Bu çalışma WM ve LY için AHA 9320033N için NIH hibe R01 HL109420 tarafından desteklenmiştir.

Fare allogreft ve singeneik greft nakli modeli Tüm hayvan çalışmaları Yale Üniversitesi kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komiteleri tarafından onaylanmıştır. Allogreft modeli için, erkek, 4-5 haftalık WT (C57BL/6J) veya IFN-γR-KO fareler aorta segmentleri bir uçtan kullanarak kadın alıcı, 8-12 haftalık WT abdominal aort içine yerleştirilen edildi uç mikrocerrahi anastomoz tekniği (ayrıntılar için sonraki bakınız). Singeneik greft modeli için, erkek, 4-5 haftalık WT farelerden alınan göğüs aortlarından kesimleri erkek karın aortlarından içine yerleştirilmiş olan, eski 8-12 hafta IFN-γR1-KO uçtan uca mikrocerrahi anastomoz tekniği kullanılarak. Ameliyat sonrası 1 hafta, hayvanlar 1 x 10 9 PFU de Ad5.CMV-fare IFN-γ veya Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) ile iv ekildi. Serum fare IFN-γ düzeyleri 1 ELISA (eBioscience) tarafından ölçüldü ve 5 hafta adenovirüs uygulamadan sonra. Bazı hayvanlar BrdU aldıKurban önce 2 hafta içinde (Sigma-Aldrich), 100 mg / kg SC. Uçtan uca mikrocerrahi anastomoz tekniği (Video bu bölümü için alınacaktır): 1. Donör Prosedürü <ol><li> Ketamin (50mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) intraperitonal enjeksiyonu ile donör farelerden anestezisi. </li><li> Yeterli anestezi olduktan sonra, bir yatar pozisyonda bir tepsi üzerinde X8-30 büyütmede işletim mikroskop altında donör fareler yerleştirin ve göğüs duvarı hazırlanması için İyot Hazırlık Pad ve Alkol Hazırlık Pad kullanın. </li><li> Kaburga ve kalp ortaya çıkarmak için diyafram ile göğüs ön duvarı İnsizyon. </li><li> Sağ atrium açın, bir 25-gauge iğne ile 10 ml şırınga kullanarak fareler temizlemek için sol ventrikül içine heparinli 10 ml (100 U / ml) serum fizyolojik enjekte. </li><li> Torasik aort tüm uzunluğu ortaya çıkarmak için kalp ve akciğer rezeke. </li><li> Doğrudan travma, whil en aza indirmek için dikkatli bir şekilde torasik aorta incelemeke, tanımlamak Arter ve aort yakın 11-0 sütür kullanarak kereste dalları bölün. </li><li> Bir kez torakal aort çevreleyen doku, nakli için tüketim tüm torasik aort içermez. </li><li> (100 U / ml) heparinli serum fizyolojik ile donör aort kesik ucuna yıkayın ve nakli kadar buz üzerinde aynı çözümü (en fazla 6 saat) saklayın. </li></ol> 2. Alıcı Prosedürü <ol><li> Analjezi için ip ketoprofen (5 mg / kg) ile alıcı farelere enjekte edilir, ve ip ketamin (50 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) ile fareler thenanesthetize. Alıcı farenin 60-90 dakika kadar bir süre için 10 dakika içinde derin anestezi uygulanır. Ameliyat sırasında, anestezi düzeyi forseps kullanarak karın ön duvarı ya da yürüyerek kısma her 15 dakikada değerlendirilir. Hayvan ameliyat sırasında her zaman zararlı uyaranlara tepki ise, ketamin ve ksilazin (1/4 veya 1/3 orijinal doz) ek bir doz sc veya im tarafından idare edilecektir </li><li> Yeterli anestezi olduktan sonra, bir elektrikli tıraş makinesi kullanarak karın ön duvarında kürk traş,, İyot Hazırlık Pad ve Alkol Hazırlık Pad kullanarak cilt temizlemek oftalmik merhem kullanarak göz