Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA Marco Pisapia (Web Birimi) tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Tuzlu su / Acı su - Biz Emilia-Romagna Çevre Koruma, Ferrara Şubesi, Biyolojik Yöntemler Grup Bölgesel Ajansı teşekkür etmek istiyorumRossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü);; Fabio Matassa ve Londra Su Kalitesi ve Luciana Migliore, onların işbirliği için Tor Vergata Üniversitesi (Roma) üzerine UNICHIM Komisyonu Su ve Sediment kendi dil desteği için Roma&#39;da Yabancı Diller Yüksekokulu.

1. Yöntem Standart Bizim test organizmaların% 50 ölüm (LC 50) 14 gün boyunca maruz neden olacak konsantrasyonu veya seyreltme düzeylerini belirlemek amacıyla madde konsantrasyonları bir aralık veya bir test örneği için Artemia larvaları teşhir ve belirlenen şartlar içerir Bu yöntem. Gerekli ve mümkün olursa, şu da tespit edilebilir: a) maruz kalan organizmaların% 20 (LC 20) ölümüne sebep konsantrasyon seviyesi, b) daha yüksek bir ölüm oranı belirlemek değil, en yüksek analiz konsantrasyon seviyesi Negatif kontrol (NOEC); 14 gün, negatif kontrol (LOEC) daha yüksek bir ölüm oranı sonra, belirler düşük seviyede test edilen konsantrasyon. 2. Test Malzeme 2.1 Artemia yumurtaları Testi gerçekleştirmek için, Artemia Franciscana </emEski az 48 saat&gt; larvaları (nauplii) yeni yumurtadan yumurta 5 elde, evre II ve III de gereklidir. Test desteklemek için kullanılan Sertifikalı yumurta veya kistler, Kalite Güvence Araştırma Bölümü, ABD Çevre Koruma Ajansı, Cincinnati, OH 45268, USA veya Su Kirliliğinin Biyolojik Araştırmalar, Ghent Üniversitesi, Belçika Laboratuvar örneğin ticari olarak kullanılabilir. 2.2 Su seyreltme Sentetik tuzlu kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesiyle hazırlanmıştır, seyreltme suyu olarak kullanılabilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Bu, 35 (± 2) eşit olan bir tuz ile seyreltme su tavsiye edilir PSU yanı sıra doymuş değerin% 80&#39;den fazla bir çözünen oksijen konsantrasyonuna ve 25 arasında bir sıcaklıkta (± 2) vedeg C. 48 saat ve en azından 0.45 mikron bir gözenek ile filtre filtrelenmesi için havalandırma sonra, seyreltme 0-4 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta karanlıkta 30 gün arasında bir maksimum saklanabilir 2.3 Alg kültürü 2.0x10 6 hücre / ml - Bu test organizmaları katlanarak artacak ve 1.3x10 6 yoğunlukları ulaşmak Dunaliella tertiolecta mikroalg, yem, olduğunu önerilir. Çevresel numuneler üzerinde test 2.0x10 6 hücre / ml 6 daha yüksek yoğunluklarda kültür gerektirir. Bu Dunaliella tertiolecta deniz suyu içeren bir kültür ortamında yetişen ileri sürülmektedir (30 (± 2) PSU ve 20 (± 1) ° C) temel besin, mineral ve vitamin ilavesi ile. Alg medya oluşumu ve hazırlık ilişkin bazı göstergeler Ek bildirilmektedir. İlk hücre yoğunluğu yaklaşık 10 5 hücre / ml olması tavsiye edilir. Alg kültür saklanır20 oda termostatı (± 1) ° C, karanlığın 8 saat ışık 16 saatlik bir periyodu oranı ile floresan lambalar 3000 (± 300) lx ile aydınlatılmıştır. Diğer fitoplankton türlerinin de beslenme için kullanılan olabilir ama Dunaliella tertiolecta için &quot;eşdeğer&quot; türler bulmak için bu fitoplankton türleri ile karşılaştırmalı çalışmalar yapmak için gerekli olacaktır, çünkü deneysel koşullar (örn. başlangıç ​​hücresi yoğunlukları, ışık aydınlatma, sıcaklık, bileşimi kültür ortamı ve maruz kalma süresi) fitoplankton türleri arasında değişir. Farklı kirleticiler için microalglerin tolerans düşünülmesi gereken yanı sıra, çünkü aynı zamanda Artemia için fitoplankton etki büyüme ve gelişme üzerindeki kirletici etkileri. 2.4 Referans madde Bu testte referans madde sodyum dodesil sülfat olduğunu. 2.5 Laboratuar cam <ol><li> 100 ml borosilikat cam bardak (18 çözümler aktarılması için test ve 18 gerçekleştirmek için) dahil test kaplar. </li><li> Standart çözelti hazırlamak için bir şişesi (örneğin 500 ml bir şişede). </li><li> Test çözümleri hazırlamak için altı matara (örneğin 200 ml şişeler). </li><li> Çıkarılabilir ile cam veya polistiren 5 cm çapında Petri kutularına kistler aktive ve test kaplara kuluçka çanağına Artemia aktarılması için kullanılmak üzere kapsar. </li><li> Nauplii aktarmak için Cam Pasteur pipetler (alev yuvarlak uçları ile). </li><li> Cam kanüller ve Artemia aktarmak için Pasteur 3 ml tek kullanımlık plastik pipetler (kesilecek). </li><li> Mikropipetler ve dereceli pipetler test çözümleri hazırlamak. </li><li> T matara gelen test çözümleri aktarmak için Altı dereceli silindir (örneğin 50 ml silindirler)O konteyner test. </li></ol> 3. Kist Etkinleştirme 3.1. Kistleri içeren Petri + su dökerek Test organizmalar üretmek için, kistler, 20 mg 48 saat testten önce seyreltme suyun 12 ml içeren bir Petri tabağına yerleştirilir. 3.2. Işık ve karanlık Kuluçka Petri (± 2) 25 tutulur ° C ve 4000 (± 1000) lüks (metre kare başına lümen) bir saat boyunca ışık şiddeti az. 3.3. Mikroskobu kullanılarak orta değiştirilmesi 24 saat sonra, kuluçka larva yapay su ile doldurulur, yeni bir Petri tabağı içine aktarılır. Transferi kuluçkalık, phototropic larvaları ışık demeti doğru göç böylece yani bir ışık kaynağı kullanarak, mikroskop kullanılarak yapılır. Bir cam Pasteur pipeti sadece olgunlaşmamış larvaların ar sağlanması, transferi yapmak için kullanılıre membranlar hala kist ya da larva transfer değil. 3.4. Karanlıkta Kuluçka Larvalar içeren çanağı 25 C&#39;de 24 saat karanlık termostatik haznesi yerleştirilir (± 2) ° C. 4. Test Çözümleri hazırlanması 4.1. Madde Tartı + şişesi transfer Bu test madde için standart çözelti bir 500 ml&#39;lik şişe içinde madde 0.5 g çözülmesi ile hazırlanır tavsiye edilir. Şişeye de-iyonize edilmiş su veya distile su ile doldurulur ve test madde tamamen eriyene kadar çözelti karıştırılır. Çözümlerin bu maddenin çözelti içinde stabil olup olmadığı bilinmemektedir sürece, kullanım sırasında hazırlanması gerekmektedir. Bu durumda, standart bir test çözeltisi iki gün önce kadar hazırlanabilir. 4.2. Seyreltme suyu ve yosun wi ekleyerek, negatif kontrol hazırlanması10 ml pipetle th Negatif kontrol 10 5 hücre / ml &#39;lik bir yoğunluğa elde edilir, böylece su ile seyreltme alg süspansiyonu bir alikot eklenerek bir şişesi (örneğin 200 ml hacim) içinde hazırlanır. 