1. Sistem Yapılandırması <ol><li> Yüksek hassasiyet uzatılmış menzil photomultiplier R-928F dedektörü ile donatılmış F-7000 Floresans Spektrofotometre. </li><li> F-7000 Aksesuarlar: rodamin B, ışık difüzör, kırmızı filtre ve alt-standart ışık kaynağı enstrüman için spektral düzeltme faktörleri oluşturmak için kullanılmıştır. </li><li> Içerir Kuantum Verim ölçme aksesuar: 60 mm küre entegre, Alüminyum Oksit beyaz çini, Spectralon beyaz standart, Toz hücreleri (2ad), Alüminyum Oksit toz ve Kuantum Verim yazılımı. </li><li> Rapor Oluşturucu program ve uygun bir şablon kromatiklik koordinatları hesaplanması için kullanılacaktır. </li></ol> 2. Sistem Kurulumu <ol><li> Hitachi F-7000 floresans spektrofotometre açın ve xenon lamba bir saat kadar ısınmasını bekleyin. Cihazda yüklü standart numune kompartmanı (küvet tutucu) kullanmaya başlayın. </li></ol> 3. ACQKüre Düzeltme Faktörleri entegre bir uisition Entegre Küre düzeltme faktörleri ölçerken, yazılım otomatik olarak Tablo 1&#39;de ölçüm test parametreleri seçer. <table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> ANALİTİK KOŞULLARI </td></tr><tr><td> Ölçüm </td><td> Dalga boyu tarama </td></tr><tr><td> Tarama modu </td><td> Senkron </td></tr><tr><td> Veri modu </td><td> Floresan </td></tr><tr><td> EM WL </td><td> 200 nm </td></tr><tr><td> EX Başlangıç ​​WL </td><td> 200 nm </td></tr><tr><td> EX End WL </td><td> 900 nm </td></tr><tr><td> Tarama hızı </td><td> 240 nm / dak </td></tr><tr><td> Gecikme </td><td> 5.0 s </td></tr><tr><td> EX Yarık </td><td> 5.0 nm </td></tr><tr><td> EM kesti </td><td> 20 nm </td></tr><tr><td> PMT Gerilim </td><td> 250 V </td></tr><tr><td> Düzeltilmiş spektrumları </td><td> AÇIK </td></tr><tr><td> Yanıt </td><td> Oto </td></tr></tbody></table> Tablo 1. 3.1. Difüzör veri alımı <ol><li> Standart örneği kompartmanda difüzör yerleştirin ve örnek bölmesi kapatın. </li><li> Difüzör Ölçümü, pencere Kuantum Verimi Düzeltme Faktörü Ölçümü tıklayın ve. </li><li> Dosya adını girin: difüzör veriler için &quot;IS_factor_F70_diffuser&quot; ve OK (Video 1) tıklayın. </li><li> Ölçüm yapıldıktan sonra, dosya FL Çözümleri &quot;Doğru&quot; klasörüne kaydedilecektir. Şekil 1 Difüzör ölçüm verileri bir örnektir. </li></ol> 3.2. Hiçbir örnek için düzeltme faktörü Alımı (referans) &lt;ol&gt; <li> Enstrüman, mağaza difüzör gelen standart numune kompartmanı çıkarın, daha sonra entegre küre yükleyin. </li><li> Kadar toz tamamen entegre kürenin liman kapsar emin olmak için en az 25 mm yüksekliğinde Alüminyum Oksit toz toz hücre doldurun. Toz sıkıştırmak için dikkatli bir şekilde hücresi alt dokunun. </li><li> Entegre küre referans noktası (P2) (emisyon monokromatör bakan biri) ve entegre kürenin örnek liman Alüminyum Oksit (P1) ile (toz hücreye alüminyum oksit, beyaz çini yerleştirin uyarma monokromatör bakan biri ). </li><li> Küre Ölçüm (örnek olmadan) (Video 2) entegre ardından, Kuantum Verimi Düzeltme Faktörü Ölçümü pencereyi tıklatın. </li><li> Yazılım örnekleri ayarlamak için size hatırlatacaktır. &quot;Hiçbir örneği ile IS&quot; adını girin ve Tamam&#39;a tıklayın. </li><li> Ölçüm yapıldıktan sonra, dosya klasörü &quot;düzeltmesi kaydedilir<html> FL Çözeltilerin t &quot;. Şekil 2 örnek yoktur ölçüm verileri ile birleşik küre bir örnektir. </li></ol> 3.3. Bir numunenin varlığında düzeltme faktörü kazanılması: <ol><li> Alüminyum oksit tozu ile pili çıkarın ve Spectralon beyaz standart ile değiştirin. (Spectralon standart uyarma monokromatör (P1) dönük olmalıdır). </li><li> Küre Ölçüm (örnek) ile entegre ardından Kuantum Verimi Düzeltme Faktörü Ölçümü pencereye tıklayın ve. Yazılım ölçümü için standart Yansıtma Malzeme ayarlamak için size hatırlatacaktır. </li><li> Adını girin: Örnek veri dosyası ile entegre