Bu çalışma NIH DC03969 R21-01 (JGB) tarafından desteklenmiştir. Biz, teknik yardım için Şekil 4B ve Sayın D. Bayley ve Bayan S. Alarcon gösterilen RT-PCR gerçekleştirmek için, tek bir tat tomurcuğu hücreleri, Dr. Tauf Huque yakalamak için Dr. Fritz Lischka teşekkür ederim. M. Yanina Pepino Tıp NIDAT32 DA07313 Washington Üniversitesi, St Louis, MO (Cottler LB PI) tarafından desteklenen bir adam.

1. Giriş ve Genel Hususlar Genel prosedür ön dilin dorsal yüzeyi kavisli bir bahar mikro kullanarak bu anestezi alan mantarbiçim (tat) papilla bir sayı (6-8) kaldırılması ile takip (1 cm 2) küçük bir alanda, lokal anestezi gerektirir -makas (McPherson-tipi Vannas # SR 5603, Roboz, Rockville, MD). Kaldırıldı mantarbiçim papilla yaklaşık 0.25 mm 3 adet. Her bir papilla ile birlikte çıkarılır çok az olmayan papilla (tat) epitel doku vardır. Yeni papilla 3 ila 5 hafta sonra bu form ve tat tomurcuklarının işleyen (Spielman ve Marka, yayınlanmamış gözlemler) yeniden. Fark, bu küçük miktarda tat malzeme çıkarılmasından sonra gıda tat veya lezzet hiçbir etkisi yoktur. Yetişkin insan dilinde bireysel tat tomurcuklarının sayılır çalışmalar, insan dilin tat tomurcukları yaklaşık 5000 içerdiğini tahmin edilebilir. Bizim prosedürü ortadan kaldırır, bu tat tomurcuklarının en az 20 ila 25 (ortalama ~ insan mantarbiçim papilla başına 3,5-4 tat tomurcukları) 2 ya da toplam% 0.4 . Buna ek olarak cerrahi bu doku kaybı ile ilişkili herhangi bir ağrı var. Bir iğne dil girerken, sadece enjeksiyon yerinde hafif ağrı, tabii ki, hissediyor. Anestezi kapalı yıpranmış sonra, bir günden daha az bir süre bazen hafif bir rahatsızlık, ancak bu rahatsızlık bir deneyimleri olanlar dil yanlışlıkla &quot;ısırma&quot; dan sonra çok daha azdır. Geçtiğimiz birkaç yıl içinde biz anestezi içermez alternatif bir prosedür geliştirdik. Doku alınması için teknik, her ikisi için de aynıdır. Prosedürü tek fark cerrah artık anestezi ele alındı, 1 cm 2 çap alanı ile sınırlı olduğunu. Aksine s / o önde gelen papilla görünen dilin dorsal yüzeyi üzerinde herhangi bir siteyi seçebilirsiniz. Uygulanmasıyla ilişkili ağrı ile kıyaslandığında kaldırıldı papilla toplam sayısı Eğer uygun bir şekilde yerine veya anestezi olmadan, her iki teknikte de 6-8 ile sınırlı, 6-8 mantarbiçim tat papilla kaldırma rahatsızlık daha az bir sorun olarak kabul edilir Lokal anestezi iki işlemlerine tabi bireylerin genel bir araştırma, yani, ve anestezi olmadan, gelecekteki tüm biyopsilerinde lokal anestezi olmadan konularda ezici bir çoğunluğu verirdi gösterdi. Bu tekniği (AIS) ve anestezi olmadan biyopsileri yapılan yazar tarafından öğretilen bazı meslektaşlarıyla geliştirilen cerrah, kendileri üzerinde denenmiş ve rahatsızlık geçicidir ve ısıran bir dili daha az kabul edilmektedir tanıklık var. Sonuç olarak, anestezi olmadan bir papilla kaldırılmasını denemek için istekli olacağını biyopsi olarak kabul bireyler onlarca soruldu ve onlar, onlar anestezi uğrayacaktı çok acı verici olabilir yargıç, tüm olmadan papilla kaldırılması ile devam etmek için mutabık kalmışlardır anestezi. Tüm biyopsi 5-10 dakika daha uzun sürmemelidir. Anestezi istihdam ise 2-3 dakika daha eklenir. Biyopsi genellikle sabah saatlerinde yapılmaktadır. Biyopsi öncesi, gönüllüler başlama saatinden iki saat önce hafif bir yemek yemek için talimat vardır. Biyopsi, yazılı bilgilendirilmiş onam elde edilir. Biyopsi zamanda Dışlama kriterleri (örneğin, gastrointestinal hastalıklar, nörodejeneratif hastalıklar, kanser, kan diskrazisi, lokal anestezikler alerjisi, vb) daha fazla kalp hızı ile birlikte bu tedavi ile kontrol olsun veya olmasın, ciddi kronik hastalığı olan olanlar 60 den 100 ya da daha az; 145 veya daha fazla 100&#39;den az sistolik kan basıncı, diyastolik kan basıncı konusu çalışmaya katılabilir 90 daha fazla 60 veya daha az ve cerrahın görüş. Son olarak, biyopsi işlemi mRNA azalan kalitesi ile sık sık belirttiğimiz gibi, doku bütünlüğü hızla kaybolur doku muayenesi için işlemden geçecektir aynı tesiste yürütülen gerektiğini dikkate almak önemlidir. Bu sorunları en aza indirmek için dil dokusu mümkün olduğunca çabuk işleme tabi tutulmalıdır. 