4.3. Test çözümleri Hazırlanması: seyreltme suyu, yosun ve standart çözüm ekleyerek Bu test çözümleri testleri için istenilen konsantrasyonu elde edilir, böylece belirtilen miktarlarda su ile seyreltme, standart çözeltisinin eklenmesi ile beş 200 ml&#39;lik şişeler içerisinde hazırlanır ileri sürülmektedir. Organizmaların beslemek için bir Dunaliella tertiolecta mikroalg süspansiyon alikotları kullanılır ve test çözümleri hazırlanır olduğunda 10 5 hücre / ml bir yoğunluğa ulaşmak için ilave edilebilir. Ek aşağıdaki sırayla önerilir: seyreltme suyu, alg süspansiyon ve standart çözüm. Test çözeltilerinin hazırlanması sonra, kısa sürede ölçüm içinde kullanılabilir olması gerekir. 4.4. Sonra Petri kutuları için, şişesi test kapları çözümler aktarma Test çözümleri eşit miktarlarda (50 ml) oldu silindir kullanılarak test kaplar içine tanıtılır. Her bir konsantrasyonu için üç kopyaları yapılır. Testler, her seri için, bir kontrol testi kabın çözeltilerinin hacmine eşit bir seyreltme bir miktar su ile hazırlanır. Test solüsyonları eşit hacimleri (12 ml) Petri kutularına sisteme dahil edilir. Testler, her seri için, bir kontrol Petri tabağı kullanılır. 5.. Test için hazırlık 5.1. II-III aşamasında nauplii Kist aktif hale kırk sekiz saat, nauplii II-III larva ulaşmak ve test için daha sonra kullanabiliyorsunuz. 5.2. Mikroskop kullanılarak Petri içine nauplii transferi Kist için kullanılan petri<html> aktivasyon termostatik odasının dışına alınır. Larva küçük bir miktar kontrol ve test çözümleri içeren Petri aktarılır. Bu görev organizmaların zarar kalmamak için yeterince geniş çaplı bir pipet kullanılarak mikroskop ile gerçekleştirilen olmaktır. Test Bu aşamada, transferi bir cam Pasteur pipeti (alev yuvarlak uçlu) ve agrega için Artemia teşvik eden bir yanal olarak yerleştirilmiş ışık kaynağı ile yapılabilir. 5.3. Mikroskop ile test kaplara Petri gelen nauplii transferi On larvaları test kaplara test çözümleri Petri kutularına aktarılır. Ayrıca, bu işlem Pasteur pipet ve mikroskop kullanılarak yapılmalıdır. Bu, 1 mL aşmayan bir hacim test sisteminin genel hacmi etkilemediği larvaların geçiş sırasında transfer edilmesi tavsiye edilir. e_step &quot;&gt; 5.4. Tam konteyner parafilm kaplı Test bardak parafilm (hava geçişi için bir boşluk bırakarak) ile kaplı, ve 25 bir sıcaklık (± 2) ° C testi tüm süresi ve 900 (± 100) lx bir aydınlatma bir periyodu ile de korunur karanlığın 10 saat ışık 14 saat arasındaki orandır. 6. Orta ve Gıda Takviyesi Değiştirilmesi 6.1. Yaşama oranı kontrolü Test başladıktan iki gün sonra, ve daha sonra 5, 7, 9 ve 12 gün sonra, Artemia hayatta kalma oranı doğrulamak için ve orta ve gıda ek yerine mikroskop altında görülmektedir. Canlı organizmaların sayısı her test konteyner sayılır. Mikroskop altında gözlem ve hafif mekanik stimülasyonu (örneğin bir cam Pasteur pipeti ile larva dokunmadan) yaklaşık 10 s için bazı hareket görünmüyor organizmalar sonrasaniye basılı tutun ölü düşünülmelidir. 6.2. Mikropipet ile test edilecek maddenin bir 10 ml pipet ve örnekleme ile yosun örnekleme gösteren bir test solüsyonu hazırlanması. Şişesi test kapları çözümler aktarma Test sırasında, test çözümleri periyodik olarak değiştirilmesi ve bunlar kullanılacaksa aynı gün içinde hazır olmalıdır. Test solüsyonları, önceden hazırlanmış standart bir çözüm yapılır. Üç yeni konteyner eski testi kapları 6.3. Artemia transferi, bir kesim Pasteur pipeti kullanarak, Artemia&#39;nın transferi şekilde organizmalar zarar vermemek için yeterince geniş bir çapa sahip bir pipet kullanılarak gerçekleştirilir. Bu faz esnasında, bir 3 ml plastik Pasteur pipetle (kesilecek) kullanılabilir. 6.4. Ya canlı ya da ölü Artemia içeren bir cam kapta Larva 1 sonra<html> Test sonunda maruz kalma 4 gün, larvaların hayatta kalma sayısı sayılır ve çalışma kaydedilir. LC 50 ve / veya LC 20, NOEC ve 14. günlerde LOEC, hesaplanır ve kaydedilir, yanı sıra güven aralığı% 95, uygun ve hesaplama yöntemleri de. 7. Temsilcisi Sonuçlar Testi (14 gün) sonunda, aşağıdaki formüle göre, her bir konsantrasyonda ölüm yüzdesi hesaplanır: (M s / N) * 100 Nerede: M s analiz örnek ölen kişilerin ortalama sayısı N maruz kalan bireylerin toplam sayısı Tablo 1 Sodyum dodesil sülfat maruz Artemia ile bir test (14d) veri bir örnektir. <table border="1"><tbody><tr><td> Konsantrasyonlar (mg / l) </td>&quot;Her çoğaltma ölen bireylerin&gt; Numara </td><td> Mortalite (%) </td></tr><tr><td></td><td> Ben </td><td> II </td><td> III </td><td></td></tr><tr><td> Negatif kontrol </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 1 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 1.56 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 3.12 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 13 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 3 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 27 </td></tr><tr><td> 12.5 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 90 </td></tr><tr><td> 25.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 50.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Dahası, belirlemekGrafiksel bir Gauss logaritmik arsa veya uygun istatistiksel yöntemler (örneğin Spearman-Karber veya Probit Yöntemi için) kullanılarak LC 50 değeri. Tablo 1 ve veriler için LC 50 hesaplanması 8,18 (7,15-9,37) mg / l&#39;dir. Maksimum konsantrasyon% 50 daha düşük bir ölüm oranı neden Sınanan varsa, o güvenilmez, hatta olmayan hesaplanabilir olurdu LC 50 değeri hesaplamasına devam etmemelisiniz. Bu durumda, bununla birlikte, test edilen konsantrasyon aralığı genişleterek testi tekrarlamak üzere uygun olacaktır. Alternatif olarak, LC 50 değeri daha doğru bir olasılıkla test edilen en yüksek konsantrasyonda ölüm oranı ve bir etkisi yoktur karşılık gelen yüksek konsantrasyon gösteren, test edilen en yüksek konsantrasyonda daha büyük olarak ifade edilir. Aşağıdaki test koşulları sonunda yerine getirildiği takdirde Sonuçlar geçerli kabul edilir: <ol class="lalpha"><li> kontrolü ortalama mortalite oranı≤% 20; </li><li> 14 gün için sodyum dodesil sülfat, LC 50 kullanılarak 8.0 (± 5) mg / l aralığında yer alır burada. </li></ol> Yukarıdaki şartlar yerine getirilmiş değil, organizmaların aynı parti ile elde edilen tüm veriler geçersiz kabul ve test tekrarlanmalıdır.

