Bu araştırma herhangi bir hibe tarafından finanse edildi. Ulusal Bilim Vakfı (KGL) 0723341 Ayrıca Schapiro Lisans Araştırma Bursu programı ve Randolph-Macon College Psikoloji Bölümü tarafından sağlanan katkılar için teşekkür ediyoruz. Son olarak, bu video yazı için Ar-MC laboratuvar hazırlanmasında bu araştırma ve Amanda Rzucidlo yardım Craig Kinsley ortak katkıları için teşekkür ederiz.

1. Hayvan Modeli Tanıtımı <ol><li> California Deer Fare (Peromyscus californicus) baba yanıtları keşfetmek için ideal bir model. Gördüğünüz gibi, bu fare, anneler gibi yavrular mamülleri - hatta bu yüzden yavrular bakım gibi görünüyor üzerlerine Crouch. California farelerin davranışlarını sık sık kaçmak ya da onlara saldırmak için çalışırken, yavrular az ilgi gösteren ortak geyik fare (Peromyscus maniculatus) aynı cins, bir tür karşılaştırılır. (Yavrular ile etkileşim bu türlerin resimler için Bkz: Şekil 1). </li><li> Tür modeli tespit edildiğinde, daha sonra çeşitli gruplar oluşturulması gerekmektedir. Bu çalışmada, biyolojik babalar, anne-babalık deneyimi olmayan bakireler, ve her iki türün sınırlı yavru maruz kalma (yavru maruz kalan veya teşvik babalar) ile bakireler yatkın ve edinsel hem de baba özellikleri değerlendirilir, böylece kullanılır. Bu özel çalışmada da sosyal etkileşimler kafes yerleştirilir şey bir yavru ve temsili bir yanıt olduğunu sağlamak için yavru bir oyuncak fare tüm grupların maruz (Bakınız Şekil 2) </li><li> Nörobiyolojik faktörler soruşturma başlamadan önce, seçilen türün ilgi davranış belirgin farklılıklar sergilerler doğrulamak için önemlidir. Bu çalışmada, erkek ile temas yavru harcanan zamanı ve miktarı yaklaşım böyle bir gecikme olarak puan davranışları için kullanılır, beş dakika ve bir baba davranış ethogram (ethogram, örneğin bkz. Tablo 1) bir yavru ile bir kafes yerleştirilir yavru. Agresif tepkiler gözlenmesi halinde, yavru derhal kaldırılır. Bu seanslar genellikle dikkatli bir davranış analizi, daha sonra yapılan böylece videoya. </li></ol> 2. Beyin Dokusu hazırlanması <ol><li> Her fare standart perfüzyon (protokol) bağlı, beyinleri özel ilgi alanı (gösteri beyin) kesitli böylece kaldırılır. </li><li> Vazopressin (AVP) - Standart bir farenin beyin atlas (atlas gösterin) hipotalamus paraventriküler çekirdeği, bu çalışmada ilgi nöropeptid üreten hücrelerin zengin olduğu bilinen bir alan bulmak için kullanılır. </li><li> Mikrotom ile kesitli önce doku dondurma böylece beyin daha sonra bloke olur ve donma mandreni monte edilir. Beyin trim modu kesitli sonra, analiz için kullanılan beyin bölümler için belirli beyin kalınlığı, 30 mikron, bu durumda, özel simge tanımlanır kadar. </li><li> Beynin bölümleri dikkatlice fosfat buffer salin (PBS) ile dolu iyi plakaları yerleştirilir; (ekli PBS için protokol, bu sadece bir örnek, standart bir immünsitokimya protokol olduğunu lütfen unutmayın). </li></ol> 3. İmmünositokimya <ol><li> (Bkz. ekli protokol), bu sürecin çeşitli adımlar boyunca bu tekniği (öğrenci pipetleme gösterir), kimyasallar ve önemli diğer maddeler hassas ölçümler sağlamak için doğru pipetleme becerilere sahip önemlidir. </li><li> Bu süreçte ilk adım iyi plakaları 3-5 kez PBS yerine içerir beyinleri yıkama; her yıkama arasında iyi bir tabak, 10 dakika boyunca bir rocker yerleştirilen (göstermek yerine öğrenci PBS ve rockçılar iyi plakaları yerleştirerek) . </li><li> Beyin dilimleri sonra primer antikor çözümü maruz kalan ve 4 ° C rocker (gösteri süreci) gece boyunca saklanır. </li><li> Başka bir yıkama sonrasında, beyin dilimleri daha sonra tekrar yıkanır, bir saat boyunca oda sıcaklığında rocker ikincil bir antikor maruz kalmaktadır. </li><li> Sonraki beyin nörokimyasal-pozitif hücrelerin görselleştirme hazırlamak için bir Avitin Biotin Kompleks çözüm maruz kalmaktadır. </li><li> Son görselleştirme adım için, beyinleri DAB maruz kalmaktadır. Bu tehlikeli bir üründür ve her zaman dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Burada görüldüğü gibi, beyin dilimleri (süreç göstermek) gözleri önünde koyu almak için başlar. </li><li> DAB maruz kalma ardından, beyinlerini yıkar son serisi üzerinden gitmek ve sonra dikkatle Altyazılı mikroskop lamı üzerine yerleştirilen ve bir gecede (slayt üzerinde bir beyin dilim yerleştirme gösterisi; Altyazılı slaytlar protokol için eke bakınız) kurutmak için izin verilir. </li><li> Slaytlar sonra, distile su ve alkol yıkar bir dizi temizlenir, nihayet güvenli tutmak için (bu sürecin çeşitli yönlerini göstermek; temizleme süreci için eke bakınız) slidebox dakika muamele ve depolanan önce Citrosolv batmış. </li></ol> 4. Neuroquantification <ol><li> Slaytlar kuruduktan sonra, bu özel neuroquantification yazılım ile değerlendirilebilir. Burada Bioquant yazılım (show ekranda yazılım ... ve mikroskop) fare beyinleri paraventriküler çekirdeğinde vazopressin-pozitif hücre ve lifler ölçmek için kullanılır. </li><li> Ilgi belirli bir alan ölçüm seçenekleri kullanılarak tanımlanıryazılım