Agarozda immobilizasyon divotları oluşturarak işleme başlayın. Bunu yapmak için, çözelti sıvılaşana kadar bir mikrodalga kullanarak PBS'de% 2 agarozu ısıtın ve karıştırın. 250 mikrolitre sıvılaştırılmış agarozu cam tabanlı bir kaba pipetleyin.
Ve esnek bir plastik örtü kayması, agarozu tabak boyunca düzleştirin. Agaroz soğuduktan ve tamamen katılaştıktan sonra, kapak kızağını çıkarmak için ince uçlu forseps kullanın. Daha sonra, üç milimetrelik bir biyopsi zımbası kullanarak, yemeğin ortasındaki agarozda bir delik açın.
Hassas bir görev mendili yardımıyla, fazla agarozu çıkarın. PBS ile nemlendirilmiş agaroz kalıbını kullanana kadar dört santigrat derecede saklayın. İzole yansıtma oküler lensini monte etmeden önce, lens tipine bağlı olarak hazırlanan agaroz kalıba iki mililitre uygun ortam ekleyin.
Embriyo forsepsleri kullanarak, sabit veya canlı lensi agarozdaki divot'a nazikçe aktarın. Ardından, çanağı ters çevrilmiş bir mikroskop tablasına yerleştirin. Çekirdek boyamayı görselleştirerek lensin ön bölge objektife bakacak şekilde yerleştirildiğini doğrulayın.
Herhangi bir çekirdek gözlenmezse, ön bölge objektife bakacak şekilde lensi yaklaşık 180 derece döndürmek için kavisli forseps kullanın. Ardından, konfokal bir mikroskop kullanarak görüntü elde etmeye devam edin. Lens kapsüllerinin görselleştirilmesi için, adım boyutu 0,3 mikron olan 40x objektif kullanarak Z yığını görüntüleri elde edin.
WGA boyaması ile gösterilen lens kapsülünün yüzeyinden önceki ilk görüntüyü ve epitel hücrelerinin apikal yüzeyinden sonraki son görüntüyü elde edin. Epitel hücrelerini görselleştirmek için, adım boyutu 0,3 mikron olan 63x objektif kullanarak Z-yığını görüntüleri elde edin.
