The authors have no acknowledgements.

1. Bakteriler Süspansiyon hazırlanması: <ol><li> Bir çizgili kültür plakasına kaynaktan, aseptik olarak steril bir aşılama döngüsü yoluyla uygun bir büyüme ortamı (Tablo 1), 100 ml içeren 250 ml&#39;lik bir steril şişeye tek bir koloni inoküle. </li><li> Düzenli büyüme kontrol 1-2 gün için uygun koşullar altında (Tablo 1) yörüngesel çalkalamalı bir enkübatörde şişeyi yerleştirin. 140 RPM çalkalama hızını ayarlayın. </li><li> Aseptik, 23 ° C&#39;de 20 dakika boyunca 3000 x g&#39;de iki steril 50 ml konik tüp ve santrifüj tüpleri içine bakteri süspansiyonu aktarın. </li><li> Süpernatant aspire ve steril pepton, 15 ml su ile birlikte her bir bakteri pelletini. Vortex gerekli. Bir boru / kap içine süspanse bakteri kültürü birleştirin. </li><li> Stok kültür titresi belirlemek için bölüm 4 başına üç nüsha olarak stok kültürü titre. </li><li> Buzdolabında 2 haftaya kadar 4 at için77; 2 ° C kadar gerekli. Yeniden titreye kullanım sırasında kültür, adım 4.8. </li></ol> 2. Trombosit Ürün Hazırlığı: <ol><li> Akredite bir kan bankasından bir standart aferez trombosit insan ürünü toplayın. Trombosit ürün aşağıdaki toplama şartlara uygun olmalıdır: 90-360 ml hacmi ve 0.8 -3.8 x 10 6 plateletler / ul konsantrasyon. <ol><li> Trombosit ürünü patojen azaltılması için işlemden önce 2 saat en az dinlenmiş emin olun. Bu 2 saat boyunca çalkalama olmaksızın, bir trombosit inkübatörde 22 ± 2 ° C &#39;de ürünler saklayın. İki saat sonra trombosit ürün trombosit kuluçka makinesi içinde 22 ± 2 ° C&#39;de çalkalandı olduğundan emin olun. Kadar 22 saat sonrası toplama ürünü kullanın. </li></ol></li><li> 3 ml&#39;lik bir enjektör 2 ml lik bir numuneyi çıkarın kullanarak trombosit ürününün pH değeri 22C ölçmek için uygulanır. Ürün sağlamak için bir kan gazı analizörü kullanın pH&gt; 6.6 vardır. Bir hematolojik analizör kullanarak trombosit ürünün trombosit konsantrasyonunu ölçmek için aynı örneği kullanın. Ürün 0,80-3,8 x 10 6 plateletler / ul toplama konsantrasyon gereksinimini karşılar olun. </li><li> Görme trombosit ürünün girdap değerlendirir. Ürün sahip bir &quot;0&quot; ürün atılır girdap. </li><li> Direkt beyaz ışık kaynağı altında trombosit çantasını tutun ve kısaca trombosit çanta sıkın. Görme trombosit numunenin dönen desen gözlemlemek. Aşağıdaki ölçeğini kullanarak ürünü Puan. NOT: 2 - Pozitif Girdap: Güçlü kontrast ile tüm torbaya boyunca görünür homojen olmayan Swirling. 1 - Intermediate Girdap: Bazı homojensizlik görünür, ama sadece birkaç yerde ve kötü kontrast. 0 - Negatif Girdap: öncesi ve trombosit çanta sıkma sonra kalan Bulanık homojenlik </li></ol> 3. Riboflavin ve UV Süreci: <ol><li> Transteril bir tüp yerleştirme aygıtı kullanılarak bir riboflavin ve UV ışığı aydınlatma ve saklama torbasına trombosit ürünü Sfer. Transferden sonra bir boru macunu kullanarak boş trombosit ünitesi toplama torbası kaldırma ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın. </li><li> Hafif koruyucu dış şal gelen stok solüsyonu riboflavin, 500 mcM 35 ml&#39;lik kese çıkarın. Steril dok işleme ve saklama torbasına giriş hattı üzerine riboflavin kiti. Içindekiler trombosit ünitesine boşalmasına izin verin. </li><li> Riboflavin kesesinden set riboflavin çantası / arıtma ve depolama çanta asmak ve yavaşça işleme ve depolama çanta dışarı ve riboflavin torbaya kalan havayı ifade eder. Trombosit ürünün küçük bir miktar sağlamak, aynı zamanda trombosit ürüne herhangi bir kalıntı riboflavin durulama riboflavin torba içine eksprese edilir. Riboflavin ve trombosit çözüm işleme ve saklama torbasına geri drenaj izin ver ve sonra giriş hattını kelepçe. Boş riboflavin çanta bize kaldırBir tüp mühürleyen ing ve biyolojik tehlikeli atık olarak boş çanta atın. </li><li> Steril dok aydınlatma ve saklama torbasına giriş hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 &quot;boru hattı. Kadın şırınga konnektörü üzerine 10 ml şırınga varil (pistonu çıkartın) takın. </li><li> Aseptik bir pipet aracılığıyla şırınga içine stok bakterilerin 5 ml ekleyin. Giriş hattı kelepçeyi açın ve bakteriler trombosit ürüne içine boşaltın. Bazı trombosit ürün, 10 ml şırınga ağzına geri akmasına izin verilerek bir şırınga gövdesi içinde durulayın. 