Yayın için Harçlar Cerus Corp, INTERCEPT Kan Sistemi üreticisi tarafından sağlanır.

1. Tam Kan Toplama <ol><li> 450 ml üst gönüllü bağışçılardan kan toplayın / alt koleksiyonu lokal kan toplama kurallarına göre ayarlar. </li><li> Tam kan santrifüjleme ve ayırmasından önce bir soğutucu plaka üzerinde 2 saat arasında, en az saklanır. </li></ol> 2. Buffy Coat Hazırlık <ol><li> Kırmızı kan hücreleri, buffy coat, ve plazma: üç kat içine kan ayırmak için bir sabit döndürme ile tam kan santrifüjleyin. Ikinci Santrifüj değerleri ± 2 ° C&#39;de 22 dakika süreyle 4,880 11 RCF idi </li><li> Toplama kaplarına buffy coat bırakarak, üst uydu çantası ve alt uydu torbaya kırmızı kan hücreleri (RBC) içine plazma ifade etmek için bir otomatik kan ayırıcı kullanılır. Buffy kat sırasıyla yaklaşık 48 ml ve% 37, olan hacim ve hematokrit aralıkları demek hedefleyin. </li><li> Buffy-mont 22 ± 2 ° C&#39;de trombosit karıştırıcı gecede saklanır </li></ol><ol><li> Steril connect 7 buffy mont ve paralel çizgiler bulunan bir tren yapılandırmada SSP + trombosit katkı çözeltisi (PAS), 300 ml tren uzunluğunu azaltmak için; PAS trenin üstünde olmalıdır. PAS ve ilk buffy coat arasındaki çizgi Kelepçe. </li><li> Buffy coat birimler arasındaki steril bağlantıları açın ve buffy kat son kabın içine boşaltın. </li><li> Kaynak ve PAS ve ilk buffy coat arasındaki kelepçesini açın. Katkı çözelti üçte biri sırayla buffy coat kapların her biri yoluyla durulama izin verin. 2 kez daha kalan PAS yarısını kullanarak her zaman tekrarlayın. </li><li> Ortalama buffy coat havuz hacminin yaklaşık olarak 600 ml olmalıdır. Bireysel buffy kat hedef hacmi ve hematokrit yerine getirilirse, plazma oranı 32 olacak -% 47 daha sonra işlem içinde INTERCEPT patojen inaktivasyonu tedavisi için gerekli olduğu gibi. </li><li> Boş SSP + ve buffy atınkat kaplar. </li><li> Optimum trombosit kurtarma için, santrifüj önce 1 saat boyunca karıştırıcı üzerinde havuz tutmak. </li><li> Steril buffy coat havuza entegre leukoreduction filtre ile trombosit saklama kabı bağlayın. </li><li> Süspansiyon trombositlerin (9 dak, 20 sn için 462 RCF) gelen kırmızı kan hücreleri ayırmak için buffy coat havuz &quot;yumuşak spin&quot; gerçekleştirin. Trombosit saklama kabı içine leukoreduction filtre üzerinden otomatik bir kan ayırıcı kullanarak trombosit süspansiyonu ifade. </li><li> 420 ml&#39;lik hacim, 2,5-7,0 x 10 11 trombosit dozu ve ≤ 4 x 10 6 / ml kırmızı hücreleri - Daha önce açıklandığı gibi, işleme gereklilikleri trombosit süspansiyonu INTERCEPT 300 ml işleme özelliklerine uygun olduğundan emin olun. </li></ol> 4. Tedavi KESMENOKTASI <ol><li> Toplandıktan sonra, 1. Gün sonunda (gün 0 toplama günü) önce INTERCEPT tedaviyi gerçekleştirin. </li><li> INTERCEPT İşleme Seti unwrapŞeffaf plastik torbadan Çift Saklama Kapları ile. </li><li> Steril INTERCEPT işleme sette amotosalen kabın hortumuna trombosit süspansiyonu konteyner bağlayın. </li><li> Yerel gereksinimler aşağıdaki uygun kan ürünü tanımlama ile INTERCEPT işleme seti saklama kapları etiketleyin. </li><li> Trombositler asın ve aydınlatma kabına akmaya amotosalen çözüm sağlayan, ilk amotosalen kapsayıcısındaki alt kanül bölünürler. Trombositler aydınlatma kabına amotosalen konteyner akmasına izin amotosalen kapsayıcısındaki üst kanül kırın. </li><li> Yavaşça trombosit ve amotosalen karışımı karıştırın ve amotosalen kabına aydınlatma kabından hava ifade. </li><li> Hortumun yaklaşık 4 cm, doldurma borusuna trombosit karışım küçük bir miktar ifade eder. Bu tüp ve aydınlatma kabı hem de trombositler patojen inactivati ​​geçmesi sağlanırtedavi. </li><li> Aydınlatma konteyner ve amotosalen konteyner arasındaki boru mühürleyin. Aydınlatma konteyner uzanan boru yaklaşık 4 cm&#39;den daha bırak. Çıkarın ve atın boş trombosit ve amotosalen kaplar ve örnekleme torbalar üzerindeki kelepçe kapatın. </li><li> Soldaki büyük bölme içinde aydınlatma kap ve sağ tarafta daha küçük bölme içinde düzenleyici ile aydınlatıcı içine işleme grubu yerleştirin. </li><li> Aydınlatıcı içine bağışı kimliği, ürün kodu, ve işleme set lot numarası girmek için el barkod aygıtı kullanın. Metal kapağını kapatın ve aydınlatıcı grafik arayüzü istendiğinde, çekmeceyi kapatın. Aydınlatma başlatmak için &quot;Başlat&quot; düğmesine basın. </li><li> Aydınlatma sonra aydınlatıcıdan işleme seti kaldırın. Aydınlatıcı otomatik işlenmiş trombosit birim (ler) için tedavi raporu yazdırır. </li><li> Organizatörü konteyner açmak ve p asmaklatelets ve işlem seti, aydınlatma kabın çıkışındaki kanül kırmak ve trombositler bileşik emme cihazı (CAD) bir kaba akmasına izin verir. </li><li> Bir plazma çıkarıcı kullanarak aydınlatma kabına CAD kabından hava ifade, CAD gofret eğmemeye bakımı. </li><li> CAD konteynerin giriş noktasına yakın boru kapatılmalıdır. Çıkarın ve boş aydınlatma kabı atın. </li><li> En az 6 saat boyunca bir karıştırıcı üzerinde trombosit bağlı depolama kapları ile CAD konteyner, ancak en fazla 16 saat yerleştirin. Bu ≤ 2 uM&#39;lik bir konsantrasyona kalıntı amotosalen azalma ile sonuçlanacaktır. </li><li> CAD Tedaviden sonra, karıştırıcı gelen trombosit birimleri