Bu araştırma fon çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı, ya da yazının hazırlanmasında hiçbir rolü vardı EAK Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü (GM099883 ve GM074675) hibe tarafından desteklenmiştir. (: Kontak Biz davranışsal aparat tasarımı için Harvard Tıp Okulu&#39;nda bizim makine dükkandan halkına teşekkür <a href="http://mikesmachine.com">http://mikesmachine.com).</a> Yazar katkıları: ST, BC davranışsal aparat tasarladı. ST tasarlanmış ve deneysel protokol optimize edilmiş. ST ve M.Ö. gerçekleştirilen ve deneyler analiz. ST, EAK ve M.Ö. kağıt yazdı.

Not: Aşağıdaki biz erkek meyve sinekleri çiftleri arasındaki güvenilir saldırganlık tetikleme izin kullanmak deneysel protokol (D. melanogaster) bir adım-adım açıklama. Bu prosedür, bir &quot;kaybeden&quot; etkisi oluşumunu uyarır. Bu protokolü kullanarak, aynı zamanda olmuştur kısa vadeli &quot;kazanan&quot; etkisi son zamanlarda 5,6 bildirildi. Şekil 1 davranışsal deneyler zaman çizelgesini gösterir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig1.jpg" /> Saldırganlık deney 1. Timeline Şekil. 1. gün, geç evre erkek pupa (kanatlar siyah olunca) taze hazırlanmış izolasyon şişeler içinde izole edilmiştir. Yetişkinler olarak ortaya çıkan 5 gün sonra, 4 günlük erkek sinekler CO 2 ile anestezi uygulanır ve tanımlama amacıyla farklı renklerle boyanmış. 7. günde, gıda bardak ve mücadele odaları vardırdavranışsal deneyler kurmak için hazır. İki 6-7 gün eski yetişkin erkekler odalarına yüklenen ve etkileşim edebiliyoruz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 1. 1. Gün: Pupa Sosyal İzolasyon <ol><li> Kaldırın ve 25 ° C&#39;de ve% 50 nispi nemde bir çevresel olarak kontrol edilen, 12 saat ışık / 12 saat karanlık çevrimi inkübatör sinek stoklarının bakımını. </li><li> Izolasyon şişeleri hazırlayın: eriyene kadar taze sinek gıda ısıtın. Pasteur pipet kullanarak, tek boş cam test tüpleri (1.6 x 10 cm) içine yaklaşık 1.5 ml erimiş sinek gıda aktarın. Gıda katılaşmaya izin verin. </li><li> Pupa izole edin: (kanatlar siyah olunca) ince bir fırça ile hafifçe stok şişeden bir geç evre erkek pupa kaldırmak ve taze hazırlanmış yiyecek içeren test tüpünün tarafına yerleştirin. Pamuk ile yakın izolasyon şişeleri (Şekil 2). </li><li&gt; 25 ° C ve% 50 nispi nemde, 12 saat ışık / 12 saat karanlık inkübatör içine pupa içeren bir yer yalıtım şişesi kullanılmıştır. </li></ol><img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53395/53395fig2.jpg" /> Şekil 2. Sosyal İzolasyon. Bir ileri evre erkek pupa taze hazırlanmış izolasyon şişenin üzerine tarafında yer alıyor. Pupa içeren İzolasyon şişeleri 25 ° C ve% 50 bağıl nemde 12 saat ışık / 12 saat karanlık inkübatör yerleştirilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 2. Gün 5: Bireyi Tanıma Amaçlı Sinekler Boyama <ol><li> CO 2 anestezi olumsuz etkisini en aza indirmek için 4 günlük erkek sinekler ve davranışsal deneyler öncesinde iki gün ile 5 gün bu adımı gerçekleştirin. </li><li> CO 2 ile sinek anestezisi. </li&gt; <li> Ince bir kürdan ile, göğüs üzerinde akrilik boya küçük bir nokta koyun. Baş, kanatlar, karın ya da bacaklarda (Şekil 3) boya koymaktan kaçının. </li><li> Yaklaşık 10 saniye boyunca boya kurumaya bırakın ve yavaşça orijinal izolasyon şişeleri geri sinekler aktarın. </li><li> 25 ° C&#39;de ve% 50 nispi nemde, 12 saat ışık / 12 saat karanlık inkübatör yalıtım şişeleri dönün. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53395/53395fig3.jpg" /> Şekil 3. Bireysel kimlik. CO 2, akrilik boya, küçük bir damla ile bir sinek anestezi sonra toraks uygulanır. Bireysel kimlik amaçla, farklı renklerde (beyaz ve burada mavi) kullanılır. Bu aşamada CO 2 kullanımı hakkında aşağıdaki açıklamalara bakın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig3large.jpg" target="_blank">Bu figu büyük halini görmek için tıklayınız</a>yeniden. 3. Gün 7: Aparatı hazırlanması <ol><li> Gıda Kupaları hazırlayın: <ol><li> O eriyene kadar taze sinek gıda ısıtın. </li><li> Pasteur pipeti kullanılarak, vida kapaklı bir küçük şişe (1.5 cm çapında, 1 cm yükseklik) kapağının yaklaşık 0.8 mi gıda transferi ve soğumaya bırakın. Hava kabarcıkları kaçının. </li><li> Su birkaç damla kuru maya karıştırılarak taze maya hamur yapın. Ne zaman kalın, bir kürdan (Şekil 4) ile gıda fincan yüzeyinin merkezine maya hamur küçük bir damla uygulayın. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53395/53395fig4.jpg" /> Gıda fincan hazırlama Şekil 4.. Bir gıda fincan taze sinek gıda ile hazırlanmıştır. Gıda katılaşır sonra, maya hamur bir nokta gıda fincan yüzeyinin merkezine yerleştirilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig4large.jpg" target="_blank">V için tıklayınız</a>Bu rakamın büyük bir sürümünü iew. <ol start="2"><li> Bireysel Mücadele Chambers hazırlayın: <ol><li> Kullanmadan önce iyice su ile her zaman cihaz ve bireysel mücadele odaları yıkayın. Kullanmadan önce kağıt havluyla kurulayın. </li><li> Her mücadele odasının ortasında bir gıda fincan yerleştirin ve macun bir damla yere sabitleyin. </li><li> Cihaz kapağının (Şekil 5) ile mücadele odaları örtün. </li><li> 25 ° C&#39;de bir yüksek nemli ortama (% 60) halinde cihazı yerleştirin. </li><li> Mücadele odaları aydınlatmak ve yukarıdan kayıt için bir video kamera ayarlamak için aparat üstünde bir ışık kaynağı yerleştirin. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53395/53395fig5.jpg" /> Şekil 5. Bireysel mücadele odasını hazırlamak. Yüzeyde maya hamur bir nokta ile taze hazırlanmış yiyecek fincan yıkanmış bireysel fi içine sabitlenirodaları ghting. Chambers, bireysel mücadele odalarına opak plastik bölücü sokulmasını sağlayan iki parçalı kapak ile kapatılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 4. Gün 7: Davranışsal Deney <ol><li> 6-7 günlük erkek sinekler davranışsal deneyler yapın. </li><li> Her mücadele odasına plastik bölücüler yerleştirin. </li><li> Izolasyon tüpten pamuk fişini çıkarın ve aparatın tarafında açık bir delik altında tüp yerleştirin. </li><li> Sinek genellikle birkaç saniye içinde, negatif geotaxis tarafından savaş odasına girelim. </li><li> Sinek tüpü ve sol odasına girdikten sonra kayan duvarı kapatın. </li><li> Aparatın diğer tarafta kavga odasına ikinci sinek tanıtmak için işlemi tekrarlayın. </li><li> Işıklı videotapi geri aparatı yerleştirinng konumu. </li><li> Video kayıt başlayın ve sinekler etkileşime izin plastik bölücü kaldırın. <ol><li> Saldırganlık Deneyleri: <ol><li> Bu deneylerde, kayıt güçlü hakimiyeti ilişkilerin oluşumunu sağlamak için en az 20 dakika boyunca savaşır. </li><li> İstenilen süre sonra, video kaydını durdurun. </li><li> Yukarıda açıklanan yordamı ters çevirerek mücadele odalarından sinekler çıkarın. </li><li> İyice her kullanımdan ve durulama sonrasında hafif deterjan ve suyla davranışsal aparatı yıkayın. </li></ol></li><li> &quot;Kaybeden&quot; Efekt Deneyleri İçin: Not: Bu deneylerde, ilk savaşır test aşamasında gibi şekillendirme aşaması ve ikinci kavgaları olarak kabul edilmektedir. Kavgalar arasında kalan dönemi farklı olabilir ama 10 dk güçlü bir &quot;kaybeden&quot; etkisi oluşumunu sağlayan. <ol><li> İlk mücadele gerçekleştirmek için yukarıda açıklanan prosedürü uygulayın. </li><li> KRİTİK ADIM: a &quot;kaybeden&quot; mantığı, e oluşumunu teşvik etmek içinİlk kavgalar en az 20 dakika, güçlü hakimiyeti ilişkileri kurmak amacıyla uzun bir şekilde almalarının sağlanması. 20 dakika sonra, sinekler ayırmak için mücadele odalarına plastik bölücü yeniden takın. </li><li> Dinlenme 10 dakikalık bir süre sonra, yavaşça sinekler ikinci kavgalar için etkileşim sağlamak için plastik bölücü kaldırın. </li><li> İkinci 20 dakika mücadele sonunda, Video kaydını durdurmak. </li><li> Yukarıdaki gibi davranışsal odalarından sinekler çıkarın. </li><li> Bir kez daha, iyice davranışsal cihazı temizleyin. </li></ol></li></ol></li></ol> 5. Davranış Analizi <ol><li> Filmler aktarma <ol><li> Bilgisayara kameraları bağlayın. </li><li> &quot;Seçilen klipleri katılmak&quot; Video dönüştürme yazılımı ve seçeneğini kullanarak, sinekler mov ve birlikte film klipleri katılmak için sinekler .mts dönüştürün. </li><li> Gözlemleyin ve video okuyucu yazılımı ile her film analiz. </li></ol></li><li> Puanlama Davranış Bu elle yapılabilir ya da bize: NotVarsa davranışsal analiz programı yazılımı ing. Aşağıdaki resimde bir &quot;kaybeden&quot; etkisi için olası manuel analizini açıklar. <ol><li> Gıda fincan üzerinde sinekler arasındaki ilk karşılaşma zamanı Puan ve ilk hamle görünüm zaman (bir sinek üzerinde yükselirse olan bir davranış paterni (karşılaştığında en az 2 sn süren sinekler çiftleri arasındaki etkileşimler vardır) onun Arka ayakları ve aşağı oturtunuz ve) rakibini kapmak için çalışır. Ardından, (ilk karşılaşma ile ilk hamle arasındaki aralığı) hamle için gecikme puan. </li><li> Kavga sırasında karşılaşır ve lunges toplam sayısını sayın. Not: İstenirse, bir de kanat tehdit, boks, eskrim, çekilme ya da örneğin ilk hamle öncesinde karşılaşmaların numaraları gibi diğer davranış kalıpları skor olabilir. </li><li> Egemenlik (ilk karşılaşma ve bir gıda fincan kıç kapalı üst üste üç kez inziva uçmak zamanı arasındaki zaman kurulması zamanını Puaner) lunges alma. Sinek Not kazanan ve hangi mücadele kaybeden. </li></ol></li><li> Bir &quot;Kaybeden&quot; Effect hesaplanması <ol><li> Önceki kaybedenler 