Bu çalışma Sağlık Araştırma ve Kalp ve M.Ö. &amp; Yukon İnme Vakfı (KİK) Kanada Enstitüleri hibe ile desteklenmiştir.

Bu çalışmada tüm protokoller gözden ve Simon Fraser Üniversitesi hayvan bakım etik kurul tarafından onaylandı. Kullanım Balb / cYJ (H2 d) donör fare ve C57BL / 6 (H2 b) alıcı fareler allojenik tepkilerini incelemek. Fareler 8-12 haftalık yaş arası deneyler için kullanılır. Kadın ya da erkek ya fareler kullanın. Singenik kontroller C57Bl / 6 alıcıya içine C57Bl / 6 donörden aort kesimleri oluşmaktadır. 1. Donör ve Alıcı Hazırlık Not: donör ve alıcı Hem anestezi ve greft iskemi en aza indirmek için ameliyattan önce hazırlanır. Enjekte anestezikler inhale anestezik teslimat için gerekli ekipman ile hayvanın tıkanıklığı önlemek için protokolde kullanılır. Bununla birlikte, eğer arzu edilirse, inhalasyon anestezi uygun bir alternatiftir. Anestezik ilk enjeksiyon, tüm prosedür tamamlamak için yaklaşık 90 dakika sürer. Greft İskemik zaman daha az than 30 dakika. <ol><li> Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Fare 10 ila 15 dakika içinde sedasyon edilecektir. Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Gerektiği gibi hayvan çekme refleksi sergilemek değil dek, anestezik kokteyl orijinal dozunun 1/3 yönetme. Her kokteyl uygulanır yakından sonra solunum hızını izleyin. Ameliyat sırasında, forseps bir çift ile karın ön duvarı sıkıştırarak anestezi seviye her 15 dakika değerlendirmek. fareler derinden 60 ila 90 dakika süreyle anestezi kalmalıdır. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için bir göz merhemi ile farenin gözleri yağlayın. </li><li> Pubis ortalarından toraks karın ventral bölgeye mümkün olduğunca cilde yakın saçları tıraş. Herhangi bir cilt nick özellikle dikkatli olun. Bu i absorbe edilebilir çünkü tüy dökücü krem ​​kullanmayınCildi nto ve inflamatuar olabilir. </li><li> Isıtma tablo veya ped üzerinde bir havlu üzerine yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. </li><li> % 2 kloroheksidinler ile bir ön fırçalama ile cerrahi siteyi temizleyin. Cerrahi alan en üst düzeye çıkarmak için geniş bir çalışma alanı hazırlayın. Cerrahi bölge merkezinde ovma başlatın ve bir doğrusal ya da dairesel bir şekilde dışarıya hareket eder. Gazlı atınız. Bu işlemi en az 5 kez daha tekrarlayın. Aynı bölgede bir alkol hazırlık pad uygulayın. Alkol kuruduktan sonra, steril gazlı bez ile Betadinede çözüm ve örtü ile temiz alanı hazırlamak. </li></ol> 2. Uçtan uca anastomoz Prosedürü <ol><li> Donör Operasyonu <ol><li> Işlem boyunca aseptik teknik koruyun. Kullanmadan önce% 0.5 hızlandırılmış hidrojen peroksit solüsyonu ile tüm tezgah ve cerrahi masa yüzeylerini temizleyin. Sarın ve kullanmak için önce tüm cerrahi aletler, Gauzes, perdeler ve önlük otoklav. Bir buhar ile araçların sterilite doğrulamaHer pakette yer sterilizatör gösterge şeridi. Steril cerrahi eldiven kullanılır ve ameliyatlar arasında atılmaktadır. Birden ameliyatlar için sıcak cam boncuk sterilizatör ile kullanımlar arasındaki cerrahi aletler sterilize edin. </li><li> 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış temiz, ince pleksiglas gemide yatar pozisyonda donör fare yerleştirin. </li><li> Bölüm 1.1 belirtildiği gibi yeterli cerrahi anestezi olduktan sonra, cerrahi ile devam edin. </li><li> Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak. </li><li> Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak. </li><li> Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve inferior vena kava (IVC) bulun. Moisperiyodik tuzlu su çözeltisi ile on maruz dokular. </li><li> Tıbbi No. 5 forseps kullanarak, çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Aorta yakın küçük dalları Arter 10-0 polyamid monofilament sütür kullanın. </li><li> Donörün aort IVC ayrılır sonra, nemli bir gazlı bez ile maruz kalan boşluğu kapsamaktadır, tuzlu su ile kap doyurulması ve steril bir alanı üzerine bir kenara donör ayarlayın. Donör (solunum ve kardiyovasküler fonksiyon ve anestezi derinliği) her 15 dakikada durumunu kontrol edin. (Adımlar 2.2.7 2.2.1) aşağıda tarif edildiği gibi aort izole, alıcı işletim başlayın. </li><li> Alıcı aort IVC ayrılmış ve bir kenara edildikten sonra, mikroskop altında donör dönün. Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) donör aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm. </li><li> Vannas-Tübingen Microscissors kullanılarak,abdominal aorta küçük bir greft parçası (uzunluk olarak 3-4 mm) transeksiyonu. </li><li> Bir şırıngaya bağlanmış bir 25 G 5/8 iğne kullanarak, Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Kap ile temas etmez iğne ucu sağlanması. </li><li> Heparinli yerleştirin aort (100 U / ml) tuz buz üzerinde çözüm ve bir kenara koyun. Hala derin anestezi altında, mikrovasküler kelepçeler serbest iken. Kansız bırakılarak donör Euthanize. </li><li> Eksizyonun 30 dakika içinde donör gemi implante. Bu aort daha büyük bir uzunluğa kesilmesiyle birden çok alıcı için bir donör kap kullanmak mümkün olsa da, en az 30 dakika iskemi zaman tutun. </li></ol></li><li> Alıcı Operasyonu <ol><li> Donör operasyonda olduğu gibi, operasyon boyunca aseptik teknik koruyun. </li><li> 8-30X büyütme ameliyat mikroskop altında steril örtü ile sarılmış ince bir pleksiglas gemide yatar pozisyonda alıcı fare yerleştirin. </li><li> AfHayvan çekilme refleksi sergilemek olmadığında yeterli anestezi sağlanması ter, cerrahi ile devam edin. </li><li> Steril makas kullanarak, xiphoid sürecine pubis, tek bir orta hat alt boyuna karın kesi yapmak. </li><li> Karın duvarları küçük retraktör açık kullanma boşluğu ortaya çıkarmak. </li><li> Aplikatörler steril pamuk uçlu kullanarak, yavaşça superior hayvan sol için bağırsakları geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bez ile örtün. Altta üreme organları hareket ettirin ve infrarenal aorta ve IVC bulun. Tuzlu su çözeltisi ile periyodik maruz kalan dokuların nemlendirin. </li><li> Çatallanma sol renal arter düzeyinden, IVC dan aorta ayırın. Gerekirse, aort yakın küçük dalları Arter 10-0 poliamid monofilament sütür kullanın. </li><li> Çapraz kelepçe (proksimal ve ilgi segmente uzak) aort, iki adet 4 mm mikrovasküler kelepçeler ile ayrı yaklaşık 5 mm. </li><li> Vannas-Tübingen microscissors kullanarak, tek bir yatay aortatomi yapmak ve donör aort greft karşılamak için abdominal aorta küçük bir kesimini (en fazla 0,5 mm) rezeke. </li><li> Heparinli (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile eksize aort yıkayın. Donör aort greft alıcının transeksiyon aort uçları bağlamak için uygun uzunlukta olmalıdır. </li><li> Ortotopik pozisyonda donör aort greft yerleştirin ve alıcının bununla ilgili greft anatomik oryantasyon uyan, alıcının sonuna kadar vericinin greft ucunu anastomoz. </li><li> Yavaşça kabın tunika eksterna kavramak ve hafif tıbbi No.5 forseps kullanılarak da tersine çevrilmesi. Forseps kullanarak, alıcının rezeke gemiye donör aort greft güvence altına almak için damar duvarının tam kalınlığı boyunca 10-0 poliamid monofilament sütür bağlı iğne sürücü. Damar açma kapama nedeniyle t kapalı olmadığından emin olmak için özenGeminin arka duvarının o yanlışlıkla dikiş. </li><li> Sürekli dikişler için, greft, üst ve alt uçları, hem de 9:00 kalmak sütür koyun. 03:00 den greft üst ucunda başlayarak, 2 koşu dikişlerle rezeke uçları anastomoz ve fiyatının dikişine dikiş sabitleyin. <ol><li> Üzerinde greft çevirin ve menşe fiyatının dikiş toplantı geminin parçası dorsal çalışan dikiş devam ediyor. Gemide fazla baskı uygulamadan sabitleyin. Alt anastomoz için dikilmesi tekrarlayın. Not: kesintiye dikişler damar kalmak ameliyat dikiş iplikleri arasında üç ayrı dikişlerle anastomoz olduğu dışında sürekli bir dikiş ile aynı şekilde başlar. Anastomoz süresi genellikle 20 dakikadır. </li></ol></li><li> Anastomoz tamamlandıktan sonra, retrograd kan akış ve anastomoz sitelerin sızıntı kontrol etmek için izin uzak mikrovasküler kelepçe bırakın. Bir kaçak, immediatel varsay kusurlu siteyi kapatmak için bir dikiş yerleştirin. Sitelerde hiçbir kanama yoksa, o zaman