kapağı. Ameliyat sırasında, aşağıdaki aseptik teknikler,% 10 çamaşır suyu ile ameliyat masasına temizlik steril eldiven ve steril mikrocerrahi aletleri (operasyonun başlaması için buharla sterilize aletler, sonra sıcak cam boncuk-sterilize kullanarak da dahil olmak üzere işlemleri için kullanılacak çoklu işlemleri, vb) arasında aletleri. </li><li> Bir yatar pozisyonda bir tepsi üzerinde X8-30 bir büyütmede işletim mikroskop altında alıcı fareler yerleştirin. </li><li> Xiphoid gelen pubis için orta hatta karın duvarı kesilirken, ve karın boşluğuna ortaya çıkarmak için bir mikro-retraktör kullanarak dışında karın duvarı yayıldı. </li><li> Superior bağırsak geri çekin ve gazlı bez ile sarın serum fizyolojik ile nemlendirilmiş. Alıcı fareler İşitme kaybı ile soğutulmuş olurdışsallaşmış bağırsak yoluyla t. Bu hayvan sıcaklık korumak için önemlidir. Mütevazı hipotermi aortik kan akımı tıkanıklığı gibi farenin gövdesinin alt yarısına yok kan akımı ile verimsiz ısı transferi yoktur sırasında omurilik hasarın önlenmesinde yararlı olduğu gibi Ancak, ısıtma kartı ameliyat sırasında kullanılmaz. </li><li> , Altta üreme organları hareket tuzlu-çözüm-nemlendirilmiş gazlı bez ile alıcı farelerin karın alanları sarın ve karnın sağ tarafına rektum geri çekmek için kullanabilirsiniz. Maruz kalan dokular nakli sırasında serum fizyolojik ile düzenli olarak sulanmaktadır. </li><li> Distale açık açık böbrek proksimal gemi ve aort çatallanma arasında infrarenal aorta bir segment incelemek ve dikkatle inferior vena kava (IVC) ayrı. </li><li> Belirlenmesi ve 11-0 Polyamid Monofilament dikiş kullanılarak abdominal aorta bu segmentte kaynaklanan küçük dalları tüm Arter. </li><li> A çapraz kelepçe izole segmentidışında yakın nedeni 5 mm, her sonunda bir iki damar kelepçeler kullanarak bdominal aort. </li><li> Anastomoz siteleri oluşturmak için keskin mikro-makas kullanarak kelepçeler arasındaki abdominal aort transect. </li><li> Donör aort greft karşılamak için kesilen alıcı aort bir kesik ucundan abdominal aorta (uzunluk en fazla 0.4 mm) küçük bir kesimi rezeke. </li><li> Kan artıkları çıkarmak için heparinli serum fizyolojik ile kelepçeler arasındaki aort segmentleri yıkayın. Kelepçeler ve donör aort greft arasındaki aort segmentleri anastomoz sırasında heparinize (100 U / ml) serum fizyolojik (en fazla 40 ml / kg) ile periyodik olarak sulanmaktadır. </li><li> Nakli için uzunluğu 2.5 mm bir segment greft oluşturmak için keskin mikro-makas ile donör aort her iki transect. </li><li> Bir son-t, sırasıyla ortotopik konumu, abdominal aort alıcının proksimal ve distal kesik ucuna anastomoz donör greft en yakın ve uzak uç, en donör aort greft yerleştirin11-0 Polyamid Monofilament dikiş kullanarak o uç desen. </li><li> Sürekli dikişler için, konaklama 3 de dikiş ve öncelikle 09:00 pozisyonları yerleştirin. Greft her iki tarafında iki konaklama sütür arasında anastomoz kesme çalışan dikiş kullanarak 3-4 dikiş kenarları, ve her ikisi de çift düğüm ile dikiş kalmak için çalışan sütür kravat. Kapağın her iki tabaka sürekli olduğu, ayrılma riski artar. Donör aort greft abdominal aortun alıcının proksimal ve distal kesik ucunu