10 ml şırınga gövdesi çıkarın. </li><li> Aseptik 30 ml şırınga takmak ve trombosit ürünün içine karıştırılır stok bakteri sağlamak için giriş bağlantı noktası iki kez en az yıkayın. Ürün iyice karıştıktan sonra, temiz bir 5-10 ml&#39;lik bir şırınga kullanın ve 2 ml ön-muamele numuneyi çıkar. Aşılama aşamasından tanıttı havayı sağlamak, yeni bir şırınga kullanılması veya adım örnekleme kaldırılır. <ol><li> Bölüm 4 başına tedavi öncesi örneği titre. </li></ol></li><li> Arıtma ve depolama çantasından giriş satırını kaldırın ve ürünü tartın. </li><li> Aydınlatıcı içine Ürünü yerleştirin ve standart bir trombosit tedaviye başlamak için ekrandaki komutları izleyin. <ol><li> Operatör ID girin. </li><li> Güvenli ve Aydınlatıcı plakaya çanta monte edin. </li><li> Barkod okuyucu veya manuel giriş tuş takımını kullanarak Aydınlatıcı içine Numune Kimliği girin. </li><li> Tarama ürün tipi. </li><li> Kuvars kelepçesini kapatın. </li><li> Aydınlatma cihazı otomatik olarak enerji 6.24 J / ml teslim edecek. Tipik tedavi süresi 5-10 dakika sürer. </li></ol></li><li> Tedavi ve saklama torbasına örnek ampul hattı üzerine dişi şırınga konnektörü ile 6 &quot;boru hattı tedavisi steril rıhtım ardından. Ürün, teknikte iyi karıştırılır sağlanması ve daha sonra bir 5 ml şırınga takın ve 2 ml&#39;lik bir tedavi sonrası numuneyi çıkar. <ol><li> Post-tedavi sam titrebölüm 4 başına ple. </li></ol></li></ol> 4. Bakteriyel Titre <ol><li> Tedavi öncesi ve sonrası numune titresi tahmin ve her bir numunenin bir bitiş noktası seri seyreltme gerçekleştirmek için gerekli 5 mi seyreltme borulannın uygun bir şekilde hazırlayabilecektir. Aseptik pepton su 1.8 ml gerekli tüpleri doldurun. </li><li> Titre, bir 10-misli seri seyreltme şeması kullanılarak her numune. Aseptik ilk seyreltme tüpü (10 -1) için sulandırılmamış numuneden 0.2 ml aktarın. Vortex bu seyreltme tüpü ve transfer sonraki seyreltme tüp 0.2 ml. Dilüsyonları gerekli numara ile seri seyreltme devam edin. <ol><li> Aseptik aktarımı, her seyreltme oranından 100 ul uygun bir agar plaka (Tablo 1) kaplanacak. </li></ol></li><li> Steril bir hücre serpme kullanarak, eşit, her agar plaka üzerine numuneyi dağıtmak. </li><li> (Ters çevirin ve uygun şartlarda plakalar inkübe <strong&gt; düzenli büyüme kontrol 1-2 gün Tablo 1). </li><li> 30-300 koloniler ile plakaları sayın. Daha fazla, 300 koloni içeren plaklar (TNTC) saymak için çok sayıda kabul edilir. En az 30 koloni içeren levhalar niceleme limitinin (LOQ) altında olduğu kabul edilir. </li><li> Her test numunesinin titresi hesaplayın ve CFU / ml olarak sonuçları kaydedin. <ol><li> CFU / ml hesaplamak için aşağıdaki denklemi kullanın: <img alt="Denklem 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li> Düşük seyreltme plaka üzerinde koloniler varsa, Saptama (LOD) Limiti&#39;ni hesaplamak için aşağıdaki denklem kullanın: <img alt="Denklem 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> ve <img alt="Denklem 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> Nerede: N p parçacıklar (CFU) en az sayıda =güvenle tespit edilebilir Ü. Bir mikroorganizma tespit edilmemiş olacağını p = olasılık; bir mikroorganizmanın tespit etmek için bir% 95 güven, p, 05 =. Ml V = toplam ürün hacmi plaka v = hacim kaplama (ml) x seyreltme seviyesi </li></ol></li><li> Negatif Kontrol, iki agar plakaları her birine seri seyreltmeleri kullanılır pepton su 0.5 ml plaka. Test edilecek aynı levha tipinde kullanın. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullarda plaka kuluçkaya yatmaktadır. <ol><li> Büyüme ya agar plaka üzerinde görülürse, kullanılan pepton şişe su atılmalıdır; Çalışmanın sonuçları da geçersiz olur. </li></ol></li><li> Pozitif Kontrol, yeniden titresi kullanılan bakterilerin stok kültür için. Ters çevirin ve 1-2 gün aralıklarla büyüme kontrol etmek için uygun koşullar plakalar inkübe. Titre kaydının CFU / ml log 1.0 ± olmalıdırÇalışma için ed stok titre (bölüm 1.5 bakınız) geçerli kabul edilecek. </li></ol>