Sphere için &quot;örnek ile IS&quot; ve (Video 3) Tamam&#39;ı tıklatın. </li><li> Ölçüm yapıldıktan sonra, dosya FL Çözümleri &quot;Doğru&quot; klasörüne kaydedilecektir. Şekil 3 örnek ölçüm verileri ile entegre Sphere bir örnektir. </li></ol>&quot;&gt; NOT: floresan tepe noktasında müdahale emisyon tarafında ikinci dereceden saçılma ışığı engellemek için kesim filtreleri kullanmak zorunda durumda, difüzör, sadece ve difüzör ve uygun filtre kullanılarak bir temel ölçmek gerekir bu. veri dosyaları kuantum verimi hesaplanırken yazılım tarafından kullanılacak. Uygulamada sistem kurmak ilk parçası olarak tüm kesme filtreleri ölçüm öneririz. 4. Numune Ölçümü (Sodyum Salisilat Toz) Kuantum verimi ölçümü hem herhangi bir örneği-(referans) ve bir numune varlığında bir emisyon spektrumunu kazanılması içerir. Aşağıdaki gibi analitik ölçüm parametreleri seçin: <ol><li> &quot;Yöntem&quot; butonuna ve ölçüm modu olarak Genel sekmesini seçin dalga boyu tarama tıklayın ve operatör ve aksesuarları hakkında gerekli bilgileri girin(Video 4). </li><li> &quot;Instrument&quot; sekmesine tıklayın ve Tablo 2 (Video 5) gösterildiği gibi enstrüman için ölçüm parametreleri girin. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> ANALİTİK KOŞULLARI </td></tr><tr><td> Ölçüm </td><td> Dalga boyu tarama </td></tr><tr><td> Tarama modu </td><td> Emisyon </td></tr><tr><td> Veri modu </td><td> Floresan </td></tr><tr><td> EX WL </td><td> 350 nm </td></tr><tr><td> EM WL Başlat </td><td> 330 nm </td></tr><tr><td> EM WL End </td><td> 600 nm </td></tr><tr><td> Tarama hızı </td><td> 1200 nm / dak </td></tr><tr><td> Gecikme </td><td> 0 s </td></tr><tr><td> EX Yarık </td><td> 5.0 nm </td></tr><tr><td> EM kesti </td><td> 5.0 nm </td></tr><tr><td> PMT Gerilim </td><td> 350 V </td></tr><tr><td> Düzeltilmiş spektrumları </td><td> AÇIK </td></tr><tr><td> Yanıt </td><td> Oto </td></tr><tr><td> Düzeltilmiş spektrumları </td><td> AÇIK </td></tr></tbody></table> Tablo 2. <ol start="3"><li> Veri ölçülen sonra Monitör, İşleme ve Rapor sekmesi ayarları yapılabilir beri hiçbir ek ayar bu zamanda gereklidir. Biz sadece aracı (Video 6) seçilen ölçüm parametrelerini ayarlamak için, onları gözden geçirmek ve sonra Tamam düğmesine tıklayın olacak. </li><li> Bir seçenek olarak, seçilmiş ayarları gelecekte kullanılmak üzere kaydedilebilir. Şimdi doğrudan uyarma kullanarak Alüminyum Oksit referans standart ölçüm devam edecektir. </li><li> Örnek ölçüm noktası (P1) (eksitasyon kiriş önünde) Al2O3 toz toz hücre yerleştirin. </li><li> &quot;Örnek&quot; butonuna tıklayınve örnek adını yazın: &quot;P1_Baseline_Al2O3&quot;, sonra &quot;Otomatik dosya&quot; yanındaki kutuyu tıklayın. Veri klasör ve dosya adını seçin: &quot;P1_Baseline_Al2O3&quot;, sonra (Video 7) &quot;Tamam&quot; &quot;Kaydet&quot; ve tıklatın. </li><li> Al2O3 örnek ölçmek için &quot;Tedbir&quot; butonuna tıklayın. Veri işleme penceresi açılır sonra (Video 8), direkt uyarılma (Şekil 4) ile saçılma pik görselleştirmek için, ölçeği ayarlama &quot;Otomatik Ölçeği Eksen&quot; düğmesine tıklayın. </li><li> Şimdi biz direkt uyarılma ile Sodyum Salisilat edilen numune ölçüm devam edecektir. &quot;Örnek&quot; simgesine tıklayın ve örnek ve dosya adı için &quot;P1_Sodium Salisilat&quot; girin, ardından OK tuşuna (Video 9) tıklayın. </li><li> Toz hücre ve entegre küre (uyarma ışık demeti bakan bağlantı noktası) ile P1 liman Sodyum Salisilat örnek yerleştirin ve &quot;Tedbir&quot; düğmesine tıklayın. (Video 10) zaman veri işleming penceresi açılır, ölçeğini ayarlamak ve saçılımı ve floresan pik görselleştirmek için &quot;Otomatik Ölçeği Eksen&quot; düğmesine tıklayın. </li><li> Şu anda biz dolaylı uyarma kullanarak onları okumak için, entegre kürenin P2 noktasına yerleştirilen