bağlamak için uygun uzunlukta olmalıdır. </li><li> Kesintiye dikişler için, 3 dört anastomoz inşa ve öncelikle greft her iki tarafında 9 hizasında ve greft her iki tarafında iki konaklama sütür arasında 3-4 dikiş hem kesim kenarları anastomoze. </li><li> Greft içine retrograd akışına izin vermek için distal kelepçe bırakın, kanama siteleri belirlemek ve 3 dakika içinde ek dikiş yapmak. </li><li> Tatmin edici hemostaz olduktan sonra, proksimal kelepçe bırakın. </li><li> Abdominal aorta ve inferior mezenterik arter distal komşu segmentinde özellikle, greft içinde güçlü nabız varlığı ve yerli abdominal aort proksimal komşu segment greft açıklığı onaylayın. Nabız kan akımının restorasyon sonra birkaç dakika içinde azalır eğer anastomoz sitelerinde tromboz düşünün. </li><li> Karın boşluğuna bağırsak dönün. </li><li> Sırasıyla, kas tabakası ve deri tabakasında 5-0 Naylon sütür kullanarak karın duvarı kapatmak dikin. </li><li> Bir ısıtma yastığı üstüne temiz bir kafes içine alıcı fareler yerleştirin ve bilinç kazanmak ve anestezi kurtarmak için fareler için 1-2 saat bekleyin. Bu kurtarma sırasında hayvanın yeterli sıcaklık korumak için önemlidir. Anestezi hayvan ardından önce sıcak ve kuru kafeste fareler tutun. </li><li> Fareler kurtarma sonra, tekrar ikinci gününde arka ekstremite motor fonksiyon değerlendirin. Başarılı bir transplantasyon cerrahi teyit edilecektir if arka bacaklarda hiçbir disfonksiyon ikinci gününde alıcı farelerde görülmektedir. </li><li> Içme suyu Ketoprofenin ile alıcı farenin yönetme (5 mg / kg / gün = 27 ug / içme suyu ml) 48 saat boyunca gerçekleştirilebilir. Damat, anormal demetler halinde duruş, vb hareketlilik, başarısızlık kaybı ile kanıtlandığı gibi herhangi bir alıcı fareler postoperatif analjezik tarafından giderilemeyen ağrı muzdarip, bunlar ötenazi olacak. Hayvanlar 1-60 gün sonra önceden tanımlanmış son noktalarında ötenazi olacaktır. </li></ol> Greft analizi Allogreftte arter greft (5 hafta viral enfeksiyon sonrası) 6 hafta operasyon sonrası vardı singeneik greft modelinde 4 hafta ve greft de temin ve Elastica-van Gieson (EVG) boyama, hematoksilen ve eozin (HE) için standart histolojik teknikler ile analiz edildi boyama ve immünofloresan boyama. Resimler bir immunofloresan mikroskop sistemi (Zeiss) ile alınmıştır. Pozitif immün çevrili çekirdeklerin hücre sayımı gerçekleştirmek olduyüksek büyütme altında ed ve her bir greft için 5 kesitler gelen ortalama. Lümen (endotel içinde), intima (endotel ve internal elastik lamina arasında, IEL), medya (IEL ve dış elastik lamina arasında, EEL), duvar kalınlığı (endotel ve dış elastik lamina arasında) greft alan ölçümleri ve bütün damar (EEL içinde) bilgisayar destekli görüntü analizi ve NIH Image 1.60 (kullanarak, her bir greft için ayrı 5 seri kesitleri, 150 mikron hesaplanmıştır <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). İstatistiksel analizler Tüm veriler ortalama ± SEM olarak ifade edilmiştir. Iki kuyruklu, çift t testi ve bir iki-yönlü varyans analizi Prism yazılım programı (GraphPad Software) kullanılarak yapıldı. P &lt;0.05 ile farklılık istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