<ol>
	<li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+of+blood+components.">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li><li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets:+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage.">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li><li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li><li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products.">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li><li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contamination+and+transfusion+safety:+experience+in+the+United+States.">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li><li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination:+the+PASSPORT+study+results.">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li><li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns.">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li><li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture.">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li><li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light.">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li><li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada.">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li><li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+years'+experience+of+using+the+BacT/ALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates,+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results.">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li><li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies.">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li><li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination:+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety.">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li><li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV,+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services.">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li><li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service.">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li><li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components.">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li><li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation.">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li><li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light.">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li><li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma.">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li><li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system.">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li><li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany:+effect+of+contamination+reduction+measures.">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li></ol>

Bu yazının tüm yazarlar halen Terumo MKC, Mirasol PRT sisteminin geliştirici ve üreticisi tarafından istihdam edilmektedir. Bu video-makale için Yayın ücretleri Terumo MKC tarafından ödenen oylandı.

Bakteriyel tarama kan bankacılığı kurumlarında yaygın bir uygulama haline geldi ve birçok yerde için bakteri bulaşmış trombositlerin transfüzyonu önlemek için birincil yöntem olarak hizmet vermektedir. Bakteriyel tarama genellikle S. gibi hızlı büyüyen Gram negatif bakterilerin çoğunluğu yasaklamakta rağmen marcescens, E. E. coli, E. cloacae, bu S. gibi yavaş büyüyen Gram pozitif bakteriler tespit için mücadele aureus, Streptococcus spp., ve S. epidermidis 8. Ne yazık ki, bu üç Gram pozitif bakteriler, hasta mortalite 1 yol açmıştır Kirlenmiş trombosit birimleri ve bu üç organizmalar içeren trombosit ürünleri transfüzyonu% 50 yukarı sorumlu tutulmaktadır. En az bir organizma, tipik 4-8 ​​mi tarama numunesi içinde bulunan ve böylece bakteriyel tarama kadar yeterince yüksek olması için trombosit ürün bakteriyel titresi dayanır. Bir bakteri 4-8 ml&#39;lik numune hacminde çekilecek için bakteriyel titre yeterince yüksek değilse, cihaz yanlış negatif olarak işaretlenmesi ve transfüzyon için serbest bırakılır. Bakteriyel tarama için alternatif bir yaklaşım, tüm trombosit birimler yapılabilir ve bu işlevsel olmayan olarak kirlenmesine neden olan organizmaları hale getirebilir proaktif bir süreç istihdam olabilir. Bu çalışmada, bakterilerin yüksek titerleri bilerek riboflavin ve UV ışığı patojen indirgeme işleminin toplam redüksiyon kapasitesini test etmek için trombosit birimlere ilave edildi. Bakteriyel yükleri, bu çalışmada test edilen, ancak çok normal bağış esnasında kan ürünlerinde bulunan edilen miktarlardan, bu çalışma riboflavin ve UV ışığı işlemi önemli bir kontamine trombosit biriminde canlı bakteri titresi azaltmak mümkün olduğunu göstermeye yarar 5.4 log (bakteri kontamine 99,7-99,9996% azalma) (Şekil 2) 2.6. Bir sahih edinmek içinte log azalma değeri, bakteri titre adımları yaparken operatör hassas pipetleme becerileri ile birlikte iyi aseptik teknik olması çok önemlidir. Seri seyreltmeler performans Imprecise pipetleme hataların birikmesi, böylece doğru titre ölçümüne neden olabilir. Bu çalışmada toplanan veriler düşük seviyede, klinik olarak anlamlı bakteriyemi (&lt;20 CFU / birim) karşı sistemi meydan riboflavin ve UV ışınlarına, önceki çalışmaları destekler. Bir önceki çalışmada gerçek bir klinik kirlenme olayı taklit etmek için tasarlanmış ve sonuçlar riboflavin gösterdi ve UV ışığı 7 günlük trombosit saklama süresi boyunca bakteri gelişimini önlemede etkili oldu. Önceki çalışmada elde edilen verilere dayanarak Modelleme trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon mevcut risk tahminleri mevcut seviyeleri 8&#39;den kadar 98 kadar% azalma olabileceğini düşündürmektedir. Riboflavin ve UV ışığı süreci bakteriyel ekrana olumlu karşılaştırırSadece klinik olarak anlamlı bakteri yükü 8 ile meydan okuduğunda trombosit birimlerinde bakteriyel kirleticileri tespit etmek için bir% 66 etkinliğini göstermiştir ing. Bütün teknolojiler gibi, trombosit ürünleri PRT tedavisi bakteri bulaşmış trombosit birimleriyle kendi sınırlamaları vardır ilişkili komplikasyonları önlemek için. PRT sistemleri bakteri sporlarına karşı etkili değildir ve PRT sistemi kalan endotoksin hala alıcı septik çarpmasına neden olabilir Gram negatif bakterilerin yüksek titreleri inaktive olabilir böylece bile endotoksin inaktive yok. Bakteriler yüksek titreleri yaymak için önce PRT iyi depolama sırasında erken yapılır. Bu iki çalışmanın kombinasyonu ile gösterildiği gibi, sonuç olarak, riboflavin ve UV ışığı işlemi hem Gram negatif ve Gram pozitif organizmaların bakteri yüklerini azaltan, ve bakteriyel tarama için uygun bir alternatif sunar. Rutin davranıyorriboflavin ve UV ışığı ile g trombosit ürünleri de virüsler ve parazitler gibi diğer kan yoluyla bulaşan ajanların potansiyel iletimini azaltarak yararı vardır.