<ol>
	<li>Togulga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Short-Term+Toxicity+of+Two+Toxicants+to+Artemia+Nauplii.">The Short-Term Toxicity of Two Toxicants to Artemia Nauplii.</a> Tr. J. of Zoology. 22, 259-266 (1998).</li><li>Persoone, G., Wells, P. G., Sorgeloos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artemia+in+aquatic+toxicology:+a+review.">Artemia in aquatic toxicology: a review.</a> Artemia Research and its Applications. Morphology, Genetics, Strain characterization Toxicology. , 259-275 (1987).</li><li>Nunes, B. S., Carvalho, F. D., Guilhermino, L. M., Stappen, G. V. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+genus+Artemia+in+ecotoxicity+testing.">Use of the genus Artemia in ecotoxicity testing.</a> Envir. Poll. 144, 453-462 (2006).</li><li>APAT IRSA-CNR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Metodi analitici per le acque Manuali e Linee guida 29/2003. Terzo Metodo, 8060 (2003).</li><li>Sorgellos, P., Wielen, C. R. e. m. i. c. h. e. -. V. a. n. D. e. r., Persoone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+Artemia+nauplii+for+toxicity+tests+â€“+a+critical+analysis.">The use of Artemia nauplii for toxicity tests â€“ a critical analysis.</a> Ecotox. Env. Saf. 2, 249-255 (1978).</li><li>Savorelli, F., Palazzi, D., Gorbi, G., Invidia, M., Sei, S., Magaletti, E., Manfra, L., Gelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Set+up+of+a+standard+methodology+for+14-day+bioassay+on+Artemia+franciscana+and+A.+parthenogenetica.">Set up of a standard methodology for 14-day bioassay on Artemia franciscana and A. parthenogenetica.</a> Biol. Amb. 21, 27-36 (2007).</li><li>Brix, K. V., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+toxicity+of+arsenic+to+the+Great+Salt+Lake+brine+shrimp,+Artemia+franciscana.">Chronic toxicity of arsenic to the Great Salt Lake brine shrimp, Artemia franciscana.</a> Ecotox. Environ. Saf. 54, 169-175 (2003).</li><li>Brix, K. V., Deforest, D. K., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+a+chronic+site-specific+water+quality+standard+for+selenium+in+the+Great+Salt+Lake,+Utah,+USA.">Derivation of a chronic site-specific water quality standard for selenium in the Great Salt Lake, Utah, USA.</a> Environ. Toxicol. Chem. 23, 606-612 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualit&#225;+dell'acqua+-+Determinazione+della+tossicit&#225;+letale+a+14+giorni+con+Artemia+franciscana+(Crustacea:+Anostraca).">Qualit&#225; dell'acqua - Determinazione della tossicit&#225; letale a 14 giorni con Artemia franciscana (Crustacea: Anostraca).</a> Commissione UNICHIM "Qualit&#225; dell'acqua" Gruppo di Lavoro "Metodi Biologici" Sottogruppo "Acque salate/salmastre e sedimenti". , (2010).</li><li>Varo, I., Navarro, J. C., Amat, F., Guilhermino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+cholinesterases+and+evaluation+of+the+inhibitory+potential+of+chlorpyrifos+and+dichlorvos+to+Artemia+salina+and+Artemia+parthenogenetica.">Characterisation of cholinesterases and evaluation of the inhibitory potential of chlorpyrifos and dichlorvos to Artemia salina and Artemia parthenogenetica.</a> Chem. 48, 563-569 (2002).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Artemia bize Toksikoloji ve Ekotoksikoloji içinde Artemia kullanımı ile ilgili çeşitli seçenekler sürdürmek mümkün olduğunu ifade sağlar şimdiye kadar yapılan ecotoxıcıty test ve araştırma için mevcut en değerli test organizmaları biridir. Biyoanalizlerin için uygun bir tür olarak bu organizmanın açmak özellikleri şunlardır: Geniş bir coğrafi dağılımı, olumsuz çevre koşulları ve çeşitli besin maddeleri, nispeten basit laboratuvar kültür ve bakım, manipülasyona...

Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA (Bilimsel Danışma ve Dokümantasyon Hizmetleri) Marco Pisapia tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Biz, Emilia-Romagna Çevre Koruma Bölge Ajansı teşekkür Ferrara Şubesi ve Biolog istiyorumical Yöntemleri Grubu - Tuzlu / Kuyu Suyu ve onların işbirliği için Su Kalitesi Üzerine UNICHIM Komisyonu Tortu; Rossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü) ve Roma&#39;da Diller London School of kendi dil desteği. <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Ürün numarası </td></tr><tr><td> Sodyum dodesil sülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L4390 </td></tr></tbody></table> Ek Alg medya analitik kalite reaktifler kullanılarak hazırlanmalıdır. Besin solüsyonu bir litre NaNO 3, damıtılmış su içinde NH4CI ile KH 2 PO 4 ve 20 g, 30 g, 300 g çözülerek hazırlanır. Dört başlangıç ​​çözümleri (A, B, C, DMineral) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre &quot;A&quot; CuSO 4 ZnSO 4 H2O, 25 g 5 H2O, COSO 4 7 H2O ile 30 g saf su içinde MnSO 4 H2O ile 20 g, 30 g ihtiva eden; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde FeCl 3 • 6 H2O ile 50 g içeren &quot;B&quot;; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde 2 Na Moo 4 • 2 H2O ile 25 g içeren &quot;C&quot;; </li><li> Çözeltisi distile su içinde 50 g di Na 2 EDTA • 2 H 2 O içeren &quot;D&quot; Bir litre. </li></ul> Minerallerin (solüsyonu &quot;E&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile yukarıda bahsedilen çözeltilerinin alikotları ekleyerek elde edilir. Ayrıca, aşağıdaki için tavsiye edilir: solüsyonu &quot;D&quot;, 100 ml, çözelti 10 ml &quot;C&quot;, çözelti &quot;B&quot; ve 10 ml ve 10 ml çözelti, &quot;A&quot;. Üç inisiyatifvitaminler l çözeltileri (F, G, H) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde biotin 100 mg içeren &quot;F&quot;; </li><li> ; Distile su içinde tiamin 10 g içeren çözelti &quot;G&quot; nin bir litre </li><li> Çözeltisi distile su içinde kobalamin 100 mg içeren &quot;H&quot; bir litre. </li></ul> Vitaminler (solüsyonu &quot;I&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile üç başlangıç ​​çözeltilerinin 10 ml ekleyerek elde edilir. Alg bir ortam litrelik besin solüsyonu, mineral nihai çözelti (solüsyonu &quot;E&quot;) ve deniz suyu vitamin nihai çözelti (solüsyonu &quot;I&quot;) ve 1 ml 1 ml 1 ml çözülmesiyle hazırlanmıştır. Bu ikinci kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesi ile elde edilebilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Ülkemizde yapılan bir30 tuzluluk (± 2) PSU ve 20 sıcaklık (± 1) ° C ile deniz suyu kullanarak ded