çıkarın. Trombositler asın. Kanül kırın ve trombosit saklama kapları içine akmasına izin verin. </li><li> CAD kabına saklama kapları havayı ifade eder. Rezidüel trombosit konsantresi geri akışı saklama kapları içine tarafından Letyerçekimi. Y-uydurma Yukarıda tüp mühür ve boş CAD kabı çıkarın. </li><li> Gerektiği gibi saklama kapları arasındaki yeniden dağıtın hacmi. Cilt ayarlamalar depolama konteynerleri tartı ile yapılır. Bir kaç santimetre saklama kabının giriş yukarıdaki her bir depolama konteyner için hortum mühür; 5.2 &#39;de tarif edildiği gibi bu, son ürünün bir steril bir örnek elde kolaylaştırır. </li></ol> 5. Ürün Örnekleme <ol><li> Rutin QC test için nihai depolama kapları saklama kapları üzerinde örnekleme kese kullanılarak kez tadılabilir. Bunu yapmak için, platelet birim iyice karıştırılmış sağlamak, daha sonra torba için kelepçeyi açmak ve birkaç kez sıkın. Kese trombositler ile doldurduktan sonra tüp mühürleyin. Uygun bir laboratuvar tüpüne trombosit örneği aktarın ve hemen testleri gerçekleştirin. </li><li> Bu tür bir çalışmada, doğrulama için olduğu gibi, depolama boyunca birden çok zaman noktasında örnekler elde etmek için, steril bağlamakTrombosit saklama kabı boru için yeni bir numune kabı. Trombositler de örnekleme konteynere aktarmak için önce karıştırılmalıdır emin olun. </li></ol> 6. In vitro Fonksiyonunun Değerlendirilmesi <ol><li> Bu validasyon çalışması için, in vitro değerlendirilmesi CAD tedavisi (Gün 1 veya Gün 2, CAD süresine bağlı olarak) sonra tekrar 4. Gün yapıldı (veya Gün 5) ve Günlük 7. Vitro ölçümlerde hacmi, trombosit sayımı, pH, dahil kan gazı (pO 2, pCO 2), glikoz, laktat ve dönen. </li><li> Cilt katkı maddesi çözelti içinde, trombositler &#39;in özgül ağırlık olarak 1.01 g / ml ile ağırlık ile tespit edildi. </li><li> Hemoglobin kontaminasyon bir renk skalası ile karşılaştırma kullanılarak görsel olarak değerlendirildi. </li><li> Dönen bir görsel olarak tespit edilmiştir. </li><li> Diğer testlerin metodolojisi için &quot;ekipman Tablosu&quot; na bakınız. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar D üretme süreciouble doz buffy coat trombosit hacmi ve hematokrit için hedef özelliklerine uygun bireysel buffy mont üretimi ile başlar. Bu son işlem doğrulama sırasında bireysel buffy kat hematokrit ölçmek için pratik olmadığı gibi, biz sürekli olarak hedef hacmi ve hematokrit karşılamak olabilir sağlamak için elimizden buffy kat optimize etmek için ayrı bir çaba üstlenerek başladı. Tablo 1 de gösterildiği gibi, Optimize buffy kat 46, hacim ve hematokrit her ikisi de ± 2 ml ve 37 ±% 3, sırasıyla için hedef değerleri ile karşılaştırıldığında olumlu. Havuzlama sonra, buffy coat havuz hacminin ve hematokrit, sırasıyla, yumuşak sıkma santrifüj işleminden önce yaklaşık olarak 600 mL% 20 olmalıdır. Tablo 2 de gösterildiği gibi, havuzlar buffy coat 615 ortalama ± 5 ml; hematokrit 19 ortalama ±% 1. Bir çift doz trombosit kons içinde yumuşak sıkma santrifüj sonuçlarıINTERCEPT Kan Sistemi DS işleme seti kullanılarak patojen inaktivasyonu için girdi şartlarını karşılayacak entrate. INTERCEPT tedavi için anahtar giriş parametreleri hacmi, trombosit, plazma oranı ve RBC içerik bulunmaktadır. Ayrıca, buffy coat havuzu ile karşılaştırıldığında trombosit konsantresi içinde trombositlerin ≥% 75 kurtarmak hedefliyoruz. Yerel gereksinimlere Per, beyaz kan hücresi (WBC) kirlenme &lt;1x10 6 / birim olmalıdır. Trombosit, doğrulama içinde konsantre KESMENOKTASı tedavisi yanı sıra WBC kirlenme ve Tablo 3&#39;te gösterildiği gibi trombosit kurtarma için hedefler için anahtar parametreler araya. Patojen inaktivasyonu için INTERCEPT işlemi tek bir INTERCEPT işleme seti kullanarak çift doz trombosit konsantresi yapılır. Işlem seti, tedavi edilen birim yol tamamlanmasından az iki ayrı terapötik trombosit doz halinde bölünebilir izin veren iki tamamlayıcı depolama konteynerleri içermektedirogen inaktivasyonu süreci. Avrupa yönergeleri test birimlerinin% 75 ≥ 200x10 9 trombositler içermesini gerektirir başına terapötik dose1; İsveç&#39;teki yerel gereksinimler test birimlerinin% 75 içerdikleri&gt; doz başına 240x10 9 trombositler gerektirir. INTERCEPT Tedaviden sonra, ortalama trombosit içeriği 265 oldu ± 22 x10 9 (n = 24). Ayrıca, ünitelerin% 88 yerine veya terapötik doz başına 240x10 9 trombositler aştı; Bu Avrupa yönergeleri ve İsveç yasalarına hem dahilindedir. Çift doz buffy coat hazırlanması ve sırasıyla KESMENOKTASı tedavi süreçlerinin bir örnek için Şekil 1 ve 2&#39;ye bakınız. Bu doğrulama için, trombosit in vitro özellikleri INTERCEPT tedavisi (bireysel depolama kapları içine bölünmüş sonra yani) sonra konsantreleri ölçülür; parametreleri depolama 7 gün boyunca ölçüldü. Ortalama ve standart sapma için toplandıtrombosit dozunun, pH, pO2, pCO 2, laktat üretim ve glukoz tüketimi. Şekil 3, depolama, 7 gün boyunca KESMENOKTASı tedavi sonrası bölünme ürünlerinin her biri içinde KESMENOKTASı tedavi ve ortalama trombosit doz verilmeden önce iki doz trombosit konsantresi trombosit başlangıç ​​dozu ortalaması gösterilmiştir. Depolama sırasında Trombosit kaybı yaklaşık% 9 idi. Bu azalma konvansiyonel trombositlerin depolama sırasında trombositlerin beklenen kayıp farklı değildir. 