이 작품은 NIH R21 DC03969 - 01 (JGB)을 지원했다. 우리는 기술 지원을 그림 4B 씨와 D. 베일리 부인과 S. Alarcon에 표시된 RT - PCR을 수행하기위한 하나의 미뢰 세포 박사 Tauf Huque를 캡처 박사 프리츠 Lischka 감사합니다. M. 야니나 Pepino는 의학의 NIDAT32 DA07313 워싱턴 대학 학교, 세인트 루이스, MO (Cottler, LB PI)에 의해 지원하는 사람입니다.

1. 소개 및 일반 고려 사항 일반적인 절차는 곡선 봄 마이크로를 사용하는 것을 anesthetized 지역에서 fungiform (미각) 용의자의 숫자 (6-8)의 제거 다음에 앞쪽에 혀 등의 표면의 작은 (1cm 2) 영역의 국소 마취를 포함 - 가위 (맥퍼슨 - Vannas 타입 SR # 5603, Roboz, 락빌, MD). 삭제 fungiform 용의자는 약 0.25 mm 3 각 수 있습니다. 각각의 유두와 함께 제거는 거의하지 않는 용의자 (맛) 상피 조직이 있습니다. 새로운 용의자의 3~5주 이후이 지역에 서식하고 (스필맨과 브랜드, 관찰되지 않은) 입맛 기능 회복. 미각 물질이​​ 소량의 제거 후 음식의 맛 또는 풍미에는 눈에 띄는 효과가 없습니다. 성인 인간의 혀를에서 개별 입맛 계산이 연구에서, 그것은 인간 혀 약 5,000 입맛을 포함 것으로 추산하실 수 있습니다. 우리의 절차는 제거이 입맛의 대부분에서 20-25 (평균 ~ 인간 fungiform 유두 당 3.5-4 입맛) 2, 또는 전체의 0.4 % 정도. 또한이 조직의 손실 수술과 관련된 통증은 없습니다. 바늘이 혀를 입력으로 하나, 사출 사이트에서만 약간의 통증 물론, 느낀다. 마취가 없어진 후, 그곳에서 하루도 안되었 가끔 온화한 불편은 있지만 불편함은 할 일이 경험하는 것은 실수로 사람의 혀를 &quot;을 물고&quot;다음보다 훨씬 적습니다. 지난 몇 년간 우리는 마취를 포함하지 않는 대체 절차를 개발했습니다. 조직 제거에 대한 기술은 모두 동일합니다. 프로 시저의 유일한 차이점은 의사가 더 이상 마취가 해결되었습니다 1cm 직경이 영역에 국한되지 않습니다 것입니다. 오히려 S / 그는 유수의 용의자가 나타납니다 혀 등의 표면에 어떤 사이트를 선택할 수 있습니다. 의식과 관련된 통증과 비교하면 제거 용의자의 총수가 제대로 수행하는 경우 또는 마취없이 두 기술에 6-8로 제한됩니다, 6-8 fungiform의 맛을의 용의자를 제거하는 불편이 적은 문제로 간주됩니다 국소 마취를 모두 절차를 받았습니다 개인의 일반적인 조사, 즉,과 마취없이 과목의 압도적 앞으로 모든 biopsies에 국소 마취를하지 않고 분배 것이라고했다. 이 기법 (AIS) 및 마취없이 biopsies을 수행 작성자 가르쳐 여러 동료를 개발 외과 의사들은 자신에 시도하고 불편이 일시적이고 물고 혀를의보다 간주됩니다 증언했습니다. 그들은 마취없이 한 유두의 제거를 시도 기꺼이면 마지막으로, biopsied 수 동의한 개인 수십 묻는 메시지가되었으며 그들이 그들이 마취를 받아야 것이 너무 힘들어하는 판단하는 경우, 모든 않고 용의자의 제거를 계속 동의 마취. 전체 생검 5-10 분 이상 안 걸릴 것입니다. 마취가 고용하는 경우 다른 2~3분이 추가됩니다. 생검은 일반적으로 아침 시간에 수행됩니다. 생검 전에, 자원 봉사자 2 시간 예정 시작 시간 전에 가벼운 식사를 지시하고 있습니다. 생검에서 작성된 정보를 동의가 얻어진다. 생검시 제외 기준 (예를 들어, 모든 위장병 질환, neurodegenerative 질병, 암, 혈액 dyscrasias, 지역 anesthetics에 알레르기 등)보다 큰 심장 박동과 함께들을 약물에 의해 통제 여부와 상관없이 심각한 만성 질환있는 사람을 포함 60 100 이하, 145보다 크거나 100보다 수축기 혈압, 피사체가 연구에 참여할 수있는 90보다 크거나 60보다, 그리고 외과 의사의 의견 diastolic 혈압. 마지막으로, 생검 절차는 우리가 자주 mRNA의 감소 품질의 언급이 같은 조직의 무결성이 빠르게 손실되어 있기 때문에 조직 검사에 대한 처리됩니다 같은 시설에서 수행되어야한다는 것을 고려하는 것이 중요합니다. 이러한 문제를 최소화하려면 혀 조직은 가능한 빨리 처리되어야합니다. 2. 제목 준비 <ol><li> 주제는 치과 의자 또는 머리 받침이있는 자리에 앉아있다. </li><li> 생검 당시의 심장 박동과 혈압을 확인합니다. 