yakın kelepçe bırakın. </li><li> Nakli inceleyin ve greft kan tıkanıklığı ve proksimal ve alıcının geminin distal kısmı olup olmadığını kontrol edin. Vericinin ve alıcının hem kap içinde Dinç darbe desen kan serbestçe akan olduğunu birincil göstergesidir. Forseps çifti kullanarak, yavaşça kalmak sütür bir ucunu kavramak ve biraz geminin arka duvarını incelemek için gemi ters çevrilecek. Not: anastomoz sitelerinin her iki ucunda damar duvarının bir kırışma olmalıdır. Kelepçeler çıkarıldıktan sonra fakir kan akımı tromboz bir işaretidir. </li><li> Pamuk uçlu aplikatörler kullanarak, karın boşluğuna bağırsakları dönün. </li><li> Castroviejo iğne tutucu ve Graefe forseps ile sürekli dikiş kullanarak 5-0 polipropilen sütür ile karın duvarı kapatın. Aynı cilt katmanı kapatınsubkütiküler kapatma kullanarak dikişler. </li><li> Transplant tamamlanmasından hemen Torbugesic (1 mg / kg) im uygulayın. </li><li> Amacıyla, hemen, atipamezol (1 mg / kg), ketoprofen (5 mg / kg) vermek ve Laktatlı Ringer çözeltisi deri altına ısıtılmıştır. </li><li> Ameliyattan hemen sonra, bir su battaniye gecede (12 saat) altında ısıtılmış bir kafes fareler yerleştirin. Anestetik-iyileşme döneminde, temiz ve kuru bir engelsiz alanda yalnız hayvanları yerleştirin. Çizgi temiz bir kağıt havlu ile (otoklav) kafes ve yaklaşık 20 ° C ile 22 su battaniye sıcaklığını ayarlamak. Kafes katta kuru ve ıslak tanecikleri ad libitum sağlayın. Not: Ameliyat sonrası bakımın önemli bir bileşeni anestezi ve cerrahi kurtarma sırasında, gerektiği gibi, hayvan ve uygun müdahale gözlemdir. izlenmesi gerekli yoğunluğu hayvanla değişecektir ve eş olarak derhal anestezik iyileşme döneminde daha olabilirDaha sonra ameliyat sonrası iyileşme için mpared. </li><li> Sürekli tamamen kurtarmak kadar izlenen geçirmiş anestezi sahip hayvanların izlemek. Hayvan yardımsız sternal yatma korumak gerekir ve gözetimsiz bırakılmamalıdır önce bu sakin ve ağrı serbest görünmesi gerekir. </li><li> Her iki deri altından, üç günlük bir süre için buprenorfın (0.1 mg / kg BID) ve ketoprofen (5 mg / kg SID) verin. </li><li> Üç gün en az anestezi kurtarma sırasında kardiyovasküler ve solunum fonksiyon, vücut ısısı ve postoperatif ağrı veya rahatsızlık izleyin. Ek bakımı gibi dehidrasyon ve elektrolit kaybı en aza indirmek için analjezikler ve diğer ilaçlarla ve parenteral sıvı idaresi olarak, gerekli olabilir. </li><li> Arka bacaklarda motor fonksiyonunu gözlemleyerek nakli ameliyatı başarı değerlendirin. Nakli tam bir başarı hayvanlardaki kurtarma üzerine derhal olmalı arka bacak ve kuyruk, engelsiz kan akışını içerirEl ve ikinci gününde arka bacaklarda hiçbir felç ile tam iyileşme </li></ol></li></ol> 3. Doku Toplama Not: Önceden belirlenmiş bitiş noktaları istenen analizin tipi ve antijen uyumsuzluğu doğasına bağlı olarak 3-60 gün arasında değişir. Genellikle, intimal kalınlaşma tam MHC uyumsuz fare suşları arasında naklinden sonra günde 30 sağlamdır. <ol><li> Ketamin intraperitonal enjeksiyonu ile fare anestezisi (100 mg / kg; 10 mg / ml) ve ksilazin (10 mg / kg; 1 mg / ml). Hayvan ayak pedi yağlı kısmını sıkıştırarak anestezi derinliğini değerlendirin. Hayvan çekilme refleksi sergilemek vermediğinde cerrahi ile devam edin. </li><li> Su ve% 70 alkol ile biten cerrahi siteyi temizleyin. </li><li> Emici ped ile kaplı bir tepsi üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. </li><li> Büyük bir orta hat boyuna kesi ile karın boşluğuna açın. Boşluğu ortaya çıkarmak için bir öz-istinat retraktör yerleştirin, IVC birabdominal aorta d. </li><li> Yavaşça tıbbi No. 5 forseps bir çift kullanarak komşu IVC nakledilen donör aort segmenti ayırın. Nakledilen geminin adventisya şerit değil, özellikle dikkatli olun. </li><li> Tüm yol torakal girişine torakal her iki yanında kaburga ile keserek göğüs boşluğu Açığa. Perikard ortaya çıkarmak ve hemostat bir çift göğüs kafesi sabitlemek için superiorda göğüs ön duvarı Reflect. </li><li> Kalp ortaya çıktığında, 25 G 5/8 sol ventrikül içine (bir şınngaya bağlanmış) iğne