2 Tablo 4 tek birimler halinde tedavi ve bölme sonra INTERCEPT trombositlerin in vitro özelliklerini özetlemektedir. Avrupa standartlarına Per, trombositlerin pH raf ömrünün sonuna kadar 6.4 üzerinde kalmalıdır. Işlem sırasında, trombosit pH değeri hafifçe trombosit konsantrasyon, ses ve trombosit sto gaz geçirgenliği esas damla konsantreöfke konteyner. Şekil 4, depolama, 7 gün boyunca bölünmüş trombosit ürünlerin pH göstermektedir. Depolama sırasında, pH kararlı olduğunu ve iyi işleme ihtiyaç içinde yapılmaktadır. Olarak Şekil 5A ve 5B, trombosit O2 tüketimi ve CO 2 de gösterildiği depolama 7 gün boyunca PL2410 kap içinde INTERCEPT trombositlerinde solunum devam etmektedir. Şekil 6A ve 6B, depolama, 7 gün boyunca laktat ve glikoz düzeyleri göstermektedir . Trombosit glukoz tüketimi ve laktat üretimi depolama 7 gün boyunca birbirleri ile tutarlıdır. 5 birim glikoz seviyesi daha az 1.11 mmol / l (glükoz tahlil için alt sınır) vardı. Özellikle, hacmi, trombosit, plazma oranı ve kırmızı bl; buffy coat hazırlanması ve havuzlama doğrulama üretilen trombosit olduğunu KESMENOKTASı tedavisi için giriş kriterlerini karşılayan konsantreleriood hücre kontaminasyonu. Nihai birimleri trombosit dozu ve pH dahil depolama 7 gün içinde geçerlilik kriterlerini karşıladı. <table border="1"><tbody><tr><td> Parametre </td><td> Hedef Aralığı </td><td> Sonuçlar ± SD </td></tr><tr><td> Hacim (ml) </td><td> ~ 48 </td><td> 46 ± 2 </td></tr><tr><td> Hematokrit (%) </td><td> ~ 37 </td><td> 37 ± 3 </td></tr><tr><td> Havuzlama önce zaman tutun </td><td> Karıştırıcı üzerinde Overnight </td><td> Karıştırıcı üzerinde Overnight </td></tr></tbody></table> Bireysel Buffy Palto (n = 19) Tablo 1. Özellikler. <table border="1"><tbody><tr><td> Parametre </td><td> Hedef Aralığı </td><td> Sonuçlar ± SD </td></tr><tr><td> Hacim (ml) </td><td> ~ 600 </td><td> 615 ± 5 </td></tr><tr><td> Hematocrit (%) </td><td> ~ 20 </td><td> 19 ± 1 </td></tr><tr><td> Santrifüj önce zaman tutun </td><td> Karıştırıcı üzerinde 1 saat </td><td> Karıştırıcı üzerinde 1 saat </td></tr></tbody></table> Buffy Coat Havuzları (n = 12) Tablo 2. Özellikler. <table border="1"><tbody><tr><td> Parametre </td><td> Hedef </td><td> Sonuçlar ± SD </td></tr><tr><td> Hacim (ml) </td><td> 370-420 </td><td> 404 ± 8 </td></tr><tr><td> Trombosit sayımı (x10 9 / birim) </td><td> 250 - 700 </td><td> 577 ± 62 </td></tr><tr><td> Trombosit kurtarma (%) Ortalama </td><td> ≥ 75 </td><td> 75 ± 4 </td></tr><tr><td> Plazma oranı (%) </td><td> 32-47 </td><td> 38 ± 1 </td></tr><tr><td> RBC (x10 6 / ml) </td><td> ≤ 4 </td><td> 1.2 ± 0.4 </td></tr><tr><td> WBC (x10 6 </s&gt; / birim) </td><td> ≤ 1 </td><td> 0.11 ± 0.1 </td></tr><tr><td> INTERCEPT (saat) önce zaman tutun </td><td> Günde 1 ≤ sonu </td><td> Günde 1 ≤ sonu </td></tr></tbody></table> Çift Doz Trombosit Tablo 3. Özellikleri (n = 12) konsantreler. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Ortalama ± SD </td><td> Min </td><td> Maksimum </td></tr><tr><td> Hacim (ml) </td><td> 199 ± 16 </td><td> 182 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> Trombosit sayımı (x10 9 / birim) </td><td> 265 ± 22 </td><td> 225 </td><td> 292 </td></tr><tr><td> pH (22 ° C) </td><td> 6.9 ± 0.1 </td><td> 6.8 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> pO 2 (kPa) </td><td> 21.4 ± 4.8 </td><td> 12.8 </td><td> 27.3 </td></tr><tr><td> pCO 2 (kPa) </td><td> 4.3 &amp; plusmn; 0.4 </td><td> 3.3 </td><td> 4.9 </td></tr><tr><td> Laktat (mmol / l) </td><td> 9.1 ± 1.7 </td><td> 6.8 </td><td> 12.4 </td></tr><tr><td> Glukoz (mmol / l) </td><td> 5.3 ± 0.9 </td><td> 3.7 </td><td> 6.5 </td></tr></tbody></table> INTERCEPT Tedavi Trombositler Gün 1/2 (Tek Üniteleri, n = 24) Tablo 4. Özellikler. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig1.jpg" /> Şekil 1. 7 buffy kat havuzundan bir çift doz trombosit konsantresi üretimi. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4414/4414fig2.jpg" /> Şekil 2. INTERCEPT Kan Sistemi ile çift doz trombosit konsantresi Patojen inaktivasyon. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig3.jpg" /> Şekil 3. Önce ve için trombosit dozu ortalamaINTERCEPT uygulamadan sonra 7 gün (n KESMENOKTASı önce = 12; KESMENOKTASı sonra n = 24). <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4414/4414fig4.jpg" /> Şekil 4. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra trombosit pH ± SD. <img alt="Şekil 5A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5a.jpg" /> Şekil 5A. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra pO 2 ± SD. <img alt="Şekil 5B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5b.jpg" /> Şekil 5B. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra pO 2 ± SD. <img alt="Şekil 6A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6a.jpg" /> Şekil 6A. KESMENOKTASI tedavisi (n = 24) sonra laktat düzeyleri ± SD. <img alt="Şekil 6B&#39;de" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6b.jpg" /> Şekil 6B. &amp; Glukoz düzeyi ortalamaplusmn; SD KESMENOKTASI tedaviden sonra (n = 24).

