İmmobilizasyon agaroz takozları oluşturarak sabit lensin tüm montaj hazırlığına başlayın. Bunu yapmak için, cam tabanlı bir tabak alın ve içine PBS'de yaklaşık beş ila altı mililitre erimiş% 2 agaroz dökün. Agaroz katılaşana kadar bekleyin.
Ardından, katılaşmış agarozda üçgen bir divot oluşturmak için keskin bir bıçak kullanın. Agaroz kamasını çıkarın ve tabağa bir mililitre PBS ekleyin. Kesimden sonra geride kalan agaroz kalıntılarını aspire edin.
Gerekirse, birden fazla lens sığdırmak için tek bir tabakta birden fazla kama oluşturun. Kalıbı saklamak için, dört santigrat derecede tutmadan önce içine bir mililitre PBS ekleyin. Kavisli cımbız kullanarak, lensi bir mililitre PBS içeren agaroz kamasına yerleştirin.
Merceği, ekvator bölgesi konfokal objektifin üzerine yerleştirildiğinde mikroskop camına bakacak şekilde ayarlayın. Çanağı mikroskop tablasına yerleştirin. Ekvator bölgesinin odakta olduğunu doğrulamak için, çekirdekleri görselleştirin ve sıralar halinde hizalandıklarından emin olun.
Ayrıca, düzensiz paketlenmiş ve şekillendirilmiş ekvatoral epitel hücrelerini ve hücre zarlarında F-aktin boyaması ile gösterilen hassas şekilde hizalanmış ve altıgen şekilli meridyen sıra hücrelerini kontrol edin. Görüş alanındaki çekirdeklerin rastgele paketlenmesi, objektife bakan merceğin ön tarafını gösterir. Çekirdekler gözlemlenemiyorsa, muhtemelen merceğin arka tarafının objektife baktığını gösterir.
Bu gibi durumlarda, lens ekvatorunda tam olarak hizalanmış çekirdekler gözlemlenene kadar lensi döndürmek için kavisli cımbız kullanın.