ve heparinize 0.1 ml (100 U / ml), tuzlu su çözeltisi ile aynı hizada yerleştirin. </li><li> Makas kullanarak, kan, heparinize tuzlu ve fiksatif perfüzyon sırasında vücudu terk etmesi için sağ atrium kaldırın. % 4 paraformaldehid 5 ml veya sıvı çalışır berrak kadar hayvan serpmek. Ötenazi sağlamak için kalbin çıkarın. </li><li> Vergi damar segmentini nakledilen ve% 4 para sokmakBir saat daha fazlası için formaldehid. Nakledilen Ekim gemiyi (optimum kesim sıcaklık) matrisi ve flaş dondurma ayarlayın. Bölüm 8 um kalınlığında ayarlanmış bir kriyostat altında gemi. Hematoksilen Eozin ve ve / veya Verhoeff-van Gieson (van Gieson) elastik boyası ile Leke bölümleri. </li></ol> Greft 4. Morfolojik Analizi Not: TA intimal kalınlaşma 13 ile karakterizedir. Bu modelde, intimal kalınlaşma ve lümen boyutunda bir azalma elde edilen bağışıklık aracılı vasküler yaralanma şiddetine yansıtıcıdır. Syngraft kontrol allojenik bağışıklık tepkilerinin yokluğunda damarların temel özelliklerini belirlemek için kullanılır. Bu kontroller, aynı zamanda, cerrahi prosedürün bir sonucu olarak ortaya çıkar arteriyal hasar değerlendirme izin verir. Syngrafts hiçbir intimal kalınlaşma olmalıdır. <ol><li> Endotel hücre içinde alanı ölçmek, intimal kalınlaşma ve lümen tıkanıklığı incelemek içintabaka, internal elastik lamina (IEL) ve bir görüntü analiz yazılımı ile elastik van Gieson lekeli arter segmentlerinde harici elastik lamina (EEL). Aşağıdaki parametreler TA yansıtıcı arter değişiklikleri belirlemek için kullanılabilir. <ol><li> Mutlak intimal alanını ölçün: internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakasının içinde bölgede. Bu ta işaretidir intimal genişleme, mutlak bir ölçüm sağlar. </li><li> Internal elastik lamina içinde alan - alan dış elastik lamina içinde: Mutlak medial alan ölçün. Bu arada bir damar duvarının bu bölgeye immün aracılı değişikliklerin bir sonucu olarak ortaya çıkabilir, medial veya bozunma büyüme mutlak ölçüm sağlar. </li><li> Dış elastik lamina içinde alan olarak toplam damar alanını ölçün. Bu immünolojik hasar sonucunda genişleme veya daralma arter içeren damar yeniden bir ölçüm sağlar. </li><li> Tedbir(internal elastik lamina içinde alan - endotel hücre tabakası içinde bölge) / (dış elastik lamina içinde alan - internal elastik lamina içinde bölge): intima / Medya. Bu intimal genleşme göreceli bir ölçümünü sunar ve damar boyutunda farklılıklar için normalleştirir. </li><li> % Luminal daralması ölçün: [(internal elastik lamina içinde bölgeyi - endotel hücre tabakası içinde alan) internal elastik lamina ile / alan)] * 100. Bu intimal genişlemesi ve damar duvarının yeniden (içe veya dışa doğru) bir kombinasyonu kaynaklanan lümen oklüzyon ölçüde, bir ölçü sağlar. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+coronary+disease:+the+lesions+and+the+patients.">Graft coronary disease: the lesions and the patients.</a> Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).</li><li>Foegh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection--graft+arteriosclerosis.">Chronic rejection--graft arteriosclerosis.</a> Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circulation research. 100, 622-632 (2007).</li><li>Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spectrum+of+coronary+artery+pathologic+findings+in+human+cardiac+allografts.">The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts.</a> The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).</li><li>Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+coronary+vascular+disease+in+the+heart+transplant+patient:+coronary+arteriographic+findings.">Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings.</a> Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).</li><li>Mennander, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection+in+rat+aortic+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis.">Chronic rejection in rat aortic allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb. 11, 671-680 (1991).