혈압, 심장 박동이나 구두 능력의 범위 밖의 주제 가을 경우, 의사는 그 / 그녀가 의사를 볼 즉각적인 약속을 그 주제로하는 것이 좋습니다. </li><li> xerostomia, 지리적 혀 또는 혀 병변의 지표에 관심을 가진 일반적인 조직의 건강을 위해 구강 검사. 혀를 병변 또는 xerostomia 포함한 구강 질환의 징후를 보여주는 모든 과목은 연구에서 제외됩니다. 구두 cavit에서 모든 파편을 제거하기 위해 물로 입을 헹굴 수있는 주제를 지시Y. 필요한 경우 혀가 마취 주사를하는 동안 혓바닥으로 진행 될 수 플라크이나 먼지를 제거하는 일회용 혀 scrapper와 세척합니다. 외과 의사는 구강에서 확장으로 혀 앞쪽에 ¼ 잡아 장갑 낀 손에 멸균 거즈 패드를 사용합니다. </li><li> 마취를 사용하는 경우, 28 게이지와 1cc 투베르쿨린 주사기 X 에피네프린 (1:100,000)와 0.25 ML lidocaine (2 %)를 포함하는 ½ &#39;주사 바늘을 천천히 그저 혀 앞쪽에 부분의 지느러미 표면 아래에 하나의 사이트에 주입 . 마취의이 사이트는 이후의 연구와 lidocaine에 의해 간섭을 피하기 위해 수집 사이트에 말초입니다. 비교, 주입 lidocaine의 크기 (0.25 ML)는 일반적으로 치과 절차에 신경 블록 (0.8 ML 1 ML)에 주어진 금액에 대해 분기입니다. 바늘의 삽입 후 있지만 마취의 주입 전에 열망은 혈관이 명중되지 않도록 보장합니다. 그것이 큰 선박이 가까이 등의 표면에 빠진 것으로 해부학적인 몸의 구조 가능성에도 불구하고이주의은 이미 사용 중입니다. 등의 표면에 유일한 동맥은 등의 언어를 구사하는 동맥은 주로 조직의 수확이 발생 앞쪽에 셋째, 더 후부에있는 작은 혈관이있다. 혀의 복부 표면에서 실행되는 큰 언어 동맥과 정맥 언어 훨씬 마취 3 수신 등의 지역에서 삭제되었습니다. 1cm anesthetized 지역은 주변 조직에 비해 약간 옅은 것 같습니다. 이것은 작은 혈관을 압축으로 조직의 붓기 때문이다. 또한 에피네프린의 vasoconstrictive 효과에 의한 것입니다. 1 분 후, 프로브 마비에 대한 영역을 테스트하는 데 사용됩니다. 이 지역은 마비되지 않은 경우, 두 번째 주사 (0.1-0.2 ML)가 주어질 수 있습니다. </li></ol> 3. 텅 용의자를 제거 기술 <ol><li> 피사체의 혀가의 앞쪽에 분기는 (오른손으로 생검을 수행하는 경우) 멸균 거즈로 싸서 (그림 1)과 외과 의사의 왼쪽에서 개최됩니다. 거즈 중 하나 모서리는 외과 의사가 타액 무료로 혀를 닦으 수 있도록 열려 남아 있습니다. 혀는 불필요한 불편을 원인으로하지, 그래서 단단히 개최,하지만 물론해야합니다. 왼손의 검지 손가락의 끝에 직접 생검이 수행되는 사이트 아래에있는 혀 아래에 위치합니다. 상승 검지 손가락을 추진함으로써, 혀 용의자를 쉽게 생검을 위해 스틱 만들기 손가락의 끝에 끌었됩니다. </li><li> 생검에 대한 용의자를 선택하는 기준 : 맛 용의자들은 모양과 크기에 의해 주변 filliform 용의자에서 쉽게 구별할 수 있습니다. Fungiform 용의자는 주변의 원형과 다소 고립됩니다. 그들의 바로 근처에 filliform 용의자 (그림 2A, 파란색 화살표)의 찾아볼 수없는이 원형의 공간이 있습니다. 이 공간은 직경 1mm에 관한 것입니다. fungiform 용의자의 또 다른 특징은 젊은 과목의 대부분 fungiform 용의자 위에 보이는 확장된 모세 arborization입니다. arborization이 위치 fungiform의 용의자는 쉽게하지만, 그들은 유두의 입맛의 존재의 좋은 predictors 반드시 없습니다. 규칙 하나는 프런트 엔드 향해 수확 시작하고 다음 조직 컬렉션의 사이트를 왜곡로부터 모세관 출혈을 피하기 위해 멀리 혀끝에서 움직이면서. </li><li> 일단 좋은 유두는 봄, 마이크로 가위 (맥퍼슨 - Vannas, 곡선, 날카로운 커팅 에지 5mm, 빗, 팁 폭 0.2 mm 전체 길이 3 &quot;(RS - 5603, Roboz) 그것을 클립하는 데 사용됩니다이 확인되었습니다. 효과적으로 마이크로 외과 가위를 사용하려면 하나는 절단을위한 블레이드의 팁을 사용하면 안됩니다; 아니라, 지금까지의 블레이드 내부 (그림 1, 확대 이미지와 그림 3) 가능한 한 가까이 교차 지점에 반대 블레이드와 함께. 유두의 제거는 가위 중 하나가 절단 이동 (그림 1)로 이루어진다. 대상 유두가 나타나는 오픈 블레이드 내부의 추가, 더 효과가 커팅되어 있습니다. 가위의 전반적인 위치가 평행해야한다는 케어 이동해야합니다 혀 등의 표면. </li><li> 때로는 혀가 외과 의사가 제거 유두를 파악하려고으로 건조된다. 