numuneler Alüminyum Oksit ve Sodyum Salisilat için ölçümler tekrar edecektir. </li><li> Onları (Video 11) hem de &quot;P2_Baseline_Al2O3&quot;: &quot;Örnek&quot; düğmesi ve tipi örnek ve dosya ismine tıklayın. </li><li> P2 entegre kürenin P1 Alüminyum Oksit beyaz karo taşı ve P2 Alüminyum Oksit toz dolu bir hücreye yerleştirmek. </li><li> (Video 12) örnek okumak için &quot;Tedbir&quot; butonuna tıklayın. </li><li> Örnek ölçüm tamamlamak için biz dolaylı radyasyon kullanarak sodyum salisilat örnek ölçmek gerekir. Öncelikle önceki adımlarda olduğu gibi örnek ve dosya adlarını yazın. Adı P2_Sodium salisilat (Video 13 olacak). </li><li> Entegre kürenin P2 liman sodyum salisilat örnek yerleştirin ve Ölçü düğmesi (Video 14) tıklayın. </li></ol> 5.. Kuantum Verim Hesaplama İlk olarak entegre küre düzeltme faktörleri yükleme devam edecektir. <ol><li> Kuantum verimi hesaplama programı (Video 15) açmak için Kuantum Verim Hesaplama butonuna tıklayın. </li><li> Kuantum Verim Düzeltme Faktörü Ayar düğmesi (Video 16) tıklayın. </li><li> Entegre Küre Düzeltme sekmesini tıklayın ve &quot;Bütünleyici küre düzeltme&quot; önünde kutusunu tıklatın, sonra Filtre Düzeltme sekmesini tıklayın ve &quot;Filtre düzeltme&quot; kutusunun seçili olduğundan emin olun, entegre Sphere Düzeltme sekmesine tekrar tıklayın (Video 17 ). </li><li> Diffüz Ölçüm Veri bölümünde Load butonuna tıklayın, ardından dosya &quot;IS_factor_F70 hiçbir örnek&quot; seçeneğini seçin ( <strong&gt; Video 18). </li><li> &quot;IS_factor_F70_diffuser&quot; dosyasını seçin ve ardından yük düğmesi (Video 19) tıklayın. </li><li> Bütünleyici küre ölçüm verilerinin Yükle düğmesini (örnek olarak) bölüm (Video 20) tıklayın. </li><li> &quot;IS_factor_F70 örnek yok&quot; dosyasını seçin ve ardından yük düğmesi (Video 21) tıklayın. </li><li> Bütünleyici küre ölçüm verilerinin Yükle düğmesini (örneklem) bölümünde (Video 22) tıklayın. </li><li> Yük düğmesi (Video 23) daha sonra dosya ve &quot;örnek ile IS_factor_F70&quot; seçin. </li><li> Normalize dalga 600Nm sola veya birleşik küre düzeltme 1 eşittir dalgaboyu değerine ayarlanabilir. Bunu yapmak için, &quot;Görünen kuantum verimi hesaplama pencere&quot; önündeki kutuyu seçili olduğundan emin olun ve &quot;Quantum Verim Faktörü Ayarı&quot; windo ve Tamam düğmesine tıklayınBu pencerede (Video 24) kapanacak w. </li><li> Şimdi &quot;Quantum Verim Hesaplama&quot; penceresinin &quot;entegre Sphere Düzeltme&quot; sekmesini tıklayın ve bütünleyici düzeltme okuma &quot;1&quot; oluncaya kadar dalga boyu (Video 25) not ederek, imleç ayarlayın. </li><li> Önceki adımda elde edilen okuma Normalize dalga boyu &quot;Kuantum Verim Düzeltme Faktörü Ayarı&quot; ve gerekli değişikliği varsa tıklayın ve OK (Video 26) tıklayın. </li></ol> Bir sonraki adım Temel ve örnek veri dosyalarını yüklemek için <ol start="13"><li> &quot;Kuantum Verim Hesaplama&quot; sekmesi (Video 27) tıklayın. </li><li> Doğrudan radyasyon (Video 28) için yük düğmesi ve yük &quot;örnek ile veri&quot; (dosya P1_Sodium salisilat) tıklayarak doğrudan ışınlanması için (dosya P1_Baseline_ Al2O3) &quot;örnek olmadan Verileri&quot; yükleyin. </li><li&gt; Sonraki biz &quot;saçılma&quot; ve &quot;floresan&quot; bölgeleri (Video 29) seçmek için devam edecek. </li><li> Şimdi örnek doğrudan ışınlanması için kuantum verimi hesaplayacaktır. &quot;Hesaplama&quot; butonuna tıklayın ve sonuçları (Video 30) okuyun. Biz örnek dikkate dolaylı uyarım dikkate alınması için kuantum verimi nihai hesaplanması için bu verileri gerekecektir. </li><li> Metin dosyası tıklayın ve dosya adını &quot;QY Doğrudan Işınlama&quot; (Video 31) altında verileri kaydetmek. </li><li> Veri dosyaları P2_Baseline_Al2O3 ve P2_Sodium salisilat kullanarak, dolaylı uyarma (Video 32) için kuantum verimi hesaplar Şimdi son Kuantum Verim hesabı için bu verileri kaydeder. </li><li> Metin dosyasını tıklayın ve Şimdi Direc için Quantum Verim veri ile Excel&#39;de iki metin dosyaları açacak adı &quot;QY Dolaylı Işınlama&quot; (Video 33) altında verileri metin dosyasına kaydetmekt ve dolaylı uyarım. Son olarak, aşağıdaki formül kullanılarak, Dolaylı Uyarma etkisi de dahil olmak üzere örnek için Kuantum Verim hesaplar: </li></ol> Φ = Φd-(1-Reklam) ΦI Nerede: Φ düzeltilmiş kuantum verimi dikkate dolaylı uyarma içine alıyor Φd Doğrudan Tahrik kullanarak İç Kuantum Verimi olduğunu. (Floresan / absorbe uyarma ışık miktarı İç kuantum verimi = miktarı.) İlan doğrudan uyarılması için absorptance olduğunu. (Bu örnek tarafından emilen eksitasyon ışınının miktarını oranıdır). (Absorbans = (AREX - AREX eksitasyon ışık ve csex miktarıdır csex) / AREX, yansıtılan ışık miktarı) ΦI Indi kullanarak İç Kuantum Verimi iserect Uyarma Φ = 0,536 - (1-0,848) 0,420 Hesaplanan Φ = 0,47216 6. Kromatiklik hesaplanması <ol><li> Biz kromatiklik hesaplanması için hazırlanan bir şablon ile birlikte isteğe bağlı yazılım Rapor Üretici kullanacaktır. </li><li> Veri dosyası P1_Sodium salisilat (Video 34) açın. </li><li> &quot;Mülkiyet&quot; butonuna, sonra &quot;Rapor sekmesi&quot; tıklayın. Açılan menüden &quot;Çıkış&quot; select &quot;Kullanım baskı jeneratör sheet&quot; olarak. &quot;Baskı öğeleri&quot; daha sonra select şablon &quot;FL70Std01_Color-chart.xls&quot; ve &quot;Aç&quot; düğmesine tıklayın. Bu Rapor Üretici (Video 35) tarafından otomatik olarak yapılır yana, dalga boyu aralığı ve aralığını seçmek için gerek yoktur. </li><li> Bir sonraki adım raporu oluşturmaktır. &quot;Rapor&quot; sekmesine tıklayın ve rapor oluşturmak için makro (Video 36) numune adı altında Excel formatında &quot;Raporlar&quot; klasöründe idam ve kaydedilir. &lt;<html> / Li&gt; <li> Şu anda biz renk verisi (Video 37) görmek için raporu açabilirsiniz. </li></ol> 7. Başarının Sırları <ol><li> Taze örnekleri kullanın. </li><li> Farklı üreticilerin malzeme farklı sonuçlar verebilir unutmayın. </li><li> Örnek sıkıştırmak ve ölçümü için üniform bir yüzey sunmak üzere toz hücresi alt dokunun. </li><li> Işık örnekler koruyun. Onlar ışığa maruz kalma ile bozulabilir. </li><li> Işığa örnek maruziyeti en aza indirmek için daha hızlı tarama hızı kullanmayı deneyin. </li></ol> 8. Temsilcisi Sonuçlar 8.1. Sodyum salisilat 0,4-0,5 arasında bir kuantum verimi sahip olduğu bilinmektedir <img src="/files/ftp_upload/3066/3066fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/3066/3066fig1large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . iles/ftp_upload/3066/3066fig2.jpg &quot;alt =&quot; Şekil 1 &quot;/&gt; Şekil 2. <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/3066/3066fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/3066/3066fig3.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 3. <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/3066/3066fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Quantum Yield Measurement of Sodium Salicylate. FL080002, 1 (2008).</li><li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Fluorescence+Spectroscopy.">Principles of Fluorescence Spectroscopy.</a> Science and Business Media, LLC. 60, (2006).</li><li>Horigome, J., Wakui, T., Shirasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Correction+Method+for+Determination+of+Absolute+Fluorescence+Quantum+Yields+of+Solid+Samples+with+a+conventional+Fluorescence+Spectrophotometer.">A Simple Correction Method for Determination of Absolute Fluorescence Quantum Yields of Solid Samples with a conventional Fluorescence Spectrophotometer.</a> Bunseki Kagako. 58 (6), 553-559 (2009).</li></ol>

