1. MEA Hazırlık <ol><li> Daha önce 18 açıklandığı veya Çok Kanallı Sistemler olarak MEA üreticilerinden satıcılardan doğrudan satın gibi elektroporasyon deneylerde kullanılmak için ÇÇA&#39;lar ya standart fotolitografi tekniği kullanılarak imal edilebilir <a href="http://www.multichannelsystems.com" target="_blank">(http:/www.multichannelsystems.com/)</a> ve Alpha MED Scientific, Inc <a href="http://www.med64.com/" target="_blank">( http://www.MED64.com)</a> . Deneylerde kullanılan ÇÇA&#39;lar Katıhal Elektroniği Araştırma (CSSER) Merkezi tarafından yönetilir Arizona Eyalet Üniversitesi, temiz oda tesisi in-house imal edilmiştir. Deneylerde kullanılan ÇÇA&#39;lar iyi bir 1 cm iç çapı camın içinde 50-200 mikron gelen elektrot çapı boyutları ile 4 dizisi tarafından 8 32 indiyum kalay oksit elektrotlar vardı. Camın çok iyi MEA kullanarak polidimetilsiloksan (PDMS) üzerine bağlanmıştır. </li><li> Hücre s önce otoklavda sterilize MEAeeding. Bunlar MEA bütünlüğünü tehlikeye olmayan uzun gibi% 70 etanol içinde bir nemlendirici gibi diğer sterilizasyon yöntemleri, başka yerlerde açıklandığı gibi UV tedavisi ve sıcak su arıtma de kullanılabilir. </li><li> Bir laminer akış kaputu otoklavlanmış MEA aktarın ve standart steril polistiren Petri yerleştirin. Önceki MEA üzerinde hücre tohumlama için, 20 dakika boyunca UV ışığı açarak laminer akış kaputu sterilize. MEA UV ışığı akış kaputu UV ışık altında iken steril alüminyum folyo ile MEA içeren Petri kabı kapsayacak şekilde hassas ise. </li></ol> 2. MEA üzerinde Tohum Hücreler <ol><li> Tripsin / EDTA ile kaplama için 1 ml hücre ortamı içinde 100-200 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyon ile onlara yapışık yükseltmek kullanılarak memeli hücrelerinde çalışan bir hücre çizgisi Hasat hücreleri. Deneylerde biz kültür NIH 3T3 fibroblast hücre hattı, HeLa hücre hattı ve MEA birincil kortikal ve hipokampal nöronlarda başarılı olmuştur. </li><li&gt; MEA üzerinde hücreleri ile ortam 20-30 ul damla yerleştirin. Inkübatör MEA ile Petri kabı aktarın. Bu hücre damla boyutu MEA tüm elektrotlar kaplayacak kadar büyük olduğundan emin olmak için önemlidir. </li><li> Hücreler laminer akış kaputu inkübatör MEA ile Petri kabı aktarmak ve hafifçe de MEA önceden ısıtılmış medya 400-500 ul (37 ° C) ekleyin tohumlama sonrası 2 saat. Bu hücreler hala bağlı ve eşit MEA yüzeye yayılır sağlamak için mikroskop altında kontrol edin. Inkübatör MEA geri aktarın. Ortam ilave edilmeden önce 2 saat bekleme süresi hücreleri MEA yüzeyi ile bağlı kalmak için yeterli zaman sağlar. Çok yakında hücreleri tohumlama sonrası hücre ortam ilavesi hücreleri uzak yıkayabilirsiniz. Hücre MEA üzerinde iyi uymayan, yüzeyi hücre adezyonu artırmak için hücre bağlanma gibi faktörler aspolylysine, fibronektin ve laminin ile tedavi edilebilir. Bizim HeLa hücre deneylerde biz genellikle fibronecti ile MEA yüzey tedavi1-2 saat için n (10 ug / ml). </li><li> Hücreler tohumlama sonrası 8-12 saat, herhangi bir ölü hücreleri çıkarmak için PBS ile 1-2 yıkar gerçekleştirin. Gerektiğinde Hücre orta her 24-48 saat değiştirilir. Tipik bir deneyde, hücreler transfeksiyon ekim sonrasında genellikle 24-48 saat için hazırdır. Elektroporasyon verimlilik tutarlılığı sağlamak için bu kültürü elektroporasyon önce konfluent en az% 80 kadar beklenmesi tavsiye edilir. </li></ol> 3. SiRNA Siteye özgü Transfeksiyon <ol><li> Nükleik asit çözeltisi hazırlayın. SiRNA transfeksiyon için, 200-400 ul nihai hacim elde etmek için buz gibi soğuk tampon içinde elektroporasyon, 1-2 uM siRNA elektroporasyon