Ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu kullanarak transfekte edilmiş HEK293T hücrelerini analiz ederek başlayın. Hücreler parlak alan ışığı kullanılarak odaklandıktan sonra, 587 nanometre floresan mCherry uyarma dalga boyuna ve 610 nanometre emisyon dalga boyuna geçin. Parlak alan ışığını kapattıktan sonra, ZnT1 mCherry ekspresyonunu doğrulamak için hücrelerin floresansını kontrol edin.
Boya yükleme çözeltisi hazırlamak için, dört mikrolitre çinkoya özgü floresan boya çözeltisi alın. Sonra dört mikrolitre% 10 pluronik asit ekleyin. Çözeltiyi yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın ve 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın.
Hazırlanan çözeltiye 750 mikrolitre yıkama solüsyonu ekleyin ve tüpü kuvvetlice girdaplayın. Yine, 750 mikrolitre yıkama çözeltisi ekleyin. Girdap haline getirildikten sonra, bu çözeltinin 750 mikrolitresini yeni bir altı oyuklu kültür plakasının iki kuyusuna ekleyin ve alüminyum folyo ile kaplayın.
Cımbız kullanarak, önceden kültürlenmiş HEK293T hücre plakasından 13 milimetrelik bir kapak fişini altı oyuklu bir plakaya aktarın. Plakayı folyo ile kapladıktan sonra, 15 ila 20 dakika hafifçe çalkalayın ve boya yükleme solüsyonunu hazırlanan yıkama solüsyonu ile değiştirin. Plaka kapatıldıktan sonra tekrar 20 dakika çalkalayın.