2. Konu Hazırlığı <ol><li> Söz konusu diş sandalye veya koltuk başlığı ile bir koltuk oturmuştur. </li><li> Biyopsi zamanda kalp hızı ve kan basıncı kontrol edin. Kan basıncı, kalp hızı veya sözlü yeterlilik aralığı dışında konusu düşüş, cerrah, o / o bir doktor görmek için acil randevu konuya önerir. </li><li> Ağız kuruluğu, coğrafi dil ya da herhangi bir dil lezyonları göstergelerine dikkat ile, genel doku sağlığı için oral kavite kontrol edin. Dil lezyonları ya da kserostomi dahil olmak üzere, ağız hastalığı belirtileri gösteren herhangi bir konuda çalışma kapsamı dışındadır. Oral cavit tüm enkaz kaldırmak için su ile ağzınızı çalkalayın konuda talimaty Gerekirse dil, anestezi enjeksiyonu sırasında dillerine yapılacak plak veya enkaz kaldırmak için bir tek dil kavgacı, ile temizlenir. Cerrah, oral kavite kadar uzanır dilin ön ¼ eldivenli elini tutmak için steril gazlı bez kullanır. </li><li> Anestezi kullanılması durumunda, 28 gauge bir 1cc Tüberkülin şırınga x epinefrin (1:100,000) ile 0.25 mL lidokain (% 2) içeren ½ &#39;iğne tek bir sitede sadece dilin ön kısmı dorsal yüzeyinin altında yavaş yavaş enjekte . Anestezi site, daha sonra yapılan çalışmalar ile lidokain bir girişimi engellemek için toplama site distal. Karşılaştırma için, enjekte lidokain miktarı (0.25 ml), normal dental prosedürler sinir bloğu (0.8 mL 1 ml) için verilen miktarın dörtte biri. Ama anestezik enjeksiyon önce iğne yerleştirilmesi sonra, aspirasyon, hiç kan damarı vurdu olduğunu garanti eder. Bu önlem, büyük bir gemi, dorsal yüzeye yakın vurdu olacağını anatomik olası olsa bile alınır. Dorsal yüzeyinde sadece arter, dorsal lingual arter öncelikle doku hasat oluşur anterior üçüncü, daha arka yer küçük kan damarları vardır. Dilin ventral yüzeyinde büyük dilli arterler ve lingual venler kadar 3 anestezi alan dorsal bölgeden kaldırıldı. 1 cm anestezi alanı çevreleyen doku ile karşılaştırıldığında biraz donuk görünür. Bu doku, küçük kan damarlarını sıkıştırmaktadır şişlik nedeniyle. Aynı zamanda epinefrin vazokonstriktif etkisi nedeniyle. Yaklaşık bir dakika sonra, bir sonda, uyuşma için alan testi için kullanılır. Bölgesini uyuşturmak değilse, ikinci bir enjeksiyon (0,1 - 0,2 ml) verilebilir. </li></ol> 3. Dil papilla Kaldırma Tekniği <ol><li> Konunun dil ön çeyreğinde steril gazlı bez içine sarılmış (sağ eli ile biyopsi) (Şekil 1) ve cerrahın sol düzenlenecek. Gazlı bir köşesinde, cerrah, tükürük, dil silmek için izin vermek için açık bırakılır. Dil, gereksiz rahatsızlığa neden olarak, bu yüzden sıkı bir şekilde tutulan, ancak, elbette olmalıdır. Sol elin işaret parmağı ucu doğrudan biyopsi sitenin altında dil altına yerleştirilir. Parmağı yukarıya doğru iterek, dil papilla kolay biyopsi için sopa parmak ucu üzerine gerilmiş olur. </li><li> Biyopsi için papilla seçimi için kriterler: Tat papilla, şekil ve boyutuna göre çevreleyen filliform papilla kolayca ayırt edilebilir. Mantar şeklinde papilla çevresindeki yuvarlak ve biraz izole. Hemen yanlarında filliform papilla (Şekil 2A, mavi oklar) yoksun dairesel bir alan vardır. Bu alan, yaklaşık 1 mm çapında. Mantarbiçim papilla diğer bir ayırt edici özelliği, genç bireylerde en mantarbiçim papilla üst görünür uzun bir kılcal arborization. Arborization yerini mantarbiçim papilla kolaylaştırıyor olsa da, bu papilla tat tomurcuklarının varlığı iyi tahmin zorunda değildir. Bir kural bir ön sonuna doğru hasat başlar ve sonraki doku toplama sitesi obscuring herhangi bir kılcal kanamayı önlemek için dil ucundan daha uzağa hareket. </li><li> Bir iyi bir papilla mikro-makas (McPherson-Vannas, kavisli, keskin kenar kesim 5 mm, tarak, ucu genişliği 0.2 mm toplam uzunluğu 3 &quot;(SC-5603, Roboz) off klibi için kullanılan bir bahar tespit edilmiştir. mikro cerrahi makas etkin bir şekilde kullanmak için bir kesim için bıçak ucu kullanmayın; yerine, bıçak kadar içinde (Şekil 1, büyütülmüş bir görüntü ve Şekil 3) mümkün