Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA Marco Pisapia (Web Birimi) tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Tuzlu su / Acı su - Biz Emilia-Romagna Çevre Koruma, Ferrara Şubesi, Biyolojik Yöntemler Grup Bölgesel Ajansı teşekkür etmek istiyorumRossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü);; Fabio Matassa ve Londra Su Kalitesi ve Luciana Migliore, onların işbirliği için Tor Vergata Üniversitesi (Roma) üzerine UNICHIM Komisyonu Su ve Sediment kendi dil desteği için Roma&#39;da Yabancı Diller Yüksekokulu.

1. Yöntem Standart Bizim test organizmaların% 50 ölüm (LC 50) 14 gün boyunca maruz neden olacak konsantrasyonu veya seyreltme düzeylerini belirlemek amacıyla madde konsantrasyonları bir aralık veya bir test örneği için Artemia larvaları teşhir ve belirlenen şartlar içerir Bu yöntem. Gerekli ve mümkün olursa, şu da tespit edilebilir: a) maruz kalan organizmaların% 20 (LC 20) ölümüne sebep konsantrasyon seviyesi, b) daha yüksek bir ölüm oranı belirlemek değil, en yüksek analiz konsantrasyon seviyesi Negatif kontrol (NOEC); 14 gün, negatif kontrol (LOEC) daha yüksek bir ölüm oranı sonra, belirler düşük seviyede test edilen konsantrasyon. 2. Test Malzeme 2.1 Artemia yumurtaları Testi gerçekleştirmek için, Artemia Franciscana </emEski az 48 saat&gt; larvaları (nauplii) yeni yumurtadan yumurta 5 elde, evre II ve III de gereklidir. Test desteklemek için kullanılan Sertifikalı yumurta veya kistler, Kalite Güvence Araştırma Bölümü, ABD Çevre Koruma Ajansı, Cincinnati, OH 45268, USA veya Su Kirliliğinin Biyolojik Araştırmalar, Ghent Üniversitesi, Belçika Laboratuvar örneğin ticari olarak kullanılabilir. 2.2 Su seyreltme Sentetik tuzlu kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesiyle hazırlanmıştır, seyreltme suyu olarak kullanılabilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Bu, 35 (± 2) eşit olan bir tuz ile seyreltme su tavsiye edilir PSU yanı sıra doymuş değerin% 80&#39;den fazla bir çözünen oksijen konsantrasyonuna ve 25 arasında bir sıcaklıkta (± 2) vedeg C. 48 saat ve en azından 0.45 mikron bir gözenek ile filtre filtrelenmesi için havalandırma sonra, seyreltme 0-4 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta karanlıkta 30 gün arasında bir maksimum saklanabilir 2.3 Alg kültürü 2.0x10 6 hücre / ml - Bu test organizmaları katlanarak artacak ve 1.3x10 6 yoğunlukları ulaşmak Dunaliella tertiolecta mikroalg, yem, olduğunu önerilir. Çevresel numuneler üzerinde test 2.0x10 6 hücre / ml 6 daha yüksek yoğunluklarda kültür gerektirir. Bu Dunaliella tertiolecta deniz suyu içeren bir kültür ortamında yetişen ileri sürülmektedir (30 (± 2) PSU ve 20 (± 1) ° C) temel besin, mineral ve vitamin ilavesi ile. Alg medya oluşumu ve hazırlık ilişkin bazı göstergeler Ek bildirilmektedir. İlk hücre yoğunluğu yaklaşık 10 5 hücre / ml olması tavsiye edilir. Alg kültür saklanır20 oda termostatı (± 1) ° C, karanlığın 8 saat ışık 16 saatlik bir periyodu oranı ile floresan lambalar 3000 (± 300) lx ile aydınlatılmıştır. Diğer fitoplankton türlerinin de beslenme için kullanılan olabilir ama Dunaliella tertiolecta için &quot;eşdeğer&quot; türler bulmak için bu fitoplankton türleri ile karşılaştırmalı çalışmalar yapmak için gerekli olacaktır, çünkü deneysel koşullar (örn. başlangıç ​​hücresi yoğunlukları, ışık aydınlatma, sıcaklık, bileşimi kültür ortamı ve maruz kalma süresi) fitoplankton türleri arasında değişir. Farklı kirleticiler için microalglerin tolerans düşünülmesi gereken yanı sıra, çünkü aynı zamanda Artemia için fitoplankton etki büyüme ve gelişme üzerindeki kirletici etkileri. 2.4 Referans madde Bu testte referans madde sodyum dodesil sülfat olduğunu. 2.5 Laboratuar cam <ol><li> 100 ml borosilikat cam bardak (18 çözümler aktarılması için test ve 18 gerçekleştirmek için) dahil test kaplar. </li><li> Standart çözelti hazırlamak için bir şişesi (örneğin 500 ml bir şişede). </li><li> Test çözümleri hazırlamak için altı matara (örneğin 200 ml şişeler). </li><li> Çıkarılabilir ile cam veya polistiren 5 cm çapında Petri kutularına kistler aktive ve test kaplara kuluçka çanağına Artemia aktarılması için kullanılmak üzere kapsar. </li><li> Nauplii aktarmak için Cam Pasteur pipetler (alev yuvarlak uçları ile). </li><li> Cam kanüller ve Artemia aktarmak için Pasteur 3 ml tek kullanımlık plastik pipetler (kesilecek). </li><li> Mikropipetler ve dereceli pipetler test çözümleri hazırlamak. </li><li> T matara gelen test çözümleri aktarmak için Altı dereceli silindir (örneğin 50 ml silindirler)O konteyner test. </li></ol> 3. Kist Etkinleştirme 3.1. Kistleri içeren Petri + su dökerek Test organizmalar üretmek için, kistler, 20 mg 48 saat testten önce seyreltme suyun 12 ml içeren bir Petri tabağına yerleştirilir. 3.2. Işık ve karanlık Kuluçka Petri (± 2) 25 tutulur ° C ve 4000 (± 1000) lüks (metre kare başına lümen) bir saat boyunca ışık şiddeti az. 3.3. Mikroskobu kullanılarak orta değiştirilmesi 24 saat sonra, kuluçka larva yapay su ile doldurulur, yeni bir Petri tabağı içine aktarılır. Transferi kuluçkalık, phototropic larvaları ışık demeti doğru göç böylece yani bir ışık kaynağı kullanarak, mikroskop kullanılarak yapılır. Bir cam Pasteur pipeti sadece olgunlaşmamış larvaların ar sağlanması, transferi yapmak için kullanılıre membranlar hala kist ya da larva transfer değil. 3.4. Karanlıkta Kuluçka Larvalar içeren çanağı 25 C&#39;de 24 saat karanlık termostatik haznesi yerleştirilir (± 2) ° C. 4. Test Çözümleri hazırlanması 4.1. Madde Tartı + şişesi transfer Bu test madde için standart çözelti bir 500 ml&#39;lik şişe içinde madde 0.5 g çözülmesi ile hazırlanır tavsiye edilir. Şişeye de-iyonize edilmiş su veya distile su ile doldurulur ve test madde tamamen eriyene kadar çözelti karıştırılır. Çözümlerin bu maddenin çözelti içinde stabil olup olmadığı bilinmemektedir sürece, kullanım sırasında hazırlanması gerekmektedir. Bu durumda, standart bir test çözeltisi iki gün önce kadar hazırlanabilir. 4.2. Seyreltme suyu ve yosun wi ekleyerek, negatif kontrol hazırlanması10 ml pipetle th Negatif kontrol 10 5 hücre / ml &#39;lik bir yoğunluğa elde edilir, böylece su ile seyreltme alg süspansiyonu bir alikot eklenerek bir şişesi (örneğin 200 ml hacim) içinde hazırlanır. 