neuroquantification için görme alanı kurmak için. Tutarlı bir görsel alan boyutu (gösterisi öğrenci Bunu yaparken), her bir hayvan için sayısal olduğunu önemlidir. </li><li> Burada koyu lekeli vazopressin immunoreaktif hücre gövdeleri ve liflerinin açıktır. Bu doku saymak ya da izlemek için zor olduğundan, bu yazılımın bir özelliği belirtilen ilgi alanı içinde olumlu boyanan doku toplam miktarını belirlemek için ışık eşiklendirme kullanır. Bu eşikleme vazopressin pozitif doku (bilgisayar ekranında veri değeri göstermek) içerdiği belirtilen alanın ne kadar söyler. </li></ol> 5. Davranış Analizi <ol><li> Birden fazla gözlemci video kasetleri puanlama olacaksa, gözlemciler, tutarlı bir şekilde davranış puanlama olduğunu sağlamak için hakemlerarası güvenilirlik kurmak için önemlidir. Gerçek puanlama oturumu için, bir davranış puanlama formunda (bkz. Tablo 2 tablolama puanlama örneğin) kolay davranış puanlama gözlem oturumları sırasında izin vermek için hazırlıklı olmalısınız. </li><li> Hızlı epizodik yanıtları olmayan davranışlar, bir microsequencing analiz belirli yanıtlar ilerlemesi hakkında inceliklerini ortaya çıkarabilir. Örneğin bakım, davranış, çok hızlı yanıtlar bir zincir oluşur. Bir seçenek damat varlığı ve süresi sadece kayıt olmasına rağmen, başka bir bu yanıtı eşlik eden olaylar zinciri belge. Bu microsequencing yazılımı kullanarak, gözlemciler yazılım (yazılım ve video gösterisi) tarafından istendiğinde belirli bir davranışı, her saniye, varlığı puan. </li><li> Veri toplama, faiz parametreler tespit edilir ve uygun davranış puanları analiz edilmektedir. Örnekler damat dizisi kesintileri (her bir hayvan için girilen verileri tablolama bilgisayar) yavru, ya da numara ile temas halinde harcanan zamanın toplam süresi olabilir. </li><li> Davranış atılırsa sonra bu iki tür için farklı tepki stratejilerinin çalışmaya ilgi davranışı sergiledi onaylamak için önemlidir. Bu durumda California geyik fareler ortak geyik farelere göre daha baba davranışları göstermelidir. Ayrıca, ilgili etkilerin daha bilinçli bir görünüm elde etmek için çeşitli davranış önlemler beyin önlemler ile ilişkili olabilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: <ol><li> Modeli doğrulamak için, iki tür faiz davranış bakımından farklı gerçekleştirilen veri açıkça belirtmelidir. Burada gördüğünüz P. californicus erkek yavrular, baba tepkileri iki işaretlerinden (Bakınız Şekil 4) üzerinde bakım ve çömelme daha fazla zaman harcadı. </li><li> Görüleceği gibi, baba P., faiz neurobiologial değişken, baba tepkileri önemlidir vazopressin (AVP) miktarını olumlu doku birkaç ilgili beyin alanları için sayısal belirlemek için californicus hayvanlar, bu beyin bölgelerinin çeşitli daha immün pozitif doku vardı . (Bkz. Şekil 5). </li><li> Microsequencing analizi ile ilgili bir çalışmada, baba Kaliforniya fareler, bakire muadillerine göre daha az anksiyete sergi olacağını hipotezi; buna göre, yırtıcı bir hayvan koku maruz kaldığında, babaları (Şekil damat dizisi bakire hayvanlardan daha az kesinti sergiledi 6). </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig1.jpg" /> Şekil 1: (A) conspecific yabancı yavru doğru baba yanıtları sergileyen Bay Kaliforniya fareler. (B) Erkek geyik fare ihtiyatlı bir yaklaşım (esneme katılmak) ve yavru bir conspecific yabancı varlığı kaçınma yanıtını sergiliyor. Not: Bu sosyal etkileşim değerlendirmelerde, bir erkek yavru karşı saldırgan tepkiler sergilemektedir, deneyciler erkek hemen dikkatini dağıtmak için kafesin üstüne vurdu. Şu anda oturum sonlandırılır ve yavru çıkarılır, herhangi bir yaralar için teftiş ve anne geri döndü. Laboratuvarımızda, bu P. ile nadiren görülmektedir californicus erkek ama bazen P. görülmektedir maniculatus yakın gözlem ve acil müdahale, ancak, hayvanların meydana gelen zarar görmesini engellemek. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig2.jpg" /> Şekil 2: oyuncak fare ile etkileşim California fare; en çok bu uyaranlara çiğnemek çalıştı . <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig3.jpg" /> Şekil 3: Deneysel çalışma tasarımı; her grupta yaklaşık 6 hayvanlar her tür vardı. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig4.jpg" /> Şekil 4: immünsitokimya süreci Grafik. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig5.jpg" /> Incirure 5 Kaliforniya ve geyik fareler Baba cevaplar; baba tepkileri (damat, çömelme, hızlı bir yaklaşım) Kaliforniya farelerde gözlendi. Streç katılır (stres tepkisi) geyik farelerde gözlendi. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig6.jpg" /> Şekil 6, her iki türün çeşitli beyin bölgelerindeki vazopressin immünoreaktivite. Kaliforniya fareler PVN hücreleri ve elyaf boyama vardı. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig7.jpg" /> Şekil 7: Baba Kaliforniya fareler yavru maruz kalan ve bakir gruplarına göre daha yırtıcı bir hayvan koku varlığında onların tımar dizileri daha az kesintileri sergilenmektedir .