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components. , (2010).</li><li>Van Rhenen, D. J., Vermeij, J., Mayaudon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characteristics+of+S-59+photochemically+treated+platelet+concentrates+derived+from+buffy+coats.">Functional characteristics of S-59 photochemically treated platelet concentrates derived from buffy coats.</a> Vox Sang. 79, 206-214 (2000).</li><li>Wollowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+DNA+and+RNA+in+pathogens:+mode+of+action+of+amotosalen+HCl.">Targeting DNA and RNA in pathogens: mode of action of amotosalen HCl.</a> Transfus. Med. Rev. 31, 11-16 (2004).</li><li>Irsch, J., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+Inactivation+of+Platelet+and+Plasma+Blood+Components+for+Transfusion+Using+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM.">Pathogen Inactivation of Platelet and Plasma Blood Components for Transfusion Using the INTERCEPT Blood SystemTM.</a> Transfus. Med. Hemother. 38, (2011).</li><li>Lin, L., Dikeman, R., Molini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+treatment+of+platelet+concentrates+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light+inactivates+a+broad+spectrum+of+pathogenic+bacteria.">Photochemical treatment of platelet concentrates with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light inactivates a broad spectrum of pathogenic bacteria.</a> Transfusion. 44, 1496-1504 (2004).</li><li>Lin, L., Hanson, C., Alter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+viruses+in+platelet+concentrates+by+photochemical+treatment+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light.">Inactivation of viruses in platelet concentrates by photochemical treatment with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light.</a> Transfusion. 45, 580-590 (2005).</li><li>Allain, J. P., Cianco, C., Blajchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protecting+the+blood+supply+from+emerging+pathogens:+the+role+of+pathogen+inactivation.">Protecting the blood supply from emerging pathogens: the role of pathogen inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 19, 110-126 (2005).</li><li>Stramer, S., Hollinger, F., Katz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+infectious+disease+agents+and+their+potential+threat+to+transfusion+safety.">Emerging infectious disease agents and their potential threat to transfusion safety.</a> Transfusion. 49, 1S-29S (2009).</li><li>Nussbaumer, W., Allesdorfer, D., Grabmer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+transfusion+of+platelet+components+contaminated+with+low+levels+of+bacteria:+a+comparison+of+bacteria+culture+and+pathogen+inactivation+methods.">Prevention of transfusion of platelet components contaminated with low levels of bacteria: a comparison of bacteria culture and pathogen inactivation methods.</a> Transfusion. 47, 1125-1133 (2007).</li><li>Schlenke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+Transfusion-Associated+Graft-versus-Host+Disease+in+Blood+transfusion:+Is+Gamma-Irradiation+the+Only+Answer?+Transfus.">Protection against Transfusion-Associated Graft-versus-Host Disease in Blood transfusion: Is Gamma-Irradiation the Only Answer? Transfus.</a> Med. Hemother. 31, 24-31 (2004).</li><li>Lin, L., Corash, L., Osselear, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+Against+TA-GVHD+Due+to+Platelet+Transfusion+By+Using+Pathogen+Inactivation+with+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM+-+Gamma+Irradiation+is+Not+the+Only+Answer.">Protection Against TA-GVHD Due to Platelet Transfusion By Using Pathogen Inactivation with the INTERCEPT Blood SystemTM - Gamma Irradiation is Not the Only Answer.</a> Haematologica. 95 (Extra 1), 230-237 (2010).</li><li>Corash, L., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+processes+for+inactivation+of+leukocytes+to+prevent+transfusion-associated+graft-verus-host+disease.">Novel processes for inactivation of leukocytes to prevent transfusion-associated graft-verus-host disease.</a> Bone Marrow Transplant. 33, 1-7 (2004).</li></ol>

Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Cerus tarafından desteklenmektedir.

Buffy coat trombositler birkaç işlem adımları gerektiren trombosit adet üretim toplam maliyeti çarpanlarına olmalıdır personeli zaman, sarf malzemeleri, ekipman ve atıklar dahil post-toplama maliyetleri, sonuç. Her buffy coat gelen trombosit verimi (buffy coat hacmi ve hematokrit optimize yoluyla) Geliştirilmesi yedi buffy kat havuzundan bir çift doz buffy coat trombosit ünitesi üretimini sağlar. Bu iyileştirme işlemi gerçekleştirildiğinde, buffy kat sayısı trombosit doz, sabit bir sayı üretmek için gerekli azaltılabilir, böylece buffy kat genel kullanımını geliştirmek ve ilave trombosit üretimi (PC) konsantre olanak tanır. Personel zaman yanı sıra havuzlama setleri, trombosit katkı çözeltisi, steril bağlantısı gofret, filtre setleri ve santrifüj işlemleri gibi sarf ve ekipman maliyetlerini% 50 kadar azalır. Trombosit üretimini optimize edip, thi ilişkili maliyetleri azaltmanın yanı sıras havuzlama yöntemi bize de bizim transfüzyon alıcılara gelişmiş koruma sağlamak için izin, KESMENOKTASI ikili saklama kabı işleme seti ile kullanmak için giriş gereksinimi karşılayan bir trombosit konsantresi (PC) üretebilirsiniz. Patojen inaktivasyonu için INTERCEPT Kan Sistemi nükleik asit çoğaltma ve hastalığa neden yapamaz render patojenlerin önlenmesi, kovalent çapraz bağ DNA ve RNA amotosalen ve ultraviyole A (UVA) ışık kullanır. 3. Bu etkili virüs, bakteri gibi patojenlerin geniş bir yelpaze inaktive , parazitler ve kirletici donör beyaz kan hücreleri. 4-6 KESMENOKTASI yeni bir test geliştirdi ve sonuçta uygulamak için önemli bir finansal yatırım gerektiriyor ise tarihsel önemli bir gecikme içerir çıkan patojenler için mevcut test paradigma, bir alternatif sağlar zaman bir test kullanılabilir hale gelir. 7,8 ayrıca gereksiz emniyet measu bir alternatif sağlayabilirbakteriyel algılama 9 ve gama ışınlama gibi res. Ayrıca 10-12, KESMENOKTASI bize çift doz trombosit birimleri tedavi sağlayan üretim verimliliği faydaları ve bize bizim bütçe uygun olur. KESMENOKTASı ve çift doz buffy coat yöntemi kan merkezi iş akışları çeşitli adapte edilebilir. Örnek olarak, tam kan koleksiyon 500 ml &#39;ye edilebilir; koleksiyonları da 22 gece boyunca saklanabilir ° C ayırma ile elde edilebilir. Buna ek olarak, alternatif bir buffy coat biriktirme yöntemi mümkün değildir (örneğin bir ahtapot yöntem yerine bir tren metod) ve / veya otomatik bir cihaz (örneğin TACSI) geri kalan kırmızı hücrelerden ikinci santrifüjleme ve trombosit süspansiyonu ayrılması için kullanılabilmektedir . Artmış trombosit içerik gerekiyorsa, çeşitli teknikler trombosit sayımı, tam kan gecelik inkübasyon, adjus dayalı donörlerin ön seçimi de dahil olmak üzere mevcutsantrifüj ayarlar tment, 7 ya da yerine 8 buffy kat bir havuz sunulabilir. Araya gelme sınırlaması nedeniyle mevcut ve santrifüj kova kapasitesi setleri, buffy coat havuzunun toplam hacmi yaklaşık 600 ml olmalıdır. Bu protokolü açıklanan santrifüj işlemi ve ayarlar 7 buffy kat bir havuz için KESMENOKTASI parametreleri karşılayan ürünü elde etmek için optimize edilmiştir. Havuzda buffy kat sayısı değiştirilirse santrifüj ayarlarını modifiye edilmelidir. Bazı ülkelerde, asgari trombosit dozu yüksek ve QC gereksinimleri İsveç&#39;te daha katıdır. Bu nedenle, bizim sonuçlar evrensel olarak uygulanabilir olmayabilir. Bu ülkelerde, önceki KESMENOKTASI tedaviye çift doz PC KESMENOKTASI tedavi ve bölünme sonra yerel gereksinimlerini karşılamak amacıyla trombositlerin sayıda içermesi gerekir. Çünkü maksimum trombosit içeriği ve tedavi volümü for INTERCEPT sırasıyla 7x10 11 trombosit ve 420 ml &#39;dir, KESMENOKTASI işleme gereksinimlerini aşan veya iki terapötik doz bölünebilir yetersiz trombosit içeriğe sahip birimlerinin yüzdesi gibi trombosit dozu, QC kriterler için yerel gereksinimler gibi faktörlere bağlı olarak değişir buffy coat optimizasyon sonuçları ve üretim istikrarı. Bir çift doz PC INTERCEPT işleme gereksinimlerini aşarsa, elle gereksinimlerini karşılamak için ayarlanabilir ve daha sonra tedavi edilebilir. 7-buffy coat havuzu KESMENOKTASI sonra bir çift doz ürün için yetersiz trombosit verir bu birkaç kez, biz KESMENOKTASI tedavi gerçekleştirmek için değil seçer. Alternatif olarak, diğer kan merkezleri açarak tüm birimler üzerinde patojen inaktivasyonu gerçekleştirerek, tek doz KESMENOKTASI işleme seti (Büyük Hacimli kümesi yani) ile PC tedavi ve tek bir büyük terapötik doz olarak PC saklamayı seçebilirsiniz. Biz karşılamak sağlamak için bizimQC gereksinimleri ve patojen mümkün olan trombosit birimlerinin çok, biz havuza zaman havuzda 5.6x10 11 trombositlerin az trombosit içeriği neden olur, donör trombosit sayımı esas buffy kat seçin inaktive eder. Bu INTERCEPT tedavi sonrası iki tedavi edici dozlarda üretmek için yeterli trombosit içeriği sağlar. Bizim doğrulama 7 tam kan türetilmiş buffy coat birimleri başarıyla toplanmış ve trombositler için INTERCEPT işlemi ile tedavi, imalat (İsveççe gereksinimleri ve Avrupa kılavuzlar) ve hastaların desteği için kabul kriterlerini karşılayan 2 patojen inaktive trombosit ürünler elde edilebileceğini göstermektedir klinik uygulama kılavuzları ve İsveç&#39;te standart trombosit infüzyonu yöntemlere göre trombosit transfüzyonu gerektiren.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material / Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Whole blood donation, primary separation, and platelet production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>R6485</td>
			<td>Top/Bottom set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated component extractor</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>Optipress-II</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood mixer and balance system</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Easymix V3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet leukocyte filtration set</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>K4R7042</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>Roto Silenta 63 RS</td>
			<td>Version 5.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet additive solution - SSP+</td>
			<td>MacoPharma</td>
			<td>SSP2030U</td>
			<td>300 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubing welder</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>T-SCD</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>INTERCEPT treatment &amp; storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT processing set</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT2503</td>
			<td>Dual Storage (DS) set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT Illuminator</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC sample pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>FTX 1122</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200/PC3200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agitator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PF48H/PF96H</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Evaluation of in vitro Platelet Function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analyzer</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td>ABL 735</td>
			<td>Used for pH, blood gases, and lactate measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry system</td>
			<td>Ortho Clinical Diagnostic</td>
			<td>Vitros 5.1</td>
			<td>Used for glucose measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology analyzer</td>
			<td>Boule Medical AB</td>
			<td>Medonic CA620-Cellguard</td>
			<td>Used for platelet count measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td>Used for white blood cell measurement</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and pathogen inactivation of double dose buffy coat platelet products using the intercept blood system

