İyi Korunmuş Ultrayapı ile Protein Lokalizasyon Analizi için Hücrelerde EM-Görünür Altın Nanopartiküllerinin Doğrudan Sentezi

Protein tespiti ve lokalizasyonu biyolojik araştırmalarda esastır. Protokolümüz, iyi korunmuş ultra yapı ile tek moleküllü görselleştirmeye in situ olarak izin veren genetik olarak kodlanmış etiketleri kullanan yeni bir EM etiketleme teknolojisini tanımlamaktadır. Aşırı sabitlemeden kaçınmak çok önemlidir.

Etiketleme yöntemi, aldehit çapraz bağlanmasına karşı oldukça hassas olan etiketlerdeki sisteinlerin aktivitesine dayanır. Protokolümüz, aldehit fiksatörlerinin kullanımını önler ve etiket etkinliğini ve ultra yapıyı korur. aynı zamanda.

EM etiketleme her zaman zor olmuştur, zayıf morfolojiden veya verimsiz etiketlemeden muzdariptir. Protokollerimiz, hedef proteinlerin yüksek sinyal-gürültü oranı, yüksek verimlilik ve özgüllük ile net ve hassas lokalizasyonunu sağlamak için in situ nanopartikülleri doğrudan bireysel proteinler üzerinde sentezler. Şimdiye kadar izole proteinlerde, E.coli hücrelerinde, maya hücrelerinde ve HeLa hücrelerinde mükemmel etiketleme elde ettik.

Doku örneklerine uygulama yöntemini keşfedeceğiz ve optimize edeceğiz. Hakim kriyo-FIB ve kriyo-EM teknolojilerini birleştirmek, önemli biyolojik soruları ele almamızı sağlayacaktır.