<ol>
	<li>Tada, N., Sato, M., Yamanoi, J., Mizorogi, T., Kasai, K., Ogawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+in+the+presence+of+raffinose+and+glycerol.">Cryopreservation of mouse spermatozoa in the presence of raffinose and glycerol.</a> J. Reprod. Fertil. 89, 511-516 (1990).</li><li>Yokoyama, M., Akiba, H., Katsuki, M., Nomura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+normal+young+following+transfer+of+mouse+embryos+obtained+by+in+vitro+fertilization+using+cryopreserved+spermatozoa.">Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization using cryopreserved spermatozoa.</a> Jikken Dobutsu. 39, 125-128 (1990).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Young, A. F., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility+of+cryopreserved+mouse+spermatozoa+affected+by+temperature+of+collection+and+rate+of+thawing.">Motility of cryopreserved mouse spermatozoa affected by temperature of collection and rate of thawing.</a> Cryobiology. 35, 46-52 (1997).</li><li>Thornton, C. E., Brown, S. D., Glenister, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+numbers+of+mice+established+by+in+vitro+fertilization+with+cryopreserved+spermatozoa:+implications+and+applications+for+genetic+resource+banks,+mutagenesis+screens,+and+mouse+backcrosses.">Large numbers of mice established by in vitro fertilization with cryopreserved spermatozoa: implications and applications for genetic resource banks, mutagenesis screens, and mouse backcrosses.</a> Mamm. Genome. 10, 987-992 (1999).</li><li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fertilization+with+cryopreserved+inbred+mouse+sperm.">In vitro fertilization with cryopreserved inbred mouse sperm.</a> Biol. Reprod. 63, 1774-1780 (2000).</li><li>Liu, L., Nutter, L. M., Law, N., McKerlie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+freezing+and+in+vitro+fertilization+in+three+substrains+of+C57BL/6+mice.">Sperm freezing and in vitro fertilization in three substrains of C57BL/6 mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48, 39-43 (2009).</li><li>Nakagata, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+and+in+vitro+fertilization.">Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.</a> Methods. Mol. Biol. 693, 57-73 (2011).</li><li>Mazur, P., Koshimoto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+intracellular+ice+formation+the+cause+of+death+of+mouse+sperm+frozen+at+high+cooling+rates.">Is intracellular ice formation the cause of death of mouse sperm frozen at high cooling rates.</a> Biol. Reprod. 66, 1485-1490 (2002).</li><li>Jin, B., Yamasaki, C., Yamada, N., Seki, S., Valdez, D. M., Kasai, M., Edashige, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+by+which+mouse+spermatozoa+are+injured+during+freezing.">The mechanism by which mouse spermatozoa are injured during freezing.</a> J. Reprod. Dev. 54, 265-269 (2008).</li><li>Visconti, P. E., Westbrook, V. A., Chertihin, O., Demarco, I., Sleight, S., Diekman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+signaling+pathways+involved+in+sperm+acquisition+of+fertilizing+capacity.">Novel signaling pathways involved in sperm acquisition of fertilizing capacity.</a> J. Reprod. Immunol. 53, 133-150 (2002).</li><li>Ostermeier, G. C., Wiles, M. V., Farley, J. S., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserving,+distributing+and+managing+genetically+modified+mouse+lines+by+sperm+cryopreservation.">Conserving, distributing and managing genetically modified mouse lines by sperm cryopreservation.</a> PLoS ONE. 3, e2792-e2792 (2008).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu makale üç temel bileşenden davranışsal sinirbilim araştırmaların başarılı bir şekilde yürütülmesi için kritik olduğu düşünülen anlatılmaktadır: (2) doğru ve hassas bir immünsitokimya protokol; (1) temsilcisi ve geçerli bir hayvan modeli ve (3) en iyi analiz (gözlemsel ve istatistiksel ) hem de davranış ve beyin veri. Hatalar tek bir kategoride kesinlikle tüm çalışma sonuçları tehlikeye sokacaktır. Bu nedenle, dikkatli bir şekilde uygun hayvan modeli seçtikten sonra, önemli çaba Pilot beyinleri başarılı işleme takip davranış güvenilir çalışma gözlenen olacağını sağlamak için, davranışsal ve histolojik prosedürleri, test doğru olmalıdır. Bu teknikte, genetik mühendisliği veya ağrılı cerrahi manipülasyonlar gerektirmez, çünkü belirli bir yanıt nörobiyolojik mekanizmaları tanımlamak için karşılaştırmalı türlerinin kullanımı Daha önce de belirtildiği gibi, değerli bir metodolojik yaklaşımdır. Bu nedenle, bu metodolojik bir yaklaşım, daha az tehdit sağlam hayvanlar kullanır. Laboratuar