olduğunca, ters bıçak ile kesiştiği noktaya yakın. papilla kaldırılması bir kesme makası hareket (Şekil 1) elde edilir. hedeflenen papilla görünen açık bıçakları içinde daha fazla, daha etkili kesme makas genel pozisyonu paralel gerektiğini dikkat edilmelidir Dilin dorsal yüzeye sahip. </li><li> Bazen dil cerrah kaldırılması için bir papilla belirlemek için çalışıyor gibi kuru olur. Kuruduktan sonra, açıkça bir mantarbiçim papilla olduğunu görmek için operatör yeteneğini daha zorlu hale gelir ve çok zor papilla üzerinde bıçakların kayması hale getirir. Aşırı kuru bir dil, genellikle hassas bir cerrahi hareket daha kontrol edilebilir hale dil metal bıçak sopa hale getirir. Bu konuda / ağzını kapatın ve tükürük, dil yüzeyi ile temas gelmiş sağlama süreci yardımcı olur. Aşırı ıslak dil ya da iyi değildir. Köşesinde bir dil tutmak için kullandığı gazlı bez kullanılması, bu süreçte yardımcı olur. </li><li> Herhangi bir kılcal damar kanaması meydana gelir, steril gazlı bez ile blot ile tedavi edilir. Genellikle kanama birkaç dakika içinde durur<html> oda ısısında ve ek doku hasat engel değildir. Papilla epitel yüzeyi üzerinde dil uzatmak ve bir mantarbiçim papilla sadece üst 3 / 4 (Şekil 2B) kaldırılmış olduğundan, tat tomurcukları gösteren mantarbiçim bu parçası, küçük kanama bekleniyor. </li><li> Küçük bir Dumont forseps (Pattern tipi) kullanarak, kaldırılan papilla (130 mM NaCl, 5 mM KCI, 1 mM CaCl 2, 1 mM MgCl 2, 1 mM Na-Piruvat, 20 mM HEPES-Na soğutulmuş temel Zil tampon yerleştirilir pH: 7.2 ~ 305 mili osmols osmolalitesi) sonraki manipülasyonları için. Forseps bıçaklar arasında papilla tutam ASLA zorunludur. Doku çok kırılgan ve çok dikkatli ele alınmalıdır. </li><li> Papilla çıkarıldıktan sonra, konu on ila on beş dakika boyunca sandalyede kalır. Her konu kendi anestezi dil ısırma, ama geri kalanı kendi dillerini tutmak için söylenir. Başlık görsel katılan cerrah tarafından izlenmelidir. Anestezi yaklaşık 30-60 dakika eskitmek bekleniyor. Papilla kaldırma site biyopsi sonrası biraz ağrılı olabilir, çünkü, onlar, baharatlı ya da sıcak (sıcaklık) gıdalar, gazlı içecekler ya da aşırı soğuk veya sıcak içecekler farkında olmak için talimat vardır. Bir başka göstergesi tükürük herhangi bir hafif kırmızımsı renklenme normaldir ve pıhtı dağılması üzerine sona erecek konulara verilir. </li><li> Başlık papilla çıkarıldı sitenin değerlendirilmesi için papilla çıkarılmasını takiben 30-40 gün görülür. Bu kez tat papilla tamamen rejenere olması gerekir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Toplanan Doku immünhistokimya, RT-PCR, in situ hibridizasyon, kalsiyum görüntüleme, yama sıkma ve doku kültürü için kullanılan olabilir. Doğru yapıldığında papilla görünümü çapı 0.5-1 mm (Şekil 2B) hakkında, beyaz görünümlü sağlıklı. Immünohistokimya için toplanan papilla mevcut ve yayınlanmış protokolleri 4 dayalı işlenir. Paraformaldehide sabit bir tat papilla tipik bir tat tomurcuğu Şekil 4A gösterilmiştir. Biyopsi papilla da enzimatik tat tomurcuğu hücrelerinin disosiasyon ulaşmak için 5 tedavi edilebilir. Enzimatik ayrılma sonra, hücreler 4C az nemlendirilmiş bir Petri kabındaki 4 saat kadar devam edilebilir. Bu durumda tek hücre PCR (Şekil 4B), Ca-görüntüleme, vb için kullanılabilir Hücreler çeşitli şekillerde, bir tat tomurcuğu hücre beklediğiniz gibi çok ince ve bipolar (Şekil 5A ve 5B). Hücreleri toplamak veya Ca görüntüleme yaparken, mikroskop altında yaklaşık 20 dakika sonra, hücrelerin apoptotik blep (Şekil 6A, 6B, oklar) ve bunların çoğu yuvarlak haline gelişmeye başlar. Şekil 5A ve 5B gösterildiği gibi laboratuarında geliştirilen bir teknik kullanarak, hücreleri, bir yama-pipet kullanarak tek tek kadar tutuklandılar. Yukarıda belirtildiği gibi, papilla regrow 5 ila 8 hafta sonra başlar. Şekil 7A, 8 mantarbiçim papilla sol tarafında bir gönüllünün dil çıkarıldı anestezi kullanılarak bir dil görünümünü ortaya koymaktadır. 