Luis A. Moreno Bu makalede kullanılan alet üreten Hitachi Yüksek Teknolojiler Amerika tarafından istihdam edilmektedir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Sodyum salisilat tozu </td><td> Wako </td><td> 191-03142 </td><td> Mol. ağırlığı 160,10 </td></tr></tbody></table>

absolute quantum yield measurement of powder samples

Floresans kuantum verimi ölçümü aydınlatma geliştirme, değerlendirme, kalite kontrol ve araştırma yeni çözüm arayışlarında önemli bir araç haline gelmiştir, AV ekipmanları, organik EL malzeme, film, filtre ve biyo-endüstri için floresan sondalar. Kuantum verimi bir malzeme tarafından yayılan fotonlarının sayısı, emilen fotonlarının sayısının oranı hesaplanır. Yüksek kuantum verimi, floresan materyal verimi daha iyi. Bu video özellikli ölçümler için, Kuantum Verimi aksesuar ve Rapor Oluşturucu program ölçme ile donatılmış Hitachi F-7000 floresans spektrometresi kullanır. Sağlanan tüm bilgileri bu sistem için de geçerlidir. Toz örneklerinde kuantum verimi ölçümü adımları izleyerek gerçekleştirilir: <ol><li> Uyarma ve emiss için aracı düzeltme faktörleri Üretimiiyon monokromatörler. Bu kuantum verimi doğru bir ölçüm için önemli bir gereksinimdir. Bu cihaz tam ölçüm aralığı için şimdiden yapılmıştır ve zaman sınırlamaları nedeniyle bu video gösterilmeyecektir. </li><li> Küre düzeltme faktörleri entegre ölçümü. Bu adımın amacı ölçümler için kullanılan entegre kürenin dikkate yansıtma özellikleri içine almaktır. </li><li> Referans ve doğrudan uyarma ve dolaylı uyarma kullanarak Örnek ölçümü. </li><li> Doğrudan ve dolaylı uyarma kullanarak Kuantum Verimi hesaplama. Örnek normal ölçüm kurulum olurdu doğrudan uyarma ışını, baktığında Direkt uyarma olduğunu. Ancak, bir birleşik küre kullanın çünkü, örnek floresans kaynaklanan fotonların bir kısmı birleşik küre tarafından yansıtılır ve örnek yeniden heyecanlandıracak, biz göz dolaylı uyarma içine almak gerekir bu yüzden. Bu Acco olduğunu, emisyon monokromatör bakan noktasına yerleştirilen numune ölçüm dolaylı kuantum verimi hesaplanması ve doğrudan kuantum verimi hesaplama düzelterek mplished. </li><li> Kuantum verimi hesaplama düzeltildi. </li><li> Kromatiklik Report Generator programı kullanarak hesaplama koordine eder. </li></ol> Bu uygulama için Hitachi F-7000 Kuantum Verim Ölçüm Sistemi teklif avantajları aşağıdaki gibidir: <ul><li> Yüksek hassasiyet (S / N oranı 800 veya daha iyi RMS). Sinyal aşağıdaki şartlarda ölçülen su Raman grubudur: Ex dalga boyunun 350 nm, bant geçiş Ex ve Em 5 nm, tepkisi 2 sn), gürültü Raman tepe en azından ölçülür. Yüksek hassasiyet hatta düşük kuantum verimi ile numune ölçümünü sağlar. Bu sistemi kullanarak biz de salisilik asit bir örnek için 0.1 gibi düşük ve magnezyum tungstat bir örnek için 0.8 gibi yüksek kuantum verimleri ölçüldü. </li><li> 6 siparişlerin bir dinamik aralık ile son derece hassas ölçümbüyüklüğü, yüksek yoğunluklu, hem de düşük yoğunluklu geniş floresans zirveleri aynı şartlar altında her iki sivri saçılması tepe noktalarının ölçümleri için olanak sağlar. </li><li> Yüksek ölçüm hacmi ve örnek indirgenmiş ışığa maruz kalma, 60,000 nm / dakika ve otomatik panjur işlevi yüksek bir tarama hızı nedeniyle. </li><li> 240-800 nm geniş bir dalga boyu aralığında kuantum verimi ölçümü. </li><li> Doğru kuantum verimi ölçümleri enstrüman spektral tepki toplayan ve örnek ölçümünden önce küre düzeltme faktörleri entegre bir sonucudur. </li><li> Özel ve kullanımı kolay yazılımı tarafından sağlanan hesaplanan parametrelerin büyük bir seçim. </li></ul> Bu video sırasında biz 0,4-0,5 kuantum verim değeri olduğu bilinen toz şeklinde sodyum salisilat ölçer.

Watch this Scientific Journal Video about Absolute Quantum Yield Measurement of Powder Samples at JoVE.com

Absolute Quantum Yield Measurement of Powder Samples

Bu videoda mutlak kuantum verimi ve kromatikliği Hitachi F-7000 Kuantum Verim Ölçme Sistemi kullanılarak toz örnekleri koordinatları doğrudan ölçüm ve hesaplama gösterecektir.

Toz numuneler mutlak Kuantum Verimi Ölçümü

Measurement of fluorescence quantum yield has become an important tool in the search for new solutions in the development, evaluation, quality control and ...

absolute-quantum-yield-measurement-of-powder-samples

Research

JoVE Journal

Biology

27.9K Görüntüleme.  Hitachi High Technologies America. Bu videoda mutlak kuantum verimi ve kromatikliği Hitachi F-7000 Kuantum Verim Ölçme Sistemi kullanılarak toz örnekleri koordinatları doğrudan ölçüm ve hesaplama gösterecektir.

Video: Absolute Quantum Yield Measurement of Powder Samples

Large Volume (20L+) Filtration of Coastal Seawater Samples

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For this method, samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. This video documents large volume (&ge;20 L) filtration of microbial biomass, ranging between 0.22&mu;m and 2.7&mu;m in diameter, from the water column. Two 20L samples can be filtered simultaneously using a single pump unit equipped with four rotating heads. Filtration is done in the field on extended trips, or immediately upon return for day trips. It is important to record the amount of water passing through each sterivex filter unit. To prevent biofilm formation between sampling trips, all filtration equipment must be rinsed with dilute HCl and deionized water and autoclaved immediately after use. This procedure will take approximately 5 hours plus an additional hour for clean up.

Large Volume 20L+ Filtration of Coastal Seawater Samples

This video documents large volume (&ge;20 L) filtration of microbial biomass, ranging between 0.22&mu;m and 2.7&mu;m in diameter, from the water column.