hayvanları içinde yer bile hayvanların doğal varyasyon kullanımı, ancak, doğal-benzeri ortamlarda kuruluş tarafından güçlendirilmiştir. Laboratuvar çalışmaları, daha fazla ilgi davranışı türlerin farklılıkları orijinalliğini doğrulamak için alanına uzatılabilir Dahası, eğer bu bir sonraki adım önerilir. Karşılaştırmalı bir yaklaşım pek çok avantaj sunuyor olsa da, bir sınırlama verilerin bağıntılı doğası; dolayısıyla, farmakolojik manipülasyonları gibi ek teknikler daha fazla ilgi davranış hedeflenen nörobiyolojik sistemler rolü doğrulamak için kullanılan olmalıdır. Deneyciler, davranışsal, histolojik ve istatistiksel işlemler hakkında güvende hissediyorum sonra, hayvanların yaşam koşullarının tüm gruplar için deneysel manipülasyon için, tabii ki hariç, sabit kalması için alınması gerekmektedir. Işık programları, gürültü seviyeleri, bakıcı, nem seviyeleri ve laboratuvar kokuları gibi değişkenler hayvanların nörobiyolojik tepkiler üzerine önemli etkileri olabilir. Bu yazıda primer antikor vazopressin ama diğer primer antikorlar farklı ilgi nörokimyasalların bir bolluk için kullanılabilir tespiti için kullanıldı. Deneyci yeni bir antikor ile çalışıyorsa, yeni antikor optimum seyreltme belirlemek için titrasyon çalışmalar yapmak önemlidir. Daha fazla antikor aşırı kullanımı çok pahalı; Birçok kez çok antikor dokuda sinyal ayırt etmek için çok karanlık (satıcı tarafından önerilen) kullanılır. Sonunda, tek bir istatistiksel analiz daha fazla alternatif görüş ve yorumlara veri sağlamak için kullanılır eğer onlar kullanılan olmalıdır. Bu özel çalışmada, genel doğrusal modeller, bağıntı ve çok boyutlu ölçeklendirme analizi, verilerin en bilgilendirici bir görüş sağlamak için kullanılmıştır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Binoküler Bileşik Mikroskop </td><td> Motic </td><td> BA400 </td><td></td></tr><tr><td> BIOQUANT Yaşam Bilim Yazılımı </td><td> BioQuant Görüntü Analiz Corporation </td><td> Sürüm 8.40.20 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Microm </td><td> HM525 </td><td></td></tr><tr><td> Masterflex Konsol Sürücü Kolay Yük L / S (Perfüzyon Pompa) </td><td> Cole-Parmer Instrument Company </td><td> 7518-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 Kuyu Hücre Kültürü Küme (doku kültürü tedavi; non-pirojenik polistiren; steril) </td><td> Corning Costar </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> 25x75x1mm Mikroskop kızakları </td><td> Globe Scientific, Inc. </td><td> 1324W </td><td></td></tr><tr><td> 22x50mm No.1 Kapak Kayma </td><td> Globe Scientific, Inc. </td><td> 1414-1410 </td><td></td></tr><tr><td> Steril olmayan 3ml Büyük Ampul Transfer Pipetler Mezun </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimler </td><td> 70962-9 </td><td> &amp;nbps; </td></tr><tr><td> Alconox Deterjan Toz </td><td> Alconox </td><td> 1104 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S9888-1kg </td><td> CAS 7647-14-5 </td></tr><tr><td> Mono Sodyum Fosfat </td><td> Spektrum </td><td> SO130 </td><td> CAS 10049-21-5 </td></tr><tr><td> Sodyum Fosfat Dibazik Dihidrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 30412 </td><td> CAS 10028-24-7 </td></tr><tr><td> Triton X </td><td> Spektrum </td><td> TR135 </td><td> CAS 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Permount </td><td> Balıkçı </td><td> SP15-500 </td><td> CAS 108-88-3 </td></tr><tr><td> Krom potasyum sülfat </td><td> Sigma </td><td> C-5926 </td><td> CAS 7788-99-0 </td></tr><tr><td> CitriSolv </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-143975 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol, Yüksek Den.Poly Şişeler, 200 kanıt, 24 x 1 pint </td><td> Pharmco-AAPER </td><td> 111000200CSPP </td><td></td></tr><tr><td> Normal Keçi Serum </td><td> Vektör </td><td> S-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Tavşan anti vazopressin analit spesifik reaktif </td><td> Immunostar, Inc. </td><td> 20069 </td><td></td></tr><tr><td> Biotinlenmiş anti-tavşan IgG (H + L) afinite-saflaştırılmış </td><td> Vektör </td><td> BA-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Elite Standart Vectastain ABC Seti </td><td> Vektör </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> DAB Peroksidaz Yüzey Seti </td><td> Vektör </td><td> SK-4100 </td><td></td></tr><tr><td> Orijinal tatsız jelatin (4 sayımı zarflar) 1-oz kutusu </td><td> Knox </td><td></td><td> Yerel bakkal alımları </td></tr><tr><td> % 3 Hidrojen Peroksit </td><td> CareOne </td><td></td><td> Yerel eczaneden satın alma </td></tr><tr><td> Çamaşır suyu </td><td> Clorox </td><td></td><td> Yerel bakkal alımları </td></tr></tbody></table>