4.3. Test çözümleri Hazırlanması: seyreltme suyu, yosun ve standart çözüm ekleyerek Bu test çözümleri testleri için istenilen konsantrasyonu elde edilir, böylece belirtilen miktarlarda su ile seyreltme, standart çözeltisinin eklenmesi ile beş 200 ml&#39;lik şişeler içerisinde hazırlanır ileri sürülmektedir. Organizmaların beslemek için bir Dunaliella tertiolecta mikroalg süspansiyon alikotları kullanılır ve test çözümleri hazırlanır olduğunda 10 5 hücre / ml bir yoğunluğa ulaşmak için ilave edilebilir. Ek aşağıdaki sırayla önerilir: seyreltme suyu, alg süspansiyon ve standart çözüm. Test çözeltilerinin hazırlanması sonra, kısa sürede ölçüm içinde kullanılabilir olması gerekir. 4.4. Sonra Petri kutuları için, şişesi test kapları çözümler aktarma Test çözümleri eşit miktarlarda (50 ml) oldu silindir kullanılarak test kaplar içine tanıtılır. Her bir konsantrasyonu için üç kopyaları yapılır. Testler, her seri için, bir kontrol testi kabın çözeltilerinin hacmine eşit bir seyreltme bir miktar su ile hazırlanır. Test solüsyonları eşit hacimleri (12 ml) Petri kutularına sisteme dahil edilir. Testler, her seri için, bir kontrol Petri tabağı kullanılır. 5.. Test için hazırlık 5.1. II-III aşamasında nauplii Kist aktif hale kırk sekiz saat, nauplii II-III larva ulaşmak ve test için daha sonra kullanabiliyorsunuz. 5.2. Mikroskop kullanılarak Petri içine nauplii transferi Kist için kullanılan petri<html> aktivasyon termostatik odasının dışına alınır. Larva küçük bir miktar kontrol ve test çözümleri içeren Petri aktarılır. Bu görev organizmaların zarar kalmamak için yeterince geniş çaplı bir pipet kullanılarak mikroskop ile gerçekleştirilen olmaktır. Test Bu aşamada, transferi bir cam Pasteur pipeti (alev yuvarlak uçlu) ve agrega için Artemia teşvik eden bir yanal olarak yerleştirilmiş ışık kaynağı ile yapılabilir. 5.3. Mikroskop ile test kaplara Petri gelen nauplii transferi On larvaları test kaplara test çözümleri Petri kutularına aktarılır. Ayrıca, bu işlem Pasteur pipet ve mikroskop kullanılarak yapılmalıdır. Bu, 1 mL aşmayan bir hacim test sisteminin genel hacmi etkilemediği larvaların geçiş sırasında transfer edilmesi tavsiye edilir. e_step &quot;&gt; 5.4. Tam konteyner parafilm kaplı Test bardak parafilm (hava geçişi için bir boşluk bırakarak) ile kaplı, ve 25 bir sıcaklık (± 2) ° C testi tüm süresi ve 900 (± 100) lx bir aydınlatma bir periyodu ile de korunur karanlığın 10 saat ışık 14 saat arasındaki orandır. 6. Orta ve Gıda Takviyesi Değiştirilmesi 6.1. Yaşama oranı kontrolü Test başladıktan iki gün sonra, ve daha sonra 5, 7, 9 ve 12 gün sonra, Artemia hayatta kalma oranı doğrulamak için ve orta ve gıda ek yerine mikroskop altında görülmektedir. Canlı organizmaların sayısı her test konteyner sayılır. Mikroskop altında gözlem ve hafif mekanik stimülasyonu (örneğin bir cam Pasteur pipeti ile larva dokunmadan) yaklaşık 10 s için bazı hareket görünmüyor organizmalar sonrasaniye basılı tutun ölü düşünülmelidir. 6.2. Mikropipet ile test edilecek maddenin bir 10 ml pipet ve örnekleme ile yosun örnekleme gösteren bir test solüsyonu hazırlanması. Şişesi test kapları çözümler aktarma Test sırasında, test çözümleri periyodik olarak değiştirilmesi ve bunlar kullanılacaksa aynı gün içinde hazır olmalıdır. Test solüsyonları, önceden hazırlanmış standart bir çözüm yapılır. Üç yeni konteyner eski testi kapları 6.3. Artemia transferi, bir kesim Pasteur pipeti kullanarak, Artemia&#39;nın transferi şekilde organizmalar zarar vermemek için yeterince geniş bir çapa sahip bir pipet kullanılarak gerçekleştirilir. Bu faz esnasında, bir 3 ml plastik Pasteur pipetle (kesilecek) kullanılabilir. 6.4. Ya canlı ya da ölü Artemia içeren bir cam kapta Larva 1 sonra<html> Test sonunda maruz kalma 4 gün, larvaların hayatta kalma sayısı sayılır ve çalışma kaydedilir. LC 50 ve / veya LC 20, NOEC ve 14. günlerde LOEC, hesaplanır ve kaydedilir, yanı sıra güven aralığı% 95, uygun ve hesaplama yöntemleri de. 7. Temsilcisi Sonuçlar Testi (14 gün) sonunda, aşağıdaki formüle göre, her bir konsantrasyonda ölüm yüzdesi hesaplanır: (M s / N) * 100 Nerede: M s analiz örnek ölen kişilerin ortalama sayısı N maruz kalan bireylerin toplam sayısı Tablo 1 Sodyum dodesil sülfat maruz Artemia ile bir test (14d) veri bir örnektir. <table border="1"><tbody><tr><td> Konsantrasyonlar (mg / l) </td>&quot;Her çoğaltma ölen bireylerin&gt; Numara </td><td> Mortalite (%) </td></tr><tr><td></td><td> Ben </td><td> II </td><td> III </td><td></td></tr><tr><td> Negatif kontrol </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 1 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 1.56 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 3.12 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 13 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 3 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 27 </td></tr><tr><td> 12.5 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 90 </td></tr><tr><td> 25.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 50.0 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Dahası, belirlemekGrafiksel bir Gauss logaritmik arsa veya uygun istatistiksel yöntemler (örneğin Spearman-Karber veya Probit Yöntemi için) kullanılarak LC 50 değeri. Tablo 1 ve veriler için LC 50 hesaplanması 8,18 (7,15-9,37) mg / l&#39;dir. Maksimum konsantrasyon% 50 daha düşük bir ölüm oranı neden Sınanan varsa, o güvenilmez, hatta olmayan hesaplanabilir olurdu LC 50 değeri hesaplamasına devam etmemelisiniz. Bu durumda, bununla birlikte, test edilen konsantrasyon aralığı genişleterek testi tekrarlamak üzere uygun olacaktır. Alternatif olarak, LC 50 değeri daha doğru bir olasılıkla test edilen en yüksek konsantrasyonda ölüm oranı ve bir etkisi yoktur karşılık gelen yüksek konsantrasyon gösteren, test edilen en yüksek konsantrasyonda daha büyük olarak ifade edilir. Aşağıdaki test koşulları sonunda yerine getirildiği takdirde Sonuçlar geçerli kabul edilir: <ol class="lalpha"><li> kontrolü ortalama mortalite oranı≤% 20; </li><li> 14 gün için sodyum dodesil sülfat, LC 50 kullanılarak 8.0 (± 5) mg / l aralığında yer alır burada. </li></ol> Yukarıdaki şartlar yerine getirilmiş değil, organizmaların aynı parti ile elde edilen tüm veriler geçersiz kabul ve test tekrarlanmalıdır.