long-term lethal toxicity test with the crustacean artemia franciscana

Bizim araştırma faaliyetleri tuzlu / acı su ve tortu özel referans ile, çevre kalitesinin değerlendirilmesi için biyolojik yöntemlerin kullanılmasını hedefliyoruz. Biyolojik göstergelerin seçimi standart prosedürlerin kullanılabilirliği, muhtemelen, güvenilir bilimsel bilgiye dayalı ve olmalıdır. Bu yazıda, kimyasal ve / veya deniz çevresel matrislerin toksisitesini değerlendirmek için deniz kabuklu Artemia kullanılan standart bir protokol mevcut. Bilim adamları, tuzlu su karidesi (artemia) dünya çapında kullanım için standart biyoassay gelişimi için uygun bir aday olduğunu öneriyorum. Kağıtları bir dizi tuzlu su karidesi (artemia) çeşitli kimyasallar ve toksik maddelerin toksik etkileri üzerine yayınlanmıştır. Toksisite çalışmaları için bu canlıya en büyük avantajı, kuru kistler genel durumu ise; bu hemen test kullanılabilir ve zor ekimi talep edilmez <sup&gt; 1,2. Kist tabanlı toksisite testlerinin ucuz, kesintisiz, kolay ve güvenilir ve endüstriyel kontrol gereksinimleri için veya düzenleyici amaçlarla 3, böylece toksisite tarama rutin ihtiyaçlarına önemli bir cevaptır. Önerilen yöntem, bir nokta olarak ölüm içerir. Hayatta kalanların numaraları sayıldı ve ölüm oranı hesaplandı. Gözlem 4 birkaç saniye içinde herhangi bir iç veya dış hareket sergilemek vermedi Larva ölü kabul edildi. Bu işlem bir referans madde (Sodyum dodesil sülfat) standart test idi; bazı sonuçlar bu çalışmada rapor edilmiştir. Bu makale, protokole ilgili tüm adımları gösteren, usul toksisite test performansını açıklayan bir video eşlik eder.

Watch this Scientific Journal Video about Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana at JoVE.com

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile ilgilidir<em&gt; Artemia Franciscana</em&gt;.