using a comparative species approach to investigate the neurobiology of paternal responses

Davranışsal sinirbilim bir hedefe belirli davranışlarını düzenleyen altta yatan nörobiyolojik faktörleri tanımlamak. Bu hedefi gerçekleştirmek için hayvan modelleri kullanarak, birçok metodolojik stratejileri ilgi davranış yoğunluğu (örneğin, lezyon yöntemleri, farmakolojik manipülasyonlar, mikrodiyaliz teknikleri, genetik olarak hayvan modellerinde) işlemek için invaziv teknikler gerektirir. Karşılaştırmalı bir tür yaklaşımın kullanımı araştırmacılar, doğal olarak tepki stratejilerini yakından ilgili türlerin mevcut farklılıklar meydana yararlanmanızı sağlar. Laboratuvarda, biz baba tepkileri farklı Peromyscus cins iki tür kullanın. Erkek Kaliforniya geyik fare (Peromyscus californicus), kuzeni ise kadın aynı ebeveyn tepkiler sergiler, ortak geyik fare (Peromyscus maniculatus) yavrular varlığı hemen hemen hiç besleyici / ebeveyn tepkiler sergiler . Bu makalede özel ilgi baba California geyik fare tarafından sergilenen affiliative sosyal tepkiler ile ilişkili nörobiyolojik faktörlerin bir keşif. Davranışsal sinirbilim yaklaşımı çok yönlü olduğundan, çalışmanın aşağıdaki temel bileşenleri kısaca değinilmiş olacak: bu tür araştırma için uygun türlerin tanımlanması, davranış analizi için veri toplama, hazırlama ve beyinleri kesit; için immünsitokimya dahil temel adımlar vazopressin-immünoreaktivite miktarının; beyin dokusu ölçmek için beyin görüntüleme yazılımı kullanımı; microsequencing video analizinin kullanımı, davranış puanı ve, nihayet, uygun istatistiksel analizler, araştırma bulgularının en bilgili yorumlara sağlamak için.

Watch this Scientific Journal Video about Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses at JoVE.com

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Karşılaştırmalı tür yaklaşım davranışsal sinirbilimciler, belirli bir hayvan modelinin karakteristik olarak görülmelidir özel davranışları ile ilgili çeşitli nörobiyolojik faktörler keşfetmek için izin verir. Yakından ilgili türler arasındaki davranış farklılıkları doğal olarak meydana gelen yararlanarak, bu tekniği invaziv tekniklerin davranış ifade işlemek için gerekli değildir.

Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

using-comparative-species-approach-to-investigate-neurobiology

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.5K Görüntüleme.  Randolph-Macon College. Karşılaştırmalı tür yaklaşım davranışsal sinirbilimciler, belirli bir hayvan modelinin karakteristik olarak görülmelidir özel davranışları ile ilgili çeşitli nörobiyolojik faktörler keşfetmek için izin verir. Yakından ilgili türler arasındaki davranış farklılıkları doğal olarak meydana gelen yararlanarak, bu tekniği invaziv tekniklerin davranış ifade işlemek için gerekli değildir.