<ol>
	<li>Togulga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Short-Term+Toxicity+of+Two+Toxicants+to+Artemia+Nauplii.">The Short-Term Toxicity of Two Toxicants to Artemia Nauplii.</a> Tr. J. of Zoology. 22, 259-266 (1998).</li><li>Persoone, G., Wells, P. G., Sorgeloos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artemia+in+aquatic+toxicology:+a+review.">Artemia in aquatic toxicology: a review.</a> Artemia Research and its Applications. Morphology, Genetics, Strain characterization Toxicology. , 259-275 (1987).</li><li>Nunes, B. S., Carvalho, F. D., Guilhermino, L. M., Stappen, G. V. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+genus+Artemia+in+ecotoxicity+testing.">Use of the genus Artemia in ecotoxicity testing.</a> Envir. Poll. 144, 453-462 (2006).</li><li>APAT IRSA-CNR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Metodi analitici per le acque Manuali e Linee guida 29/2003. Terzo Metodo, 8060 (2003).</li><li>Sorgellos, P., Wielen, C. R. e. m. i. c. h. e. -. V. a. n. D. e. r., Persoone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+Artemia+nauplii+for+toxicity+tests+â€“+a+critical+analysis.">The use of Artemia nauplii for toxicity tests â€“ a critical analysis.</a> Ecotox. Env. Saf. 2, 249-255 (1978).</li><li>Savorelli, F., Palazzi, D., Gorbi, G., Invidia, M., Sei, S., Magaletti, E., Manfra, L., Gelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Set+up+of+a+standard+methodology+for+14-day+bioassay+on+Artemia+franciscana+and+A.+parthenogenetica.">Set up of a standard methodology for 14-day bioassay on Artemia franciscana and A. parthenogenetica.</a> Biol. Amb. 21, 27-36 (2007).</li><li>Brix, K. V., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+toxicity+of+arsenic+to+the+Great+Salt+Lake+brine+shrimp,+Artemia+franciscana.">Chronic toxicity of arsenic to the Great Salt Lake brine shrimp, Artemia franciscana.</a> Ecotox. Environ. Saf. 54, 169-175 (2003).</li><li>Brix, K. V., Deforest, D. K., Cardwell, R. D., Adams, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+a+chronic+site-specific+water+quality+standard+for+selenium+in+the+Great+Salt+Lake,+Utah,+USA.">Derivation of a chronic site-specific water quality standard for selenium in the Great Salt Lake, Utah, USA.</a> Environ. Toxicol. Chem. 23, 606-612 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualit&#225;+dell'acqua+-+Determinazione+della+tossicit&#225;+letale+a+14+giorni+con+Artemia+franciscana+(Crustacea:+Anostraca).">Qualit&#225; dell'acqua - Determinazione della tossicit&#225; letale a 14 giorni con Artemia franciscana (Crustacea: Anostraca).</a> Commissione UNICHIM "Qualit&#225; dell'acqua" Gruppo di Lavoro "Metodi Biologici" Sottogruppo "Acque salate/salmastre e sedimenti". , (2010).</li><li>Varo, I., Navarro, J. C., Amat, F., Guilhermino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+cholinesterases+and+evaluation+of+the+inhibitory+potential+of+chlorpyrifos+and+dichlorvos+to+Artemia+salina+and+Artemia+parthenogenetica.">Characterisation of cholinesterases and evaluation of the inhibitory potential of chlorpyrifos and dichlorvos to Artemia salina and Artemia parthenogenetica.</a> Chem. 48, 563-569 (2002).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Artemia bize Toksikoloji ve Ekotoksikoloji içinde Artemia kullanımı ile ilgili çeşitli seçenekler sürdürmek mümkün olduğunu ifade sağlar şimdiye kadar yapılan ecotoxıcıty test ve araştırma için mevcut en değerli test organizmaları biridir. Biyoanalizlerin için uygun bir tür olarak bu organizmanın açmak özellikleri şunlardır: Geniş bir coğrafi dağılımı, olumsuz çevre koşulları ve çeşitli besin maddeleri, nispeten basit laboratuvar kültür ve bakım, manipülasyona...