<ol>
	<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+arteriopathy:+pathogenesis+update.">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+vascular+disease:+immune+response+meets+the+vessel+wall.">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li><li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts:+role+of+interferon-gamma.">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li><li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts.">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li><li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients.">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li><li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells.">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+some+females+reject+males?+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection.">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li><li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy.">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li><li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy.">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li><li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries.">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li><li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+vascular+rejection:+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models.">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li><li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li><li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-&#947;-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-&#947;-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Açıklanan protokoller fare GA modelleri odaklandık. Prosedürleri diğer grefti modeller uygulanabilir. Bu modeller insanlaşmış ksenogreft (yani insan koroner arter segmentleri bağışık yetmezliği olan farelerin alt-böbrek aortlarından içine interpoze) ve akut rejeksiyon fare GA modeli (yani başka bir genetik gerginlik alıcı içine bir genetik gerginlik bir fare aort) içerir. Bizim tarif fare modelleri insan GA lezyonlar kapatmak için daha fazladır. Birinci model, erkek fare, aynı k...

Ayrıca allogreft vaskülopatisi denir greft arteriosclerois (GA), tüm greft vasküler ağacın 7 yaygın, çevresel darlığı ile karakterize nakledilen organlarda yıl ay içinde gelişen bir patolojik lezyondur. Erken evrelerde böylece daha yakından geleneksel ateroskleroz görülen darlık benzeyen, arterlerde daha açıkça görülür eksantrik ve odak darlığı neden olabilir. Nedeniyle ana T hücreleri ve makrofajlar infiltrasyonu ve özellikle hücre-dışı matris birikimi ve düz kas hücreleri gibi için intimal genişleme greft damarlarının lümeni kaybı yetersiz telafi edilir greft, bir ana bilgisayar veya her ikisi de 5, 13, 19, kaynaklanmıştır dışa gemi yeniden tarafından. Kardiyak allogreftlerin, en lezyonlar klinik olarak anlamlı epikardiyal ve intrakardiyak koroner arterlerde olanlardır. Sonuçta, koroner arterlerin GA iskemik kalp yetmezliği neden olur. GA geç kalp gr en önemli nedenidirkıç kaybı. GA darlığı güçlü patogenezinde greft aloantijenlerine ev sahibi tepki karıştığı ve bize kronik rejeksiyon 3 biçimi olarak GA sınıflandırmak yol açan, dikiş hatları durdurmak. Ancak, arter yaralanması diğer formları yaralanma net yükünü artırarak ya da yoğunlaştırılması ve / veya immün yanıt modüle yoluyla, GA riskini artırabilir. Greft arterlerin endotel hücre (EC) astar insan GA korunmuş ve AT astar bitişik intima en yüzeysel bölgelerinde en yoğun IFN-γ üreten T hücreleri ve makrofajlar 11 ana-türetilmiş tarafından sızmış site olduğunu, içinde GA greft EC 16 ama damarları bağlamak donör özel alloantikorların gelişimi ile ilişkili bazı hastalarda Akut antikor aracılı ret 11 özelliğidir fibrinoid nekroz çok az kanıt gösteriyor. GA patogenezinde en önemli bileşeni olanintima içinde düz kas benzeri hücrelerinin çoğalması, bu süreci tutuklandı eğer, GA ilerleme pek mümkün değildir. Bizim gruptan önceki çalışma, insan koroner arter bölümlerinin intimas farenin bağışıklık yetersizliği olan bu işlem, arter donör allojen adoptif transfer insan T hücrelerine karşılık olarak genişletmek ve en alt böbrek aortlarından içine yerleştirilmiş olduğunu göstermiştir insan nötralize tarafından önlenebildi IFN- γ 18. Ayrıca dışsal insan IFN-γ (ve orta) insan T hücrelerinin 15, 17 yokluğunda, bu damar grefti, vasküler düz kas hücresi (VSMC) yayılması intimal neden olabilir. (Bu not önemli olduğunu insan ve fare IFN-γ. Bu deneysel sistemde fare ana bilgisayarda dolaylı etkilerini iktidar, türler arası yok) Bu beşeri fare modelleri insan T hücre / vasküler hücre etkileşimleri yansıtan yararına ve intimal lezyonların büyük ölçüde insan (yani graft türevi) hücreler oluşurgibi klinik örneklerde gözlenmiştir, ancak klinik nakli lezyonlar dahil taşıyıcı makrofajlar ve muhtemelen diğer hücre tipleri rolü göz ardı çünkü tam klinik durum özetlemek yoktur. Bu işlem, geleneksel bir fare modeli teorik olarak tam bir konak bağışıklık sistemini içeren ve GA uygulanacak fare genetik yaklaşımlar güç sağlayan ek avantaj sağlayarak hümanize modeli sınırlamaları tamamlayan, bu sorunu çözmek olabilir. Iki en yaygın olarak kullanılan fare modelleri heterotopik kalp nakli ve ortotopik arter nakli 1 içerir. Insan kalbi greft arterlerin intimal hücreler greft kökenli 5, 13, 19 ağırlıklı iken heterotopik kalp greft arterlerde geliştirmek lezyonlar büyük ölçüde, kemik iliği kökenli olasılıkla ev sahibi hücreleri, oluşur. Bu bize alternatif fare modelleri geliştirmek yol açmıştır önemli bir ayrımdır. Araya girmesiBu fare modelinde, akut hücre kaynaklı red tepkisi tamamen iki üç içinde greft tüm verici türetilmiş vasküler hücrelerde ortadan kaldırır, çünkü başka bir fare suşu alıcıya bir suşundan bir fare aort insanlardaki kronik rejeksiyon için bir model olarak daha da kısıtlı hafta 19. Sonuç olarak, bir araya giren kap kademeli görülen sonraki değişiklikler klinikte meydana greft damar değişiklikleri için bir model olarak uygunluğu sınırlıdır hayli yapısından durum oluşturmak Decellularized geminin iskele yeniden doldurulur olan konakçı hücrelerin sadece bir yanıt vardır. Yakın zamanda bu sorunların 21 aşmak için iki yeni fare modeli geliştirdik. Birinci model, erkek fare, aynı kendilenmiş suşu (C57BL/6J) bir dişi alıcı bir kap kademeli bir araya girmesi içerir. İkinci model rec yoksun aynı zorlanma ve cinsiyet bir dizi fare içine vahşi bir C57BL/6J fare verici bir arter segmenti interposing içerireptor için IFN-γ (IFN-γR-KO), fare uygulaması takip IFN-γ (bir adenoviral vektörü ile fare karaciğer enfeksiyonu ile teslim edilmiştir. Burada ayrıntılı protokoller ve fare modelleri GA avantajlarını açıklar.