Video: Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Multielectrode Array Recordings of the Vomeronasal Epithelium

Understanding neural circuits requires methods to record from many neurons simultaneously. For in vitro studies, one currently available technology is planar multielectrode array (MEA) recording. Here we document the use of MEAs to study the mouse vomeronasal organ (VNO), which plays an essential role in the detection of pheromones and social cues via a diverse population of sensory neurons expressing hundreds of types of receptors. Combining MEA recording with a robotic liquid handler to deliver chemical stimuli, the sensory responses of a large and diverse population of neurons can be recorded. The preparation allows us to remove the intact neuroepithelium of the VNO from the mouse and stimulate with a battery of chemicals or potential ligands while monitoring the electrical activity of the neurons for several hours. Therefore, this technique serves as a useful method for assessing ligand activity as well as exploring the properties of receptor neurons. We present the techniques needed to prepare the vomeronasal epithelium, MEA recording, and chemical stimulation.

Multielectrode array (MEA) recordings provide a method for studying the electrical activity of large populations of neurons. Here, we present the details of a MEA preparation to record from the mouse vomeronasal epithelium while simultaneously stimulating the tissue.

Vomeronasal Epitel Multielectrode Dizi Kayıtlar

Understanding neural circuits requires methods to record from many neurons simultaneously. For in vitro studies, one currently available technology is ...

Nörobilim

Recording Behavioral Responses to Reflection in Crayfish

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems. One important issue concerns the relative roles of each sensory modality in guiding behavior. The role of visual inputs has been examined by isolating visual stimuli from mechanical and chemosensory stimuli. In some studies (Bruski &amp; Dunham, 1987: Delgado-Morales et al., 2004) visual inputs have been removed with blindfolds or low light intensity, and effects of remaining sensory modalities have been elucidated. An alternative approach is to study the effects of visual inputs in the absence of any appropriate mechanical and chemosensory cues. This approach aims to identify the exclusive role of visual inputs. 
We have used two methods to provide visual stimuli to crayfish without providing chemical and mechanical cues. In one method, crayfish are videotaped in an aquarium where half of the walls are covered in mirrors to provide a reflective environment, and the other half are covered in a non-reflective (matte finish) plastic. This gives the crayfish a choice between reflective and non-reflective environments. The reflective environment provides visual cues in the form of reflected images of the crayfish as it moves throughout half of the tank; these visual cues are missing from the non-reflective half of the tank. An alternative method is to videotape the behavior of crayfish in an aquarium separated by a smaller chamber at each end, with a crayfish in one small chamber providing visual cues and an inert object in the opposite small chamber providing visual input from a non-moving, non-crayfish source. 
Our published results indicate that responses of crayfish to the reflective environment depend on socialization and dominance rank. Socialized crayfish spent more time in the reflective environment and exhibited certain behaviors more frequently there than in the non-reflective environment; isolated crayfish showed no such differences. Crayfish that were housed in same-sex pairs developed a social rank of either dominant or subordinate. Responses to reflection differed between dominant and subordinate crayfish (May &amp; Mercier, 2006; May &amp; Mercier, 2007). Dominant crayfish spent more time on the reflective side, entered reflective corners more frequently and spent more time in reflective corners compared to the non-reflective side. Subordinate crayfish walked in reverse more often on the reflective side than on the non-reflective side. Preliminary data suggest similar effects from visual cues provided by a crayfish in a small adjoining chamber (May et al., 2008).

We have developed two methods for studying effects of visual cues on behavior in the absence of tactile and chemical cues. One method involves videotaping responses of crayfish to reflective walls in an aquarium; the other examines effects of visual inputs provided by a live crayfish behind a transparent partition.

Kerevit Yansıma Davranış Yanıtları kaydedilmesi

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems.  One important issue concerns the relative roles of each ...

Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation

In vivo imaging using two-photon laser scanning microscopy (2PLSM) allows the study of living cells and neuronal processes in the intact brain. The technique presented here allows the imaging of the same area of the brain at several time points (chronic imaging) with microscopic resolution allowing the tracking of dendritic spines which are the small structures that represent the majority of postsynaptic excitatory sites in the CNS. The ability to clearly resolve fine cortical structures over several time points has many advantages, specifically in the study of brain plasticity in which morphological changes at synapses and circuit remodeling may help explain underlying mechanisms. In this video and supplementary material, we show a protocol for chronic in vivo imaging of the intact brain using a thinned-skull preparation. The thinned-skull preparation is a minimally invasive approach, which avoids potential damage to the dura and/or cortex, thus reducing the onset of an inflammatory response. When this protocol is performed correctly, it is possible to clearly monitor changes in dendritic spine characteristics in the intact brain over a prolonged period of time.

In this video and supplemental material, we show a protocol for chronic in vivo imaging of the intact brain using a thinned-skull preparation.

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

In vivo imaging using two-photon laser scanning microscopy (2PLSM) allows the study of living cells and neuronal processes in the intact brain. The ...

