<p class="jove_content"> Amato Lusitano Hastanesi, Castelo Branco Portekiz. <br /> Hastanesi Sousa Martins, Guarda Portekiz. </p>

<ol><li> Arterler 3-7 cm UC parçalarından elde edilir. </li><li> Arterleri çevreleyen Wharton jöle makas ile keserek dikkatlice kaldırıldı. </li><li> Disseke arterlerin bir ucundan bir dış çapı 0.6-1mm bir künt uç iğne 7mm yerleştirildi. </li><li> Kan damarları içinde kalan kaldırmak için, damar dikey olarak düzenlenen ve yaklaşık 20 ila 40 ml serum fizyolojik solüsyonu (PSS) ile perfüze, bir iğne bağlı 20 ml şırınga kullanarak. Gerekirse, bu yıkama adım birkaç kez tekrarlandı. </li><li> % 10 fetal sığır serumu (FBS) ile takviye RPMI 1640 kullanarak aynı prosedür tekrarlandı. </li><li> Bir ekstremite kan damarının kapalı idi. 10 ml şırınga, iğne bağlı ve 3 mL kollajenaz tip I (Hank Tamponlu Tuz Çözeltisi (HBSS) 800 birim / ml) ile perfüze edildi. Sonra diğer extremityof gemi de kapatıldı. </li><li> Geminin fosfat 15 dakika 37 ° ° C ajitasyon için tuzlu su solüsyonu (PBS), tamponlu ile inkübe edildi. </li><li> Geminin ucu serbest SMC&#39;lere toplamak için kesildi sonra. Arterlerde% 5 FBS ve 50-ml tüp için antibiyotik ile desteklenmiş DMEM-F12 yaklaşık 20 ila 40 ml serpmek. </li><li> Tüp, oda sıcaklığında (250 g, 8 dk) santrifüj edildi ve hücre pelletini DMEM-F12 5 ml% 5 FBS ile takviye yeniden süspanse edildi. </li><li> Hücre süspansiyonu T-balon kollajen kaplı transfer ve 37 inkübe ° C,% 5 CO <sub>2</sub> nemlendirilmiş bir atmosfer altında. </li><li> , 37, 5 16 saat, yapışmaz hücre ve hücresel drebis çıkarıldı sonra 5 ml kültür ortamı eklendi ve hücrelerin inkübe edildi ° C,% 5 <sub>CO</sub> 2 nemlendirilmiş bir atmosfer altında . </li><li> SMC&#39;lere izdiham ulaşana kadar hücre kültür ortamı, 2, 3 günde bir değiştirildi. </li><li> Hücreleri izdiham elde ettikten sonra, iki veya üç <sup>25 cm 2,</sup> T-şişeler içine numaralı seribaşı. </li></ol><p class="jove_title"> Temizleme </p><ol><li> Kavuz konteyner iğneler atın. </li><li> Büyük biohazard konteyner şırınga atın. </li><li> Tüm doku, küçük bir biohazard çantaya koyun. Çanta ve dondurma kapatın -20 ° yakma kadar santigrat. </li><li> Virüsit tüm araçların en az 10 dakika bekletin. </li><li> Kullanılmayan ortamları buzdolabı dönün. </li><li> Biyolojik tehlikeli atık eldiven atın. </li></ol>