Büyük Hacimli Kıyı Deniz suyu Örnekleri (20L +) Filtrasyon

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For this method, ...

Biyoloji

Small Volume (1-3L) Filtration of Coastal Seawater Samples

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For today s demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. This video documents small volume (~1 L) filtration of microbial biomass from the water column. The protocol is an extension of the large volume sampling protocol described earlier, with one major difference: here, there is no pre-filtration step, so all size classes of biomass are collected down to the 0.22 &mu;m filter cut-off. Samples collected this way are ideal for nucleic acid analysis. The set-up, filtration, and clean-up steps each take about 20-30 minutes. If using two peristaltic pumps simultaneously, up to 8 samples may be filtered at the same time. To prevent biofilm formation between sampling trips, all filtration equipment must be rinsed with dilute HCl and deionized water and autoclaved immediately after use.

Small Volume 1-3L Filtration of Coastal Seawater Samples

This video documents small volume (~1 L) filtration of microbial biomass from the water column.

Kıyı Deniz suyu Örnekleri Küçük Hacim (1-3L) Filtrasyon

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For today s ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) processes or by exogenous factors, particularly ionizing radiation and radiomimetic compounds. Phosphorylation of the H2A histone variant, H2AX, at the serine-139 residue, in the highly conserved C-terminal SQEY motif, forming &gamma;H2AX, is an early response to DNA double-strand breaks1. This phosphorylation event is mediated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PI3K) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)2. Overall, DSB induction results in the formation of discrete nuclear &gamma;H2AX foci which can be easily detected and quantitated by immunofluorescence microscopy2. Given the unique specificity and sensitivity of this marker, analysis of &gamma;H2AX foci has led to a wide range of applications in biomedical research, particularly in radiation biology and nuclear medicine. The quantitation of &gamma;H2AX foci has been most widely investigated in cell culture systems in the context of ionizing radiation-induced DSBs. Apart from cellular radiosensitivity, immunofluorescence based assays have also been used to evaluate the efficacy of radiation-modifying compounds. In addition, &gamma;H2AX has been used as a molecular marker to examine the efficacy of various DSB-inducing compounds and is recently being heralded as important marker of ageing and disease, particularly cancer3. Further, immunofluorescence-based methods have been adapted to suit detection and quantitation of &gamma;H2AX foci ex vivo and in vivo4,5. Here, we demonstrate a typical immunofluorescence method for detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in mouse tissues.

Quantitation of &#947;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of DNA double-strand breaks on the basis of &gamma;H2AX foci has become an invaluable tool, particularly in radiation biology, for the evaluation of tissue radiosensitivity and effects of radiation modifying compounds. Here we demonstrate the use of an immunofluorescence assay for quantitation of &gamma;H2AX foci in tissue samples.

Doku Örnekleri γH2AX Foci kantitasyonu

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Environmental Samples

Many types of organic phosphorus (P) molecules exist in environmental samples1. Traditional P measurements do not detect these organic P compounds since they do not react with colorimetric reagents2,3. Enzymatic hydrolysis (EH) is an emerging method for accurately characterizing organic P forms in environmental samples4,5. This method is only trumped in accuracy by Phosphorus-31 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (31P-NMR) -a method that is expensive and requires specialized technical training6. We have adapted an enzymatic hydrolysis method capable of measuring three classes of phosphorus (monoester P, diester P and inorganic P) to a microplate reader system7. This method provides researchers with a fast, accurate, affordable and user-friendly means to measure P species in soils, sediments, manures and, if concentrated, aquatic samples. This is the only high-throughput method for measuring the forms and enzyme-lability of organic P that can be performed in a standard laboratory. The resulting data provides insight to scientists studying system nutrient content and eutrophication potential.

This protocol describes a high-throughput method of enzymatic hydrolysis that utilizes a microplate reader to measure and classify soil phosphorus as P monoesters, P diesters and inorganic P. Up to 96 samples can be measured at one time in a standard laboratory.

Çevre Örneklerinde Organik P Yüksek Verim Ölçme ve Sınıflandırma

Many types of organic phosphorus (P) molecules exist in environmental samples1.  Traditional P measurements do not detect these organic P compounds since ...

Measurement of Cellular Chemotaxis with ECIS/Taxis

Cellular movement in response to external stimuli is fundamental to many cellular processes including wound healing, inflammation and the response to infection. A common method to measure chemotaxis is the Boyden chamber assay, in which cells and chemoattractant are separated by a porous membrane. As cells migrate through the membrane toward the chemoattractant, they adhere to the underside of the membrane, or fall into the underlying media, and are subsequently stained and visually counted 1. In this method, cells are exposed to a steep and transient chemoattractant gradient, which is thought to be a poor representation of gradients found in tissues 2.
Another assay system, the under-agarose chemotaxis assay, 3, 4 measures cell movement across a solid substrate in a thin aqueous film that forms under the agarose layer. The gradient that develops in the agarose is shallow and is thought to be an appropriate representation of naturally occurring gradients. Chemotaxis can be evaluated by microscopic imaging of the distance traveled. Both the Boyden chamber assay and the under-agarose assay are usually configured as endpoint assays.
The automated ECIS/Taxis system combines the under-agarose approach with Electric Cell-substrate Impedance Sensing (ECIS) 5, 6. In this assay, target electrodes are located in each of 8 chambers. A large counter-electrode runs through each of the 8 chambers (Figure 2). Each chamber is filled with agarose and two small wells are the cut in the agarose on either side of the target electrode. One well is filled with the test cell population, while the other holds the sources of diffusing chemoattractant (Figure 3). Current passed through the system can be used to determine the change in resistance that occurs as cells pass over the target electrode. Cells on the target electrode increase the resistance of the system 6. In addition, rapid fluctuations in the resistance represent changes in the interactions of cells with the electrode surface and are indicative of ongoing cellular shape changes. The ECIS/Taxis system can measure movement of the cell population in real-time over extended periods of time, but is also sensitive enough to detect the arrival of a single cell at the target electrode. 
Dictyostelium discoidium is known to migrate in the presence of a folate gradient 7, 8 and its chemotactic response can be accurately measured by ECIS/Taxis 9. Leukocyte chemotaxis, in response to SDF1&alpha; and to chemotaxis antagonists has also been measured with ECIS/Taxis 10, 11. An example of the leukocyte response to SDF1&alpha; is shown in Figure 1.