Çevre koruma ve araştırma enstitüsünün Loredana Manfra (Çevre Kalitesi İzleme ISPRA-Bölümü) ve Çevre Koruma Bölge Ajansı (Emilia-Romagna, İtalya) Federica Savorelli tarafından hazırlanmıştır. Tuzlu su / Kuyu Suyu ve UNICHIM Komisyonu Su Kalitesi (kimya sektöründe teknik standardizasyon çalışma için enstitusu) Tortu - Biyolojik Yöntemler Grubu içinde Artemia kabuklu üzerine alt çalışma grubu için referans Üyeleri. ISPRA (Bilimsel Danışma ve Dokümantasyon Hizmetleri) Marco Pisapia tarafından Videography ve düzenleme. Anna Maria Cicero ve ISPRA Erika Magaletti (Çevre Kalitesi İzleme Bölümü) tarafından Üretim Koordinasyonu. Biz, Emilia-Romagna Çevre Koruma Bölge Ajansı teşekkür Ferrara Şubesi ve Biolog istiyorumical Yöntemleri Grubu - Tuzlu / Kuyu Suyu ve onların işbirliği için Su Kalitesi Üzerine UNICHIM Komisyonu Tortu; Rossella Boscolo ve mali destek için ISPRA Massimo Gabellini (Önlenmesi ve Etkilerinin Azaltılması Bölümü) ve Roma&#39;da Diller London School of kendi dil desteği. <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Ürün numarası </td></tr><tr><td> Sodyum dodesil sülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L4390 </td></tr></tbody></table> Ek Alg medya analitik kalite reaktifler kullanılarak hazırlanmalıdır. Besin solüsyonu bir litre NaNO 3, damıtılmış su içinde NH4CI ile KH 2 PO 4 ve 20 g, 30 g, 300 g çözülerek hazırlanır. Dört başlangıç ​​çözümleri (A, B, C, DMineral) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre &quot;A&quot; CuSO 4 ZnSO 4 H2O, 25 g 5 H2O, COSO 4 7 H2O ile 30 g saf su içinde MnSO 4 H2O ile 20 g, 30 g ihtiva eden; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde FeCl 3 • 6 H2O ile 50 g içeren &quot;B&quot;; </li><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde 2 Na Moo 4 • 2 H2O ile 25 g içeren &quot;C&quot;; </li><li> Çözeltisi distile su içinde 50 g di Na 2 EDTA • 2 H 2 O içeren &quot;D&quot; Bir litre. </li></ul> Minerallerin (solüsyonu &quot;E&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile yukarıda bahsedilen çözeltilerinin alikotları ekleyerek elde edilir. Ayrıca, aşağıdaki için tavsiye edilir: solüsyonu &quot;D&quot;, 100 ml, çözelti 10 ml &quot;C&quot;, çözelti &quot;B&quot; ve 10 ml ve 10 ml çözelti, &quot;A&quot;. Üç inisiyatifvitaminler l çözeltileri (F, G, H) şu şekilde hazırlanır: <ul><li> Çözeltisi bir litre damıtık su içerisinde biotin 100 mg içeren &quot;F&quot;; </li><li> ; Distile su içinde tiamin 10 g içeren çözelti &quot;G&quot; nin bir litre </li><li> Çözeltisi distile su içinde kobalamin 100 mg içeren &quot;H&quot; bir litre. </li></ul> Vitaminler (solüsyonu &quot;I&quot;) bir nihai çözelti bir litre damıtık su ile üç başlangıç ​​çözeltilerinin 10 ml ekleyerek elde edilir. Alg bir ortam litrelik besin solüsyonu, mineral nihai çözelti (solüsyonu &quot;E&quot;) ve deniz suyu vitamin nihai çözelti (solüsyonu &quot;I&quot;) ve 1 ml 1 ml 1 ml çözülmesiyle hazırlanmıştır. Bu ikinci kabul analitik kalite reaktifler veya distile veya deiyonize su içinde ticari olarak satılan bir formülasyon çözülmesi ile elde edilebilir. İdeal tuzlu oluşturmak için tuz karışımlarının, ticari olarak mevcuttur, örneğin Instant Ocean karışımları. Ülkemizde yapılan bir30 tuzluluk (± 2) PSU ve 20 sıcaklık (± 1) ° C ile deniz suyu kullanarak ded

long-term lethal toxicity test with the crustacean artemia franciscana

Bizim araştırma faaliyetleri tuzlu / acı su ve tortu özel referans ile, çevre kalitesinin değerlendirilmesi için biyolojik yöntemlerin kullanılmasını hedefliyoruz. Biyolojik göstergelerin seçimi standart prosedürlerin kullanılabilirliği, muhtemelen, güvenilir bilimsel bilgiye dayalı ve olmalıdır. Bu yazıda, kimyasal ve / veya deniz çevresel matrislerin toksisitesini değerlendirmek için deniz kabuklu Artemia kullanılan standart bir protokol mevcut. Bilim adamları, tuzlu su karidesi (artemia) dünya çapında kullanım için standart biyoassay gelişimi için uygun bir aday olduğunu öneriyorum. Kağıtları bir dizi tuzlu su karidesi (artemia) çeşitli kimyasallar ve toksik maddelerin toksik etkileri üzerine yayınlanmıştır. Toksisite çalışmaları için bu canlıya en büyük avantajı, kuru kistler genel durumu ise; bu hemen test kullanılabilir ve zor ekimi talep edilmez <sup&gt; 1,2. Kist tabanlı toksisite testlerinin ucuz, kesintisiz, kolay ve güvenilir ve endüstriyel kontrol gereksinimleri için veya düzenleyici amaçlarla 3, böylece toksisite tarama rutin ihtiyaçlarına önemli bir cevaptır. Önerilen yöntem, bir nokta olarak ölüm içerir. Hayatta kalanların numaraları sayıldı ve ölüm oranı hesaplandı. Gözlem 4 birkaç saniye içinde herhangi bir iç veya dış hareket sergilemek vermedi Larva ölü kabul edildi. Bu işlem bir referans madde (Sodyum dodesil sülfat) standart test idi; bazı sonuçlar bu çalışmada rapor edilmiştir. Bu makale, protokole ilgili tüm adımları gösteren, usul toksisite test performansını açıklayan bir video eşlik eder.