Kan merkezleri maksimize üretim aldıkları kan ürünü bağışlardan verimi yanı sıra transfüzyon bulaşan hastalıklardan korunma dahil transfüzyon hastalar için güvenlik en üst düzeyde sağlanması da dahil olmak üzere pek çok sorun ile karşı karşıyayız. Bu sarf malzemeleri, ekipman, atık, ve diğerleri arasında personel giderleri de dahil olmak üzere işletme giderleri en aza indiren bir mali açıdan sorumlu bir şekilde yerine getirmesi gerekir. Çeşitli yöntemler trombosit transfüzyonu konsantreleri üretmek için kullanılabilir. En yaygın olanlarından biri, tek bir terapötik trombosit ünitesi (birim başına ya da yerel yönetmeliklere başına ≥ 2,0 x10 11 trombositler) altı tam kan bağış kadar gelen buffy coat tabakası havuzu tarafından hazırlanan olduğu buffy coat yöntemdir. &quot;Çift doz&quot; tam kan türetilmiş trombosit üretimi için bir prosedür sadece son zamanlarda geliştirilmiştir. Hazırlanması için yeni bir yöntem olup burada sunulançift ​​doz tam kan türetilmiş trombosit 7 buffy mont ve sonradan patojen inaktivasyonu için INTERCEPT Kan Sistemi ile çift doz birimleri tedavi havuzları yoğunlaşmaktadır. INTERCEPT virüsler, bakteriler, parazitler ve bağışlanan kan mevcut olabilir kirlenmesine donör beyaz hücreleri etkisiz hale geliştirilmiştir. , Çift Saklama Kapları (&quot;DS kümesi&quot;) ile ayarlayın INTERCEPT İşleme kullanarak çift doz buffy coat yöntemi ile KESMENOKTASI eşleştirme böylece hasta güvenliği maksimize, kan merkezleri tek bir patojen inaktivasyonu işleme seti kendi çift doz birimlerinin her tedavi sağlar maliyetleri en aza indirirken. Çift doz buffy coat yöntemi az buffy kat gerektirir ve tek doz buffy coat trombosit birimlerin hazırlanması ve tedavi ile karşılaştırıldığında% 50 (örneğin havuzlama setleri, filtre setleri, trombosit katkı çözümü ve steril bağlantı gofret) varan sarf kullanımını azaltır . Diğer maliyet tasarrufu daha az atık, daha az ekipman Maintenan dahilce, düşük güç gereksinimleri, personel zamanı azalır ve daha düşük toplama maliyeti aferez teknikle karşılaştırıldığında.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System at JoVE.com

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Bu makalede, tam kan bağışlarından hazırlanmıştır ve patojen inaktivasyonu için INTERCEPT Kan Sistemi ile tedavi çift doz buffy coat trombosit konsantreleri üretmek için Örebro Üniversitesi Hastanesi tarafından kullanılan işlem açıklanmaktadır.<em&gt; In vitro</emNihai trombosit birimlerin&gt; kaliteli depolama 7 gün içinde değerlendirilir.

INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K Görüntüleme.  Örebro University Hospital. Bu makalede, tam kan bağışlarından hazırlanmıştır ve patojen inaktivasyonu için INTERCEPT Kan Sistemi ile tedavi çift doz buffy coat trombosit konsantreleri üretmek için Örebro Üniversitesi Hastanesi tarafından kullanılan işlem açıklanmaktadır. In vitro kaliteli depolama 7 gün içinde değerlendirilir.

Video: Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Minimal Erythema Dose (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including psoriasis, acne, and eczema. The dosage of UV light is prescribed according to an individual's skin sensitivity. Thus, to establish the proper dosage of UV light to administer to a patient, the patient is sometimes screened to determine a minimal erythema dose (MED), which is the amount of UV radiation that will produce minimal erythema (sunburn or redness caused by engorgement of capillaries) of an individual's skin within a few hours following exposure. This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing. There is currently no easy way to determine an appropriate UV dose for clinical or research purposes without conducting formal MED testing, requiring observation hours after testing, or informal trial and error testing with the risks of under- or over-dosing. However, some alternative methods are discussed.

Minimal Erythema Dose MED Testing

This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing in order to determine the lowest dose of ultraviolet radiation that will cause erythema (burning) when administered to an individual.

Minimal Eritem Dozu (MED) Test

Ultraviolet radiation (UV) therapy is  sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including  psoriasis, acne, and eczema. The ...

Tıp

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The goal of computational methods for drug repurposing is to enable solutions for safer, cheaper and faster drug discovery. Towards this end, we developed a novel method that integrates genetic and clinical phenotype data from large-scale GWAS and PheWAS studies with detailed drug information on the concept of transitive Drug-Gene-Disease triads. We created "RE:fine Drugs," a freely available, interactive dashboard that automates gene, disease and drug-based searches to identify drug repurposing candidates. This web-based tool supports a user-friendly interface that includes an array of advanced search and export options. Results can be prioritized in a variety of ways, including but not limited to, biomedical literature support, strength and statistical significance of GWAS and/or PheWAS associations, disease indications and molecular drug targets. Here we provide a protocol that illustrates the functionalities available in the "RE:fine Drugs" system and explores the different advanced options through a case study.

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the &quot;RE:fine Drugs&quot; System

Here we describe a protocol using the web-based drug repurposing hypothesis generation tool: "RE:fine Drugs." This protocol can be modified to a user's preferences at the level of the query type (gene, drug or disease) and/or the range of available advanced options.

&quot;RE: İnce ilaçlar kullanılması&quot; İlaç repurposing Hipotez Üretim Sistemi

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or in buffer (washed platelets), by the use of one or a combination of agonists. The use of washed platelets separated from their plasma environment and in the absence of anticoagulants allows for studying intrinsic platelet properties. Among the large panel of agonists, arachidonic acid (AA), adenosine di-phosphate (ADP), thrombin and collagen are the most frequently used. The aggregation response is quantified by measuring the relative optical density (OD) over time of platelet suspension under continuous stirring. Platelets in homogeneous suspension limit the passage of light after the addition of an agonist, platelet shape change occurs producing a small transitory increase in OD. Following this initial activation step, platelet clots form gradually, allowing the passage of light through the suspension as a result of decreased OD. The aggregation process is ultimately expressed as a percentage, compared to the OD of platelet-poor plasma or buffer. Rigorous calibration is thus essential at the beginning of each experiment. As a general rule: calibration to 0% is set by measuring the OD of a non-stimulated platelet suspension while measuring the OD of the suspension medium containing no platelets represents a value of 100%. Platelet aggregation is generally visualized as a real-time aggregation curve. Turbidimetry is one of the most commonly used laboratory techniques for the investigation of platelet function and is considered as the historical gold standard and used for the development of new pharmaceutical agents aimed at inhibiting platelet aggregation. Here, we describe detailed protocols for 1) preparation of human washed platelets and 2) turbidimetric analysis of collagen-induced aggregation of human washed platelets pretreated with the food dye Brilliant Blue FCF that was recently identified as an inhibitor of Pannexin1 (Panx1) channels.

We describe a straightforward method for the isolation of washed platelets from human blood followed by agonist-induced platelet aggregation measurements by turbidimetry. As an example we apply this method for studying the aggregation response of human platelets to collagen after a pre-incubation with the Pannexin1 channel inhibitor Brilliant Blue FCF.