solüsyon hazırlanır. Bu video yazıda siRNA Alexa 488 konjuge karıştırılmış sırası ile HeLa hücrelerinin transfeksiyon göstermektedir. </li><li> Inkübatör, steril laminer akış kaputu hücreleri ile MEA aktarın. MEA gelen hücre ortamı çıkarın ve PBS ile yıkama gerçekleştirin. Bundan sonra, i 200-400 ul ekleyinkuyuya ce soğuk 1 uM siRNA elektroporasyon çözüm. </li><li> Hedeflenen elektrotlar (elektrikli darbe optimal parametrelerin belirlenmesi için 4. adıma bakın) için anodik kare elektrik darbeleri uygulayın. Deneylerde biz elektrik bakliyat ve MEA bağ yastıkları ile temas yapmak için bir dual-inline-paketi (DIP) 16 pin klibi oluşturmak için Pragmatik Cihazları 2414A dalga üreteci kullanılır. Dalga biçimi üreteci tek tek elektrodların seçicilik sağlamak için bir demultiplexor baskılı devre kartı yoluyla DIP klip ile bağlanabilir. Referans elektrodu, hücre ortamı içinde bir çelik katot yerleştirin. Medyada çelik referans elektrot düşerken onu MEA yüzeyi ile temas yapmaz emin olmak için son derece önemlidir. Temas ettiğinde, bu hücreleri ve MEA zarar verebilir. Bu, hücrelerin yukarıda 1 mm bir konum ile referans elektrodu düşürmek için tavsiye edilir. 1 mm bir yüksekliğe sahip bir boşluk ref yerleştirilmesi yardımcı olmak için iyi yerleştirilebilirerence elektrot. Harici bir referans elektrot kullanarak alternatif bir yaklaşım katot-anot çiftleri olarak komşu elektrotlar kullanmaktır. </li><li> Hemen MEA üzerinde hedeflenen elektrotlara elektrik darbeleri uygulandıktan sonra, kuluçka için MEA geri aktarın. 5 dakikalık bir kuluçka döneminden sonra, yavaşça önceden ısıtılmış (37 ° C), hücre ortamı ile elektroporasyon tamponu% 75 değiştirin. Daha sonra, fosforlu görüntü hücrelerinin fluoresan etiketli siRNA teslim teyit etmek için yapılabilir. </li></ol> 4. Elektroporasyon Parametre Optimizasyonu <ol><li> Darbe genlik, darbe süresi ve darbe sayısı değerlerinin bir aralığı için elektroporasyon, tasarım elektroporasyon deney için optimal elektrik nabız parametreleri belirlemek için. HeLa hücreleri ile bizim deneyim, biz gözlenen mil ile başarılı elektroporasyon yol açtı 100 mikron bir elektrot boyutu için tek bir gerilimi 3 V ila 9 V genlikli darbe ve msn 1 den 10 msn sürelinimal hücre ölümü. Bu bir parametre bir seferde değiştirilebilir ve diğerlerinin sabit tutulması bizim tavsiyedir. Nabız parametrelerin her biri için elektroporasyon etkinliğini ölçmek için, olduğu gibi adımlar 4,2-4,5 açıklandığı propidyum iyodür (PI), bir hücre laktobionat, boya ki lekeleri nükleik malzeme, ve canlı deney esaslı yönteme kullanır. </li><li> Adım 1 ve 2&#39;de belirtilen yön takip eden MEA üzerinde bir hücre kültür oluşturulması. </li><li> Önceki elektroporasyon bir buz gibi soğuk elektroporasyon tamponu içinde 30 ug / ml solüsyon PI 300-500 ve calcien ul PBS içinde çözelti AM 4 uM 400 ul hazırlamak için. </li><li> Inkübatör laminer akış kaputu MEA aktarın. MEA gelen hücre ortamı çıkarın ve PBS ile yıkama gerçekleştirin. Bundan sonra, PI ile buz soğuk elektroporasyon tamponu 300-500 ul ekleyin. </li><li> Hedeflenen elektrotlar (elektrik üretme ve uygulama için Deneylerde kullanılan ekipmana istenen darbe genliği ve süresi ile elektrik darbeleri uygulayınMEA ile mide darbe adım 3.3) anlatılmıştır. Referans elektrot için ya iyi MEA elektroporasyon tampon içine çelik elektrot düşürmek veya referans olarak komşu elektrodu kullanın. Seçici farklı elektrotlarla değişen genlik veya süreleri darbeleri uygulayarak birden fazla deneyler aynı cihaz üzerinde yapılabilir. Örneğin, bir 32 elektrot MEA üzerinde, 8 deneyler 8 grup, 4 elektrot oluşan her bir bölme ile 32 elektrotlar gerçekleştirilebilir. 