Watch this Scientific Journal Video about Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana at JoVE.com

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile ilgilidir<em&gt; Artemia Franciscana</em&gt;.

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

long-term-lethal-toxicity-test-with-the-crustacean-artemia-franciscana

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

19.5K Görüntüleme.  Institute for Environmental Protection and Research. Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile ilgilidir Artemia Franciscana.

Video: Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Actually what I'm gonna do, mount it in here first and then swap out You. So now I'm gonna aspirate try and be as gentle as possible.Okay. A few seconds just holding.Okay.Alright.So the important features of our lifestyle imaging grid are that, so it's an inverted scope, which means the objective, the samples here in the objective is underneath. So the objective is pointing up and the whole scope, or practically the whole, practically the whole scope, including the objectives and the sample are at 37 degrees. So everything in this plastic box is at 37 degrees.And right on top of the stage we have an air and CO2 mix. That is 5%CO2. So the idea is that the sample is actually in a cell, it's like a cell incubator.And so we have, this is our mixer for the air and the CO2 and, and it gets humidified and heated and then piped onto the, the sample on the stage.Okay. And today we're just gonna be doing fluorescence one channel GFP fluorescence. This is the hose that the CO2 and 5%CO2 goes in and it just fits into the stage holder.That's important. And then we can close these, take these down, and then we go to our first position. And what I'm gonna do is go to the first field, which is my control sample, and I'll pick positions based on what I see on the screen.So I just make sure I actually look into the microscope in each new, well, because the focal plane for each of the wells is different, the, the dish is not perfectly flat on the bottom. So you will need to make fine adjustments when you move from well to the well. So right now I'm on the first, well, what I'll do is I'll focus, so I just hit, I just told, I just turned on the light, the transmitted light for the microscope.And I have make sure all the light is going to the eye pieces. And so I just look in, make sure I get a nice clean field. And then what I'll do is turn that light off, turn the fluorescence light on, make sure the cells that I'm looking at look healthy and they're not apoptotic.And, and I turn that off. And what I do next is send, so now I'm gonna start picking positions, which means I have to te send the light path to the camera. This is the camera right here.So I tell the microscope to send all the camera, they don't see anything in the eye pieces. What I'll do is in the software controlling the microscope, I'll choose the right filter set, which for our purposes is psy. And then set an exposure time.And I know these cells very well and I know that they take a 0.2 second exposure time. So I tell, that's what I tell the software to do. And what I'll do is hit focus.This is, and it's basically just alive. The, A light will turn on and you can, oh, I don't know if you can see cells, but the reason this is a good field is because there's, all the cells are, even in terms of their fluorescence, There are no apoptotic cells. Apoptotic cells tend to be very bright and there's no dirt or schmutz in the field.And you can see that they're actually, this is a metaphase cell and that's a metaphase cell, that's a cell that's probably just exited mitosis. And I can just tell that because it looks like those are, those two sets of chromatin are very nicely oriented to each other. Like they just exited an face.So that's a good field. So, and now that I know that the exposure time and the filter set is correct, and this is gonna be software specific, I'll go and I'll take positions and now the software has memorized the X, Y, Z position of that field. And then when I do pick another field, it's, and I'll, so when I'm picking, when I'm picking new fields, but in the same, well, I'll use the, I'll move the i'll, I'll turn the shutter, I'll open the shutter and I'll look to see what I see on the screen and I'll pick fields based on that versus looking in the field.So I don't see any of my tonics in there. But again, even nicely centered, these cells will go through my PS I continue, here's a good example. Here's a good example of what I would avoid that, see how bright that is?That's very bright. That's probably remnants of an apoptotic cell. And the reason I would avoid that is because since it's so bright, when the software auto focuses, it will autofocus just on that and it won't be in the same plane as all these other cells.And so I won't get any information from that field. That looks nice. There's a, this is a pro metaphase right here, That's A metaphase.So, and I'm gonna take three positions per well. So that was three positions and now I'm going to go to my next Well, so you can, so what I will probably do is take images every 10 minutes. So it's a compromise.Lifestyle imaging is always a compromise, right? You have to image, you have to keep the cells healthy, especially if you're interested in mitosis. So you have to minimize their exposure to the fluorescent line.And, but you wanna get information. So you have to take images, you have to, so you have to compromise, you have to make a choice about what you want to capture, what kind of information you wanna capture. For our purposes, mitosis tends to take about an hour.So if we're taking 10 minute intervals, that's pretty good. We see prophase, we see metaphase, we see anaphase, and we can, we can see when there are, there are treatments or drugs or siRNAs that affect those specific cell cycle stages. So for our purposes, that's enough, but we always want more.We always want more positions or finer time and interval or something like that. So it's a compromise. So, and then I'll hit start.And so our software, it does an autofocusing pass on the first pass. So once I hit start, it should start auto autofocusing and you'll see the shutter open, open and close between auto focusing. So I'll hit start.So that's the shutter opening and closing. The Z motor is engaging and it's actually trying to find the plane with the most contrast, which will be the most in focus. You can actually see on the screen going in and out of finding the best plane of focus that might be worrisome.So what it does is it, it drives the Z motor to find the best, the most in focus plane focus, well the most in image. And then it acquires picture there and then it learns that Z position. And then we'll use that Z position for the next 12 passes.And then we'll do the auto focusing pass again. What Kind of experiments do they do? Okay, so our lab is mostly interested in understanding what regulates mitic progression, or at least I'm most interested in understanding that.So with live cell imaging and especially our multi position, long-term imaging scope, you can take, you can film cells for two or three days entering anding mitosis, and you can image multiple rounds of mitosis so you can understand. And then you can put drugs or RNAs or any kind of perturbations on the cells that you would like to study. So you can understand how, how those drugs or, or genes are, are important in regulating mitotic progression.Because it's not fixed cell work and live cell work, you can understand what, when you need to have a perturbation to affect mitosis or what stage of mitosis is affected. So it's really powerful in that respect. What, what are the main technical elements of this experiments?What are the possible problems? Well, the biggest problem besides getting the rig set up, getting the rig set up is not trivial. A lot of people have the rig, but just making sure it works well for your application.The financial element is not, you know, is not small. So there's the setting up of the apparatus and then, and then once you gather the data, there's a real data analysis issue. It takes these movie, if, so, if you're gathering 40 movies each with 30 cells, so you have 40 in 40 fields that you just filmed and each of those fields has 30 cells, then you have to sit down with each one of those movies and look at each one of those cells in that movie.So it takes a really long time to do data analysis. And that's, so it takes a week to analyze data that it took you two days to collect. So there's a, that's a very big obstacle in terms of gathering lots of data.So it's not, while it's high throughput data collection, it's not high throughput analysis. So what would you make to make this experiment really high throughput? So our lab is in the process of developing a program that does the data analysis automatically.And it's a pretty decent program. It's not perfect. The human eye is always better, but it's getting there.So What are the interesting application of this experiment? Maybe other fields you can mention? Besides cell division?You mean for the, oh, for the live cell imaging? Yes.Well, you can do cell motility assays. You can, depending on the, the microscopy that's involved, you can, you know, look at how cells, you could look at tumor development if you really wanted to.But there, you, you're, if as long as you have the right imaging set up, you can, you're pretty much not limited in terms of anything. Our scope happens to be just a wide field and we use 20 by 20 x objective. So it's a pretty low resolution set up, but that's sufficient for what we need to see.So there are, but there definitely aren't, you wouldn't be limited. Anything that has any dynamic kind of experiment, which is biology, it would be, would really benefit from lifestyle imaging. So calcium imaging, although you couldn't do it on our apparatus, that's a live cell.You definitely need live cell imaging for that. Like I said, patient assays, motility assays, those kinds of things would really benefit from live cell imaging. Would you like to tell a few words about your previous experience?How long do you work on these techniques? What do you you work on before? Wow.So in my PhD I didn't work.I did a lot of confocal microscopy, but no lifestyle imaging. And so during my postdoc I was, I helped Dr.King get this apparatus that, that we just used to set up these fragment, get that up and running. And, and so during my postdoc, I had a lot of experience with both widefield with TimeLapse imaging on our scope, which is the widefield and also TimeLapse imaging with confocal microscopy.And I would say that it's really powerful. You get a lot of information, but it's not easy to get working perfectly. So it really requires a lot of attention and a lot of attention to details at every little step of the process.And, and then you still have problems. So it's a tough application, but you can really get, if, if it's what you need to have to, to study your problem, your scientific problem, then it, it's invaluable in that respect, but it's tough. So find someone who knows what they're doing and use them.That's my advice. So good.