Kollajen ile indüklenen on Aggregation Pannexin1-inhibitör Parlak Mavi FCF: Türbidimetrik İnsanlar üzerinde Trombositler Yıkanmış

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Trombosit transfüzyonları Microparticles için yöntem eleme rutin

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited effect on the repair of cartilage and on bone regeneration. Platelet-rich plasma (PRP) is an autologous bioactive substance that can repair cartilage injury and accelerate bone regeneration effectively. However, reporting of PRP preparation protocols in clinical studies is highly inconsistent, with the majority of studies providing insufficient information to allow the protocol to be reproduced. We describe a repeatable method of preparing PRP visually, the treatment of KOA using PRP intra-articular injection, and methods of evaluating the outcome. PRP was prepared using manual double centrifugation. The PRP layer was extracted from peripheral blood and used for knee joint cavity injection. Evaluations included assessments of blood platelet concentrations and clinical outcomes. Preparation of PRP by manual centrifugation requires less apparatus and is less costly than plasma filtration or centrifugation using equipment. The centrifugation time of our double centrifugation method was 6 and 5 minutes for the respective centrifugations at forces of 800 and 1400 x g, respectively, to allow for the consistent preparation of standardized PRP. However, a manual method is susceptible to operator error, and PRP batch preparation is not available. Intra-articular injection of PRP proved to be an effective treatment for knee osteoarthritis. The entire treatment procedure took less than 30 minutes, the blood platelet concentration of PRP could be standardized, and treatment was proven to be effective when evaluated by follow-up.

Knee osteoarthritis is frequently seen in the orthopedic department. We introduce in detail the entire knee osteoarthritis treatment process with platelet-rich plasma injection, including preparation, procedures, and evaluation.

Hazırlık, yordamlar ve trombosit açısından zengin plazma enjeksiyon diz osteoartriti tedavisinde değerlendirilmesi

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent vasoactive agents, nitric oxide (NO), can also act as a powerful inhibitor of platelet aggregation. Direct NO detection in blood is very challenging due to its high reactivity with cell-free hemoglobin that limits NO half-life to the millisecond range. Currently, NO changes after interventions are only estimated based on measured changes of nitrite and nitrate (members of the nitrate-nitrite-NO metabolic pathway). However precise, these measurements are rather difficult to interpret vis a vis actual NO changes, due to the naturally high baseline nitrite and nitrate levels that are several orders of magnitude higher than expected changes of NO itself. Therefore, the development of direct and simple methods that would allow one to detect NO directly is long overdue. This protocol addresses a potential use of platelets as a highly sensitive NO sensor in blood. It describes initial platelet rich plasma (PRP) and washed platelet preparations and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as NO generators. Phosphorylation of VASP at serine 239 (P-VASPSer239) is used to detect the presence of NO. The fact that VASP protein is highly expressed in platelets and that it is rapidly phosphorylated when NO is present leads to a unique opportunity to use this pathway to directly detect NO presence in blood.

Here, we present a protocol to address the potential use of platelets as a highly sensitive nitric oxide sensor in blood. It describes initial platelet preparation and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as nitric oxide generators.

Nitrik oksit VASP fosforilasyon ölçme tarafından kan trombosit tabanlı algılama

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a nonmammalian animal model that is widely used as an assay system due to its short lifespan, transparency, cost-effectiveness, and lack of animal ethics issues. In this study, a method was developed to investigate the effects of different bacteria and 3,3'-diindolylmethane (DIM) on the intestinal permeability of C. elegans with a high-throughput image analysis system. The worms were infected with different gut bacteria or cotreated with DIM for 48 h and fed with fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran overnight. Then, the intestinal permeability was examined by comparing the fluorescence images and the fluorescence intensity inside the worm bodies. This method may also have the potential to identify probiotic and pathogenic intestinal bacteria that affect intestinal permeability in the animal model and is effective for examining the effects of harmful or health-promoting chemicals on intestinal permeability and intestinal health. However, this protocol also has some considerable limitations at the genetic level, especially for determining which genes are altered to control illness, because this method is mostly used for phenotypic determination. In addition, this method is limited to determining exactly which pathogenic substrates cause inflammation or increase the permeability of the worms' intestines during infection. Therefore, further in-depth studies, including investigation of the molecular genetic mechanism using mutant bacteria and nematodes as well as chemical component analysis of bacteria, are required to fully evaluate the function of bacteria and chemicals in determining intestinal permeability.

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

This protocol describes how to measure intestinal permeability of Caenorhabditis elegans. This method is helpful for basic biological research on intestinal health related to the interaction between intestinal bacteria and their host and for screening to identify probiotic and chemical agents to cure leaky gut syndrome and inflammatory bowel diseases.

Bakteri ve Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Bağırsak Geçirgenliği Üzerine Etkilerinin Ölçülmesi

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a ...

Laminectomy for the Removal of Thoracic Ossification of the Ligamentum Flavum (TOLF) Using Ultrasonic and Conventional Osteotomes

Thoracic ossification of the ligamentum flavum (TOLF) is a common cause of progressive thoracic myelopathy. TOLF is typically treated with surgical decompression. A variety of surgical techniques, including laminoplasty, laminectomy, and lamina fenestration, are used for the effective treatment of TOLF. However, traditional methods are associated with a substantial risk of perioperative complications, including dural laceration and/or iatrogenic spinal cord injury. Therefore, it is important to develop an efficient and secure surgical technique for TOLF. Herein, we describe a method for laminectomyperformed at the thoracic spine using an ultrasonic osteotome combined with a conventional osteotome. This technique can reduce intraoperative complications. This is a relatively safe and easy-to-learn method that should be recommended for the treatment of TOLF.

Laminectomy for the Removal of Thoracic Ossification of the Ligamentum Flavum TOLF Using Ultrasonic and Conventional Osteotomes

We present a methodology for using an ultrasonic osteotome combined with a conventional osteotome for laminectomy in thoracic ossification of the ligamentum flavum. This is a relatively safe and easy-to-learn method that avoids the perioperative complications associated with the conventional method.

Ultrasonik ve Konvansiyonel Osteotomlar Kullanılarak Ligamentum Flavum'un (TOLF) Torasik Ossifikasyonunun Giderilmesi için Laminektomi

Thoracic ossification of the ligamentum flavum (TOLF) is a common cause of progressive thoracic myelopathy. TOLF is typically treated with surgical ...