Measuring the Subjective Value of Risky and Ambiguous Options using Experimental Economics and Functional MRI Methods

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition termed "risky". In other cases when probabilities cannot be estimated, this is a condition described as "ambiguous". While most people are averse to both risk and ambiguity1,2, the degree of those aversions vary substantially across individuals, such that the subjective value of the same risky or ambiguous option can be very different for different individuals. We combine functional MRI (fMRI) with an experimental economics-based method3 to assess the neural representation of the subjective values of risky and ambiguous options4. This technique can be now used to study these neural representations in different populations, such as different age groups and different patient populations.
In our experiment, subjects make consequential choices between two alternatives while their neural activation is tracked using fMRI. On each trial subjects choose between lotteries that vary in their monetary amount and in either the probability of winning that amount or the ambiguity level associated with winning. Our parametric design allows us to use each individual's choice behavior to estimate their attitudes towards risk and ambiguity, and thus to estimate the subjective values that each option held for them. Another important feature of the design is that the outcome of the chosen lottery is not revealed during the experiment, so that no learning can take place, and thus the ambiguous options remain ambiguous and risk attitudes are stable. Instead, at the end of the scanning session one or few trials are randomly selected and played for real money. Since subjects do not know beforehand which trials will be selected, they must treat each and every trial as if it and it alone was the one trial on which they will be paid. This design ensures that we can estimate the true subjective value of each option to each subject. We then look for areas in the brain whose activation is correlated with the subjective value of risky options and for areas whose activation is correlated with the subjective value of ambiguous options.

Using functional MRI and behavioral methods to determine the neural representation of the subjective value of risky and ambiguous options in the human brain.

Deneysel İktisat ve Fonksiyonel MRI yöntemleri kullanarak Riskli ve belirsiz Seçenekleri Sübjektif Değer Ölçme

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of the dendritic tree, which eventually leads to neuronal output of action potentials at the axon. The influence of diverse spatial and temporal parameters of specific synaptic input on neuronal output is currently under investigation, e.g. the distance-dependent attenuation of dendritic inputs, the location-dependent interaction of spatially segregated inputs, the influence of GABAergig inhibition on excitatory integration, linear and non-linear integration modes, and many more.
With fast micro-iontophoresis of glutamate and GABA it is possible to precisely investigate the spatial and temporal integration of glutamatergic excitation and GABAergic inhibition. Critical technical requirements are either a triggered fluorescent lamp, light-emitting diode (LED), or a two-photon scanning microscope to visualize dendritic branches without introducing significant photo-damage of the tissue. Furthermore, it is very important to have a micro-iontophoresis amplifier that allows for fast capacitance compensation of high resistance pipettes. Another crucial point is that no transmitter is involuntarily released by the pipette during the experiment.
Once established, this technique will give reliable and reproducible signals with a high neurotransmitter and location specificity. Compared to glutamate and GABA uncaging, fast iontophoresis allows using both transmitters at the same time but at very distant locations without limitation to the field of view. There are also advantages compared to focal electrical stimulation of axons: with micro-iontophoresis the location of the input site is definitely known and it is sure that only the neurotransmitter of interest is released. However it has to be considered that with micro-iontophoresis only the postsynapse is activated and presynaptic aspects of neurotransmitter release are not resolved. In this article we demonstrate how to set up micro-iontophoresis in brain slice experiments.

In this article we introduce fast micro-iontophoresis of neurotransmitters as a technique to investigate integration of postsynaptic signals with high spatial and temporal precision.

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Laser-scanning Photostimulation of Optogenetically Targeted Forebrain Circuits

The sensory forebrain is composed of intricately connected cell types, of which functional properties have yet to be fully elucidated. Understanding the interactions of these forebrain circuits has been aided recently by the development of optogenetic methods for light-mediated modulation of neuronal activity. Here, we describe a protocol for examining the functional organization of forebrain circuits&#160;in vitro using laser-scanning photostimulation of channelrhodopsin, expressed optogenetically via viral-mediated transfection. This approach also exploits the utility of cre-lox recombination in transgenic mice to target expression in specific neuronal cell types. Following transfection, neurons are physiologically recorded in slice preparations using whole-cell patch clamp to measure their evoked responses to laser-scanning photostimulation of channelrhodopsin expressing fibers. This approach enables an assessment of functional topography and synaptic properties. Morphological correlates can be obtained by imaging the neuroanatomical expression of channelrhodopsin expressing fibers using confocal microscopy of the live slice or post-fixed tissue. These methods enable functional investigations of forebrain circuits that expand upon more conventional approaches.

We describe a method for characterizing the functional topography and synaptic properties of forebrain circuits using an optogenetic approach to photostimulate neuronal populations&#160;in vitro.