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

long-term-lethal-toxicity-test-with-the-crustacean-artemia-franciscana

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

19.4K Görüntüleme.  Institute for Environmental Protection and Research. Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile ilgilidir Artemia Franciscana.

Video: Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Geniş Alan Mikroskop kullanarak Uzun vadeli Görüntüleme Memeli Hücreleri

Biyoloji

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later distally, is a major factor in patient prognosis. Experimental systems of breast cancer rely on cell lines usually derived from primary tumours or pleural effusions. Two major obstacles hinder this research: (i) some known sub-types of breast cancers (notably poor prognosis luminal B tumours) are not represented within current line collections; (ii) the influence of the tumour microenvironment is not usually taken into account.
We demonstrate a technique to culture primary breast cancer specimens of all sub-types. This is achieved by using three-dimensional (3D) culture system in which small pieces of tumour are embedded in soft rat collagen I cushions. Within 2-3 weeks, the tumour cells spread into the collagen and form various structures similar to those observed in human tumours1. Viable adipocytes, epithelial cells and fibroblasts within the original core were evident on histology. Malignant epithelial cells with squamoid morphology were demonstrated invading into the surrounding collagen. Nuclear pleomorphism was evident within these cells, along with mitotic figures and apoptotic bodies.
We have employed Optical Projection Tomography (OPT), a 3D imaging technology, in order to quantify the extent of tumour spread in culture. We have used OPT to measure the bulk volume of the tumour culture, a parameter routinely measured during the neo-adjuvant treatment of breast cancer patients to assess response to drug therapy. 
Here, we present an opportunity to culture human breast tumours without sub-type bias and quantify the spread of those ex vivo. This method could be used in the future to quantify drug sensitivity in original tumour. This may provide a more predictive model than currently used cell lines.

We have developed a collagen-based in vitro assay which promotes proliferation and invasion from samples of all breast cancer subtypes. Optical Projection Tomography, a three dimensional microscopy technique was utilised to visualise and quantify tumour expansion. This assay may be used to quantify drug response of individual tumour samples.

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue patterning. During animal development, key cell proliferation and patterning events occur very quickly. For instance, in Caenorhabditis elegans all cell divisions required for the larval body plan are completed within six hours after fertilization, with seven mitotic cycles1; the sixteen or more mitoses of Drosophila embryogenesis occur in less than 24 hr2. In contrast, cell divisions during plant development are slow, typically on the order of a day 3,4,5 . This imposes a unique challenge and a need for long-term live imaging for documenting dynamic behaviors of cell division and differentiation events during plant organogenesis. Arabidopsis epidermis is an excellent model system for investigating signaling, cell fate, and development in plants. In the cotyledon, this tissue consists of air- and water-resistant pavement cells interspersed with evenly distributed stomata, valves that open and close to control gas exchange and water loss. Proper spacing of these stomata is critical to their function, and their development follows a sequence of asymmetric division and cell differentiation steps to produce the organized epidermis (Fig. 1).
This protocol allows observation of cells and proteins in the epidermis over several days of development. This time frame enables precise documentation of stem-cell divisions and differentiation of epidermal cells, including stomata and epidermal pavement cells. Fluorescent proteins can be fused to proteins of interest to assess their dynamics during cell division and differentiation processes. This technique allows us to understand the localization of a novel protein, POLAR6, during the proliferation stage of stomatal-lineage cells in the Arabidopsis cotyledon epidermis, where it is expressed in cells preceding asymmetric division events and moves to a characteristic area of the cell cortex shortly before division occurs. Images can be registered and streamlined video easily produced using public domain software to visualize dynamic protein localization and cell types as they change over time.

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

We describe a protocol using chamber slides and media to immobilize plant cotyledons for confocal imaging of the epidermis over several days of development, documenting stomatal differentiation. Fluorophore-tagged proteins can be tracked dynamically by expression and subcellular localization, increasing understanding of their possible roles during cell division and cell-type differentiation.

Uzun süreli, yüksek çözünürlüklü Konfokal Time Lapse Görüntüleme<em&gt; Arabidopsis Kotiledon</emÇimlenme sırasında&gt; Epidermis

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...

Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is particularly suited for long-term time-lapse imaging over many hours up to several days. However, an appropriate sample mounting strategy is needed that offers both confinement and normal development of the sample. Multilayer mounting, a new embedding technique using low-concentration agarose in optically clear tubes, now overcomes this limitation and unleashes the full potential of light sheet microscopy for real-time developmental biology.

The development of zebrafish can be followed over days with light sheet microscopy when embryos are embedded in optically clear polymer tubes with low-concentration agarose.

Çok katmanlı Zebra balığı uzun vadeli Işık Sayfalık Mikroskopi için Montaj

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is ...