일단 건조, 명확하게 fungiform의 유두되는 확인하기 위해 운영자의 능력보다 도전되고 매우 어려운 유두를 통해 날개의 슬라이딩 있습니다. 지나치게 마른 혀는 일반적으로 섬세한 수술 이동이 적은 제어하는​​ 혀에 금속 블레이드 스틱을합니다. 피사체가 그 / 그녀의 입을 닫고 타액은 혀의 표면과 접촉 온시키는 것은 과정을 도와줍니다. 지나치게 서부 유럽 표준시 혀도 좋지 않다. 하나가 혀를 보유하는 데 사용하는 거즈의 모서리를 사용하면이 과정에서 도움이됩니다. </li><li> 발생하는 모든 모세관 출혈은 멸균 거즈로 모래 바닥에 의해 처리됩니다. 보통 출혈하면 몇 분 이내에 중지<html> 백인 군대가 및 추가 조직 수확을 방해하지 않습니다. 용의자는 혀가의 상피 표면 위 확장 및 fungiform 유두만을 상단 4분의 3가 (그림 2B) 제거되기 때문에 입맛을 나타내는 fungiform의 일부는 약간의 출혈이 예상된다. </li><li> 작은 더몬트 포셉을 (패턴 타입)를 사용하여 제거 용의자는 (130 MM NaCl, 5 MM KCl, 1 MM CaCl 2, 1 MM MgCl 2, 1 ㎜ 나 - Pyruvate, 20 MM HEPES - 나 차게 기본 링어 버퍼에 배치됩니다 , 산도 7.2; ~ 305 밀리의 osmols의 osmolality) 이후 조작하십시오. 포셉의 날개 사이에 유두를 꼬집어 절대로 필수적인 그것을 것입니다. 조직은 매우 불안정하고 극단주의해서 다루어 져야합니다. </li><li> 용의자를 제거 후, ​​주제 십년은 15 분 동안 의자에 남아 있습니다. 각 과목들은 anesthetized 혀에 물려하지만, 나머지에 그들의 혀를 유지 말라고합니다. 과목은 시각적으로 참가 외과 의사에 의해 모니터링해야합니다. 마취는 약 30-60분에서 깨어나기 예정입니다. 용의자를 제거 사이트에서 생검 후 약간 아플 수도 있기 때문에, 그들은 매운 곳이나 (온도) 음식, 탄산 음료 또는 중 매우 추운 곳이나 아르 음료 인식하도록 지시하고 있습니다. 추가 표시는 타액의 약간의 붉은 착색 정상이고 응고의 해산시 중단됩니다 과목에 주어집니다. </li><li> 과목은 용의자가 제거되었습니다 사이트의 평가 용의자를 제거 다음 30-40일 볼 수 있습니다. 이 시간 맛이 용의자에 의해 완전히 다시 생성해야한다. </li></ol> 5. 대표 결과 수집 조직은 현장 하이브리드화, 칼슘 이미징, 패치 클램핑 및 조직 문화에 immunohistochemistry, RT - PCR, 사용할 수 있습니다. 제대로 수행하면 용의자의 외관은 직경 0.5-1 mm (그림 2B)에 관한, 흰색을 찾고 건강을하고 있습니다. immunohistochemistry에 대한 수집 용의자는 기존 출판 프로토콜 4에 따라 처리됩니다. paraformaldehide - 고정 맛을 유두에서 전형적인 미뢰은 그림 4A에 표시됩니다. Biopsied의 용의자는 또한 효소 미뢰 세포의 분리를 달성하기위한 5 대우 수 있습니다. 효소 분리 후, 세포는 4C에서 humidified 페트리 접시에 4 시간에 유지하실 수 있습니다. 이 상태에서는 그들은 단세포 PCR (그림 4B), CA - 영상 등을 사용할 수 있습니다 세포 모양의 다양한 사람이 미뢰 세포의 기대처럼 많은 사람들이 슬림 및 바이폴라 (그림 5A 및 5B)되고 표시됩니다. 세포를 수집 또는 CA - 이미징을 수행하면, 현미경으로 약 20 분 후에 세포가 apoptotic blebs (그림 6A 및 6B, 화살표)과 그들의 많은 라운드가 개발을 시작합니다. 그림 5A 및 5B와 같이 우리가 실험실에서 개발한 기술을 사용하여, 세포는 패치 - 피펫을 사용하여 개별적으로 포착했다. 위에서 언급한 바와 같이 용의자는 5~8주 후에 regrow 시작합니다. 그림 7A는 마취를 사용하지 8 fungiform의 용의자가 왼쪽에서 자원 봉사의 혀를 제거되었습니다 혀의 모양을 보여줍니다. 용의자가 해제 냈다되었습니다 여덟 약간의 붉은 반점을 확인할 수 있습니다. 출혈은 수술 후 관찰되지 않습니다. 현재 이미지는 생검 후 10 분 정도 촬영했다. 그림 7B 40 일 생검 후 본 같은 제목의 혀가의 이미지입니다. 모든 용의자를 통지 regrown 있습니다. 재생 용의자가 작동하는지 확인하기 위해 우리는 동일한 용의자와 관련된 두 번째 생검에 동의하는 것으로 간주됩니다 우리의 자원을 물었다. 