8 gruplarının her biri daha sonra, bir kontrol olarak kullanılan 0,5 V artışlarla ve bir grupta, 3 V-6 V aralığında değişen genlikleri ile süresi 5 msn dikdörtgen tek bir voltaj palsı ile stimüle edilebilir. </li><li> Hemen uyguladıktan sonra voltaj darbeleri 5 dakika inkübatör MEA aktarın. Daha sonra, hafifçe de MEA gelen elektroporasyon tampon% 75&#39;i kaldırmak ve sıcak hücre ortam ile değiştirin. Inkübatör MEA geri aktarın. </li><li> 2-4 saat bir kuluçka döneminden sonra4 uM 300-500 ul ile iyice MEA ortamı içinde hücre değiştirmek Calcein AM PBS çözeltisi. Başka bir 30 dakika için inkübatöre geri MEA aktarın. </li><li> Calcein AM ile hücrelerin inkübasyonu takiben, PBS ile iki yıkamadan sonra PBS ile iyice MEA içinde çözelti Calcein AM değiştirin. Ve Calcein AM (Uyarma / Emisyon - 490 nm/520 nm) - PI (535 nm/617 nm Uyarma / Emisyon) için filtreler optik mikroskopla kullanarak hücrelerin floresan görüntüler elde edin. Elektroporasyon nedeniyle PI alımı, hücre kırmızı floresan ve Calcein AM yeşil floresan için canlı hücreler neden olmuştur. Görülebilir Üç olası senaryo)) canlı hücre electroporated ve canlı (kırmızı ve yeşil iki floresan olacak), 2) Hücreler 1 ama electroporated (sadece yeşil floresan olacaktır) ve 3 değil, elektroporasyon nedeniyle ölü hücreler (sadece kırmızı floresan olacaktır) . Hücre canlılığı elektrot üzerinde canlı hücrelerin toplam sayısının yüzde ve elektroporasyon eff olarak hesaplandıiciency PI / siRNA ile yüklü hücrelerin toplam sayısının yüzde olarak hesaplanmıştır. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 1, PI ile HeLa hücrelerinin site-spesifik yükleme göstermektedir. Bu, elektrot üzerinde tek hücreler PI (Şekil 1B) bir alımı gösteren olduğu görülmektedir. Canlı test sonrası elektroporasyon hücreler (Şekil 1A) canlılığı değerlendirmek için kullanılmıştır yapılır. Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi, örneğin elektroporasyon verim ve hücre viabilitesi, sırasıyla% 81.8 ve% 96.1 &#39;bulunmaktadır. Yüksek hücre canlılığı ve elektroporasyon verim elektroporasyon darbe parametreleri optimize edilmesi ile elde edilebilir. Optimize edilmiş bir elektroporasyon puls için floresan etiketlendi siRNA (8 V, 1 mili saniye) ile HeLa hücrelerinin Yere-özgü transfeksiyon Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. 8. V, 1 milisaniye de siRNA için elektroporasyon verim ± 74.4 bulundu% 16.0 ve edildiHücre canlılığı 87.9 ±% 8.4 (ortalama olarak temsil edilen tüm veriler ortalama ± standart sapma, N = 5) olarak tespit edilmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4415/4415fig1.jpg" /> Şekil 200 mikron elektrot (6 V, 5 ms) hakkında HeLa hücrelerinde PI 1. Siteye özgü teslimat. A) Calcien göre canlı assay 2 saat sonrası elektroporasyon gerçekleştirilir. Canlı hücreleri yeşil floresan ile gösterilir. B) Kırmızı floresan elektrot üzerinde hücreleri tarafından PI alımını gösterir. C) A ve B beyaz oklar A bindirilmiş görüntü electroporated ve canlı hücreleri gösterir. Siyah oklar ölü hücreleri gösterir. A, B ve C &#39;de beyaz bir daire elektrot dış hatlarını göstermektedir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4415/4415fig2.jpg" /> Şekil 2. Floresan etiketlendi scrambl ile HeLa hücrelerinin transfeksiyonusiRNA e dizisi. A) bir 100 um elektrot üzerinde HeLa hücreleri ile ilgili görüntü Alexa 488 etiketli siRNA (8 V, 1 mili saniye) ile transfekte. B) hücre çekirdeğinin Görüntü DAPI ile boyanmış. Beyaz bir daire elektrot kenarına işaretler.

