Başlamak için hazırlanan omurilik dilimini kayıt odasına yerleştirin. Ardından, uygun omurilik stimülatörü konumlandırması için mikro manipülasyon sisteminin anotunu dorsal orta hattın yakınına, dorsal kök giriş bölgesine yakın katotta yerleştirin. Şimdi, görünür çekirdekleri olmayan pürüzsüz ve parlak bir yüzeye sahip sağlıklı bir nöronu tanımlamak için 60X objektif merceğe geçin.
Kızılötesi yoğunluğu biraz azaltın, floresan ışık kaynağını açın ve ışık filtresini geniş bant ultraviyole uyarma seçeneğine ayarlayın. Şimdi, uygun bir Floro-Altın-pozitif motor nöron seçin ve elektrotu nörona yakın olana kadar kademeli olarak indirin. Pipet yüzeyine temas ettiğinde, uç seviyesinde küçük bir membran girintisi olup olmadığına bakın ve daha önce uygulanan pozitif basıncı serbest bırakın.
Ardından bir şırınga kullanarak pipete negatif basınç uygulayın ve yazılım arayüzünde direnç değeri gigaohm'a yükselene kadar bekleyin. Membran potansiyelini eksi 70 milivoltta sıkıştırın. Hızlı kapasitans kompanzasyon düğmesine basın amplifier'ın yazılım arayüzünde, ardından hücre zarını yırtmak için kısa bir negatif basınç uygulayın ve yavaş kapasitans kompanzasyon düğmesine basın.
Omurilik stimülasyonunu bir ila iki saniye boyunca uygulayın ve genliği bir ila 10 miliamper arasında tutun. İlk aksiyon potansiyeli gözlenene kadar stimülasyon genliğini kademeli olarak artırarak motor eşiğini belirleyin. Akım kelepçe modunda reobaz etrafına beş saniyelik depolarize edici akım enjeksiyonu kullanarak gecikmeli ve anında ateşlenen motor nöronları ayırt edin.
Omurilik stimülasyonunu kapattıktan sonra, spontan aksiyon potansiyellerinin ateşlenmesini yakalamak için membran potansiyellerini kaydetmeye devam edin. Omurilik stimülasyonunun genliği yükseltildiğinde, membran potansiyeli arttırıldı ve aksiyon potansiyelleri her 10 ila 20 darbede bir tetiklendi. Omurilik stimülasyonu kapatıldıktan sonra, nöron kısa bir süre için bir dizi spontan aksiyon potansiyelini ateşledi.
Daha sonra, dinlenme membranı potansiyeli eksi 65 milivolta geri döndü.