<table border="1" >
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the Reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>C57BL/6J (H-2b)</td>
 <td>Jackson Laboratories 
 (Bar Harbor, ME)</td>
 <td>000664</td>
 <td>Donor (5 weeks) 
 Recipient (8-12weeks)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine Hydrochloride Injection </td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-2053</td>
 <td>Storage Solution(50 mg/ml) 
 Working Solution(5 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td> Xylazine Sterile Solution</td>
 <td>Lloyd Inc.</td>
 <td>NADA# 139-236</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution(1 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen</td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution-oral 
 (0.027 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heparin Sodium</td>
 <td>Sagent Pharmaceticals</td>
 <td>NDC 25021-400</td>
 <td>Storage Solution(1000 U/ml) 
 Working Solution(100 U/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
 <td>CareFusion</td>
 <td>AL4109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.9% Sodium Chloride Injection</td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-4888-10</td>
 <td>To prepare the anesthetic </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum Ophthalmic Ointment </td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>NDC 17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine Prep Pads </td>
 <td>Triad Disposables, Inc.</td>
 <td>NDC 50730-3201-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alcohol Prep Pads</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>NDC 68599-5805-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MZ95</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Scissors</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5693</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>15009-08</td>
 <td>To transect the aorta of donor or recipient </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Narrow Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>14088-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle Holder/Forceps</td>
 <td>MICRINS</td>
 <td>MI1542</td>
 <td>To hold the needle</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>11254-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11251-35</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Standard Pattern Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11000-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>13011-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LANCASTER Eye Speculum</td>
 <td>Zepf Medical Instruments</td>
 <td>42-1209-07</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Vascular Clip</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-6472</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Clip Applying Forceps With Lock</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Polyamide Monofilament Suture</td>
 <td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
 <td>Cat #T4A10Q07</td>
 <td>10-0 suture, Needle=70 microns</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Monofilament Nylon Suture</td>
 <td>Syneture 
 (Covidien)</td>
 <td>SN-1956</td>
 <td>6-0 suture</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-Woven Songes</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>Reorder No. 94442000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309659</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>3 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309657</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309604</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18G 1 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305196</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25G 7/8, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305124</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hearting Pad</td>
 <td>Sunbeam</td>
 <td>Z-1228-001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>9854-500</td>
 <td></td>
 </tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
</tr>
 </tbody>
</table>