<ol>
	<li>Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Caplen, N. J., Parrish, S., Imani, F., Fire, A., Morgan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+inhibition+of+gene+expression+by+small+double-stranded+RNAs+in+invertebrate+and+vertebrate+systems.">Specific inhibition of gene expression by small double-stranded RNAs in invertebrate and vertebrate systems.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 9742 (2001).</li><li>Elbashir, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duplexes+of+21-nucleotide+RNAs+mediate+RNA+interference+in+cultured+mammalian+cells.">Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells.</a> Nature. 411, 494-498 (2001).</li><li>Brummelkamp, T. R., Bernards, R., Agami, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+system+for+stable+expression+of+short+interfering+RNAs+in+mammalian+cells.">A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells.</a> Science. 296, 550 (2002).</li><li>Lee, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+small+interfering+RNAs+targeted+against+HIV-1+rev+transcripts+in+human+cells.">Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells.</a> Nat. Biotechnol. 20, 500-505 (2002).</li><li>Miyagishi, M., Taira, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=U6+promoter-driven+siRNAs+with+four+uridine+3'+overhangs+efficiently+suppress+targeted+gene+expression+in+mammalian+cells.">U6 promoter-driven siRNAs with four uridine 3' overhangs efficiently suppress targeted gene expression in mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 20, 497-500 (2002).</li><li>Paul, C. P., Good, P. D., Winer, I., Engelke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+expression+of+small+interfering+RNA+in+human+cells.">Effective expression of small interfering RNA in human cells.</a> Nat. Biotechnol. 20, 505-508 (2002).</li><li>Xia, H., Mao, Q., Paulson, H. L., Davidson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=siRNA-mediated+gene+silencing+in+vitro+and+in+vivo.">siRNA-mediated gene silencing in vitro and in vivo.</a> Nat. Biotechnol. 20, 1006-1010 (2002).</li><li>Chu, G., Hayakawa, H., Berg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+for+the+efficient+transfection+of+mammalian+cells+with+DNA.">Electroporation for the efficient transfection of mammalian cells with DNA.</a> Nucleic Acids Res. 15, 1311 (1987).</li><li>Felgner, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofection:+a+highly+efficient,+lipid-mediated+DNA-transfection+procedure.">Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 84, 7413 (1987).</li><li>Raptis, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=applications+of+electroporation+of+adherent+cells+in+situ,+on+a+partly+conductive+slide.">applications of electroporation of adherent cells in situ, on a partly conductive slide.</a> Mol. Biotechnol. 4, 129-138 (1995).</li><li>Jordan, M., Schallhorn, A., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfecting+mammalian+cells:+optimization+of+critical+parameters+affecting+calcium-phosphate+precipitate+formation.">Transfecting mammalian cells: optimization of critical parameters affecting calcium-phosphate precipitate formation.</a> Nucleic Acids Res. 24, 596-601 (1996).</li><li>Gao, Y., Liu, X. L., Li, X. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+on+siRNA+delivery+with+nonviral+carriers.">Research progress on siRNA delivery with nonviral carriers.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 1017 (2011).