8 papilla kapalı snipped hafif kırmızımsı lekeler, dikkat edin. Ameliyattan sonra kanama görülmektedir. Mevcut görüntü, 10 dakika sonra biyopsi alındı. Şekil 7B dil biyopsi 40 gün sonra görülen aynı konuda bir görüntü. Tüm papilla Bildirimi regrown var. Rejenere papilla fonksiyonel olup olmadığını belirlemek için aynı papilla içeren ikinci bir biyopsi kabul etmeye gönüllü istedi. Uygun papilla hasat yeniden planlama doğru bir şekilde tanımlamak için, ilk etapta kaldırıldı ve 40 gün başlangıç ​​biyopsi yazılan sonra aynı gönüllü dil üzerine bindirilmiş olan 8 papilla uygun bir ızgara (Şekil 7C) oluşturulan . Destekli dil kontur ve marj ızgara mesafe, bir kez tanımlanır, aynı papilla birkaç kaldırılır ve immünohistokimya için işlenmiş. Şekil 4A bu papilla biridir. Bir tat tomurcuğu (sarı) ve tip 2 tat hücre transdüksiyon ilişkili enzim Fosfolipaz Cβ2 (PLCβ2), immünopozitif boyama anahat dikkat edin. Bu veriler, burada açıklandığı gibi biyopsisi kullanarak o, mantarbiçim papilla yeterince yer büyük olasılıkla fonksiyonel tat tomurcukları da 40 gün yeniden göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Konunun dil ön çeyreğinde, steril gazlı bez içine sarılmış ve cerrahın sol elde tutulur. Dil sıkıca tutulmalıdır. Sağdaki büyütülmüş görüntü makas ve bıçak ile ilgili olarak papilla konumunu uygun konumunu gösterir. 201/2201fig2.jpg &quot;alt =&quot; Şekil 2 &quot;/&gt; Şekil 2. (A) Mantar papilla mavi oklarla gösterilmiştir. Bunlar biraz çevresi ve onların yakın çevresinde filliform papilla yoksun dairesel bir alan var izole yuvarlak yapılardır. Kaldırıldı bahar ucunda mikro-makas saniye sonra (B) Mantar tat papilla. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Öz, bir ayna ve anestezi kullanılarak mantarbiçim papilla biyopsisi. Içerlek makas genel pozisyonu, dilin dorsal yüzeyi ile paralel olmalıdır göstermektedir. Düzgün ve atraumatically yapılırsa, anestezi hemen hemen tüm gönüllüler tarafından Dolaylı maliyetler. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="Şekil 4a" /> Şekil 4 A. İmmünohistokimya bir tat tomurcuğu. Bir mantarbiçim papilla Fosfolipaz β2 antikorları kullanarak Nomarski optik görüntülendi ve kırmızı floresan proteini ile etiketlenen. Anahat tat tomurcuğu ve birkaç etiketli tat hücreleri sarı gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="Şekil 4b" /> B. aday ekşi bir tat reseptör RT-PCR, Asit Algılama İyon Kanal 1 (ASIC1). M = işaretleyici. 1 - 4 arasındaki Lanes dört farklı gönüllülerin ASIC1 için tek hücre RT-PCR. Toplandıktan sonra, mantarbiçim papilla enzimatik olarak ayrışmış, hücreleri tek tek kaldırdı ve ASIC1 ifade yapıldı. 2 ve 4 Lanes ASIC1 normal bir ifade vardı. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="Şekil 5" /> Şekil 5. A. Görüntüsü olan tek tat hücreleri, bir yama pipet kullanarak aldı. Büyük bir epitel hücre sol alt köşesinde (5A) görünür. İki kırmızı kan hücreleri de yama pipet üzerinde ve cam varil arkasında görünür. Tat hücresi yaklaşık 30-50 mikron uzunluğunda ve yaklaşık 6 mikron genişliğinde. Referans için, kırmızı kan hücresi, yaklaşık 7-8 mikron çapındadır. B. dört epitel hücreleri ile çevrili bir başka tat reseptör hücre gösterir. Tat hücre net görünüyor. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="Şekil 6" /> Şekil 6. A. Görüntüler hücrelerinin apoptotik blep (tat hücre, oklar bağlı yuvarlak blep gibi hayalet) gelişmeye başladı. Burada görüldüğü gibi onların görünümünü değiştirir B. Hücreler artık hasat edilir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="Şekil 7" /> Şekil 7. Hiçbir anestezi ile 8 tat papilla çıkarılmasından sonra on dakika A.. Cerrahi siteleri biraz kırmızımsı lekeler olarak görünür. Kanama fark edilir. B. biyopsi 40 gün sonra aynı dil. Rejenere tüm papilla dikkat edin. Regrown olarak kaldırılır papilla belirlemenize yardımcı olmak için, ızgara sağ tarafında resmi sitesi ile oluşturulan ve sol tarafı görüntü yeniden papilla üzerinde kaydırılır. C. rejenere papilla aynı noktada ortaya çıktı. Rejenere papilla (Bkz. Şekil 4A) fonksiyonel tat hücreleri içerdiği gösterilmiştir immünohistokimya bu grup tekrar papilla Hasat.