Geniş Alan Mikroskop kullanarak Uzun vadeli Görüntüleme Memeli Hücreleri

Biyoloji

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later distally, is a major factor in patient prognosis. Experimental systems of breast cancer rely on cell lines usually derived from primary tumours or pleural effusions. Two major obstacles hinder this research: (i) some known sub-types of breast cancers (notably poor prognosis luminal B tumours) are not represented within current line collections; (ii) the influence of the tumour microenvironment is not usually taken into account.
We demonstrate a technique to culture primary breast cancer specimens of all sub-types. This is achieved by using three-dimensional (3D) culture system in which small pieces of tumour are embedded in soft rat collagen I cushions. Within 2-3 weeks, the tumour cells spread into the collagen and form various structures similar to those observed in human tumours1. Viable adipocytes, epithelial cells and fibroblasts within the original core were evident on histology. Malignant epithelial cells with squamoid morphology were demonstrated invading into the surrounding collagen. Nuclear pleomorphism was evident within these cells, along with mitotic figures and apoptotic bodies.
We have employed Optical Projection Tomography (OPT), a 3D imaging technology, in order to quantify the extent of tumour spread in culture. We have used OPT to measure the bulk volume of the tumour culture, a parameter routinely measured during the neo-adjuvant treatment of breast cancer patients to assess response to drug therapy. 
Here, we present an opportunity to culture human breast tumours without sub-type bias and quantify the spread of those ex vivo. This method could be used in the future to quantify drug sensitivity in original tumour. This may provide a more predictive model than currently used cell lines.

We have developed a collagen-based in vitro assay which promotes proliferation and invasion from samples of all breast cancer subtypes. Optical Projection Tomography, a three dimensional microscopy technique was utilised to visualise and quantify tumour expansion. This assay may be used to quantify drug response of individual tumour samples.

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue patterning. During animal development, key cell proliferation and patterning events occur very quickly. For instance, in Caenorhabditis elegans all cell divisions required for the larval body plan are completed within six hours after fertilization, with seven mitotic cycles1; the sixteen or more mitoses of Drosophila embryogenesis occur in less than 24 hr2. In contrast, cell divisions during plant development are slow, typically on the order of a day 3,4,5 . This imposes a unique challenge and a need for long-term live imaging for documenting dynamic behaviors of cell division and differentiation events during plant organogenesis. Arabidopsis epidermis is an excellent model system for investigating signaling, cell fate, and development in plants. In the cotyledon, this tissue consists of air- and water-resistant pavement cells interspersed with evenly distributed stomata, valves that open and close to control gas exchange and water loss. Proper spacing of these stomata is critical to their function, and their development follows a sequence of asymmetric division and cell differentiation steps to produce the organized epidermis (Fig. 1).
This protocol allows observation of cells and proteins in the epidermis over several days of development. This time frame enables precise documentation of stem-cell divisions and differentiation of epidermal cells, including stomata and epidermal pavement cells. Fluorescent proteins can be fused to proteins of interest to assess their dynamics during cell division and differentiation processes. This technique allows us to understand the localization of a novel protein, POLAR6, during the proliferation stage of stomatal-lineage cells in the Arabidopsis cotyledon epidermis, where it is expressed in cells preceding asymmetric division events and moves to a characteristic area of the cell cortex shortly before division occurs. Images can be registered and streamlined video easily produced using public domain software to visualize dynamic protein localization and cell types as they change over time.