2. kavgalar (kaybedersiniz Kaybedenler: LL) kaybettiği kavgalar sayısını bölün kavgalar toplam sayısına göre ve 100 elde yüzdesi &quot;kaybeden&quot; etkisini temsil ile çarpmak: [(# LL uçar) / (# Toplam kavga)] x 100 </li><li> &quot;Kaybeden&quot; etkisi% 50 beklenen değerden istatistiksel olarak farklı olup olmadığını karşılaştırmak için Ki-kare testi kullanın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Chen, S., Lee, A. Y., Bowens, N. M., Huber, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fighting+fruit+flies:+a+model+system+for+the+study+of+aggression.">Fighting fruit flies: a model system for the study of aggression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 5664-5668 (2002).</li><li>Hsu, Y., Earley, R. L., Wolf, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+aggressive+behaviour+by+fighting+experience:+mechanisms+and+contest+outcomes.">Modulation of aggressive behaviour by fighting experience: mechanisms and contest outcomes.</a> Biol Rev Camb Philos Soc. 81, 33-74 (2006).</li><li>Yurkovic, A., Wang, O., Basu, A. C., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+associated+with+aggression+in+Drosophila+melanogaster.">Learning and memory associated with aggression in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 17519-17524 (2006).</li><li>Penn, J. K., Zito, M. F., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+social+defeat+reduces+aggression+in+a+highly+aggressive+strain+of+Drosophila.">A single social defeat reduces aggression in a highly aggressive strain of Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 12682-12686 (2010).</li><li>Trannoy, S., Chowdhury, B., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handling+alters+aggression+and+'loser'+effect+formation+in+Drosophila+melanogaster.">Handling alters aggression and 'loser' effect formation in Drosophila melanogaster.</a> Learn Mem. 22, 64-68 (2015).</li><li>Trannoy, S., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+during+aggression+in+Drosophila:+handling+affects+aggression+and+the+formation+of+a+''loser''+effect.">Learning and memory during aggression in Drosophila: handling affects aggression and the formation of a ''loser'' effect.</a> Journal of Nature and Science. 1 (3), e56 (2015).</li><li>Alekseyenko, O. V., Chan, Y. B., Li, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+dopaminergic+neurons+that+modulate+aggression+in+Drosophila.">Single dopaminergic neurons that modulate aggression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 6151-6156 (2013).</li><li>Dierick, H. A., Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+and+neuropeptide+F+have+opposite+modulatory+effects+on+fly+aggression.">Serotonin and neuropeptide F have opposite modulatory effects on fly aggression.</a> Nat Genet. 39, 678-682 (2007).</li><li>Williams, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aggression+by+obesity-linked+genes+TfAP-2+and+Twz+through+octopamine+signaling+in+Drosophila.">Regulation of aggression by obesity-linked genes TfAP-2 and Twz through octopamine signaling in Drosophila.</a> Genetics. 196, 349-362 (2014).</li><li>Chase, I. D., Bartolomeo, C., Dugatkin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+interactions+and+inter-contest+interval:+how+long+do+winners+keep+winning?.">Aggressive interactions and inter-contest interval: how long do winners keep winning?.</a> Anim. Behav. 48, 393-400 (1994).</li><li>Goessmann, C., Hemelrijk, C., Huber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+and+maintenance+of+crayfish+hierarchies:+behavioral+and+self-structuring+properties.">The formation and maintenance of crayfish hierarchies: behavioral and self-structuring properties.</a> Behav Ecol Sociobiol. 48, 418-428 (2000).</li><li>Sturtevant, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experiments+on+sex+recognition+and+the+problem+of+sexual+selection+in+Drosophila.">Experiments on sex recognition and the problem of sexual selection in Drosophila.</a> J Animal Behav. 5, 351-366 (1915).</li><li>Jacobs, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+light+on+mating+of+Drosophila+melanogaster.">Influence of light on mating of Drosophila melanogaster.</a> Ecology. 41, 182-188 (1960).</li><li>Dow, M. A., von Schilcher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggression+and+mating+success+in+Drosophila+melanogaster.">Aggression and mating success in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 254, 511-512 (1975).</li><li>Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+laboratory+study+of+male+territoriality+in+the+sibling+species+Drosophila+melanogaster+and+D.+simulans.">A laboratory study of male territoriality in the sibling species Drosophila melanogaster and D. simulans.</a> Anim. Behav. 35, 807-818 (1987).</li><li>Vrontou, E., Nilsen, S. P., Demir, E., Kravitz, E. A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fruitless+regulates+aggression+and+dominance+in+Drosophila.">fruitless regulates aggression and dominance in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 9, 1469-1471 (2006).</li><li>Nilsen, S. P., Chan, Y. B., Huber, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender-selective+patterns+of+aggressive+behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Gender-selective patterns of aggressive behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12342-12347 (2004).</li><li>Fernandez, M. P., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggression+and+courtship+in+Drosophila:+pheromonal+communication+and+sex+recognition.">Aggression and courtship in Drosophila: pheromonal communication and sex recognition.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 199, 1065-1076 (2013).</li><li>Alekseyenko, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+serotonergic+neurons+that+modulate+aggression+in+Drosophila.">Single serotonergic neurons that modulate aggression in Drosophila.</a> Current biology : CB. 24, 2700-2707 (2014).</li><li>Asahina, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tachykinin-expressing+neurons+control+male-specific+aggressive+arousal+in+Drosophila.">Tachykinin-expressing neurons control male-specific aggressive arousal in Drosophila.</a> Cell. 156, 221-235 (2014).</li><li>Andrews, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Octopamine+neuromodulation+regulates+Gr32a-linked+aggression+and+courtship+pathways+in+Drosophila+males.">Octopamine neuromodulation regulates Gr32a-linked aggression and courtship pathways in Drosophila males.</a> PLoS genetics. 10, e1004356 (2014).</li><li>Zwarts, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+genetic+architecture+of+Drosophila+aggressive+behavior.">Complex genetic architecture of Drosophila aggressive behavior.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 17070-17075 (2011).</li><li>Dierick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+quantifying+aggression+in+male+Drosophila+melanogaster.">A method for quantifying aggression in male Drosophila melanogaster.</a> Nat Protoc. 2, 2712-2718 (2007).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+chemosensory+regulation+of+male-male+social+interactions+in+Drosophila.">Hierarchical chemosensory regulation of male-male social interactions in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14, 757-762 (2011).</li><li>Davis, S. M., Thomas, A. L., Nomie, K. J., Huang, L., Dierick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailless+and+Atrophin+control+Drosophila+aggression+by+regulating+neuropeptide+signalling+in+the+pars+intercerebralis.">Tailless and Atrophin control Drosophila aggression by regulating neuropeptide signalling in the pars intercerebralis.</a> Nat Commun. 5, 3177 (2014).</li><li>Yuan, Q., Song, Y., Yang, C. H., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+contact+modulates+male+aggression+via+a+sexually+dimorphic+GABAergic+circuit+in+Drosophila.">Female contact modulates male aggression via a sexually dimorphic GABAergic circuit in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 17, 81-88 (2014).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Joachim, D., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotype+and+anesthetic+determine+mate+choice+in+Drosophila+melanogaster.">Genotype and anesthetic determine mate choice in Drosophila melanogaster.</a> Behav Genet. 20, 73-79 (1990).</li><li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).</li><li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fly Pushing: The theory and Practice of Drosophila Genetics. , (1997).</li><li>Cabral, L. G., Foley, B. R., Nuzhdin, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+sex+trade+with+violence+among+genotypes+in+Drosophila+melanogaster?.">Does sex trade with violence among genotypes in Drosophila melanogaster?.</a> PLoS One. 3 (4), e1986 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Saldırganlık çalışma için bir model organizma olarak güçlü genetik yöntemlerle Drosophila kullanarak modern çağın, güvenilir dövüş davranış sinekler 1,7 tek çiftleri elde edilebileceği roman deneysel arenalarda tanıtımıyla bir düzine yıl önce başladı 8,17,19. Bu arenalarda istenen kaynaklar (gıda fincan, potansiyel arkadaşları) ve kaybeden için bir boşluk içine çekilmeye uçar dahil. Bu arenalarda elde edilen sonuçlar meyve sineği kavga davr...

