Bu araştırmanın kapsamı fizyolojik koşullar altında trombosit fonksiyonunu değerlendirmektir. Özellikle mikroakışkan cihazlar ve biyolojik yüzeyler kullanarak trombosit fonksiyonunu inceliyoruz. Ve bu yaklaşımı kullanarak, transfüzyon tıbbındaki uygulamalar için trombosit disfonksiyonu ve hemostatik resüsitasyon ile ilgili soruları cevaplayabildik.
Mevcut trombosit fonksiyon testleri genellikle trombositlerin tercih edilen belirli bir agoniste yanıt olarak toplanma yeteneğini test eder. Algılama yöntemleri, ışık iletimi veya elektrik empedansını içerebilir ve bu tahliller, proses örneklerini kullanabilir ve durgun bir şekilde test edilir. Trombosit fonksiyonunu test etmek için bu mikroakışkan yaklaşımı kullanarak, fizyolojik alaka düzeyi eklemek için akışkanlar dinamiğini dahil ediyoruz.
Akışkanlar dinamiği, hemostaz sırasında trombosit fonksiyonunda yer alan biyolojik mekanizmalarda kritik bir rol oynar. Kanama hastalarında, özellikle trombosit fonksiyonu ve daha iyi sonuçlar için bu işlevi artırabilecek terapötik müdahaleler konusunda endişeliyiz. Bu trombosit fonksiyon testi yaklaşımını kullanarak, bir deneyde farklı trombosit popülasyonlarının katkılarını izleyebiliyor ve travma ve diğer kanama durumları için terapötik seçenekleri değerlendirmenin bir yolunu açabiliyoruz.
Başlamak için, silikon elastomer tabanı bir tartım kabına dökün. Silikon sertleştirme maddesini ona bir oranında ekleyin ve silikon polimer zincirlerinin uygun şekilde çapraz bağlanmasını sağlamak için karışımı iyice karıştırın. Ana kalıbı bir Petri kabına yerleştirin ve kürlenmemiş PDMS'yi kalıba eşit şekilde dökün.
Ardından, karışımdaki kabarcıkları çıkarmak için Petri kabını 30 dakika boyunca bir vakumlu desikatörün içine yerleştirin. PDMS'yi kürlemeyi bitirmek için kalıbı 90 dakika boyunca 70 santigrat dereceye ayarlanmış bir fırına koyun. PDMS kürlemesi tamamlandıktan sonra, mikroakışkan dökümü kesmek için bir tıraş bıçağı veya neşter kullanın.
Kanalların kenarlarına delikler açın. Şimdi, cam sürgüyü ve mikroakışkan dökümü, kazınmış tarafı yukarı bakacak şekilde bir plazma temizleyiciye yerleştirin. Vakum pompasını çalıştırın ve hazneyi kapatın.
Ardından plazma temizleyiciyi Yüksek ayara getirin ve kurulumu 30 saniye boyunca temizleyicide bırakın. Bundan sonra, plazma temizleyiciyi kapatın ve vakumu serbest bırakın. Plazma ile temizlenmiş döküm ve cam slaytı bağlamak için, plazma temizleyicide yukarı bakan kenarları hafifçe bastırın.
Bağlama işlemini tamamlamak için mikroakışkan cihazı 10 dakika boyunca 70 santigrat derecede bir fırına veya sıcak bir plakaya yerleştirin. Şimdi, mikroakışkan odayı, belirlenen girişe belirlenmiş bir çıkıştan birinci tip at fibriller kollajen reaktifi ile kaplayın. Kaplanmış kolajenin kanal içinde buharlaşmasını önlemek için cihazı ılık, nemli, kapalı bir kapta saklayın.
Bir saat sonra, kollajen solüsyonunu temizlemek için cihazı kaplamanın tersi yönde PBS ile durulayın. Başlamak için, sitrat tam kanı, tercih edilen bir florofor kullanarak floresan konjuge CD41 antikoru ile inkübe edin. Kanı 30 dakika boyunca bir somun külbütör üzerinde boyayın.
Ardından, mikroskobu ve ilgili yazılımı açın. Çekme şırınga pompası seviyesini mikroskop aşaması ile ayarlayın ve şırınga pompası ayarlarını deneysel gereksinimlere göre ayarlayın. Ardından, mikroakışkan cihazı mikroskop tablasına yerleştirin ve hareketi önlemek için kenarlarını tablaya bantlayın.
Şimdi, bir inç iç çapın on altıda birini bir dirsek konektörüne ve ardından bir inç iç çapın on altıda biri konektörüne sahip 10 mililitrelik bir şırıngaya bağlayın. 10 mililitrelik şırıngayı steril PBS ile doldurun ve şırınga pompasına bağlayın. Ardından, dirsek konektörünü mikroakışkan cihazın çıkışına takın.
Bir ucunda dirsek konektörü ve diğer ucunda açılı bir kesim ile yaklaşık 10 santimetre uzunluğunda giriş hatları hazırlayın. Şimdi, giriş dirseği konektörünü cihaz girişine bağlayın ve giriş hattını açılı bir tutucu üzerine yerleştirilmiş bir atık mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin. Mikroakışkan cihaz kanalı kenarlarına odaklanmak için 10 kez objektif lensi kullanın.
Ardından, satırları PBS ile astarlayın. Kanaldaki herhangi bir PDMS veya kalıntıyı temizlemek için şırınga pompasını manuel olarak ilerletin. Kanal girişinin ve çıkışının yakınında herhangi bir engel olup olmadığını kontrol edin.
Şimdi, kaydedilen görüntü yakalama ayarlarını açın veya kan örneğindeki CD41 antikorlarına karşılık gelen parlak bir alan kanalı ve floresan kanalları ile her bir ila iki saniyede bir yakalanan zaman serisi görüntüleri için yeni bir görüntü yakalama prosedürü oluşturun. Filtrelenmiş sitrat kan örneğini alın ve deneye başlamadan hemen önce yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın. Numuneyi açılı mikrosantrifüj tutucusuna yerleştirin.
Ardından, giriş hattını kan örneğine yerleştirin ve görüntü yakalamayı kaydetmeye başlayın. Borudaki ölü hacmi doldurmak için şırıngayı yavaşça geri çekin. Kan kanala ulaştığında, akışı istenen hızda devam ettirmek için hemen şırınga pompasındaki Oynat düğmesine basın.
Trombositler mikroakışkan cihazın stenotik bölgesini tamamen tıkayana kadar veya tipik olarak 10 dakika olan deneysel son noktaya kadar deneyi çalıştırın. Deney tamamlandıktan sonra, görüntü yakalamayı durdurun ve şırınga pompasını durdurun. Son olarak, yakalanan görüntüyü uygun depoya kaydedin.