Trombositlerin transfüzyonu, plazma, eritrositler paketlenmiş ve tam kan ürünleri, modern tıpta önemli bir rol oynamaktadır ve çeşitli tıbbi durumların tedavisinde hayati sıvıyı yerine ve sonuçta hayatlarını kurtarmak için kullanılabilir. Trombositler, ya tam kandan izole ve toplanmış bir transfusable doz halinde veya trombosit aferez sürecinde toplanan Hücresel bir ürünüdür. Vücutta trombositlerin ana rolü yara yerlerinde kanamayı durdurmak ve hemostaz korumaya yardımcı olmaktır. Düşük trombosit hücre sayımı (trombositopeni) muzdarip hastalar spontan kanama olaylarına duyarlı ve trombosit hücresi normal aralıkta geri sayım getirmek için trombositler ile transfüzyon. Toplanan trombosit 5-7 günlük bir süre için saklanabilir ve sabit bir ajitasyon altında iken 22 ± 2 ° C&#39;de saklanır. Trombosit transfüzyonu özelliklerini hayat kurtarıcı orada nedeniyle co transfüzyon alıcıya hafif bir risk olmaya devam rağmenparazitler, bakteriler ve virüsler 11 ile bu ürünlerin ntamination. Viral nükleik asit testleri uygulanması (NAT), hepatit C virüsü (HCV), Hepatit B virüsü (HBV), insan immüno-ve eksikliği virüsü (HIV) gibi büyük kan yoluyla bulaşan maddeler, viral bulaşma riskini anlamlı derecede düşme 5. Bu ajanlar HIV 1000000 8 uyarınca bağış, HCV için 1.000.000 6.7 başına bağış ve HBV 15 1000000 1,7 başına bağış olmak için Kanada Kan Hizmetleri&#39;nden yeni bir yayın kalıntı riski tahmin ediyor. Trombosit ürünleri her yıl milyonlarca transfüzyon çünkü birçok alıcı potansiyel olarak yaşamı tehdit eden komplikasyonlara maruz 1000 7 ve: bakteri genellikle kamuoyuna daha az dikkat toplamak rağmen, trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sıklığı yüksek 1 olarak tahmin edilmiştir Sepsis 6 gibi. Araştırma zamanda bu bakteri yükü göstermektedirkirlenme düşük bölgesinin &lt;100 koloni oluşturan birim (CFU) / ürün 2,16, ancak besin açısından zengin ortam ve oda sıcaklığında depolama öncesinde transfüzyon tehlikeli yüksek titreleri için çoğalırlar bakterilerin kirletici sağlar. Şu anda, trombosit alıcı ulaşmasını bakteri bulaşmış ürünlerin önlemek için yalnızca onaylanmış yöntemler kültür tabanlı sistemler ve bakım testi hızlı noktası kullanımı geçer. Kısaca, kültür tabanlı sistemler için trombosit ürünleri 4-8 ml örnek bir şişe içine trombosit üründen çıkarılır ve inoküle edilir, bunun üzerine bakterilerin ürün olarak çoğalma izin 12-24 saat için 22 ° C&#39;da bir çalkalayıcı üzerinde saklanır besleyici ortamı ihtiva etmektedir. Şişe bakteri üremesi için şişe izleyen bir alet yerleştirilir. Gösterge şişe bakteri üremesini tespit ederse bayraklı ve karşılık gelen trombosit ünitesi atılır. Bu süreç hızlı gro tespit etmede oldukça başarılı ikenkanat organizmalar, yavaş büyüyen türlerin birçoğu böylece transfüzyonu 7,12,14,16,22 için çıkacak yanlış negatif birimler için potansiyel yaratıyor, tespit için yeterince yüksek bir titreye büyümek yok. Bakteriyel yükü önemli ölçüde artmıştır zaman kültür tabanlı algılama sistemlerinin aksine, bakım testi hızlı noktası genellikle trombosit saklama dönemi daha sonra yapılır. Yüksek titreleri bakım testlerinin noktası kültürü temelli sistemlere göre daha az duyarlı olduğu için gerekli ve onlar bir titreye ≥1 x 10 3 CFU / ml 17 ulaştıktan sonra sadece güvenilir bakteri tespit edilmiştir. Ancak bu tür testler örnekleme 1 saat içinde sonuçlar sağlayabilir. Bu testlerin performansı değişkenlik alıcı 9 ölümcül septik reaksiyona neden yalancı negatif ürünün salınımına yol açmıştır. Trombosit ürünleri bakteriyel kontaminasyon sorununu mücadele için alternatif bir yol patojen azaltma proc rutin kullanımı yoluylakirletici bakterilerin inaktive yerine onları tespit deneyebilirsiniz ess. UV ışığı ile bir arada, bir photosensitizer olarak riboflavin kullanarak, bakteri 3,4,8,10,19-21 riboflavin ve UV .bir kullanımı dahil olmak üzere patojenik kan yoluyla bulaşan kirletici maddelerin geniş bir enfeksiyon oluşturma azaltmak için gösterilmiştir Patojen azaltılması için hafif toksik olmayan mutajenik ve riboflavin ve UV ışığı ile muamele edilmiş bileşenler transfüzyon alıcı hem de kan ürünleri 18 taşıma olanlar için güvenli olduğu gösterilmiştir. Kısaca, riboflavin moleküller, bakteri, parazit, virüs ve herhangi bir çekirdekli hücre (örneğin, beyaz kan hücreleri) nükleik asitleri (DNA ve RNA) ile ilişkilendirebilir. UV ışığına maruz kalma ve böylece nükleik asitlerin replikasyonu ve / veya transkripsiyon önlenmesi ve 13 inaktive organizmanın bırakarak, nükleik asitler (öncelikle guanin bazlar) fonksiyonel gruplarının bir kimyasal değişimini neden riboflavin etkinleştirir. Plaka gibi çekirdeklerini kaybetmiş hücrelersağlar ve kırmızı kan hücreleri, bağlı nükleik asidin eksikliği riboflavin kimyası ile etkilenmez. Riboflavin ve UV ışığı teknolojisi ile önceki çalışma klinik olarak anlamlı bakteri yükü (&lt;20 CFU / ürün) 8 kontamine trombosit ürünü taklit etmek amaçlanan bir deney tasarımı kullanılarak bakterilerin seçilmiş bir grup değerlendirdi. Bu çalışmanın amacı, yüksek titre bakteriyel kirlenmeye karşı riboflavin ve UV ışığı sürecini değerlendirmektir (&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml) sistemin toplam bakteri azaltma kapasitesini ölçmek amacıyla plazmada tedavi trombosit ürünleri. Hemovigilance çalışmaları 1 ile toplanan verilere dayalı olarak, genel olarak ortaya çıkan gram negatif ve gram pozitif organizmaların panel bu çalışmada değerlendirme için seçilir ve aşağıdaki türler dahil: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Streptococcus pyogenes, Serratia marcescens, Yersinia enterocolitica ,Brucella neotomae, B.cereus (vejetatif formu), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Klebsiella pneumoniae. B. dışındaki tüm canlılar, cereus, ATCC&#39;den elde edilmiştir ve öncelik kan bileşenlerinden izole edildiğini tespit edilmiş bakteri türleri elde üzerine yerleştirilmiştir. B. cereus bu çalışmada test kontamine trombosit ürününden içten izole klinik türdür.