LarvaSPA, A Method for Mounting Drosophila Larva for Long-Term Time-Lapse Imaging

Live imaging is a valuable approach for investigating cell biology questions. The Drosophila larva is particularly suited for in vivo live imaging because the larval body wall and most internal organs are transparent. However, continuous live imaging of intact Drosophila larvae for longer than 30 min has been challenging because it is difficult to noninvasively immobilizeimmobilizing larvae for a long time. Here we present a larval mounting method called LarvaSPA that allows for continuous imaging of live Drosophila larvae with high temporal and spatial resolution for longer than 10 hours. This method involves partially attaching larvae to the coverslip using a UV-reactive glue and additionally restraining larval movement using a polydimethylsiloxane (PDMS) block. This method is compatible with larvae at developmental stages from second instar to wandering third instar. We demonstrate applications of this method in studying dynamic processes of Drosophila somatosensory neurons, including dendrite growth and injury-induced dendrite degeneration. This method can also be applied to study many other cellular processes that happen near the larval body wall.

LarvaSPA, A Method for Mounting Drosophila Larva for Long-Term Time-Lapse Imaging

This protocol describes a method for mounting Drosophila larvae to achieve longer than 10 h of uninterrupted time-lapse imaging in intact live animals. This method can be used to image many biological processes close to the larval body wall.

LarvaSPA, Uzun Süreli Hızlandırılmış Görüntüleme için Drosophila Larva Montajı Için Bir Yöntem

Live imaging is a valuable approach for investigating cell biology questions. The Drosophila larva is particularly suited for in vivo live imaging because ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. Adult mammalian CMs are terminally differentiated cells with minimal proliferative capacity. The post-mitotic state of adult CMs not only restricts cardiomyocyte cell cycle progression but also limits the efficient culture of CMs. Moreover, the long-term culture of adult CMs is necessary for many studies, such as CM proliferation and analysis of gene expression.
The mouse and the rat are the two most preferred laboratory animals to be used for cardiomyocyte isolation. While the long-term culture of rat CMs is possible, adult mouse CMs are susceptible to death and cannot be cultured more than five days under normal conditions. Therefore, there is a critical need to optimize the cell isolation and long-term culture protocol for adult murine CMs. With this modified protocol, it is possible to successfully isolate and culture both adult mouse and rat CMs for more than 20 days. Moreover, the siRNA transfection efficiency of isolated CM is significantly increased compared to previous reports. For adult mouse CM isolation, the Langendorff perfusion method is utilized with an optimal enzyme solution and sufficient time for complete extracellular matrix dissociation. In order to obtain pure ventricular CMs, both atria were dissected and discarded before proceeding with the disassociation and plating. Cells were dispersed on a laminin coated plate, which allowed for efficient and rapid attachment. CMs were allowed to settle for 4-6 h before siRNA transfection. Culture media was refreshed every 24 h for 20 days, and subsequently, CMs were fixed and stained for cardiac-specific markers such as Troponin and markers of cell cycle such as KI67.

Here, we present a protocol for the isolation, transfection, and long-term culture of adult mouse and rat cardiomyocytes.

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Application of Passive Head Motion to Generate Defined Accelerations at the Heads of Rodents

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular mechanisms behind the beneficial effects of exercise are poorly understood. Many physical workouts, particularly those classified as aerobic exercises such as jogging and walking, produce impulsive forces at the time of foot contact with the ground. Therefore, it was speculated that mechanical impact might be implicated in how exercise contributes to organismal homeostasis. For testing this hypothesis on the brain, a custom-designed ''passive head motion'' (hereafter referred to as PHM) system was developed that can generate vertical accelerations with controlled and defined magnitudes and modes and reproduce mechanical stimulation that might be applied to the heads of rodents during treadmill running at moderate velocities, a typical intervention to test the effects of exercise in animals. By using this system, it was demonstrated that PHM recapitulates the serotonin (5-hydroxytryptamine, hereafter referred to as 5-HT) receptor subtype 2A (5-HT2A) signaling in the prefrontal cortex (PFC) neurons of mice. This work provides detailed protocols for applying PHM and measuring its resultant mechanical accelerations at rodents' heads.

The present protocol describes a custom-designed ''passive head motion'' system, which reproduces mechanical accelerations at rodents' heads generated during their treadmill running at moderate velocities. It allows dissecting mechanical factors/elements from the beneficial effects of physical exercise.

Kemirgenlerin Kafalarında Tanımlanmış İvmelenmeler Oluşturmak için Pasif Kafa Hareketinin Uygulanması

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular ...