<ol>
	<li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+taste+perception.">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li><li>Miller, I., Doty, R. I., Dekker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+peripheral+taste+system.">Anatomy of the peripheral taste system.</a> Handbook of Olfaction and Gustation. , 521-547 (1995).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Figure+12.67.">Figure 12.67.</a> Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery. , (1995).</li><li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue.">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li><li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I., Spielman, A. I., Brand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse.">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. , 329-332 (1995).</li></ol>

Bir önemli avantajı, insan hücreleri kullanarak, kendi özgünlüklerini. Burada ayrıntılı olarak açıklanan prosedürü insandan tat reseptör hücrelerinin izolasyonu için dil doku sağlar. Bu tat hücreleri tat bilgisini transdüksiyonu için önemli molekülleri keşfetmek isteyen moleküler çalışmalar için kullanılan, kalsiyum görüntüleme çalışmaları uyaranlara tat hücre aktivitesini izlemek için olabilir Ayrıca, bu yordamı tarafından sağlanan dil doku in situ hibridizasyon gibi i...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>McPherson-Vannas. Curved, sharp cutting edge 5mm. Comb, tip width 0.2 mm overall length 3"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz Surgical Instruments Co., Inc. Gaithersburg, MD 20898</td>
<td>RS-5603, Roboz</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small Dumont forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz Surgical Instruments Co.</td>
<td>RS-4915, Roboz</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

