Başlamak için, döllenmiş tavuk yumurtalarını 38 santigrat derecede nemlendirilmiş bir inkübatörde kuluçkaya yatırın. Şimdi HBSS'de evre 30 ila 33 tavuk embriyo dorsal derisini inceleyin. Daha sonra derileri 15 ila 20 dakika boyunca% 0.25 EDTA ile iki kez kalsiyum ve magnezyum içermeyen salin içinde inkübe edin.
Epitel ve MESENCHYME'yi saatçi forsepslerini kullanarak dikkatlice ayırın ve ayrılan materyali buz üzerine yerleştirilmiş HBSS'ye taşıyın. Ayrılmış mezenşimi 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne toplayın ve PBS'de yapılan iki mililitre% 0.1 kollajenaz tripsin ekleyin. Daha sonra çözeltiyi bir su banyosunda inkübe edin.
Daha sonra, cilt mezenşimini tek hücreli bir süspansiyona dağıtmak için bir pastör pipeti kullanın. Daha sonra sindirimi durdurmak için% 10 fetal sığır serumu içeren sekiz mililitre DMEM ekleyin. Hücreleri beş dakika boyunca 233G'de santrifüjleyin.
Daha sonra peleti kültür ortamında yeniden süspanse edin. Daha sonra, altı kuyulu bir tabağın kuyusuna bir hücre kültürü eki yerleştirin, 10 mikrolitrelik bir mezenkimal hücre damlacığı ekin üzerine bırakın. Ek parçanın dışındaki kuyuya, iki mililitre DMEM'i% 10 fetal sığır serumu ile pipetleyin.
Kaplanmış hücreleri 37 derecede% 5 karbondioksit ve% 95 hava ile ayarlanmış bir inkübatörde bir saat inkübe edin. Bir mililitrelik bir pipet kullanarak, sağlam epiteli kaplanmış mezenkimal damlacığın üzerine aktarın. Sulandırılmış cilt ekstansını oluşturmak için sağlam epiteli mezenşim üzerinde düzleştirin.
Cildi yarı ıslak tutmak için ek parça üzerinde ince bir orta tabaka bırakın. Bir hava / sıvı arayüzü sağlayarak, sulandırılmış cilt eksplantını %5 karbondioksit ve %95 hava ortamı ile bir inkübatörde 37 derecede inkübe edin. Ex vivo organ kültürleri ilk başta homojen görünür; kültürde iki ila üç gün sonra oluşan kısa tüy tomurcukları ve kültürde dört ila beş gün sonra oluşan uzun tüy tomurcukları.