<ol>
	<li>Van Rijen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junctions+in+human+umbilical+cord+endothelial+cells+contain+multiple+connexins.">Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins.</a> <em style='font-style: italic'>The American journal of physiology</em>. <b>272</b> (1 PT 1), C117-C117 (1997).</li><li>Mart&#237;n de Llano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedure+to+consistently+obtain+endothelial+and+smooth+muscle+cell+cultures+from+umbilical+cord+vessels.">Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels.</a> <em style='font-style: italic'>Translational Research</em>. <b>149</b> (1), 1-9 (2007).</li><li>Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+human+endothelial+cells+derived+from+umbilical+veins.+Identification+by+morphologic+and+immunologic+criteria.">Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria.</a> <em style='font-style: italic'>J Clin Invest</em>. <b>52</b> (11), 2745-2756 (1973).</li><li>Cairr&#227;o, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+human+umbilical+artery+smooth+muscle+cells+expressing+functional+calcium+channels.">Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels.</a> <em style='font-style: italic'>In Vitro Cellular &#38; Developmental Biology-Animal</em>. <b>45</b> (3), 175-184 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content"> SMC konstriktör ilaçlar ile gelecek deneyleri için model olarak izole etmek için kullanılan ve yapısal olarak, L-tipi kalsiyum kanalları karakterize vasküler fonksiyon hücresel ve moleküler yönlerini incelemek ve doku mühendisliği onları kullanmak için olabilir. SMC&#39;lere ve EC, insanlarda kullanılmak üzere yarı sentetik kan damarlarının üretiminde kullanılabilir yeni Biyomalzemelerin gelişimi için esastır. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-F12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>095K8311</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom-AG</td>
<td>0117T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>3103806</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>067K2302</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>10 &mu;L/ 1 mL of medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilized</td>
</tr>
<tr>
<td>Needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Diameter of 0.6-1mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>10 - 20 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Physiological Saline Solution (PSS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>20-40 mL per artery</td>
</tr>
<tr>
<td>Collagenase type I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>047K1052</td>
<td>3 mL per artery</td>
</tr>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution(HBSS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Diluted collagenase </td>
</tr>
<tr>
<td>Phosphate buffered saline solution (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Warmed to 37&deg;C</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

isolation of human umbilical arterial smooth muscle cells (huasmc)

<p class="jove_content">Insan göbek kordonu (UC), doğumdan hemen sonra kolayca elde edilebilir bir biyolojik örnek. Bu biyolojik örnek, çoğu zaman atılan ve toplama doğan veya annenin sağlığı için herhangi bir ek risk anlamına gelmez. Ayrıca, hiçbir etik kaygıları artırdı. UC bir ven ve her iki endotel hücreleri (EC) iki arter tarafından bestelenmiş<sup&gt; 1</sup&gt; Ve düz kas hücreleri (SMC&#39;lere)<sup&gt; 2</sup&gt; Kan damarlarının ana hücresel bileşenlerinin iki izole edilebilir. Bu projede SMC&#39;lere buna göre UC arterlerin enzimatik tedavi Jaffe tarafından daha önce açıklanan deneysel işlemin sonunda elde edilen<em&gt; Ve ark.</em<sup&gt; 3</sup&gt;. Hücre izolasyonu sonra DMEM-F12% 5 fetal sığır serumu ile desteklenmiş ve çeşitli pasajlar için kültüre edildi t-flash tutuldu. Hücreler farklı kuşaklardan morfolojik ve diğer fenotipik özellikleri korumuştur. Bu çalışmanın amacı konstriktör ilaçlar ile gelecekteki deneyleri için model olarak kullanmak amacıyla düz kas hücreleri izole etmek, izole etmek ve yapısal vasküler fonksiyon hücresel ve moleküler yönlerini incelemek için, L-tipi kalsiyum kanalları karakterize<sup&gt; 4</sup&gt; Ve doku mühendisliği onları kullanmak için.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC at JoVE.com

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

<p class="jove_content">Göbek kordonu, farklı şekillerde düz kas hücreleri izole etmek için kullanılır. Bu çalışmada izole düz kas hücreleri için enzimatik tedavi kullanılır.</p>

İnsan Umblikal Arter düz kas hücrelerinin izolasyonu (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

isolation-of-human-umbilical-arterial-smooth-muscle-cells-huasmc

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

13.8K Görüntüleme.  Universidade da Beira Interior. Göbek kordonu, farklı şekillerde düz kas hücreleri izole etmek için kullanılır. Bu çalışmada izole düz kas hücreleri için enzimatik tedavi kullanılır.