technique to collect fungiform (taste) papillae from human tongue

Tat duygusu, insan hayatı için kritik öneme sahiptir. Bu vücudu potansiyel yutulur gıda kalitesi hakkında bilgilendirir ve sindirim için sindirim kanalı hazırlamak metabolik süreçleri harekete geçirir. Sabit ilerleme tat transdüksiyon (bir inceleme için, Breslin ve Spector, 2008 1) erken biyokimyasal ve moleküler olayların altında yatan anlayış doğru yapılmaktadır. Ancak, bugüne kadar kaydedilen ilerleme, büyük ölçüde hayvan modellerinde yol açmıştır. Ancak, reseptör özgüllüğü ve reseptör yoğunluğu belirgin farklılıklar, türler arasında değişiklik gösterir, insan tat transdüksiyon sadece insan tat doku kullanarak anlaşılmış olacaktır. Burada tat tomurcukları içeren çapı yaklaşık 0,5 mm yuvarlak pembe anterior yapılar gibi görünür insan mantarbiçim papilla, toplamak için bir biyopsi tekniği açıklar. Bu biyopsi papilla in situ hibridizasyon, immünhistokimya yaşayabilir tat tomurcuğu hücrelerinin izolasyonu ve moleküler biyoloji teknikleri ile, tat-özel yeni proteinlerin belirlenmesi de dahil olmak üzere birçok amaç için kullanılmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue at JoVE.com

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Bilgi tat transdüksiyon altında yatan moleküler mekanizmaları son zamanlarda büyük ölçüde hayvan modelleri kullanarak, önemli gelişmeler kazanmıştır. Ancak, insan doku memeliler garanti çalışmalar arasında tat duyarlılığı ve özgüllüğü çeşitliliği. Biz insan dil üzerinde papilla yaşam tat hücreleri toplamak için biyopsi tekniği açıklar.

İnsan Dil Mantar (Tat) papilla toplayın Tekniği

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

technique-to-collect-fungiform-taste-papillae-from-human-tongue

Research

JoVE Journal

Medicine

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

28.8K Görüntüleme.  College of Dentistry, New York University. Bilgi tat transdüksiyon altında yatan moleküler mekanizmaları son zamanlarda büyük ölçüde hayvan modelleri kullanarak, önemli gelişmeler kazanmıştır. Ancak, insan doku memeliler garanti çalışmalar arasında tat duyarlılığı ve özgüllüğü çeşitliliği. Biz insan dil üzerinde papilla yaşam tat hücreleri toplamak için biyopsi tekniği açıklar.

Video: Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 diabetic islets from organ donors2. Here we share our protocol for isolating islets from human pancreatic tissue obtained from type 2 diabetic and non-diabetic patients who have undergone partial pancreatectomy due to different pancreatic diseases (benign or malignant pancreatic tumors, chronic pancreatitis, and common bile duct or duodenal tumors). All patients involved gave their consent to this study, which had also been approved by the local ethics committee. The surgical specimens were immediately delivered to the pathologist who selected soft and healthy appearing pancreatic tissue for islet isolation, retaining the damaged tissue for diagnostic purposes. We found that to isolate more than 1,000 islets, we had to begin with at least 2 g of pancreatic tissue. Also essential to our protocol was to visibly distend the tissue when injecting the enzyme-containing media and subsequently mince it to aid digestion by increasing the surface area.
To extend the applicability of our protocol to include the occasional case in which a large amount (&gt;15g) of human pancreatic tissue is available , we used a Ricordi chamber (50 ml) to digest the tissue. During digestion, we manually shook the Ricordi chamber3 at an intensity that varied by specimen according to its level of tissue fibrosis. A discontinous Ficoll gradient was then used to separate the islets from acinar tissue. We noted that the tissue pellet should be small enough to be homogenously resuspended in Ficoll medium with a density of 1.125 g/ml. After isolation, we cultured the islets under stress free conditions (no shaking or rotation) with 5% CO2 at 37 &deg;C for at least 48 h in order to facilitate their functional recovery. Widespread application of our protocol and its future improvement could enable the timely harvesting of large quantities of human islets from diabetic and clinically matched non-diabetic subjects, greatly advancing type 2 diabetes research.