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

We describe a protocol using chamber slides and media to immobilize plant cotyledons for confocal imaging of the epidermis over several days of development, documenting stomatal differentiation. Fluorophore-tagged proteins can be tracked dynamically by expression and subcellular localization, increasing understanding of their possible roles during cell division and cell-type differentiation.

Uzun süreli, yüksek çözünürlüklü Konfokal Time Lapse Görüntüleme<em&gt; Arabidopsis Kotiledon</emÇimlenme sırasında&gt; Epidermis

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly the lifetime of the animal. While the precise mechanisms that govern self-renewal and differentiation in vivo are challenging to study, various systems have been developed previously to propagate murine SSCs in vitro using a combination of specialized culture media and feeder cells1-3.
Most in vitro forays into the biology of SSCs have derived cell lines from neonates, possibly due to the difficulty in obtaining adult cell lines4. However, the testis continues to mature up until ~5 weeks of age in most mouse strains. In the early post-natal period, dramatic changes occur in the architecture of the testis and in the biology of both somatic and spermatogenic cells, including alterations in expression levels of numerous stem cell-related genes. Therefore, neonatally-derived SSC lines may not fully recapitulate the biology of adult SSCs that persist after the adult testis has reached a steady state.
Several factors have hindered the production of adult SSC lines historically. First, the proportion of functional stem cells may decrease during adulthood, either due to intrinsic or extrinsic factors5,6. Furthermore, as with other adult stem cells, it has been difficult to enrich SSCs sufficiently from total adult testicular cells without using a combination of immunoselection or other sorting strategies7. Commonly employed strategies include the use of cryptorchid mice as a source of donor cells due to a higher ratio of stem cells to other cell types8. Based on the hypothesis that removal of somatic cells from the initial culture disrupts interactions with the stem cell niche that are essential for SSC survival, we previously developed methods to derive adult lines that do not require immunoselection or cryptorchid donors but rather employ serial enrichment of SSCs in culture, referred to hereafter as SESC2,3.
The method described below entails a simple procedure for deriving adult SSC lines by dissociating adult donor seminiferous tubules, followed by plating of cells on feeders comprised of a testicular stromal cell line (JK1)3. Through serial passaging, strongly adherent, contaminating non-germ cells are depleted from the culture with concomitant enrichment of SSCs. Cultures produced in this manner contain a mixture of spermatogonia at different stages of differentiation, which contain SSCs, based on long-term self renewal capability. The crux of the SESC method is that it enables SSCs to make the difficult transition from self-renewal in vivo to long-term self-renewal in vitro in a radically different microenvironment, produces long-term SSC lines, free of contaminating somatic cells, and thereby enables subsequent experimental manipulation of SSCs.

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

A simple method to derive and maintain spermatogonial stem and progenitor cell lines from adult mice is presented here. The method utilizes feeder cells originating from the somatic cell compartment of the adult mouse testis. This technique is applicable to common mouse strains, including transgenic, knock-out, and knock-in mice.

Uzun vadeli Yetişkin Fare SSC Hatları türetilmesi için Kültür Spermatogonial Kök ve progenitör hücrelerin Seri Zenginleştirme (DGM)

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

Ablation of a Single Cell From Eight-cell Embryos of the Amphipod Crustacean Parhyale hawaiensis

The amphipod Parhyale hawaiensis is a small crustacean found in intertidal marine habitats worldwide. Over the past decade, Parhyale has emerged as a promising model organism for laboratory studies of development, providing a useful outgroup comparison to the well studied arthropod model organism Drosophila melanogaster. In contrast to the syncytial cleavages of Drosophila, the early cleavages of Parhyale are holoblastic. Fate mapping using tracer dyes injected into early blastomeres have shown that all three germ layers and the germ line are established by the eight-cell stage. At this stage, three blastomeres are fated to give rise to the ectoderm, three are fated to give rise to the mesoderm, and the remaining two blastomeres are the precursors of the endoderm and germ line respectively. However, blastomere ablation experiments have shown that Parhyale embryos also possess significant regulatory capabilities, such that the fates of blastomeres ablated at the eight-cell stage can be taken over by the descendants of some of the remaining blastomeres. Blastomere ablation has previously been described by one of two methods: injection and subsequent activation of phototoxic dyes or manual ablation. However, photoablation kills blastomeres but does not remove the dead cell body from the embryo. Complete physical removal of specific blastomeres may therefore be a preferred method of ablation for some applications. Here we present a protocol for manual removal of single blastomeres from the eight-cell stage of Parhyale embryos, illustrating the instruments and manual procedures necessary for complete removal of the cell body while keeping the remaining blastomeres alive and intact. This protocol can be applied to any Parhyale cell at the eight-cell stage, or to blastomeres of other early cleavage stages. In addition, in principle this protocol could be applicable to early cleavage stage embryos of other holoblastically cleaving marine invertebrates.

Ablation of a Single Cell From Eight-cell Embryos of the Amphipod Crustacean Parhyale hawaiensis

The amphipod Parhyale hawaiensis is a promising model organism for studies of crustacean embryology and comparative arthropod development and evolution. This protocol describes a method for manual removal of single blastomeres from early cleavage stage embryos of Parhyale.

Amphipod Crustacean Sekiz hücreli embriyolardan Tek Hücre Ablasyon<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

The amphipod Parhyale hawaiensis is a small crustacean found in intertidal marine habitats worldwide. Over the past decade, Parhyale has emerged as a ...

Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is particularly suited for long-term time-lapse imaging over many hours up to several days. However, an appropriate sample mounting strategy is needed that offers both confinement and normal development of the sample. Multilayer mounting, a new embedding technique using low-concentration agarose in optically clear tubes, now overcomes this limitation and unleashes the full potential of light sheet microscopy for real-time developmental biology.

The development of zebrafish can be followed over days with light sheet microscopy when embryos are embedded in optically clear polymer tubes with low-concentration agarose.

Çok katmanlı Zebra balığı uzun vadeli Işık Sayfalık Mikroskopi için Montaj

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is ...