The ECIS/Taxis system is an automated, real-time assay that measures cellular chemotaxis. In this assay, cells move beneath a layer of agarose to arrive at a target electrode. Cellular movement is measured by the onset of resistance to AC current 0.

ECIS / Taksiler ile Hücresel Kemotaksis Ölçümü

Cellular movement in response to external stimuli is fundamental to many cellular processes including wound healing, inflammation and the response to ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced physical performance and increased risk of disease. Individual aging is manifest at the population level as an increase in age-dependent mortality, which is often measured in the laboratory by observing lifespan in large cohorts of age-matched individuals. Experiments that seek to quantify the extent to which genetic or environmental manipulations impact lifespan in simple model organisms have been remarkably successful for understanding the aspects of aging that are conserved across taxa and for inspiring new strategies for extending lifespan and preventing age-associated disease in mammals.
The vinegar fly, Drosophila melanogaster, is an attractive model organism for studying the mechanisms of aging due to its relatively short lifespan, convenient husbandry, and facile genetics. However, demographic measures of aging, including age-specific survival and mortality, are extraordinarily susceptible to even minor variations in experimental design and environment, and the maintenance of strict laboratory practices for the duration of aging experiments is required. These considerations, together with the need to practice careful control of genetic background, are essential for generating robust measurements. Indeed, there are many notable controversies surrounding inference from longevity experiments in yeast, worms, flies and mice that have been traced to environmental or genetic artifacts1-4. In this protocol, we describe a set of procedures that have been optimized over many years of measuring longevity in Drosophila using laboratory vials. We also describe the use of the dLife software, which was developed by our laboratory and is available for download (<a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software</a>). dLife accelerates throughput and promotes good practices by incorporating optimal experimental design, simplifying fly handling and data collection, and standardizing data analysis. We will also discuss the many potential pitfalls in the design, collection, and interpretation of lifespan data, and we provide steps to avoid these dangers.

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is a powerful model organism for exploring the molecular basis of longevity regulation. This protocol will discuss the steps involved in generating a reproducible, population-based measurement of longevity as well as potential pitfalls and how to avoid them.

In ömrü ölçümü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

A High Yield and Cost-efficient Expression System of Human Granzymes in Mammalian Cells

When cytotoxic T lymphocytes (CTL) or natural killer (NK) cells recognize tumor cells or cells infected with intracellular pathogens, they release their cytotoxic granule content to eliminate the target cells and the intracellular pathogen. Death of the host cells and intracellular pathogens is triggered by the granule serine proteases, granzymes (Gzms), delivered into the host cell cytosol by the pore forming protein perforin (PFN) and into bacterial pathogens by the prokaryotic membrane disrupting protein granulysin (GNLY). To investigate the molecular mechanisms of target cell death mediated by the Gzms in experimental in-vitro settings, protein expression and purification systems that produce high amounts of active enzymes are necessary. Mammalian secreted protein expression systems imply the potential to produce correctly folded, fully functional protein that bears posttranslational modification, such as glycosylation. Therefore, we used a cost-efficient calcium precipitation method for transient transfection of HEK293T cells with human Gzms cloned into the expression plasmid pHLsec. Gzm purification from the culture supernatant was achieved by immobilized nickel affinity chromatography using the C-terminal polyhistidine tag provided by the vector. The insertion of an enterokinase site at the N-terminus of the protein allowed the generation of active protease that was finally purified by cation exchange chromatography. The system was tested by producing high levels of cytotoxic human Gzm A, B and M and should be capable to produce virtually every enzyme in the human body in high yields.

We describe here a cost-efficient granzyme expression system using HEK293T cells that produces high yields of pure, fully glycosylated and enzymatically active protease.

Memeli hücrelerinde İnsan Granzymes bir Yüksek Verimli ve Maliyet-etkin İfade Sistemi

When cytotoxic T lymphocytes (CTL) or natural killer (NK) cells recognize tumor cells or cells infected with intracellular pathogens, they release their ...