Hayvan sistemlerinde Saldırganlık şiddetle edinimi ve gıda, toprak ve arkadaşları gibi kaynakların holding ile ilişkilidir. Bu bireylerin uygunluk oynadığı önemli rol göz önüne alındığında, bu saldırganlık hayvan krallığının genelinde gelişmiştir olması şaşırtıcı değildir. Doğrudan bireyler fayda adaptif özelliği olarak, güçlü bir öğrenme ve bellek bileşeni saldırganlık ile ilişkilidir. Sosyal rütbe için rekabet, bir önceki dövüş deneyimi sonraki yarışmaların sonuçlarını etkiler. Genel olarak, önce kaybeden tecrübe artar ve kazanan bir deneyim azalır, daha sonraki yarışmaları kaybetme olasılığı (&quot;kaybeden&quot; ve &quot;kazanan&quot; etkileri denir). &quot;Kaybeden&quot; etkileri türlerin geniş bir yelpazede gözlenen ve bazı raporlar &quot;kazanan&quot; etkiler genellikle kısa süreli 2,10,11 arasında ise bu birkaç gün sürebilir düşündürmektedir oylandı. Saldırgan davranış ilk raporumeyve sinekleri (D. ampelophila) seks tanıma ve cinsiyet seçimi 12 ile ilgili bir makalede 1915 yılında Sturtevant oldu. Daha sonra, erkek meyve daha tam muayeneleri saldırganlık uçmak Yarım yüzyıl meyve sineği kavgalar sırasında gözlenen davranış kalıplarının çoğu tarif, yapılmıştır. Bu deneyler genellikle saat 13-15 gözlenen kadın ve erkek sineklerin küçük gruplar halinde yürütülmüştür. Son zamanlarda, güçlü genetik araçlar diyadik tek seks mücadele kurulumları ve gözlem, D. kısa zamanlarda eklenmesiyle melanogaster saldırganlık 1,16 biyolojisi çalışmaları için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. Erkek ve dişi sineklerin aynı cinsiyetten çiftleri arasındaki kavgalar Analizi saldırganlık bir istatistiksel güvenilir bir şekilde 1,17 yılında birinden diğerine geçiş basmakalıp davranış kalıplarını içerdiğini göstermiştir. Diğerleri mücadelede görülürken gözlenen davranış kalıplarının bazıları cinsiyete özgü olanHer iki cinsiyette de s. Erkek kavgalar açık &quot;kazananlar&quot; ve &quot;kaybedenler&quot; ile egemenlik ilişkilerinin oluşumunda kadın kavgalar ve sonucu daha yüksek yoğunluk seviyelerine gidin. Şu anda birçok laboratuvarlar biyokimyasal 18, nöral 7,19-21 ve saldırganlık genetik temelleri 22 soruşturma başladı. Ne yazık ki, çalışmaların bir meta-analiz, farklı laboratuvarlarda deneysel prosedürlerin çokluğu kullanımına mücadele dinamikleri içgörü ve oluşumu ve egemenlik ilişkilerinin bakımı sorunlu kazanmak için. Esasen literatürde tanımlanan tekniklerin tüm arenalarda dışarı sinekler aktarmak için arenalarda 19,23,24 içine ve davranışsal deney 3,4 sırasında bunları tanıtmak için sinek kullanım ve manipülasyon içerir. Nazik aspirasyon sinekler 3,4,23-25 ​​işlemek için en yaygın yolu, ancak soğuk ya da CO 2 anestezi de olsa p rağmen, 9,26 kullanılırnceki çalışmalar zaten bu işlemler sinek davranışı 27,28 üzerinde zararlı etkilere sahip olduğunu bildirmişlerdir. En az 24 saatlik bir süre davranışı 29,30 üzerindeki etkilerini en aza indirmek için herhangi bir anestezik kullanımı sonra tavsiye edilir. Sinekler önceki mücadele deneyimlerinden öğrenmek ve öğrenme ve hafıza eşlik ve agonistik karşılaşmaların sonuçları olduğunu öne sürerek, yeni durumlarda kendi davranışsal model kullanımını değiştirin. Bu anlamda, kavgalar sonraki karşılaşmalarda sırasında daha fazla ve daha sık kullanmak sonra strateji çalışmış olduğunu öğrenmek ve sinekler hangi edimsel koşullanma öğrenme ortamlarına benzer uçmak. Egemenlik ilişkileri kavgalar sırasında oluşturulan edildikten sonra Sinekler kazananlar daha fazla ve kaybedenler daha az lunging ile kendi dövüş stratejilerini değiştirmek. Ayrılık bir süre sonra, önceki kaybedenler çok daha uysal davranışlar göstermek ve naif fl ile eşleştirilmiş savaşır nd 2 kaybetmek son derece muhtemeldirler veya önceki kazananlar 3,4. Ancak, sinekler ele dışlayan bir deneysel işlemin yokluğu zor &quot;kaybeden&quot; etkileri detaylı çalışmalar yapmıştır. Yeni bir çalışmada, rutin kullanımını ortadan kaldıran yeni prosedüre davranışsal odalarına sinekler tanıtmak için laboratuvarlar (aspirasyon ve soğuk anestezi) kullanılan iki deneysel prosedürleri