</li><li>Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granzymes+and+perforin+in+solid+organ+transplant+rejection.">Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection.</a> Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).</li><li>Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+cells+form+the+intimal+proliferative+lesion+in+the+rat+aortic+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis.</a> Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Yu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+interferon-gamma-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Circ Res. 109, 418-427 (2011).</li><li>Miller, C., DeWitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+humoral+responses+to+major+and+minor+histocompatibility+antigens.">Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens.</a> Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).</li><li>Tsutsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumen+loss+in+transplant+coronary+artery+disease+is+a+biphasic+process+involving+early+intimal+thickening+and+late+constrictive+remodeling:+results+from+a+5-year+serial+intravascular+ultrasound+study.">Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 104, 653-657 (2001).</li><li>Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bim+regulates+allogeneic+immune+responses+and+transplant+arteriosclerosis+through+effects+on+T+cell+activation+and+death.">Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).</li><li>Ho, M. K., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution,+structural+characterization,+and+biosynthesis+of+Mac-3,+a+macrophage+surface+glycoprotein+exhibiting+molecular+weight+heterogeneity.">Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity.</a> J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).</li><li>Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+against+macrophages+that+overlap+in+specificity+with+fibroblasts.">Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts.</a> Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+basis+of+transplant-associated+arteriosclerosis.">Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).</li><li>Skaro, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+mediate+aortic+allograft+vasculopathy+by+direct+killing+and+an+interferon-gamma-dependent+indirect+pathway.">CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway.</a> Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).</li><li>Tellides, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Soulez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perlecan+fragment+LG3+is+a+novel+regulator+of+obliterative+remodeling+associated+with+allograft+vascular+rejection.">The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection.</a> Circ Res. 110, 94-104 (2012).</li><li>Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perforin+mediates+endothelial+cell+death+and+resultant+transplant+vascular+disease+in+cardiac+allografts.">Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts.</a> Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).</li><li>Choy, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granzyme+B+induces+endothelial+cell+apoptosis+and+contributes+to+the+development+of+transplant+vascular+disease.">Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease.</a> Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).</li><li>Reis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+remodeling+of+advanced+atherosclerotic+plaques+of+the+apolipoprotein+E-deficient+mouse+in+a+novel+transplantation+model.">Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model.</a> Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).</li><li>Potteaux, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressed+monocyte+recruitment+drives+macrophage+removal+from+atherosclerotic+plaques+of+Apoe-/-+mice+during+disease+regression.">Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression.</a> J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).</li></ol>