<table><tbody><tr><td>Mirasol Illuminator</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hematology Analyzer</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Ac&amp;bull;T diff&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Blood Gas Analyzer</td><td>Siemens</td><td>RapidLab 1265&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Docking Device</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Platelet Incubator</td><td>Helmer</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Incubator Shaker</td><td>Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>Dry Incubator</td><td>Fisher</td><td>Iso-temp</td><td></td></tr><tr><td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td><td>Thermo-forma</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>Tubing Sealer</td><td>Sebra</td><td>Smart Sealer II</td><td></td></tr><tr><td>Table Top Centrifuge</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Dilution Tube</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tube</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Gilson</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>Repeat Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 &amp;micro;l Filter Tip</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 ml 500 &amp;micro;M Riboflavin</td><td>Terumo BCT</td><td>35 mL 500 &amp;micro;M&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td><td>BBL</td><td>221547</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>Peptone Water</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Agar</td><td>Remel</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Horse Serum</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination

Bakteriler tarafından trombosit birimlerinin kirlenmesi uzun nedeniyle sonrası bağış depolama koşulları önemli bir transfüzyon riski olarak kabul edilmiştir. Ürünler, rutin bir ajite çalkalayıcı üzerinde 22 ° C&#39;de bakteri büyümesini teşvik edebilen bir durum saklanır. Trombosit ürün içine inanılan bakteri sayısı çok düşük olduğu halde, bu bakteriler, ciddi yan etkilere yol, çok yüksek bir titre önce transfüzyon çoğalabilir. Bu çalışmanın amacı, trombosit ürünlerinin ortak kirleticiler olarak tespit edilmiştir bakteri panele karşı riboflavin tabanlı patojen azaltma süreci değerlendirmektir. Bu panel aşağıdaki organizmaları dahil: S. epidermidis, S. aureus, S. mitis, S. pyogenes, S. marcescens, Y. enterocolitica, B. neotomae, B. cereus, E. coli, P. aeruginosa, ve K. pneumoniae. Her trombosit ünite yüksek bakteri yükü ile aşılandı ve numuneler b çıkarıldıtedavi öncesi ve sonrasında oth. Bir koloni deneyi oluşturan bir uç noktası sulandırması şeması kullanılarak ön-işleme ve tedavi sonrası bakteri titrelerini belirlemek için kullanılmıştır. Log azalma tedavi öncesi titresi gelen tedavi sonrası titresi çıkarılarak hesaplandı. Aşağıdaki günlük indirim gözlendi: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B. neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E.coli ≥5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K . pneumoniae 2.8 log (% 99.8). Bu çalışmanın sonuçları süreci bakteriyel kontaminasyon ile ilişkili ciddi yan transfüzyon olay riskini azaltmak için yardımcı olabilir öneririz.