karşılaştırıldı. Sonuçlar soğuk anestezi aspirasyon çok saldırganlık üzerine daha büyük olumsuz etkileri vardı, ama bile aspirasyon sinekler tarafından saldırganlık düzeyini azalttığını göstermiştir. Aspirasyon, ancak saldırganlığı eşlik öğrenme ve hafıza üzerinde çok önemli etkilere neden etmedi. İki deneysel prosedürler (aspirasyon ve hiçbir işleme), sineklerin ele deneysel prosedür 5,6 elendiği zaman sağlam &quot;kaybeden&quot; etkisi sadece gözlendi özdeş protokol sonrasında. İdeal olarak, labo Drosophila saldırganlık çalışmalarıratories normalde (kaçmaya savunmak için kaynaklar için rekabet, bölge ve uzay) vahşi karşılaşabileceğiniz sinekler çevresel durumları içermelidir. Buna ek olarak, deneysel koşullar güvenilir, neden gözlemlemek ve inceleme altında davranışlarını yorumlamak için optimize edilmelidir (hayvan taşıma minimize anestezik olarak CO 2 kullanımını sınırlamak ve deneysel prosedürler standart çalışın). Çoğu veya bütün bu konular ele çalışırken, biz sırasında ve davranışsal arenalarda onları tanıttıktan sonra, daha önce sineklerin işlenmesini ortadan kaldıran yeni bir davranış aparat tasarladı. Bu aparat sayesinde, sinekler kendi doğuştan negatif geotaxis taşındı ve içine ve kavga odalarından dışarı aktarılacak kullanın. (A) bireyler arasında davranışsal değişkenlik azaltmak;: sinekler işlenmesini ortadan kaldırarak, protokol hedefliyor Sinekler etkileşim ve net baskınlık ilişkileri (erkek) oluşturmak için (b) gerekli zaman azaltmak; ve (c) güvenilir yeterince güçlü behavio nedenral değişiklikleri &quot;kaybeden&quot; etkilerin oluşmasına izin vermek. Bu protokol, yeni bir deneysel düzenek ve aşamalı bir prosedür ile bir adım saldırganlık analiz etmek ve D&#39;de güçlü bir &quot;kaybeden&quot; etkisi oluşumuna izin vermek için tarif melanogaster. Biz bu davranışsal cihaz kolayca meyve sinekleri tarafından sergilenen diğer sosyal davranışların incelenmesi için adapte edilebilir bekliyoruz.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="665">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Drosophila melanogaster pupa</td>
			<td style="width:163px;">Bloomington Stock Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Standard fly food</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Fabricated in-house.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Behavioral chambers</td>
			<td style="width:163px;">Mike machine</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Fabricated in-house. Directly&#160; contact the compagny for more informations.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Borosilicate glass vials</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">47729-576</td>
			<td style="width:167px;">16 x 10 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cotton</td>
			<td style="width:163px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">22-456-881</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">53300-567</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paintbrush&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Blick Art Material</td>
			<td style="width:119px;">06157-7030</td>
			<td style="width:167px;">Round , Size 3/0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Toothpick</td>
			<td style="width:163px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Acrylic paint (blue/white)</td>
			<td style="width:163px;">Blick Art Material</td>
			<td style="width:119px;">01637-5172/01637-1022</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dry active yeast</td>
			<td style="width:163px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">YSC2-500G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Srew cap tube</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">10011-394&#160;</td>
			<td style="width:167px;">15 mm diameter, 10 mm height</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22363212</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tape</td>
			<td style="width:163px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Plastic slices</td>