Optogenetically Hedeflenen Önbeyin Devreler Lazer tarama photostimulation

The sensory forebrain is composed of intricately connected cell types, of which functional properties have yet to be fully elucidated. Understanding the ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the &quot;Loser&quot; Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

Saldırganlık incelenmesi için Handling ortadan kaldırır Yeni Bir Yaklaşım ve &quot;Loser&quot; Etkisi içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons

Photostimulation is a noninvasive way to control biological events with excellent spatial and temporal resolution. New methods are desired to photo-regulate endogenous proteins expressed in their native environment. Here, we present an approach to optically control the function of a neuronal protein directly in neurons using a genetically encoded unnatural amino acid (Uaa). By using an orthogonal tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase pair to suppress the amber codon, a photo-reactive Uaa 4,5-dimethoxy-2-nitrobenzyl-cysteine (Cmn) is site-specifically incorporated in the pore of a neuronal protein Kir2.1, an inwardly rectifying potassium channel. The bulky Cmn physically blocks the channel pore, rendering Kir2.1 non-conducting. Light illumination instantaneously converts Cmn into a smaller natural amino acid Cys, activating Kir2.1 channel function. We express these photo-inducible inwardly rectifying potassium (PIRK) channels in rat hippocampal primary neurons, and demonstrate that light-activation of PIRK ceases the neuronal firing due to the outflux of K+ current through the activated Kir2.1 channels. Using in utero electroporation, we also express PIRK in the embryonic mouse neocortex in vivo, showing the light-activation of PIRK in neocortical neurons. Genetically encoding Uaa imposes no restrictions on target protein type or cellular location, and a family of photoreactive Uaas is available for modulating different natural amino acid residues. This technique thus has the potential to be generally applied to many neuronal proteins to achieve optical regulation of different processes in brains. The current protocol presents an accessible procedure for intricate Uaa incorporation in neurons in vitro and in vivo to achieve photo control of neuronal protein activity on the molecular level.

Here, a procedure to selectively activate a neuronal protein with a short pulse of light by genetically encoding a photo-reactive unnatural amino acid into a target neuronal protein expressed in neurons in culture or in vivo is presented.

Nöronlar bir Genetiği kodlanmış doğal olmayan Amino Asit kullanarak Nöronal Protein Optik Kontrol

Photostimulation is a noninvasive way to control biological events with excellent spatial and temporal resolution. New methods are desired to ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to navigate axonal growth. Netrin, slit, semaphorin, and ephrins are known guidance molecules that can attract or repel axons upon binding to receptors and co-receptors on the axon. The activated receptors initiate various signaling molecules in the growth cone that alter the structure and movement of the neuron. Here, we describe the detailed protocol for a stripe assay to assess the ability of a guidance molecule to attract or repel neurons. In this method, dissociated hippocampal neurons from E15.5 mice are cultured on laminin-coated dishes processed with alternating stripes of ectodomain of fibronectin and leucine-rich transmembrane protein-2 (FLRT2) and control immunoglobulin G (IgG) fragment crystallizable region (Fc) protein. Both axons and cell bodies were strongly repelled from the FLRT2-coated stripe regions after 24 h of culture. Immunostaining with tau1 showed that ~90% of the neurons were distributed on the Fc-coated stripes compared to the FLRT2-Fc-coated stripes (~10%). This result indicates that FLRT2 has a strong repulsive effect on these neurons. This powerful method is applicable not only for primary cultured neurons but also for a variety of other cells, such as neuroblasts.

Axon guidance molecules regulate neuronal migration and targeted growth-cone navigation. We present a powerful method, the stripe assay, to assess the ability of guidance molecules to attract or repulse neurons. In this protocol, we demonstrate the stripe assay by showing FLRT2's ability to repel cultured hippocampal neurons.

Çizgili Deneyi Disosiye Hipokampal Nöronlar kullanarak Protein Substrat çekici veya itici Aktivite Eğitim için

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from flowering plants. Only a few studies have described the gustatory responses of bees toward toxins in food, and these experiments have mainly used the proboscis extension response on restrained honey bees. Here, a new behavioral assay is presented for measuring the feeding responses of freely-moving, individual worker bumble bees to nutrients and toxins. This assay measures the amount of solution ingested by each bumble bee and identifies how tastants in food influence the microstructure of the feeding behavior.
The solutions are presented in a microcapillary tube to individual bumble bees that have been previously starved for 2-4 hr. The behavior is captured on digital video. The fine structure of the feeding behavior is analyzed by continuously scoring the position of the proboscis (mouthparts) from video recordings using event logging software. The position of the proboscis is defined by three different behavioral categories: (1) proboscis is extended and in contact with the solution, (2) proboscis is extended but not in contact with the solution and (3) proboscis is stowed under the head. Furthermore the speed of the proboscis retracting away from the solution is also estimated.
In the present assay the volume of solution consumed, the number of feeding bouts, the duration of the feeding bouts and the speed of the proboscis retraction after the first contact is used to evaluate the phagostimulatory or the deterrent activity of the compounds tested.
This new taste assay will allow researchers to measure how compounds found in nectar influence the feeding behavior of bees and will also be useful to pollination biologists, toxicologists and neuroethologists studying the bumble bee&#39;s taste system.

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

A novel behavioral assay is described for investigating the short term gustatory responses of the mouthparts of freely-moving bumble bees (Bombus terrestris) toward nutrients and toxins in solution.

A Novel Davranış Testi (Bumble Bees Serbestçe hareket eden Bireyin Tat Cevapları, Araştırma<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...