On bir farklı bakteri türlerinin azaltılması riboflavin ve UV ışığı göre PRT işlemi kullanılarak değerlendirildi. Bu ajanlar trombosit ürünleri daha yaygın kirletici bazılarını temsil ve pozitif beş Gram ve altı Gram negatif organizmalar bulunur. En az altı trombosit ürünler organizma başına değerlendirilmiş ve her bir ürünün trombosit ürünü bakteri&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml son titresi elde etmek için yeterli bakteri ile aşılandı. Önceki tedavi etmek için örnek bir trombosit ürünü hemen riboflavin ve UV işlemi ile muamele edildi ve bundan sonra, tedavi öncesi titresi belirlemek için uzaklaştırılmıştır. Aşağıdaki günlük azalmalar gözlenmiştir trombosit ürünleri tedavi sonrasında: S. epidermidis 4.7 log (99,998%), S. aureus 4.8 log (99,998%), S. 3.7 log (99.98%) Mitis, S. pyogenes 2.6 log (% 99.7), S. marcescens 4,0 log (% 99,99), Y. enterocolitica 3.3 log (% 99,95), B.neotomae 5.4 log (99,9996%), B. cereus 2.6 log (% 99.7), E. coli ≥ 5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4.7 log (99,998%) ve K. pneumoniae 2.8 log (% 99.8) (Şekil 2). Riboflavin ve UV işlem için yukarıda belirtildiği gibi tüm birimler sistem özellikleri bir araya geldi. Ek redüksiyon testi S. ile gerçekleştirildi buffy coat türetilmiş tabakalar kullanılarak pyogenes. Anlamlı bir fark S. azaltılması gözlendi aferez trombositler karşı ince beyaz tabaka elde edilen trombositler içinde pyogenes (veriler gösterilmemiştir). <img alt="Tablo 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> Tablo 1: riboflavin ve UV ışığı kullanılarak değerlendirildi bakteriyel tür için büyüme koşulları. Trombosit ürünleri kirletebilir gösterilmiştir hem Gram negatif ve Gram pozitif bakterilere oluşan bir panel, bu çalışma için seçilmiştir. Büyüme yaymak için kullanılan koşulları (sıcaklık ve ortam türü) ve titer organizmalar gösterilir. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> Şekil 1: Riboflavin ve UV ışığı patojen azaltma süreci. Riboflavin 500 uM nominal konsantrasyonda% 0.9 tuzlu su içinde çözülmüştür. Çözüm, her trombosit ürünün içine bağlanmış ve süzülmüş steril oldu. Bakteriler, her trombosit birimine aseptik eklenmiş ve daha sonra UV enerji (yaklaşık 6-10 dakika) 6.2 J / ml ile muamele edilmiştir. Bu in vitro tedavi sonrası trombosit ünitesi nihai bakteri titresi belirlemek için numune alındı ​​çalışma. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> Şekil 2:., Riboflavin ve UV ışığı Riboflavin ile muamele edilmiş ve UV ışığı trombosit ürünleri yaygın bakteriyel kirletici bakteri yüklerini azaltmak için kullanılan, farklı bakteri türlerinin indirgenmesi. Günlük 10 indirim farkıOrtalama tedavi öncesi titresi ve ortalama tedavi sonrası titresi arasında. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination at JoVE.com

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.6K Görüntüleme.  Scientific Affairs. The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

Video: Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the highest possible level of safety for transfusion patients, including protection from transfusion transmitted diseases. This must be accomplished in a fiscally responsible manner which minimizes operating expenses including consumables, equipment, waste, and personnel costs, among others.
Several methods are available to produce platelet concentrates for transfusion. One of the most common is the buffy coat method in which a single therapeutic platelet unit (&ge; 2.0 x1011 platelets per unit or per local regulations) is prepared by pooling the buffy coat layer from up to six whole blood donations. A procedure for producing "double dose" whole blood derived platelets has only recently been developed.
Presented here is a novel method for preparing double dose whole blood derived platelet concentrates from pools of 7 buffy coats and subsequently treating the double dose units with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. INTERCEPT was developed to inactivate viruses, bacteria, parasites, and contaminating donor white cells which may be present in donated blood. Pairing INTERCEPT with the double dose buffy coat method by utilizing the INTERCEPT Processing Set with Dual Storage Containers (the "DS set"), allows blood centers to treat each of their double dose units in a single pathogen inactivation processing set, thereby maximizing patient safety while minimizing costs. The double dose buffy coat method requires fewer buffy coats and reduces the use of consumables by up to 50% (e.g. pooling sets, filter sets, platelet additive solution, and sterile connection wafers) compared to preparation and treatment of single dose buffy coat platelet units. Other cost savings include less waste, less equipment maintenance, lower power requirements, reduced personnel time, and lower collection cost compared to the apheresis technique.

This article describes the process used by &#214;rebro University Hospital to produce double dose buffy coat platelet concentrates prepared from whole blood donations and treated with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. The in vitro quality of the final platelet units are evaluated over 7 days of storage.

INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

Tıp

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, transmission of antibiotic resistant bacteria between animals and humans, and the high cost of treating infections.
In this study, we disclose a new strategy that may be effective in preventing implant-associated infection based on the potential antimicrobial properties of platelet-rich plasma (PRP). Due to its well-studied properties for promoting healing, PRP (a biological product) has been increasingly used for clinical applications including orthopaedic surgeries, periodontal and oral surgeries, maxillofacial surgeries, plastic surgeries, sports medicine, etc.
PRP could be an advanced alternative to conventional antibiotic treatments in preventing implant-associated infections. The use of PRP may be advantageous compared to conventional antibiotic treatments since PRP is less likely to induce antibiotic resistance and PRP's antimicrobial and healing-promoting properties may have a synergistic effect on infection prevention. It is well known that pathogens and human cells are racing for implant surfaces, and PRP's properties of promoting healing could improve human cell attachment thereby reducing the odds for infection. In addition, PRP is inherently biocompatible, and safe and free from the risk of transmissible diseases.
For our study, we have selected several clinical bacterial strains that are commonly found in orthopaedic infections and examined whether PRP has in vitro antimicrobial properties against these bacteria. We have prepared PRP using a twice centrifugation approach which allows the same platelet concentration to be obtained for all samples. We have achieved consistent antimicrobial findings and found that PRP has strong in vitro antimicrobial properties against bacteria like methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Group A Streptococcus, and Neisseria gonorrhoeae. Therefore, the use of PRP may have the potential to prevent infection and to reduce the need for costly post-operative treatment of implant-associated infections.