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants (Atta) in Laboratory Conditions

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled environments enables an enriched comprehension of their biology that can contribute to applied research. This practice is usually employed in population control studies of species that cause economic loss, such as Atta ants. To cultivate their mutualistic fungus, these leaf-cutting ants collect leaves and for this are considered agricultural pests widely distributed throughout the American continent. They are highly socially organized and inhabit elaborated underground nests composed of a variety of chambers. Their maintenance in a controlled environment depends on a daily routine of several procedures and frequent care that are described here. It starts with the collection of queens during the reproductive season (i.e., nuptial flight), which are then individually transferred to plastic containers. Due to the high mortality rate of queens, a second collection can be carried out about 6 months after the nuptial flight, when incipient nests with developed fungus wad are excavated, hand-picked, and placed in plastic containers. In the laboratory, leaves are daily provided to established colonies, and ant-produced waste is weekly removed along with remaining dry plant material. As the fungus garden keeps growing, colonies are transferred to different types of containers according to the experimental purpose. Leaf-cutting ant colonies are placed in interconnected containers, representing the organizational system with functional chambers built by those insects in nature. This setup is ideal to monitor factors such as waste amount, fungus garden health, and the behavior of workers and queen. Facilitated data collection and more detailed observations are considered the greatest advantage of keeping ant colonies in controlled conditions.

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants Atta in Laboratory Conditions

Here, a protocol is described to successfully collect and maintain healthy Atta (Hymenoptera: Formicidae) ant colonies in laboratory conditions. Additionally, different nest types and configurations are detailed together with possible experimental procedures.

Yaprak Kesici Karıncaların (Atta) Laboratuvar Koşullarında Toplanması ve Uzun Süreli Bakımı

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled ...

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid nematode growth media (NGM), allowing the efficient collection of population-level data for survival and other physiological phenotypes, and periodic sampling of subpopulations for fluorescent biomarker quantification. Limitations to this approach are the inability to (1) follow individual worms over time to develop age trajectories for phenotypes of interest and (2) monitor fluorescent biomarkers directly in the context of the culture environment. Alternative culture approaches use liquid culture or microfluidics to monitor individual animals over time, in some cases including fluorescence quantification, with the tradeoff that the culture environment is contextually distinct from solid NGM. The WorMotel is a previously described microfabricated multi-well device for culturing isolated worms on solid NGM. Each worm is maintained in a well containing solid NGM surrounded by a moat filled with copper sulfate, a contact repellent for C. elegans, allowing longitudinal monitoring of individual animals. We find copper sulfate insufficient to prevent worms from fleeing when subjected to aversive interventions common in aging research, including dietary restriction, pathogenic bacteria, and chemical agents that induce cellular stress. The multi-well devices are also molded from polydimethylsiloxane, which produces high background artifacts in fluorescence imaging. This protocol describes a new approach for culturing isolated roundworms on solid NGM using commercially available polystyrene microtrays, originally designed for human leukocyte antigen (HLA) typing, allowing the measurement of survival, physiological phenotypes, and fluorescence across the lifespan. A palmitic acid barrier prevents worms from fleeing, even in the presence of aversive conditions. Each plate can culture up to 96 animals and easily adapts to a variety of conditions, including dietary restriction, RNAi, and chemical additives, and is compatible with automated systems for collecting lifespan and activity data.

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Here, we present a protocol to culture isolated individual nematodes on solid media for lifelong physiological parameter tracking and fluorescence quantification. This culture system includes a palmitic acid barrier around single-worm wells to prevent animals from fleeing, allowing the use of aversive interventions, including pathogenic bacteria and chemical stressors.

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid ...

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, rapid reproduction cycle (~3 days), short lifespan (~3 weeks), and numerous available tools for genetic manipulation and molecular analysis. The most common approach for conducting aging studies in C. elegans, including survival analysis, involves culturing populations of tens to hundreds of animals together on solid nematode growth media (NGM) in Petri plates. While this approach gathers data on a population of animals, most protocols do not track individual animals over time. Presented here is an optimized protocol for the long-term culturing of individual animals on microfabricated polydimethylsiloxane (PDMS) devices called WorMotels. Each device allows up to 240 animals to be cultured in small wells containing NGM, with each well isolated by a copper sulfate-containing moat that prevents the animals from fleeing. Building on the original WorMotel description, this paper provides a detailed protocol for molding, preparing, and populating each device, with descriptions of common technical complications and advice for troubleshooting. Within this protocol are techniques for the consistent loading of small-volume NGM, the consistent drying of both the NGM and bacterial food, options for delivering pharmacological interventions, instructions for and practical limitations to reusing PDMS devices, and tips for minimizing desiccation, even in low-humidity environments. This technique allows the longitudinal monitoring of various physiological parameters, including stimulated activity, unstimulated activity, body size, movement geometry, healthspan, and survival, in an environment similar to the standard technique for group culture on solid media in Petri plates. This method is compatible with high-throughput data collection when used in conjunction with automated microscopy and analysis software. Finally, the limitations of this technique are discussed, as well as a comparison of this approach to a recently developed method that uses microtrays to culture isolated nematodes on solid media.

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Presented here is an optimized protocol for culturing isolated individual nematodes on solid media in microfabricated multi-well devices. This approach allows individual animals to be monitored throughout their lives for a variety of phenotypes related to aging and health, including activity, body size and shape, movement geometry, and survival.

Çok Kuyulu Cihazlarda Katı Ortamda İzole Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kültürü ve İzlenmesi

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, ...