Selected Reaction Monitoring Mass Spectrometry for Absolute Protein Quantification

Absolute quantification of target proteins within complex biological samples is critical to a wide range of research and clinical applications. This protocol provides step-by-step instructions for the development and application of quantitative assays using selected reaction monitoring (SRM) mass spectrometry (MS). First, likely quantotypic target peptides are identified based on numerous criteria. This includes identifying proteotypic peptides, avoiding sites of posttranslational modification, and analyzing the uniqueness of the target peptide to the target protein. Next, crude external peptide standards are synthesized and used to develop SRM assays, and the resulting assays are used to perform qualitative analyses of the biological samples. Finally, purified, quantified, heavy isotope labeled internal peptide standards are prepared and used to perform isotope dilution series SRM assays. Analysis of all of the resulting MS data is presented. This protocol was used to accurately assay the absolute abundance of proteins of the chemotaxis signaling pathway within RAW 264.7 cells (a mouse monocyte/macrophage cell line). The quantification of Gi2 (a heterotrimeric G-protein &#945;-subunit) is described in detail.

This protocol describes how to perform absolute quantification assays of target proteins within complex biological samples using selected reaction monitoring. It was used to accurately quantify proteins of the mouse macrophage chemotaxis signaling pathway. Target peptide selection, assay development, and qualitative and quantitative assays are described in detail.

Mutlak Protein Niceleme Kütle Spektrometresi İzleme Seçilen Tepki

Absolute quantification of target proteins within complex biological samples is critical to a wide range of research and clinical applications. This ...

High Yield Expression of Recombinant Human Proteins with the Transient Transfection of HEK293 Cells in Suspension

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and function. The rapid establishment and high recovery from transiently-transfected mammalian cell lines addresses this barrier and is an effective means of expressing proteins that are naturally channeled through the ER and Golgi-mediated secretory pathway. Here is one protocol for protein expression using the human HEK293F and HEK293S cell lines transfected with a mammalian expression vector designed for high protein yields. The applicability of this system is demonstrated using three representative glycoproteins that expressed with yields between 95-120 mg of purified protein recovered per liter of culture. These proteins are the human Fc&#947;RIIIa and the rat &#945;2-6 sialyltransferase, ST6GalI, both expressed with an N-terminal GFP fusion, as well as the unmodified human immunoglobulin G1 Fc. This robust system utilizes a serum-free medium that is adaptable for expression of isotopically enriched proteins and carbohydrates for structural studies using mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy. Furthermore, the composition of the N-glycan can be tuned by adding a small molecule to prevent certain glycan modifications in a manner that does not reduce yield.

Laboratory-scale production of eukaryotic proteins with appropriate post-translational modification represents a significant barrier. Here is a robust protocol with rapid establishment and turnaround for protein expression using a mammalian expression system. This system supports selective amino acid, selective labeling of proteins and small molecule modulators of glycan composition.

Süspansiyon HEK293 hücrelerinin kısa süreli transfection ile Rekombinant İnsan Proteinlerinin Yüksek Verimli İfadesi

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and ...

Absolute Quantification of Plasma MicroRNA Levels in Cynomolgus Monkeys, Using Quantitative Real-time Reverse Transcription PCR

RT-qPCR is one of the most common methods to assess individual target miRNAs. MiRNAs levels are generally measured relative to a reference sample. This approach is appropriate for examining physiological changes in target gene expression levels. However, absolute quantification using better statistical analysis is preferable for a comprehensive assessment of gene expression levels. Absolute quantification is still not in common use. This report describes a protocol for measuring the absolute levels of plasma miRNA, using RT-qPCR with or without pre-amplification.
A fixed volume (200 &#181;L) of EDTA-plasma was prepared from the blood collected from the femoral vein of conscious cynomolgus monkeys (n = 50). Total RNA was extracted using commercially available system. Plasma miRNAs were quantified by probe-based RT-qPCR assays which contains miRNA-specific forward/reverse PCR primer and probe. Standard curves for absolute quantification were generated using commercially available synthetic RNA oligonucleotides. A synthetic cel-miR-238 was used as an external control for normalization and quality assessment. The miRNAs that showed quantification cycle (Cq) values above 35 were pre-amplified prior to the qPCR step.
Among the 8 miRNAs examined, miR-122, miR-133a, and miR-192 were detectable without pre-amplification, whereas miR-1, miR-206, and miR-499a required pre-amplification because of their low expression levels. MiR-208a and miR-208b were not detectable even after pre-amplification. Sample processing efficiency was evaluated by the Cq values of the spiked cel-miR-238. In this assay method, technical variation was estimated to be less than 3-fold and the lower limit of quantification (LLOQ) was 102 copy/&#181;L, for most of the examined miRNAs.
This protocol provides a better estimate of the quantity of plasma miRNAs, and allows quality assessment of corresponding data from different studies. Considering the low number of miRNAs in body fluids, pre-amplification is useful to enhance detection of poorly expressed miRNAs.

This report describes a protocol for measuring the absolute levels of plasma miRNA, using quantitative real-time reverse transcription PCR with or without pre-amplification. This protocol affords better understanding of the quantity of plasma miRNAs and allows qualitative assessment of corresponding data from different studies or laboratories.

Cynomolgus maymunlar, nicel gerçek zamanlı ters transkripsiyon PCR kullanarak plazma mikroRNA düzeylerinin mutlak miktar

RT-qPCR is one of the most common methods to assess individual target miRNAs. MiRNAs levels are generally measured relative to a reference sample. This ...