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is a significant clinical complication. This study describes an approach using platelet-rich plasma (PRP) to prevent implant-associated infections, presents the protocol for preparing PRP with constant platelet concentration, and reports the newly identified antimicrobial properties of PRP and related protocols for examining such antimicrobial properties in vitro.

Hazırlama ve: Enfeksiyon Önleme Yeni Bir Yaklaşım olarak PRP<em&gt; In vitro</emPRP&gt; Antimikrobiyal Özellikleri

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma<em&gt; İn Vitro</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

Biyomühendislik

LED-Based In Vitro Screening for Assessing Photoactivable Molecules in Bacterial Photodynamic Inactivation

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic inactivation of bacteria (aPDI). This process involves the administration of a photosensitizer (PS) activated by a suitable visible light source, producing exacerbated levels of reactive oxygen species (ROS) that damage crucial cellular biomolecules, ultimately causing bacterial cell death. It is crucial to create standardized, easy-to-use, and reproducible initial tests to assess and compare the effectiveness of light-induced phototoxicity of potential photosensitizers. This study introduces a simple and efficient in vitro technique for assessing photodynamic activity against planktonic bacterial cells. By employing a 96-well microplate format along with a large LED panel, the system facilitates the systematic evaluation of various compounds. Such a configuration allows for high-throughput screening of potential photosensitizers in a controlled and consistent environment, simplifying the process of identifying promising candidates for further development. This flexible platform serves as an important step in advancing the development of innovative photodynamic therapies for managing antibiotic-resistant infections.

This protocol describes a straightforward and economical method for evaluating the effectiveness of potential photosensitizers in antibacterial photodynamic inactivation (aPDI), using a 96-well plate format combined with an LED panel light source. This approach enables the simultaneous testing of multiple experimental conditions, including different concentrations, compounds, and bacterial strains.

Bakteriyel Fotodinamik İnaktivasyonda Fotoaktif Moleküllerin Değerlendirilmesi için LED Tabanlı İn Vitro Tarama

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic ...

Biyokimya

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic growth of C. albicans SN425, the inoculums grew on Yeast Nitrogen Base media. For biofilm formation, RPMI 1640 media, which have high concentrations of amino acids, were applied to help biofilm growth. Biofilms of 48 h were treated twice a day for a period of 1 min with a non-coherent light device (red light; wavelength = 635 nm; energy density = 87.6 J&#183;cm-2). As a positive control (PC), 0.12% chlorhexidine (CHX) was applied, and as a negative control (NC), 0.89% NaCl was applied to the biofilms. Colony forming units (CFU), dry-weight, soluble and insoluble exopolysaccharides were quantified after treatments. Briefly, the protocol presented here is simple, reproducible and provides answers regarding viability, dry-weight and extracellular polysaccharide amounts after red light treatment.

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcome of red light application on the growth of Candida albicans biofilm. A non-coherent red light device with the wavelength of 635 nm and energy density of 87.6 J&#183;cm-2 was applied throughout the growth of Candida albicans biofilms for 48 h.

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can be generated from FMN photolysis upon irradiation with visible light. The ROS generated from FMN photolysis are harmful to microorganisms, including pathogenic bacteria such as Staphylococcus aureus (S. aureus). This article presents a protocol for deactivating S. aureus, as an example, via photochemical reactions involving FMN under visible light irradiation. The superoxide radical anion (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" />) generated during the FMN photolysis is evaluated via nitro blue tetrazolium (NBT) reduction. The microbial viability of S. aureus that is attributed to reactive <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" /> species was used to determine the effectiveness of the process. The bacterial inactivation rate is proportional to FMN concentration. Violet light is more efficient in inactivating S. aureus than blue light irradiation, while the red or green light does not drive FMN photolysis. The present article demonstrates FMN photolysis as a simple and safe method for sanitary processes.

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Here, we present a protocol to inactivate pathogenic bacteria with reactive oxygen species produced during photolysis of flavin mononucleotide (FMN) under blue and violet light irradiation of low intensity. FMN photolysis is demonstrated to be a simple and safe method for sanitary processes.

Riboflavin-5′- Fosfatın Görünür Işık Fotolizi ile Patojenlerin İnaktivasyonu

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, mouth, vagina, and skin. Despite the availability of antifungal medication, the mortality rate of invasive candidiasis remains ~50%. Unfortunately, the incidence of drug-resistant C. albicans is increasing globally. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer an alternative or adjuvant treatment to inhibit C. albicans biofilm formation and overcome drug resistance. Rose bengal (RB)-mediated aPDT has shown effective cell killing of bacteria and C. albicans. In this study, the efficacy of RB-aPDT on multidrug-resistant C. albicans is described. A homemade green light-emitting diode (LED) light source is designed to align with the center of a well of a 96-well plate. The yeasts were incubated in the wells with different concentrations of RB and illuminated with varying fluences of green light. The killing effects were analyzed by the plate dilution method. With an optimal combination of light and RB, 3-log growth inhibition was achieved. It was concluded that RB-aPDT might potentially inhibit drug-resistant C. albicans.