Immün aracılı vasküler reddi ve TA araştırılması için de faydalıdıdr farelerde aşılama aort araya yerleştirilmesi için bir protokol tanımlamışlardır. Bu model TA nedenleri olarak, yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini araştırmak için kullanılabilir. Bu TA 14,17-21 adaptif bağışıklık, sitotoksik T hücre yanıtları, sitokinin aracılık ettiği bir CD4 T hücre yanıtlarının efektör ve antikor-aracılı greft hasarının önemli bir rol oluşturulması için geçmişte...

Geçtiğimiz 30 + yıl içinde, immunsupresif ilaçların gelişmeler nedeniyle akut ret greft reddi azalmış fakat kronik ret ana sorun olmaya devam etmektedir. Kronik kalp transplant reddi ana tezahürü nakli damar sertliği (TA) 1,2 olduğunu. Bu durum, intimal hiperplazi ve allogreft arterlerin vazomotor disfonksiyon ile karakterizedir ve alıcı bağışıklık sisteminin endotel ve düz kas hücrelerinin imünolojik hedefleme bir sonucu olarak gelişir. konak gemiler 3 tutumlu iken sebebiyle yabancı peptit-majör histokompatibilite kompleksi (MHC) tanınması greft damar spesifik hedefleme sadece greft arterlerde ta gelişmesi ile vurgulanır. Buna uygun olarak, alıcı verici veya alıcı T ve B hücreleri 4 yoksun için genetik olarak özdeş olduğu zaman ta deneysel oluşmaz gözlemdir. İmmün aracılı vasküler yaralanma ve disfonksiyonunn, TA 5 intimal kalınlaşma ve fibroz gelişimi, hem de lipid ve ECM proteinleri olarak anormal birikimi neden olur. Iç tabakasındaki kalınlaşma belirgin tüm arteryel ağaç 4-6 boyunca eş olma eğilimindedir. Greft kaybı ve ölüm genellikle allogreft arterlerin 4 lümen tıkanıklığı sonucu ilerleyici iskemi sonucu meydana gelir. 1991 yılında, Mennander ve ark., 7 TA model sıçanlarda aort interpozisyon modeli öncülük etmiştir. Çeşitli gruplar, daha sonra farelerde kullanım için bu prosedürü adapte edilmiştir. Bu modelde, allogreft aort segmentleri TA karşılaştırılabilir özellikler, klinik nakli gözlenen olan lezyonlar gelişir. Bu düz kas-benzeri hücreler ve alıcı lökositlerin 7 birikimi ile karakterize edilen, intimal kalınlaşma içerir. Son 2 yılda bu model, vasküler yaralanma, reddedilme ve TA mekanizmalarına önemli fikir üretmek için kullanılır olmuştur. Bizi olabilired arteriyel patoloji sırasında bağışıklık ve vasküler yanıtlarına ilişkin soruları incelemek. antijen uyumsuzluğu etkileri seçimi uygun bu sorulara cevap yeteneği. Tam MHC bariyerleri boyunca nakli, organ transplant reddi dahil olmak üzere bilinen immün cevapların kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu greft türetilmiş hücreler tarafından sunulan doğrudan CD4 ve CD8 T hücresi tanıma ve yabancı peptit-MHC hedef içerir, dolaylı CD4 (ve muhtemelen CD8), T hücresi tanınması ve sunucu hücreler alıcının antijen tarafından sunulan greft türetilen alloantijenlere hedeflenmesi ve antikor vasküler hücre yüzeylerinde 8 alloantijenlere aracılı tanınması. Bununla birlikte, tam bir MHC-uyumsuz deneylerde yaralanması vasküler müdahale, klinik olarak gözlenenden daha farklı olabilir. Johnson ve ark. 9 gösterdi, bu en iyi şekilde tam bir MHC uyumsuzluğu bariyer boyunca nakledilen aort interpozisyon greft bölgesineointimal Hücreler, alıcı kökenli olup donör kökenlidir. Bu en intimal düz kas hücreleri, donor kaynaklı 9,10 insan nakli gözlenenden farklıdır. Bu sınırlama için hesap için, küçük doku uygunluk antijeni uyumsuzlukları genelinde aşılama barındırır alternatif deneysel modeller daha yakından klinik transplantasyon 11 gözlenen benzeyen vasküler yanıtları tetikleyen geliştirilmiştir. Bu alternatif modeller önemli sonuçlar için izin yaparken TA, tamamen klinik ortamda meydana olanlar yeniden teslim olmayan küçük histokompatabilite antijen uyumsuz greft vasküler ret neden immünolojik süreçlerin gelişimini sürücü damar yanıtları ile ilgili yapılacak. Örneğin, küçük doku uygunluk antijenleri aşı reaktif antikorlar 12 ile kötü tanınır. Yukarıdaki hususlar göz önüne alındığında, patolojik sorunlarınızda dikkate almak önemlidiraort interpozisyonu modelinde kullanılan antijen uyumsuzluğu türünü seçerken üzerinde incelenen. Burada fare aort interpozisyon aşılama için ayrıntılı bir protokol açıklar. Biz tam MHC-uyumsuz farelerde aynı protokolü diğer antijen uyumsuz fare suşları arasında aşılama için kullanılan arasındaki interpozisyonu aşılama açıklar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name&#160;</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J (H-2b)</td>