mouse models for graft arteriosclerosis

Ayrıca allogreft vaskülopatisi denir greft arteriosclerois (GA), tüm greft vasküler ağacın yaygın, çevresel darlığı ile karakterize nakledilen organlarda yıl ay içinde gelişen bir patolojik lezyondur. GA patogenezinde en önemli bileşeni intima içinde düz kas benzeri hücrelerinin çoğalması olduğunu. Bir insan koroner arter kademeli bir bağışıklık yetersizliği olan farelerde, infra-böbrek aortlarından içine yerleştirilmiş olduğunda, intimas arter verici veya eksojen insan IFN-γ insan T-hücrelerinin yokluğunda. Allojen adoptif transfer insan T hücrelerine karşılık olarak genişletmek mümkündür Bu fare modelinde, akut hücre kaynaklı red tepkisi tamamen iki üç içinde greft tüm verici türetilmiş vasküler hücrelerin ortadan kaldırır, çünkü başka bir fare suşu alıcıya bir suşundan bir fare aort araya girmesi insanlardaki kronik rejeksiyon için bir model olarak sınırlıdır hafta. Yakın zamanda iki yeni m geliştirdikBu sorunları aşmak için model Ouse. Birinci model, erkek fare, aynı kendilenmiş suşu (C57BL/6J) bir dişi alıcı bir kap kademeli bir araya girmesi içerir. Bu durumda greft reddi Y kromozomu (erkek mevcut ama kadın değil) ve birkaç hafta için donör kaynaklı düz kas hücreleri korumak için yeterince sessiz olduğu görüldüğünde bu red yanıtı tarafından kodlanan küçük doku uygunluk antijenleri karşı yalnızca yönlendirilir. İkinci model için reseptör yoksun aynı zorlanma ve cinsiyet bir dizi fare içine vahşi bir C57BL/6J fare verici bir arter segmenti interposing içerir IFN-γ fare uygulaması takip IFN-γ (fare enfeksiyon ile teslim bir adenoviral vektör ile karaciğer. donör ve alıcı fareler her ikisi de aynı gerginlik ve cinsiyet ama ev sahibi kaynaklı hücreleri, için reseptör eksik ise donör düz kas hücreleri sitokin yanıt olarak çoğalırlar bu durumda herhangi bir ret yokBu sitokin, tepkisiz. Damar donör içine ek genetik değişiklikler geri melezlenmesine tarafından, her iki modelde GA ilerlemesi belirli genlerin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir. Burada, bizim fare GA modelleri için ayrıntılı protokolleri tarif.

Fare allogreft arteryoskleroz (GA) modeli: Bu modelde, bir erkek donör aort ana üzerinde sentezlenen küçük bir-Y antijeni (erkek-spesifik küçük histokompatibilite antijeni HY) karşı alloreactive T hücre aracılı immün tepkilerini getirir, böylece dişi alıcıya nakledilir greft 12 ve sırayla T diğer organ transplantasyonu modellerinde 2&#39;de görüldüğü gibi, IFN-γ diskler VSMC proliferasyonunu 20, 6, 8-10, 14 hücre üretti. Bir donör erkek gelen...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models for Graft Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Biz fare greft arteriosclerois (GA) aynı doğuştan gerginlik bir alıcıya bir fare damar segmentinin interpozisyonu içeren modeller için protokolleri tarif. Damar donör içine ek genetik değişiklikler geri melezlenmesine tarafından, model GA belirli genlerin etkisini değerlendirebilir.