정확하게 우리가 다시 수확을 계획하고 있던 해당 용의자를 식별하기 위해, 우리는 처음부터 제거 40 일 초기 생검을 게시 후 같은 자원 봉사의 혀를 통해 그것을 겹쳐 있었다 8 용의자에 맞는 그리드를 (7C 그림) 생성 . 혀의 윤곽과 여백에서 격자의 거리로 주었 한번 확인, 우리는 똑같은 용의자를 몇 가지를 제거하고 immunohistochemistry 그들을 처리합니다. 그림 4A이 용의자 중 하나입니다. 미뢰 (노란색)과 제 2 형 맛을 전달 세포 - 관련된 효소 포스 포 라이 페이스 Cβ2 (PLCβ2)에 대한 immunopositive 얼룩의 개요를 확인할 수 있습니다. 이러한 데이터는 여기에 설명된대로 생검 절차를 사용하여 즉, fungiform의 용의자는 장소 가능성이 기능 입맛도가 40 일까지 재생 충분히 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 피사체의 혀가의 앞쪽에 분기는 멸균 거즈로 싸서와 외과 의사의 왼쪽에서 개최됩니다. 텅는 단단히 실시해야합니다. 오른쪽에 확대된 이미지는 가위와 블레이드 관련하여 유두의 위치의 적절한 위치를 보여줍니다. 201/2201fig2.jpg &quot;고도 =&quot;그림 2 &quot;/&gt; 그림 2. (A) Fungiform 용의자는 파란색 화살표로 표시됩니다. 이들은 다소 그 주변과 인근에 filliform 용의자를 찾아볼 수없는이 원형 공간이있다으로부터 격리 원형 구조입니다. 그것이 제거된 마이크로 가위 초 후에 봄의 끝 (B) Fungiform의 미각 유두. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 자체 거울없이 마취를 사용하여 fungiform의 유두의 생검. 삽입된 페이지는 혀 등의 표면과 평행해야하는 가위의 전반적인 위치를 보여줍니다. 제대로하고 atraumatically 완료하면, 마취가 거의 모든 자원 봉사자에 의해 forgone 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="그림 4A" /> 그림 4 A. 미뢰의 Immunohistochemistry. fungiform 유두는 포스 포 라이 페이스 β2에 항체를 사용하여 Nomarski 광학에 의해 시각과 레드 형광 단백질 태그. 미뢰 및 몇 가지 표시 맛을 세포의 개요는 노란색으로 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="그림 4B" /> 후보 신맛 수용체의 RT - PCR B., 산성 감지 이온 채널 1 (ASIC1). M = 마커. 4 레인스 1 네 가지 자원 봉사자의 ASIC1에 대한 단세포 RT - PCR되었습니다. 수집 후, fungiform 용의자는 효소 dissociated 있었다 전지는 개별적으로 데리러와 ASIC1 표현 다되었습니다. 레인스 2 4 ASIC1 정상 표현했다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5. 되는 하나의 미각 세포의 A. 이미지 패치 피펫을 사용하여 왔어요. 대형 상피 세포는 왼쪽 하단 모서리 (5A)에서 볼 수 있습니다. 두 개의 적혈구가 또한 패치 피펫 위에 유리 통 뒤에 볼 수 있습니다. 미각 세포는 약 30-50 마이크론 길이 약 6 미크론 넓습니다. 참고로, 적혈구 세포는 직경 7-8 미크론에 관한 것입니다. B. 네 개의 상피 세포로 둘러싸인 다른 맛 수용체 세포를 보여줍니다. 미각 세포는 상쾌한 보입니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="그림 6" /> 그림 6. apoptotic blebs를 (맛 세포, 화살표에 부착된 둥근 blebs 같은 귀신) 개발을 시작 세포의 A. 이미지. 여기에 같이 자신의 외관이 변화하면 B. 전지는 더 이상 수확되지 않습니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="그림 7" /> 그림 7. 어떤 마취를 사용하지 여덟 맛을 용의자를 제거 후 10 분 A.. 외과 사이트는 약간 붉은 반점으로 볼 수 있습니다. 출혈은이 발견되지 않습니다. 사십일 생검 후 같은 혀를 B.. 모든 용의자가 생성납니다. regrown로 제거 용의자를 식별하기 위해, 그리드는 오른쪽 그림에있는 사이트 만들고 왼쪽 이미지에있는 재생 용의자를 통해 이동했다. C.이 생성 용의자는 동일한 장소에 나타났습니다. 재생 용의자는 (그림 4A 참조) 기능 미각 세포를 포함 것을 보여준 immunohistochemistry 다음이 그룹에서 다시 용의자를 수확.

<ol>
	<li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+taste+perception.">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li><li>Miller, I., Doty, R. I., Dekker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+peripheral+taste+system.">Anatomy of the peripheral taste system.</a> Handbook of Olfaction and Gustation. , 521-547 (1995).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Figure+12.67.">Figure 12.67.</a> Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery. , (1995).</li><li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue.">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li><li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I., Spielman, A. I., Brand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse.">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. , 329-332 (1995).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

인간의 세포를 사용하는 한 가지 주목할만한 장점은 자신의 특이성이다. 상세 여기에서 설명한 절차는 인간의 미각 수용체 세포의 격리를 위해 혀 조직을 제공합니다. 이러한 미각 세포가 미각 정보 전달에 중요한 분자를 발견하려는, 분자 연구에 사용하고, 자극에 맛을 세포 활동을 모니터링 칼슘 이미징 연구. 수 있습니다 또한,이 절차에 의해 제공 혀 조직은 현장 하이브리드화 이러?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>McPherson-Vannas. Curved, sharp cutting edge 5mm. Comb, tip width 0.2 mm overall length 3"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz Surgical Instruments Co., Inc. Gaithersburg, MD 20898</td>
<td>RS-5603, Roboz</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small Dumont forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz Surgical Instruments Co.</td>
<td>RS-4915, Roboz</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