			<td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td>
			<td>Strain# 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balb/cBYJ</td>
			<td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td>
			<td>Strain# 001026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Ketamine Hydrochloride Injection USP 100 mg/ mL</td>
			<td rowspan="2">Ketalean</td>
			<td rowspan="2">DIN 00612316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine Injection 20 mg/mL</td>
			<td>Rompum</td>
			<td>DIN 02169592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen Injection 100 mg/mL</td>
			<td>Anafen</td>
			<td>DIN 01938126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol Tartrate&#160;injection 10 mg/mL</td>
			<td>Torbugesic</td>
			<td>DIN 008450000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Injection 0.3 mg/mL</td>
			<td>Reckitt Benckiser</td>
			<td>B.N. 5241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride sterile injectable solution</td>
			<td>Antisedan</td>
			<td>DIN 02237744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection, USP, 1000 units/mL</td>
			<td>McKesson Distribution</td>
			<td>DIN 02264315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tears naturale ophthalmic ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>DIN 02082519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride, sterile</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringer&#8217;s solution, sterile</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection, sterile, 10 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Loris</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorohexidine Gluconate 4% w/v</td>
			<td>Germi-Stat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Polyamide Monofilament</td>
			<td>AROSurgical Instruments</td>
			<td rowspan="2">T4A10Q07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture, 10-0 suture, 70 microns</td>
			<td>Corporation</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue monofilament suture 5-0, P3 needle</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8698G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1cc TB insulin syringe with 28G 1/2</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 309309</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G 7/8, hypodermic needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 305124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G 1/2, hypodermic needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>REF 305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colibri Retractor- 1.5cm spread 4cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17000-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T CAF-4 Clip applying forceps, without lock</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00072-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supergrip forceps, S&#38;T</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical No.5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lexer Baby Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14078-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Adson forceps serrated</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-Tubingen microscissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15003-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro clamps, b-1; 3.5mm x 1mm; 7mm length</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00396-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe-forceps, 10cm 1x2 teeth</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11054-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo with lock and tungsten jaws</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot glass bead sterilizer</td>
			<td>Inotech 250</td>
			<td>IS-250 - Steri-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven gauzes</td>
			<td>Progene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beard Trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse model of alloimmune-induced vascular rejection and transplant arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