			<td style="width:163px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">70329-40</td>
			<td style="width:167px;">22 x 40 x 0.25 mm Thickness</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light source (bulb)</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">500003-418</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Timer</td>
			<td style="width:163px;">VWR International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">62344-641</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Incubator</td>
			<td style="width:163px;">Percival</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Directly contact the constructor for more informations.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Carbon Dioxide Dry (CO2)</td>
			<td style="width:163px;">Medical-Technical Gases, Inc</td>
			<td style="width:119px;">14H31</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Binocular</td>
			<td style="width:163px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ-745</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Camera (SONY Handycam&#160; HDR-CX330)</td>
			<td style="width:163px;">B&#38;H</td>
			<td style="width:119px;">SOHDRCX330B</td>
			<td style="width:167px;">Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Computer</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">With a minimum of 1.4 Ghz Processor, running Microsoft Windows or Machintosh HD</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">ClipWrap</td>
			<td style="width:163px;">Download online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any importing software can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QuickTime Player</td>
			<td style="width:163px;">Download online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any reading software can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GraphPad Software</td>
			<td style="width:163px;">Online</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Any statistical software can be used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new approach that eliminates handling for studying aggression and the "loser" effect in drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster saldırgan davranış basmakalıp davranış kalıplarının sıralı ifade oluşmaktadır (analiz için bkz 1). Bu kompleks davranış, genetik, hormonal ve çevresel faktörlerden etkilenir. Birçok organizma olduğu gibi, daha önceki savaş deneyimi sinek mücadele stratejisi ve sonraki yarışmaların sonucunu etkiler: kavga kaybetme olasılığı öğrenme ve hafıza 2-4 dahil &quot;kaybeden&quot; etkileri açığa sonraki yarışmalar kaybetme olasılığını artırır. Saldırganlık gibi karmaşık sosyal davranışların ifadesini eşlik öğrenme ve bellek, hayvanların 5,6 işlenmesini test öncesi duyarlıdır. Birçok deneysel prosedürler ancak saldırganlık 7-9, sineklerin işleme şu anda kullanılabilir dışlayan hiçbir rutin olarak kullanılan protokol incelemek için farklı laboratuvarlarda kullanılmaktadır. Burada, biz Instea kullanarak, sineklerin taşıma ortadan kaldırır yeni davranış cihazı raporud doğuştan olumsuz geotactic yanıtlar içine veya mücadele odaları dışında hayvanları taşımak için. Bu protokol, bir gıda fincan içeren küçük dairesel mücadele arenalarda önce sineklerin tanıtımına çıkartılabilir plastik kaydırıcı tarafından iki eşit parçaya bölünür. Sinekler odası kapı ve geotaxis sürgülü yoluyla ev izolasyon flakonlarından odacıkları girin. Plastik sürgü çıkarılması üzerine, sinekler etkileşime ücretsizdir. Belirtilen süreler sonra, sineklerin sonraki deneyler için sürgü tarafından tekrar ayrılır. Tüm bu bireysel sinekler ele olmadan kolayca yapılır. Bu cihaz saldırganlık ve sinek kavgalarına &quot;kaybeden&quot; etkilerin oluşumu da dahil olmak üzere ilgili öğrenme ve hafıza, çalışmak için yeni bir yaklaşım sunuyor. Buna ek olarak, bu yeni genel amaçlı davranış cihazı sinekler, diğer sosyal davranışlarının incelemek için kullanılabilir ve, genel olarak, temel bir davranışsal sürece deneyimi ile ilgili değişikliklerin araştırılması için ilgili olmalıdır.