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

The growing incidence of drug-resistant Candida albicans is a serious health issue worldwide. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer a strategy to fight against drug-resistant fungal infections. The present protocol describes Rose bengal-mediated aPDT efficacy on a multidrug-resistant C. albicans strain in vitro.

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to eradicate not only due to the emergence of antibiotic-resistant strains but also its ability to form biofilms. Recently, photodynamic therapy (PDT) has been indicated as one of the potential treatments for controlling biofilm infections. However, further studies are required to improve our knowledge of its effect on bacterial biofilms, as well as the underlying mechanisms. This manuscript describes an in vitro model of PDT with 5-aminolevulinic acid (5-ALA), a precursor of the actual photosensitizer, protoporphyrin IX (PpIX). Briefly, mature S. aureus biofilms were incubated with ALA and then exposed to light. Subsequently, the antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilm was quantified by calculating the colony forming units (CFUs) and visualized by viability fluorescent staining via confocal laser scanning microscopy (CLSM). Representative results demonstrated a strong antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilms. This protocol is simple and can be used to develop an in vitro model to study the treatment of S. aureus biofilms with ALA-PDT. In the future, it could also be referenced in PDT studies utilizing other photosensitizers for different bacterial strains with minimal adjustments.

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

This manuscript describes a protocol to study the antimicrobial effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy (ALA-PDT) on a Staphylococcus aureus biofilm. This protocol can be used to develop an in vitro model to study the treatment of bacterial biofilms with PDT in the future.

5-Aminolevulinik asit-aracılı Fotodinamik Tedavi etkisi Staphylococcus aureus biyofilm çalışmaya bir In Vitro modeli

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to ...

Biyoloji

<meta charset="utf8"></head><body>Trombosit Fosfatidilserin ve Mikrovezikül Salınımının Analizi

Procoagulant Platelet Characterization by Measuring Phosphatidylserine Exposure and Microvesicle Release from Human Purified Platelets

Activated platelets promote coagulation primarily by exposing the procoagulant phospholipid phosphatidylserine (PS) on their outer membrane surfaces and releasing PS-expressing microvesicles that retain the original membrane architecture and cytoplasmic components of their originating cells. The accessibility of phosphatidylserine facilitates the binding of major coagulation factors, significantly amplifying the catalytic efficiency of coagulation enzymes, while microvesicle release acts as a pivotal mediator of intercellular signaling. Procoagulant platelets play a crucial role in clot stabilization during hemostasis, and their increased proportion in the bloodstream correlates with an increased risk of thrombosis. It has also been shown that platelet microvesicles are rich in growth factors that promote wound healing and inflammatory modulation. Analyzing phosphatidylserine exposure and microvesicle release using flow cytometry poses significant challenges due to their small size and the limited number of positive events for markers of interest. Despite considerable advances in the last decade, methods for assessing phosphatidylserine exposure and microvesicle release remain a work in progress. Unfortunately, no single universally applicable protocol exists, and several factors must be evaluated to determine the most appropriate methodology for each specific application. Here, we describe a detailed protocol for isolating washed platelets from human blood, followed by collagen and/or thrombin activation, to measure the exposure of phosphatidylserine and microvesicle release that characterize procoagulant platelets. This protocol is designed to facilitate the initial preparation of platelet-rich plasma and the isolation of washed platelets. Finally, phosphatidylserine exposure and microvesicle release are quantified by flow cytometry, enabling the identification of procoagulant platelets.

<meta charset="utf8"></head><body>İnsan Saflaştırılmış Trombositlerinden Fosfatidilserin Maruziyeti ve Mikrovezikül Salınımının Ölçülmesiyle Prokoagülan Trombosit Karakterizasyonu

Procoagulant platelet formation has been correlated with an increased risk of thrombosis. Presented here is a precise protocol for isolating washed platelets from human blood, intended to quantify the exposure of phosphatidylserine and microvesicle release, which are distinctive features of procoagulant platelets.

İnsan Saflaştırılmış Trombositlerinden Fosfatidilserin Maruziyeti ve Mikrovezikül Salınımının Ölçülmesiyle Prokoagülan Trombosit Karakterizasyonu

Activated platelets promote coagulation primarily by exposing the procoagulant phospholipid phosphatidylserine (PS) on their outer membrane surfaces and ...

Riboflavin ile Trombosit Ürünleri ve UV Işık Tedavisi: Yüksek Titre Bakteriyel Kontaminasyon Karşı Etkinliği

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Hazırlama ve: Enfeksiyon Önleme Yeni Bir Yaklaşım olarak PRP

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma

Bakteriyel Fotodinamik İnaktivasyonda Fotoaktif Moleküllerin Değerlendirilmesi için LED Tabanlı İn Vitro Tarama

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Riboflavin-5′- Fosfatın Görünür Işık Fotolizi ile Patojenlerin İnaktivasyonu

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

5-Aminolevulinik asit-aracılı Fotodinamik Tedavi etkisi Staphylococcus aureus biyofilm çalışmaya bir In Vitro modeli

İnsan Saflaştırılmış Trombositlerinden Fosfatidilserin Maruziyeti ve Mikrovezikül Salınımının Ölçülmesiyle Prokoagülan Trombosit Karakterizasyonu

İnsan Saflaştırılmış Trombositlerinden Fosfatidilserin Maruziyeti ve Mikrovezikül Salınımının Ölçülmesiyle Prokoagülan Trombosit Karakterizasyonu