Bu modelde, bir Balb / cYJ fare abdominal aort, bir C57BL / 6 alıcı infrarenal aort içine yerleştirilir. Bu allogreft arterler hedef Alloimmün tepkilerin kapsamlı bir değerlendirmesini sağlar. Bu modelde immün aracılı vasküler yaralanma intimal kalınlaşma, luminal daralmasının ve immün hücre toplanmasından sonuçlanan vasküler onarım yanıtları başlatır (Şekil 1 ve 2). Bu kriterler daha sonra Alloimmün tepkilerin şiddeti, vasküler ret, ve TA için bir okuma o...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Aloimmün kaynaklı Vasküler Reddi ve Nakli arterioskleroz Fare Modeli

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

mouse-model-alloimmune-induced-vascular-rejection-transplant

Research

JoVE Journal

Medicine

8.4K Görüntüleme.  Simon Fraser University. We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure. 

Video: Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Tıp

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Graft arteriosclerois (GA), also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over months to years in transplanted organs characterized by diffuse, circumferential stenosis of the entire graft vascular tree. The most critical component of GA pathogenesis is the proliferation of smooth muscle-like cells within the intima. When a human coronary artery segment is interposed into the infra-renal aortae of immunodeficient mice, the intimas could be expand in response to adoptively transferred human T cells allogeneic to the artery donor or exogenous human IFN-&gamma; in the absence of human T cells. Interposition of a mouse aorta from one strain into another mouse strain recipient is limited as a model for chronic rejection in humans because the acute cell-mediated rejection response in this mouse model completely eliminates all donor-derived vascular cells from the graft within two-three weeks. We have recently developed two new mouse models to circumvent these problems. The first model involves interposition of a vessel segment from a male mouse into a female recipient of the same inbred strain (C57BL/6J). Graft rejection in this case is directed only against minor histocompatibility antigens encoded by the Y chromosome (present in the male but not the female) and the rejection response that ensues is sufficiently indolent to preserve donor-derived smooth muscle cells for several weeks. The second model involves interposing an artery segment from a wild type C57BL/6J mouse donor into a host mouse of the same strain and gender that lacks the receptor for IFN-&gamma; followed by administration of mouse IFN-&gamma; (delivered via infection of the mouse liver with an adenoviral vector. There is no rejection in this case as both donor and recipient mice are of the same strain and gender but donor smooth muscle cells proliferate in response to the cytokine while host-derived cells, lacking receptor for this cytokine, are unresponsive. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, both models can be used to assess the effect of specific genes on GA progression. Here, we describe detailed protocols for our mouse GA models.

We describe protocols for our mouse graft arteriosclerois (GA) models which involve interposition of a mouse vessel segment into a recipient of the same inbred strain. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, the model can assess the effect of specific genes on GA.

Greft damar sertliği için fare modelleri

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

Fare Aortocaval Fistül Teknik Yönleri

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique was developed and reported in 2001 by Niimi. Described here are the techniques that have evolved over more than a decade in the hands of three surgeons (Plenter, Grazia, Pietra) in our center. These techniques are now being passed on to a younger generation of surgeons and researchers.
Based largely on the Niimi experience, the procedures used have evolved in the fine details - details which we will endeavor to relate here in such a way that others may be able to use this very useful model. Like Niimi, we have found that a video aid to learning is a priceless resource for the beginner.

The manuscript describes the steps required to perform the heterotopic heart transplant in the mouse.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric chloride injury is now a well-established technique to rapidly and accurately induce the formation of thrombi in exposed veins or artery of small and large diameter. This model has played a key role in the study of the pathophysiology of thrombosis, in the discovery and validation of novel antithrombotic drugs and in the understanding of the mechanism of action of these new agents. Here, the implementation of this technique on a mesenteric vessel and carotid artery in mice is presented. The method describes how to label circulating leukocytes and platelets with a fluorescent dye and to observe, by intravital microscopy on the exposed mesentery, their accumulation at the injured vessel wall which leads to the formation of a thrombus. On the carotid artery, the occlusion caused by the clot formation is measured by monitoring the blood flow with a Doppler probe.

The FeCl3 induced thrombosis model in mice is described herein. A method to monitor thrombus growth by intravital microscopy observation on a mesenteric vessel and by blood flow measurement in the carotid artery is presented.

Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

Fare Arteriovenöz Fistül Endotelyumunun için intraluminal Drug Delivery

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

Kol tekniği aort transplantasyonu - eğitici bir Video bir fare Model kullanma

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of aortic disease exist, in vivo imaging of the vasculature has been limited. In recent years, micro-computerized tomography (micro-CT) has emerged as a preferred modality for imaging both large and small vessels both in vivo and ex vivo. In conjunction with a method of vascular casting, we have successfully used micro-CT to characterize the frequency and distribution of aortic pathology in &#946;-aminopropionitrile-treated C57/Bl6 mice. Technical limitations of this method include variations in the quality of the perfusion introduced by poor animal preparation, the application of proper methodologies for vessel size quantification, and the non-survivability of this procedure. This article details a methodology for the intravascular perfusion of a lead-based radiopaque silicone rubber for the quantitative characterization of aortopathy in a mouse model of aneurysm and dissection. In addition to visualizing aortic pathology, this method may be used for examining other vascular beds in vivo or vascular beds removed post-mortem.

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &amp;#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

This article describes a detailed methodology of using a radiopaque lead-based silicone rubber to perfuse the murine vasculature for aortic diameter quantification in a mouse model of aortic aneurysm and dissection.

Aortopathy aort anevrizması β-aminopropionitrile-indüklenen ve diseksiyon, fare modeli nicel mikro-CT Analizi

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...