The supply of type 2 diabetic islets for research is insufficient. Here we share our protocol for isolating islets from patients undergoing partial pancreatectomy. This approach represents a unique venue for obtaining islets from type 2 diabetic and clinically matched non-diabetic subjects in adequate numbers for basic and clinical studies.

Kısmen Pancreatectomized hastalar İnsan Islets izolasyonu

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Tıp

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly effective. This video describes the percutaneous biopsy technique using a modified Bergstr&#246;m needle to obtain skeletal muscle tissue samples from the vastus lateralis of human subjects. The Bergstr&#246;m needle consists of an outer cannula with a small opening (&#8216;window&#8217;) at the side of the tip and an inner trocar with a cutting blade at the distal end. Under local anesthesia and aseptic conditions, the needle is advanced into the skeletal muscle through an incision in the skin, subcutaneous tissue, and fascia. Next, suction is applied to the inner trocar, the outer trocar is pulled back, skeletal muscle tissue is drawn into the window of the outer cannula by the suction, and the inner trocar is rapidly closed, thus cutting or clipping the skeletal muscle tissue sample. The needle is rotated 90&#176;&#160;and another cut is made. This process may be repeated three more times. This multiple cutting technique typically produces a sample of 100-200 mg or more in healthy subjects and can be done immediately before, during, and after a bout of exercise or other intervention. Following post-biopsy dressing of the incision site, subjects typically resume their activities of daily living right away and can fully participate in vigorous physical activity within 48-72 hr. Subjects should avoid heavy resistance exercise for 48 hr to reduce the risk of herniation of the muscle through the incision in the fascia.

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Modifiye Bergström Tekniği İnsan İskelet Kası Biyopsi Prosedürleri

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Using a Laminating Technique to Perform Confocal Microscopy of the Human Sclera

The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and VII). Due to its autofluorescence, opaqueness, and thickness, it has not been found suitable for confocal microscopy. An alternative approach to the one presented here, which uses formalin-fixed sclera embedded in paraffin for immunohistochemistry, has technical challenges, especially when preheating the tissue for antigen retrieval. Since the sclera is relatively poor in both cells and vessels, the use of larger tissue samples was explored to help prevent overlooking cells and to understand their localization in relation to vessels and other anatomical sites. To allow for the analysis of larger tissue samples under the confocal microscope, a laminating technique was performed to create thin layers from the sclera. Following the analysis of results of CD31 blood vessels and lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE1) positive cells, for which approval for scientific examination was obtained, the advantages and limitations of this method are discussed.

Human sclera tissue is mainly collagen; therefore, it is not easily usable for immunohistochemistry. To achieve the goal of performing immunohistochemistry for confocal microscopy of scleral tissue, a laminating technique was used.

İnsan sklera Konfokal Mikroskobu gerçekleştirmek için bir Laminasyon Tekniği


The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

Sıçan Dilinin Mekanik ve Viskoelastik Özelliklerinin In Vivo Değerlendirilmesi

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

Minimal invaziv transvers aort daralma farelerde sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için tekniği

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

Tat sınavı: Bir kısa ve doğrulanan Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures prevents a number of cardiac surgeons from incorporating them into their practice. The aim of this protocol is to describe a simplified and user-friendly technique of an aortic valve-sparing root replacement (VSRR) procedure by re-implantation of the aortic valve. Proper selection of patients and limitations of the technique are discussed.
In 54 consecutive patients, normal appearing aortic valves were re-implanted in a commercially available polyester prosthesis with pre-shaped sinuses by a simplified and standardized technique. Placement of the first row of the proximal suture line, choice of the prosthesis size, and adjustment of the height of the commissures of the patient to the fixed height of the sinus portion of the prosthesis were slightly modified from the reference techniques with the aim of increasing its feasibility for use by other cardiac surgeons. Early mortality and morbidity as well as 5-year survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were collected in all patients.
Thirty-day mortality, re-sternotomy for bleeding, re-sternotomy for mediastinitis, and the incidence of stroke were very low, 1.8% for each (1 of 54). No patient required permanent pace-maker implantation. At 5 years, survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were 97.5%, 95.2%, and 91.6%, respectively.
Mid-term results of our standardized technique of re-implantation of the aortic valve for valve-sparing aortic root replacement are very good and compare with more complex techniques reported by experienced surgeons. By following the present protocol of the standardized re-implantation technique, a greater number of cardiac surgeons can perform this procedure with comparable good results.