Bu bölüm davranışsal odasının tasarımı ve saldırganlığı ve &quot;kaybeden&quot; etkisi oluşumunu ölçmek yukarıda açıklanan protokol aşağıdaki davranışsal deneyler tipik bir dizi analizini sunmaktadır. Ayrıca, bu aygıt kullanılarak ölçülebilir diğer davranışları örnekleridir resimli. Şekil 6, yeni bir tertibatın şematik bir temsilini göstermektedir. Cihaz üç silindirik kuyu oluşmaktadır (boyutun: 22.86 mm çapında, 17 mm yükseklik)...

Watch this Scientific Journal Video about A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster at JoVE.com

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the &quot;Loser&quot; Effect in Drosophila melanogaster

Meyve sırasında davranış kalıpları dinamikleri mücadele, gözlenen ve ilişkili öğrenme ve bellek deneysel koşullar etkilenmiştir, kavgalar sinek. Burada sunulan protokol tamamen deneyler sırasında sinekler işlenmesini ortadan kaldıran yeni bir yordam açıklanır. Bu mücadele dinamikleri geliştirir ve güçlü &quot;kaybeden&quot; etkilerinin oluşumunu verir.

Saldırganlık incelenmesi için Handling ortadan kaldırır Yeni Bir Yaklaşım ve &quot;Loser&quot; Etkisi içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

a-new-approach-that-eliminates-handling-for-studying-aggression-loser

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

9.5K Görüntüleme.  Harvard Medical School.  Meyve sırasında davranış kalıpları dinamikleri mücadele, gözlenen ve ilişkili öğrenme ve bellek deneysel koşullar etkilenmiştir, kavgalar sinek. Burada sunulan protokol tamamen deneyler sırasında sinekler işlenmesini ortadan kaldıran yeni bir yordam açıklanır. Bu mücadele dinamikleri geliştirir ve güçlü "kaybeden" etkilerinin oluşumunu verir. 

Video: A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Nörobilim

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We developed a novel nanoinjection/electrophysiology assay that allows the detection of bioactive modulatory effects of compounds on the function of a neuronal circuit that mediates the escape response in Drosophila melanogaster3,4. Our in vivo assay, which uses the Drosophila Giant Fiber System (GFS, Figure 1) allows screening of different types of compounds, such as small molecules or peptides, and requires only minimal quantities to elicit an effect. In addition, the Drosophila GFS offers a large variety of potential molecular targets on neurons or muscles. The Giant Fibers (GFs) synapse electrically (Gap Junctions) as well as chemically (cholinergic) onto a Peripheral Synapsing Interneuron (PSI) and the Tergo Trochanteral Muscle neuron (TTMn)5. The PSI to DLMn (Dorsal Longitudinal Muscle neuron) connection is dependent on D&alpha;7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs)6. Finally, the neuromuscular junctions (NMJ) of the TTMn and the DLMn with the jump (TTM) and flight muscles (DLM) are glutamatergic7-12. Here, we demonstrate how to inject nanoliter quantities of a compound, while obtaining electrophysiological intracellular recordings from the Giant Fiber System13 and how to monitor the effects of the compound on the function of this circuit. We show specificity of the assay with methyllycaconitine citrate (MLA), a nAChR antagonist, which disrupts the PSI to DLMn connection but not the GF to TTMn connection or the function of the NMJ at the jump or flight muscles.
Before beginning this video it is critical that you carefully watch and become familiar with the JoVE video titled "Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster " from Augustin et al7, as the video presented here is intended as an expansion to this existing technique. Here we use the electrophysiological recordings method and focus in detail only on the addition of the paired nanoinjections and monitoring technique.

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

A rapid in vivo assay to test for neuromodulatory compounds using the Giant Fiber System (GFS) of Drosophila melanogaster is described. Nanoinjections in the head of the animal along with electrophysiological recordings of the GFS can reveal bioactivity of compounds on neurons or muscles.

Kullanarak Bileşiklerin Biyoaktivite için eşli Nanoinjection ve Ekran için Elektrofizyoloji Testi Drosophila melanogaster Dev Elyaf Sistemi

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other insects proprioception is provided by specialized sensory organs termed chordotonal organs (ChOs) 2. Like many other organs in Drosophila, ChOs develop twice during the life cycle of the fly. First, the larval ChOs develop during embryogenesis. Then, the adult ChOs start to develop in the larval imaginal discs and continue to differentiate during metamorphosis.
The development of larval ChOs during embryogenesis has been studied extensively 10,11,13,15,16. The centerpiece of each ChO is a sensory unit composed of a neuron and a scolopale cell. The sensory unit is stretched between two types of accessory cells that attach to the cuticle via specialized epidermal attachment cells 1,9,14. When a fly larva moves, the relative displacement of the epidermal attachment cells leads to stretching of the sensory unit and consequent opening of specific transient receptor potential vanilloid (TRPV) channels at the outer segment of the dendrite 8,12. The elicited signal is then transferred to the locomotor central pattern generator circuit in the central nervous system.
Multiple ChOs have been described in the adult fly 7. These are located near the joints of the adult fly appendages (legs, wings and halters) and in the thorax and abdomen. In addition, several hundreds of ChOs collectively form the Johnston's organ in the adult antenna that transduce acoustic to mechanical energy 3,5,17,4.
In contrast to the extensive knowledge about the development of ChOs in embryonic stages, very little is known about the morphology of these organs during larval stages. Moreover, with the exception of femoral ChOs 18 and Johnston's organ, our knowledge about the development and structure of ChOs in the adult fly is very fragmentary.
Here we describe a method for staining and visualizing ChOs in third instar larvae and pupae. This method can be applied together with genetic tools to better characterize the morphology and understand the development of the various ChOs in the fly.

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

A method to immunostain and visualize chordotonal organs in larvae and pupae of Drosophila melanogaster is described.

Içinde proprioseptörlere Görselleştirmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva ve Pupa

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Sosyal Space Etkileyen Koşullar<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Drosophila melanogaster</emKullanma&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...