluklardan biri, tüm araştırmacıların yumurtalık örneği toplamada kullanabileceği tekrarlanabilir tekniklere duyulan ihtiyaçtır. Özellikle, araştırmacılar arasında anlaşma ve tutarlılık sağlamak için özel granüloza ve teka hücre katmanlarının tavuk foliküllerinden uygun şekilde ayrılmasını tanımlamak için ayrıntılı bir görsel süreç oluşturulmalıdır.

Bu çalışma, birinci sınıf üreme çağındaki beyaz leghorn tavuklarında yumurtlama öncesi foliküllerin ve yumurtalık dokusunun ekstraksiyonunu açıklamaktadır. Bu foliküllerin ayrılması, daha kolay manipülasyon için yumurta sarısını pıhtılaştırmak ve ayırma işlemi sırasında folikülün kendi ağırlığının hücre katmanlarını parçalamasını önlemek için soğuk, sıvı koşullar altında gerçekleştirilir. Ayırma işlemi tamamlandıktan sonra, istenen hücre katmanları doku kültürü yaklaşımları için daha fazla sindirilebilir veya genomik ve proteomik analizler için dondurularak saklanabilir.

Giriş

Yumurta üreten tavuklar, dünya gıda tedarik zincirinin önemli bir bileşenidir ve doğurganlık ve yumurtalık kanseri çalışmaları için gelişen bir hayvan modelidir. Tavuk, influenza aşılarının¹ in ovo çalışmalarından kanserli tümör büyümesi² çalışmasına kadar uzun bir laboratuvar kullanım geçmişine sahiptir ve gonadal gelişim ^3,4,5 hakkında bilgi edinmek için kilit bir hayvandır. Bir tavuğun üreme sisteminin rolünü, özellikle yumurtalık foliküler gelişiminin döngüsel doğasını ve ilgili hüc....

Protokol

Bu çalışmada kullanılan tüm hayvanlar, Delaware Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC Protokolü 110R) tarafından onaylanan protokole göre korundu ve ötenazi yapıldı.

1. Hazırlık

1. Sterilizasyon
   1. Yerçekimi deplasmanlı otoklavlama (20 dakika boyunca 121 °C) kullanan otoklav 5 oz cam kaseler, steriliteyi korumak ve belirtmek için üstte otoklav bandı ile alüminyum folyo ile kaplanmıştır.
      NOT: Ayırma işleminin gerçekleştirildiği her folikül için bir kaseye ihtiyaç duyulacaktır.
   2. Sterilizasyon torbalarında makas, kavisli forseps ve düz fo....

Sonuçlar

Bu protokol over folikülünden granüloza ve tekal hücre tabakalarının ayrılmasını sağlar (Şekil 5 ve Şekil 6). Bu katmanlar daha sonra başarılı bir şekilde ayrılmayı doğrulamak için histolojik inceleme için hazırlanabilir. Kurul onaylı bir veteriner patolog (EMB) tarafından gözden geçirilen ve yakalanan bu histolojik görüntüler, hem F1 hem de F5 preovulatuar foliküller için granüloza ve teka tabaka.......

Tartışmalar

Bu çalışma, kümes hayvanlarında hem granüloza hem de tekal hücre katmanlarının yumurtlama öncesi foliküllerden farklı şekilde ayrılması prosedürünü özetlemektedir. 1977 yılında Gilbert ve ark. tarafından kurulan mevcut yöntemden farklı olarak, bu yöntemde yapılan uyarlamalar, granüloza hücre tabakasını tüm preovulatuar foliküllerden teka tabakasından manuel olarak ayırırken daha kontrollü bir ortama izin verir¹⁵. Ayrıca, araşt.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
3.5 in. Small Glass Bowls, 5 oz	Amazon	B0BXP5PJTN	Autoclavable glass bowls of at least 3.5 in. diameter
Aluminum Foil	Costco	720	Cover autoclave bowls
Amazon Pet Training Pads, Regular, 100-Count	Amazon	B0B58WTPFS	For use as necrospy pads, any absorbant pad will work
Autoclave Tape	Fisherbrand	15-901-111
Cole-Parmer LED Fiber Optic Illuminators	Cole-Parmer	EW-41723-02
Curved Very Fine Precision Tip Forceps	Fisherbrand	16-100-123	Non-Serrated
Dissecting Microscope	Leica	S6E
Fine Precision Scissors	Fisherbrand	12-000-155	Non-Serrated
Food Container Boxes with Lid Set of 17 Clear/Green Microwave Freezer Dishwasher Safe	Amazon	B09QGZCRDB	Use any container that can hold ice AND an 3.5 in. small glass bowl
High Precision 45 Degree Curved Tapered Very Fine Point Tweezers/Forceps	Fisherbrand	12-000-125	Non-Serrated
High Precision Straight Very Fine Point Tweezers/Forceps	Fisherbrand	16-100-120	Non-Serrated
Isopropanol	Fisherbrand	A426P-4
McKesson Specimen Container, Sterile, Screw Cap, Leak-Resistant, 120 mL	McKesson	16-9526	4 oz. / 120 cc, graduated
Phosphate-buffered saline (PBS, 10x), pH 7.6	ThermoFisher	J62692.K7	Will need to be made into 1x PBS
Spray Bottle	Cole-Parmer	EW-06091-01	For 70% Isopropanol
Sterile Surgical Blades #22	Cincinnati Surgical	122
Sterilization Pouches 10" x 16"	Amazon	B07MFB455C
Tapered Ultrafine Tip Forceps Fisherbrand	Fisherbrand	16-100-121	Non-Serrated
Foam Biopsy Pads, Rectangular	Fisherbrand	22-038-221
Formalin Solution, 10% (Histological)	Fisher Chemical	SF98-4
Tissue processing/embedding cassettes with lid	Simport M490-2	Z672122