Valve-sparing aortic root replacement has the advantage of preserving the patient&#39;s own aortic valve. The complexity of the reported techniques to date restricts their use to a limited number of cardiac surgeons. This protocol describes step-by-step a standardized technique reproducible by a greater number of cardiac surgeons.

Aort kapak yeniden implantasyon Vana-tutumlu aort için standart tekniği kök değiştirme

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal pigment epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera, the integrity of the fragile retina can easily be compromised. The aim of this study was to develop a novel HORC model that contains the retina, RPE-choroid and sclera to maintain retinal integrity when culturing retinal explants.
After cutting circumferentially along the limbus to remove iris and lens, four deep incisions were made to flatten the eyecup. In contrast to previous HORC protocols, a trephine was used to cut through not only the retina but also the RPE-choroid and sclera. The resultant triple-layered explants were cultured for 72 h. Hematoxylin and Eosin staining (H&#38;E) was used to assess anatomical structures and retinal explants were further characterized by immunohistochemistry (IHC) for apoptosis, M&#252;ller cell integrity and retinal inflammation. To confirm the possibility of disease induction, explants were exposed to high glucose (HG) and pro-inflammatory cytokines (Cyt), to mimic diabetic retinopathy (DR). The Luminex magnetic bead assay was used to measure DR-related cytokines released into the culture medium.
H&#38;E staining revealed distinct retinal lamellae and compact nuclei in retinal explants with the underlying RPE-choroid and sclera, while retinas without the underlying structures exhibited reduced thickness and severe nuclei loss. IHC results indicated absence of apoptosis and retinal inflammation as well as preserved M&#252;ller cell integrity. The Luminex&#160;assays showed significantly increased secretion of DR-associated pro-inflammatory cytokines in retinal explants exposed to HG + Cyt relative to baseline levels at 24 h.
We successfully developed and characterized a novel HORC protocol in which retinal integrity was preserved without apoptosis or retinal inflammation. Moreover, the induced secretion of DR-associated pro-inflammatory biomarkers when exposing retinal explants to HG + Cyt suggests that this model could be used for clinically translatable retinal disease studies.

This study aims to develop a novel human organotypic retinal culture (HORC) model that prevents compromising retinal integrity during explant handling. This is achieved by culturing the retina with the overlying vitreous and the underlying retinal pigment&#160;epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera.

Yeni bir İnsan Organotipik Retina Kültürü Tekniğinin Karakterizasyonu

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold (TDT) Test

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a reliable measure of sweet, salty, and umami taste detection thresholds from childhood to adulthood. Advantages of the method include procedures that are identical for children and adults, thus allowing the determination of age-related and individual differences in taste perception, if any, and tasks that can be completed in a relatively short time frame, do not rely on continuous attention or require memorization, control for subjective response biases, and minimize the impact of language development. After a 1 hour fast, participants are presented with pairs of solutions; in each pair, one solution is water, and the other solution contains varying concentrations of the tastant.
Using a whole-mouth tasting method, participants taste each solution (without swallowing and with rinsing between tastings) and then point to the solution with a taste or that tastes different from water. The concentration of the stimulus in the subsequent pair increases after a single incorrect response and decreases after two consecutive correct responses. A reversal occurs when the concentration sequence changes direction. The task is deemed completed after the occurrence of four reversals, provided there are a maximum of two dilution steps between two successive reversals, and the series of reversals do not form an ascending pattern. These additional criteria ensure greater reliability in outcomes. The TDT is then calculated as the geometric mean of the concentrations of the four reversals. This method has real-world relevance as it provides information on a dimension of taste perception that is independent of hedonics, and that can change with aging and certain disease states, making it a valuable psychophysical test.

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold TDT Test

Psychophysical tools measure the functionality of the taste system for both research and health assessment purposes. This paper describes a method to measure taste detection thresholds that can determine the lowest concentration of sucrose, sodium chloride, or monosodium glutamate that can be tasted by individuals as young as 6 years.

Çocuklarda, Ergenlerde ve Yetişkinlerde Tat Algılama Eşiklerini Değerlendirmek için Psikofiziksel Takip Yöntemi: Tat Algılama Eşiği (TDT) Testi

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a ...