Greft damar sertliği için fare modelleri

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Görüntüleme.  Yale University School of Medicine. Biz fare greft arteriosclerois (GA) aynı doğuştan gerginlik bir alıcıya bir fare damar segmentinin interpozisyonu içeren modeller için protokolleri tarif. Damar donör içine ek genetik değişiklikler geri melezlenmesine tarafından, model GA belirli genlerin etkisini değerlendirebilir.

Video: Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Tıp

Production of Apolipoprotein C-III Knockout Rabbits using Zinc Finger Nucleases

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins (HDL). It has been recognized that high levels of plasma ApoCIII constitutea risk factor for cardiovascular diseases (CVD). Elevated plasma ApoCIII level often correlates with insulin resistance, obesity, and hypertriglyceridemia. Invaluable knowledge on the roles of ApoCIIIin lipid metabolisms and CVD has been obtained from transgenic mouse models including ApoCIII knockout (KO) mice; however, it is noted that the metabolism of lipoprotein in mice is different from that of humans in many aspects. It is not known until now whether elevated plasma ApoCIII is directly atherogenic. We worked to develop ApoCIII KO rabbits in the present study based on the hypothesis that rabbits can serve as a reasonablemodelfor studying human lipid metabolism and atherosclerosis. Zinc finger nuclease (ZFN) sets targeting rabbit ApoCIIIgene were subjected to in vitro validation prior to embryo microinjection. The mRNA was injected to the cytoplasm of 35 rabbit pronuclear stage embryos, and evaluated the mutation rates at the blastocyst state. Of sixteen blastocysts that were assayed, a satisfactory 50% mutation rate (8/16) at the targeting site was achieved, supporting the use of Set 1 for in vivo experiments. Next, we microinjected 145 embryos with Set 1 mRNA, and transferred these embryos to 7 recipient rabbits. After 30 days gestation, 21 kits were born, out of which five were confirmed as ApoCIII KO rabbits after PCR sequencing assays. The KO animal rate (#KO kits/total born) was 23.8%. The overall production efficiency is 3.4% (5 kits/145 embryos transferred). The present work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits. These ApoCIII KO rabbits are novel resources to study the roles of ApoCIII in lipid metabolisms.

Recent development in gene targeting tools makes production of knockout (KO) rabbits possible. In the present work, we generated five Apolipoprotein (Apo) C-III KO rabbits using Zinc Finger Nucleases (ZFN). This work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits.

Çinko Finger nükleazlar kullanılması Apolipoprotein C-III Knockout Tavşanlar Üretimi

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

Fare Servikal lenf nodu Yüksek frekanslı Ultrasonik Görüntüleme

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

Deri Cerrahi denervasyon: Cilt Hastalıkları Fare modelleri Sinirler için Gereği Test Bir Yöntem

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination model can be used for the evaluation of treatment methods for intrathoracic diseases such as lung cancer or malignant pleural mesothelioma.
Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is a recently developed cancer treatment strategy that combines the specificity of tumor-targeting antibodies with toxicity caused by a photoabsorber (IR700Dye) after exposure to NIR light. The efficacy of NIR-PIT has been reported using various antibodies; however, only a few reports have shown the therapeutic effect of this strategy in an orthotopic model. In the present study, we demonstrate an example of efficacy evaluation of the pleural disseminated lung cancer model, which was treated using NIR-PIT.

Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is an emerging cancer therapeutic strategy that utilizes an antibody-photoabsorber (IR700Dye) conjugate and NIR light to destroy cancer cells. Here, we present a method to evaluate the antitumor effect of NIR-PIT in a mouse model of pleural disseminated lung cancer and malignant pleural mesothelioma using bioluminescence imaging.

Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...