technique to collect fungiform (taste) papillae from human tongue

맛의 감각은 인간 생활에 중요합니다. 그것은 잠재적으로 섭취한다 음식의 품질에 대한 본문을 알리고 소화에 대한 영양의 운하를 준비 신진 대사 과정을 자극. 꾸준한 진행 맛을 전달을 (검토를 위해, 브레슬린과 스펙터 2008 1) 기본 초기 생화학 및 분자 이벤트를 이해하는 방향으로 만들어지고있다. 그러나, 현재까지 진행 주로 동물 모델에서 발생했습니다. 수용체의 특이성과 수용체 밀도에 표시된 차이가 종 가운데 다르므 그러나, 인간의 맛을 전달은 인간의 미각 조직을 사용하여 이해합니다. 여기 우리는 입맛을 포함 직경 0.5 mm에 대한 반올림 핑크 앞쪽에 구조로 보이는 인간 fungiform 용의자를 수집하는 생검 방법을 설명합니다. 이러한 biopsied 용의자는 현장 하이브리드화, immunohistochemistry에서 가능한 미뢰 세포의 분리, 그리고 분자 생물학의 기술을 통해 맛을 특정 소설 단백질의 식별을 포함하여 여러 목적으로 사용됩니다.

Watch this Scientific Journal Video about Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue at JoVE.com

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

gustatory 전달을 기본 분자 메커니즘의 지식은 최근에 크게 인해 동물 모델을 사용하는, 상당한 발전을 즐기고있다. 그러나, 인간의 조직에있는 포유류 영장 연구 중에서 맛이 감도 및 특이성의 넓은 다양성. 우리는 인간의 혀 용의자의 생활 미각 세포를 수집하는 생검 방법을 설명합니다.

인간 혀에서 Fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

technique-to-collect-fungiform-taste-papillae-from-human-tongue

Research

JoVE Journal

Medicine

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

28.7K 조회수.  College of Dentistry, New York University. gustatory 전달을 기본 분자 메커니즘의 지식은 최근에 크게 인해 동물 모델을 사용하는, 상당한 발전을 즐기고있다. 그러나, 인간의 조직에있는 포유류 영장 연구 중에서 맛이 감도 및 특이성의 넓은 다양성. 우리는 인간의 혀 용의자의 생활 미각 세포를 수집하는 생검 방법을 설명합니다.

비디오: Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 diabetic islets from organ donors2. Here we share our protocol for isolating islets from human pancreatic tissue obtained from type 2 diabetic and non-diabetic patients who have undergone partial pancreatectomy due to different pancreatic diseases (benign or malignant pancreatic tumors, chronic pancreatitis, and common bile duct or duodenal tumors). All patients involved gave their consent to this study, which had also been approved by the local ethics committee. The surgical specimens were immediately delivered to the pathologist who selected soft and healthy appearing pancreatic tissue for islet isolation, retaining the damaged tissue for diagnostic purposes. We found that to isolate more than 1,000 islets, we had to begin with at least 2 g of pancreatic tissue. Also essential to our protocol was to visibly distend the tissue when injecting the enzyme-containing media and subsequently mince it to aid digestion by increasing the surface area.
To extend the applicability of our protocol to include the occasional case in which a large amount (&gt;15g) of human pancreatic tissue is available , we used a Ricordi chamber (50 ml) to digest the tissue. During digestion, we manually shook the Ricordi chamber3 at an intensity that varied by specimen according to its level of tissue fibrosis. A discontinous Ficoll gradient was then used to separate the islets from acinar tissue. We noted that the tissue pellet should be small enough to be homogenously resuspended in Ficoll medium with a density of 1.125 g/ml. After isolation, we cultured the islets under stress free conditions (no shaking or rotation) with 5% CO2 at 37 &deg;C for at least 48 h in order to facilitate their functional recovery. Widespread application of our protocol and its future improvement could enable the timely harvesting of large quantities of human islets from diabetic and clinically matched non-diabetic subjects, greatly advancing type 2 diabetes research.

The supply of type 2 diabetic islets for research is insufficient. Here we share our protocol for isolating islets from patients undergoing partial pancreatectomy. This approach represents a unique venue for obtaining islets from type 2 diabetic and clinically matched non-diabetic subjects in adequate numbers for basic and clinical studies.

부분 Pancreatectomized 환자에서 인간 아일 레츠의 분리

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

연구

의학

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

위한 간편한 기법<em&gt; 현장에서</em인간 안구 글로브에서 각막 및 망막 조직의 내장 적출의&gt; 절단

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly effective. This video describes the percutaneous biopsy technique using a modified Bergstr&#246;m needle to obtain skeletal muscle tissue samples from the vastus lateralis of human subjects. The Bergstr&#246;m needle consists of an outer cannula with a small opening (&#8216;window&#8217;) at the side of the tip and an inner trocar with a cutting blade at the distal end. Under local anesthesia and aseptic conditions, the needle is advanced into the skeletal muscle through an incision in the skin, subcutaneous tissue, and fascia. Next, suction is applied to the inner trocar, the outer trocar is pulled back, skeletal muscle tissue is drawn into the window of the outer cannula by the suction, and the inner trocar is rapidly closed, thus cutting or clipping the skeletal muscle tissue sample. The needle is rotated 90&#176;&#160;and another cut is made. This process may be repeated three more times. This multiple cutting technique typically produces a sample of 100-200 mg or more in healthy subjects and can be done immediately before, during, and after a bout of exercise or other intervention. Following post-biopsy dressing of the incision site, subjects typically resume their activities of daily living right away and can fully participate in vigorous physical activity within 48-72 hr. Subjects should avoid heavy resistance exercise for 48 hr to reduce the risk of herniation of the muscle through the incision in the fascia.

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&amp;#246;m Technique

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

수정 된 버그 스트롬 기술을 이용하여 인간의 골격 근육 생검 절차

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Using a Laminating Technique to Perform Confocal Microscopy of the Human Sclera

The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and VII). Due to its autofluorescence, opaqueness, and thickness, it has not been found suitable for confocal microscopy. An alternative approach to the one presented here, which uses formalin-fixed sclera embedded in paraffin for immunohistochemistry, has technical challenges, especially when preheating the tissue for antigen retrieval. Since the sclera is relatively poor in both cells and vessels, the use of larger tissue samples was explored to help prevent overlooking cells and to understand their localization in relation to vessels and other anatomical sites. To allow for the analysis of larger tissue samples under the confocal microscope, a laminating technique was performed to create thin layers from the sclera. Following the analysis of results of CD31 blood vessels and lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE1) positive cells, for which approval for scientific examination was obtained, the advantages and limitations of this method are discussed.

Human sclera tissue is mainly collagen; therefore, it is not easily usable for immunohistochemistry. To achieve the goal of performing immunohistochemistry for confocal microscopy of scleral tissue, a laminating technique was used.

인간 공막의 공 초점 현미경을 수행하기 위해 코팅 기술을 사용하여


The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

혀의 기계적 및 점탄성 특성에 대한 생체 내 평가

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

맛 시험: 짧고 검증 테스트

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures prevents a number of cardiac surgeons from incorporating them into their practice. The aim of this protocol is to describe a simplified and user-friendly technique of an aortic valve-sparing root replacement (VSRR) procedure by re-implantation of the aortic valve. Proper selection of patients and limitations of the technique are discussed.
In 54 consecutive patients, normal appearing aortic valves were re-implanted in a commercially available polyester prosthesis with pre-shaped sinuses by a simplified and standardized technique. Placement of the first row of the proximal suture line, choice of the prosthesis size, and adjustment of the height of the commissures of the patient to the fixed height of the sinus portion of the prosthesis were slightly modified from the reference techniques with the aim of increasing its feasibility for use by other cardiac surgeons. Early mortality and morbidity as well as 5-year survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were collected in all patients.
Thirty-day mortality, re-sternotomy for bleeding, re-sternotomy for mediastinitis, and the incidence of stroke were very low, 1.8% for each (1 of 54). No patient required permanent pace-maker implantation. At 5 years, survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were 97.5%, 95.2%, and 91.6%, respectively.
Mid-term results of our standardized technique of re-implantation of the aortic valve for valve-sparing aortic root replacement are very good and compare with more complex techniques reported by experienced surgeons. By following the present protocol of the standardized re-implantation technique, a greater number of cardiac surgeons can perform this procedure with comparable good results.

Valve-sparing aortic root replacement has the advantage of preserving the patient&#39;s own aortic valve. The complexity of the reported techniques to date restricts their use to a limited number of cardiac surgeons. This protocol describes step-by-step a standardized technique reproducible by a greater number of cardiac surgeons.

대동맥 밸브 밸브 스페어링 대동맥에 다시 주입의 표준화 된 기술 루트 교체

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal pigment epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera, the integrity of the fragile retina can easily be compromised. The aim of this study was to develop a novel HORC model that contains the retina, RPE-choroid and sclera to maintain retinal integrity when culturing retinal explants.
After cutting circumferentially along the limbus to remove iris and lens, four deep incisions were made to flatten the eyecup. In contrast to previous HORC protocols, a trephine was used to cut through not only the retina but also the RPE-choroid and sclera. The resultant triple-layered explants were cultured for 72 h. Hematoxylin and Eosin staining (H&#38;E) was used to assess anatomical structures and retinal explants were further characterized by immunohistochemistry (IHC) for apoptosis, M&#252;ller cell integrity and retinal inflammation. To confirm the possibility of disease induction, explants were exposed to high glucose (HG) and pro-inflammatory cytokines (Cyt), to mimic diabetic retinopathy (DR). The Luminex magnetic bead assay was used to measure DR-related cytokines released into the culture medium.
H&#38;E staining revealed distinct retinal lamellae and compact nuclei in retinal explants with the underlying RPE-choroid and sclera, while retinas without the underlying structures exhibited reduced thickness and severe nuclei loss. IHC results indicated absence of apoptosis and retinal inflammation as well as preserved M&#252;ller cell integrity. The Luminex&#160;assays showed significantly increased secretion of DR-associated pro-inflammatory cytokines in retinal explants exposed to HG + Cyt relative to baseline levels at 24 h.
We successfully developed and characterized a novel HORC protocol in which retinal integrity was preserved without apoptosis or retinal inflammation. Moreover, the induced secretion of DR-associated pro-inflammatory biomarkers when exposing retinal explants to HG + Cyt suggests that this model could be used for clinically translatable retinal disease studies.

This study aims to develop a novel human organotypic retinal culture (HORC) model that prevents compromising retinal integrity during explant handling. This is achieved by culturing the retina with the overlying vitreous and the underlying retinal pigment&#160;epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera.

소설 인간 오르가노피 망막 문화 기술의 특성화

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold (TDT) Test

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a reliable measure of sweet, salty, and umami taste detection thresholds from childhood to adulthood. Advantages of the method include procedures that are identical for children and adults, thus allowing the determination of age-related and individual differences in taste perception, if any, and tasks that can be completed in a relatively short time frame, do not rely on continuous attention or require memorization, control for subjective response biases, and minimize the impact of language development. After a 1 hour fast, participants are presented with pairs of solutions; in each pair, one solution is water, and the other solution contains varying concentrations of the tastant.
Using a whole-mouth tasting method, participants taste each solution (without swallowing and with rinsing between tastings) and then point to the solution with a taste or that tastes different from water. The concentration of the stimulus in the subsequent pair increases after a single incorrect response and decreases after two consecutive correct responses. A reversal occurs when the concentration sequence changes direction. The task is deemed completed after the occurrence of four reversals, provided there are a maximum of two dilution steps between two successive reversals, and the series of reversals do not form an ascending pattern. These additional criteria ensure greater reliability in outcomes. The TDT is then calculated as the geometric mean of the concentrations of the four reversals. This method has real-world relevance as it provides information on a dimension of taste perception that is independent of hedonics, and that can change with aging and certain disease states, making it a valuable psychophysical test.

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold TDT Test

Psychophysical tools measure the functionality of the taste system for both research and health assessment purposes. This paper describes a method to measure taste detection thresholds that can determine the lowest concentration of sucrose, sodium chloride, or monosodium glutamate that can be tasted by individuals as young as 6 years.

어린이, 청소년 및 성인의 맛 감지 임계값을 평가하는 정신 물리학 추적 방법: 맛 감지 임계값(TDT) 테스트

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a ...