LarvaSPA, A Method for Mounting Drosophila Larva for Long-Term Time-Lapse Imaging

Live imaging is a valuable approach for investigating cell biology questions. The Drosophila larva is particularly suited for in vivo live imaging because the larval body wall and most internal organs are transparent. However, continuous live imaging of intact Drosophila larvae for longer than 30 min has been challenging because it is difficult to noninvasively immobilizeimmobilizing larvae for a long time. Here we present a larval mounting method called LarvaSPA that allows for continuous imaging of live Drosophila larvae with high temporal and spatial resolution for longer than 10 hours. This method involves partially attaching larvae to the coverslip using a UV-reactive glue and additionally restraining larval movement using a polydimethylsiloxane (PDMS) block. This method is compatible with larvae at developmental stages from second instar to wandering third instar. We demonstrate applications of this method in studying dynamic processes of Drosophila somatosensory neurons, including dendrite growth and injury-induced dendrite degeneration. This method can also be applied to study many other cellular processes that happen near the larval body wall.

LarvaSPA, A Method for Mounting Drosophila Larva for Long-Term Time-Lapse Imaging

This protocol describes a method for mounting Drosophila larvae to achieve longer than 10 h of uninterrupted time-lapse imaging in intact live animals. This method can be used to image many biological processes close to the larval body wall.

LarvaSPA, Uzun Süreli Hızlandırılmış Görüntüleme için Drosophila Larva Montajı Için Bir Yöntem

Live imaging is a valuable approach for investigating cell biology questions. The Drosophila larva is particularly suited for in vivo live imaging because ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. Adult mammalian CMs are terminally differentiated cells with minimal proliferative capacity. The post-mitotic state of adult CMs not only restricts cardiomyocyte cell cycle progression but also limits the efficient culture of CMs. Moreover, the long-term culture of adult CMs is necessary for many studies, such as CM proliferation and analysis of gene expression.
The mouse and the rat are the two most preferred laboratory animals to be used for cardiomyocyte isolation. While the long-term culture of rat CMs is possible, adult mouse CMs are susceptible to death and cannot be cultured more than five days under normal conditions. Therefore, there is a critical need to optimize the cell isolation and long-term culture protocol for adult murine CMs. With this modified protocol, it is possible to successfully isolate and culture both adult mouse and rat CMs for more than 20 days. Moreover, the siRNA transfection efficiency of isolated CM is significantly increased compared to previous reports. For adult mouse CM isolation, the Langendorff perfusion method is utilized with an optimal enzyme solution and sufficient time for complete extracellular matrix dissociation. In order to obtain pure ventricular CMs, both atria were dissected and discarded before proceeding with the disassociation and plating. Cells were dispersed on a laminin coated plate, which allowed for efficient and rapid attachment. CMs were allowed to settle for 4-6 h before siRNA transfection. Culture media was refreshed every 24 h for 20 days, and subsequently, CMs were fixed and stained for cardiac-specific markers such as Troponin and markers of cell cycle such as KI67.

Here, we present a protocol for the isolation, transfection, and long-term culture of adult mouse and rat cardiomyocytes.

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Application of Passive Head Motion to Generate Defined Accelerations at the Heads of Rodents

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular mechanisms behind the beneficial effects of exercise are poorly understood. Many physical workouts, particularly those classified as aerobic exercises such as jogging and walking, produce impulsive forces at the time of foot contact with the ground. Therefore, it was speculated that mechanical impact might be implicated in how exercise contributes to organismal homeostasis. For testing this hypothesis on the brain, a custom-designed ''passive head motion'' (hereafter referred to as PHM) system was developed that can generate vertical accelerations with controlled and defined magnitudes and modes and reproduce mechanical stimulation that might be applied to the heads of rodents during treadmill running at moderate velocities, a typical intervention to test the effects of exercise in animals. By using this system, it was demonstrated that PHM recapitulates the serotonin (5-hydroxytryptamine, hereafter referred to as 5-HT) receptor subtype 2A (5-HT2A) signaling in the prefrontal cortex (PFC) neurons of mice. This work provides detailed protocols for applying PHM and measuring its resultant mechanical accelerations at rodents' heads.

The present protocol describes a custom-designed ''passive head motion'' system, which reproduces mechanical accelerations at rodents' heads generated during their treadmill running at moderate velocities. It allows dissecting mechanical factors/elements from the beneficial effects of physical exercise.

Kemirgenlerin Kafalarında Tanımlanmış İvmelenmeler Oluşturmak için Pasif Kafa Hareketinin Uygulanması

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular ...

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants (Atta) in Laboratory Conditions

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled environments enables an enriched comprehension of their biology that can contribute to applied research. This practice is usually employed in population control studies of species that cause economic loss, such as Atta ants. To cultivate their mutualistic fungus, these leaf-cutting ants collect leaves and for this are considered agricultural pests widely distributed throughout the American continent. They are highly socially organized and inhabit elaborated underground nests composed of a variety of chambers. Their maintenance in a controlled environment depends on a daily routine of several procedures and frequent care that are described here. It starts with the collection of queens during the reproductive season (i.e., nuptial flight), which are then individually transferred to plastic containers. Due to the high mortality rate of queens, a second collection can be carried out about 6 months after the nuptial flight, when incipient nests with developed fungus wad are excavated, hand-picked, and placed in plastic containers. In the laboratory, leaves are daily provided to established colonies, and ant-produced waste is weekly removed along with remaining dry plant material. As the fungus garden keeps growing, colonies are transferred to different types of containers according to the experimental purpose. Leaf-cutting ant colonies are placed in interconnected containers, representing the organizational system with functional chambers built by those insects in nature. This setup is ideal to monitor factors such as waste amount, fungus garden health, and the behavior of workers and queen. Facilitated data collection and more detailed observations are considered the greatest advantage of keeping ant colonies in controlled conditions.

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants Atta in Laboratory Conditions

Here, a protocol is described to successfully collect and maintain healthy Atta (Hymenoptera: Formicidae) ant colonies in laboratory conditions. Additionally, different nest types and configurations are detailed together with possible experimental procedures.

Yaprak Kesici Karıncaların (Atta) Laboratuvar Koşullarında Toplanması ve Uzun Süreli Bakımı

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled ...

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler