<p class="jove_content"> Bu araştırma, Western Kentucky Üniversitesi&#39;nde Fakülte Burs Konseyi Yeni Bir Fakültesi Grant tarafından desteklenmiştir. </p>

<p class="jove_title"> 1. Parmak-Stick Kan Örnekleme </p><ol><li> Tam kan toplanması genellikle kesildikten sonra (genellikle 1-3 saat sırasında bazal ölçüm (genellikle 10-15 dk oturan geri kalanı aşağıdaki), veya bir egzersiz nöbeti hemen ardından, egzersiz sonrası dönem boyunca dinlenme alınır egzersiz). </li><li> Evrensel Önlemler kullanarak, önce parmak ucu% 70 izopropil alkol ile sterilize edin. </li><li> Sonra, delinme, otomatik bir neşter veya benzeri bir cihaz kullanarak site. Biz tabi konfor sağlamak için 30-gauge neşter kullanmalarına rağmen, daha büyük bir iğne yararlanılabilir. </li><li> Ilk kan damlası uzak silin ve sonra da kan pıhtılaşmasını önlemek için lityum heparin ile tedavi, kılcal tüpler veya microvettes içine toplamak. </li></ol><p class="jove_title"> 2. Hücre fenotipleme ve Apoptoz Boyama </p><ol><li> 250 mcL bağlayıcı tampon titred antikor paneli (bkz. Tablo 1 şematik) 10 mcL heparinize tam kan ekleyin. Biz başarı ile 1:20 seyreltme faktörü var, ama her laboratuar için en iyi çalışma çözümü belirlemek için reaktifler titre. <br /> <strong>(Tablo 1).</strong> Lökosit altkümelerini egzersiz apoptosis belirlenmesi için antikor paneli. Geç apoptozis Annexin V ve 7-AAD çift pozitif etiketleme tarafından tanımlanan iken erken apoptozis, Annexin V ifadesi ile tanımlanmıştır. V-7-AAD + hücreler nekrotik hücreler Annexin edildi. <br /><table border="1"><tbody><tr><td> Tüp 1 </td><td> Tüp 2 </td><td> Tüp 3 </td><td> Tüp 4 </td></tr><tr><td> Hücreler sadece tüp </td><td> Annexin V - FITC </td><td> Annexin V - FITC </td><td> Annexin V - FITC <strong></strong></td></tr><tr><td></td><td> Anti İnsan CD4-PE </td><td> Anti İnsan CD8 - PE </td><td> Anti İnsan CD19-PE </td></tr><tr><td></td><td> 7-AAD </td><td> 7-AAD </td><td> 7-AAD </td></tr><tr><td></td><td> Anti İnsan CD45RA - APC </td><td> Anti İnsan CD45RA - APC </td><td></td></tr></tbody></table><br /> 7-AAD = 7-Amino-aktinomisin D, APC = Allophycocyanin, CD4 yardımcı T lenfositler, CD8 = Bastırıcı / sitotoksik T lenfositler, CD19 = B lenfositleri, CD45RA = naif hücre alt grupları, FITC = Floresein izotiyosiyanat, PE = Fikoeritrin. </li><li> Karanlık oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. </li><li> 5-10 dakika 1075 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Durusu, 300 mcL Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tampon ekleyin ve iyice girdap. </li><li> 15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> RBC parçalama reaksiyonu durdurmak için 300 mcL PBS ekleyin. </li><li> 5-10 dakika 1075 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Durusu, raf ve 50 mcL bağlayıcı tampon ekleyin. </li><li> Flow sitometri ile analiz edin. </li></ol><p class="jove_content"> Sadece tüp arka plan otofloresans saptanmasında bir negatif kontrol olarak hizmet etmek için bir hücre, her bireyin içeren tüplere ve akış sitometresinin ilk sırasında tazminat ayarlamak için florokrom: en azından aşağıdaki denetimleri kullanılan olması tavsiye edilir. Buna ek olarak, bizim deneyler kurmak için tazminat standart boncuk başarıyla kullanmıştır. </p>

<ol>
	<li>Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+does+not+contribute+to+the+blood+lymphocytopenia+observed+after+intensive+and+downhill+treadmill+running+in+humans.">Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans.</a> <em style='font-style: italic'>Res. Sports Med</em>. <b>15</b>, 157-174 (2007).</li><li>Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+exercise,+lymphocyte+apoptosis+and+F2-isoprostanes.">Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes.</a> <em style='font-style: italic'>Eur. J. Appl. Physiol</em>. <b>87</b>, 38-42 (2002).</li><li>Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., V&#246;lker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+apoptosis+after+exhaustive+and+moderate+exercise.">Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise.</a> <em style='font-style: italic'>J. Appl. Physiol</em>. <b>93</b>, 147-153 (2002).</li><li>Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+exercise+does+not+cause+lymphocyte+DNA+damage+or+increased+apoptosis+in+well-trained+endurance+athletes.">Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes.</a> <em style='font-style: italic'>Eur. J. Appl. Physiol</em>. <b>98</b>, 124-131 (2006).</li><li>Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+exercise+intensity+on+lymphocyte+apoptosis+induced+by+oxidative+stress+in+men.">Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men.</a> <em style='font-style: italic'>Eur. J. Appl. Physiol</em>. <b>95</b>, 290-291 (2005).</li><li>Mooren, F. C., Lechtermann, A., V&#246;lker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+apoptosis+of+lymphocytes+depends+on+training+status.">Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status.</a> <em style='font-style: italic'>Med. Sci. Sports Exerc</em>. <b>36</b>, 1476-1483 (2004).</li><li>Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+treatment+influences+the+yield+of+apoptotic+lymphocytes+after+maximal+exercise.">Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise.</a> <em style='font-style: italic'>Med. Sci. Sports Exerc</em>. <b>37</b>, 369-373 (2005).</li></ol>

<p class="jove_content"> Minimal invaziv bir örnek toplama işlemi ve sonraki analiz egzersize bağlı lenfosit apoptozis hem erken ve geç faz analizi için gösterilmiştir. Bu açıkça nekrotik ve apoptotik değil bu hücrelerin, dışlamak için de mümkündür. Bu işlem sırasında, önce birden fazla zaman noktalarında antekübital bölgede invaziv venipunktür ile ilgili sakıncaları ve rahatsızlık üstesinden ve egzersizden hemen sonra ya da egzersiz maçın süresi için bir kateter güvence. Araştırmacılar açısından, bu t...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Flow Cytometry Binding Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>eBioscience</td>
<td>00-4222-26</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RBC Lysis Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>eBioscience</td>
<td>00-4333-57</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lancet Device</td>
<td>Accu Check Soft Touch</td>
<td>Roche Diagnostics Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubes</td>
<td>Heparinized Capillary Tubes</td>
<td>Chase Scientific Glass, Inc.</td>
<td>501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>GmC Lab</td>
<td>Gilson</td>
<td>PMS-880</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Annexin V-FITC Conjugated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biovision Inc.</td>
<td>K201-400-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD4-PE Conjugated</td>
<td>Anti-human, clone RPA-T4</td>
<td>eBioscience</td>
<td>12-0049-42</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD8-PE Conjugated</td>
<td>Anti-human, clone OKT8</td>
<td>eBioscience</td>
<td>12-0086-73</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD19-PE Conjugated</td>
<td>Anti-human, clone HIB19</td>
<td>eBioscience</td>
<td>12-0199-42</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-AAD Viability Staining Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>eBioscience</td>
<td>00-6993-50</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD45RA-APC Conjugated</td>
<td>Anti-human, clone HI100</td>
<td>eBioscience</td>
<td>17-0458-42</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Flow cytometer</td>
<td>C6</td>
<td>Accuri</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

finger-stick blood sampling methodology for the determination of exercise-induced lymphocyte apoptosis

<p class="jove_content"> Egzersiz bağışıklık hücrelerinin apoptozisi indükleyen yeteneğine fizyolojik bir uyarı. Bugüne kadar, özellikle hücre ölümü değerlendirme öncesinde kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli sınırlamalar, bu fenomenin ölçümü ile tespit edilmiştir. Bu nedenle, immün hücre apoptozis artar, sistem üzerinde egzersiz gerçek etkisi katkıda veya bu ölçüm sonunda elde etmek için gerekli zaman ve işleme bir yansıması olup olmadığını belirlemek zordur. Bu yazıda, egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir prosedür ortaya koymaktadır. Diğer tekniklerin aksine, tam kan, hemen bir örnek elde etmek üzerine bir antikor paneline eklenir. Kuluçka döneminin ardından, kırmızı kan hücrelerinin parçalanmış ve numuneler analiz edilecek hazırız. Bir parmak-stick örnekleme prosedürü kullanmak gerekli kan hacmini azaltır ve konulara rahatsızlığı en aza indirir. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis at JoVE.com

Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis

<p class="jove_content">Egzersiz immün hücrelerinde apopitoz indükleyen yeteneğine sahiptir. Özellikle önce değerlendirilmesi için kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli ölçüm sınırlamaları vardır. Göstermiştir egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir işlemdir.</p>

Egzersizle indüklenen Lenfosit Apoptoz belirlenmesi için parmak sopa Kan Örnekleme Metodolojisi

Exercise is a physiological stimulus capable of inducing apoptosis in immune cells. To date, various limitations have been identified with the measurement ...

finger-stick-blood-sampling-methodology-for-determination-exercise

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

12.1K Görüntüleme.  Western Kentucky University. Egzersiz immün hücrelerinde apopitoz indükleyen yeteneğine sahiptir. Özellikle önce değerlendirilmesi için kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli ölçüm sınırlamaları vardır. Göstermiştir egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir işlemdir.