</li><li>Ziauddin, J., Sabatini, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarrays+of+cells+expressing+defined+cDNAs.">Microarrays of cells expressing defined cDNAs.</a> Nature. 411, 107-110 (2001).</li><li>Yamauchi, F., Kato, K., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+and+temporally+controlled+gene+transfer+by+electroporation+into+adherent+cells+on+plasmid+DNA-loaded+electrodes.">Spatially and temporally controlled gene transfer by electroporation into adherent cells on plasmid DNA-loaded electrodes.</a> Nucleic Acids Res. 32, e187 (2004).</li><li>Yamauchi, F., Kato, K., Iwata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Layer-by-Layer+Assembly+of+Poly+(ethyleneimine)+and+Plasmid+DNA+onto+Transparent+Indium?+Tin+Oxide+Electrodes+for+Temporally+and+Spatially+Specific+Gene+Transfer.">Layer-by-Layer Assembly of Poly (ethyleneimine) and Plasmid DNA onto Transparent Indium? Tin Oxide Electrodes for Temporally and Spatially Specific Gene Transfer.</a> Langmuir. 21, 8360-8367 (2005).</li><li>Jain, T., Muthuswamy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microsystem+for+transfection+of+exogenous+molecules+with+spatio-temporal+control+into+adherent+cells.">Microsystem for transfection of exogenous molecules with spatio-temporal control into adherent cells.</a> Biosensors and Bioelectronics. 22, 863-870 (2007).</li><li>Jain, T., Muthuswamy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bio-chip+for+spatially+controlled+transfection+of+nucleic+acid+payloads+into+cells+in+a+culture.">Bio-chip for spatially controlled transfection of nucleic acid payloads into cells in a culture.</a> Lab on a Chip. 7, 1004-1011 (2007).</li><li>Jain, T., Muthuswamy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microelectrode+array+(MEA)+platform+for+targeted+neuronal+transfection+and+recording.">Microelectrode array (MEA) platform for targeted neuronal transfection and recording.</a> Biomedical Engineering, IEEE Transactions on. 55, 827-832 (2008).</li><li>Jain, T., McBride, R., Head, S., Saez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+parallel+introduction+of+nucleic+acids+into+mammalian+cells+grown+in+microwell+arrays.">Highly parallel introduction of nucleic acids into mammalian cells grown in microwell arrays.</a> Lab on a Chip. 9, 3557-3566 (2009).</li><li>Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+and+high-throughput+electroporation+microchip+applicable+for+siRNA+delivery.">An efficient and high-throughput electroporation microchip applicable for siRNA delivery.</a> Lab Chip. 11, 163-172 (2010).</li><li>Li, Z., Wei, Z., Li, X., Du, Q., Liang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+high-throughput+electroporation+chips.">Efficient and high-throughput electroporation chips.</a> , (2011).</li><li>Jain, T., Papas, A., Jadhav, A., McBride, R., Saez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+electroporation+of+surface-bound+siRNAs+in+microwell+arrays.">In situ electroporation of surface-bound siRNAs in microwell arrays.</a> Lab Chip. 12, 939-947 (2012).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Electroporationfor+Gene+Transfer+In+Vivo.">Single-Cell Electroporationfor Gene Transfer In Vivo.</a> Neuron. 29, 583-591 (2001).</li><li>Akaneya, Y., Jiang, B., Tsumoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+gene+silencing+by+local+electroporation+in+targeting+brain+region.">RNAi-induced gene silencing by local electroporation in targeting brain region.</a> J. Neurophysiol. 93, 594 (2005).</li><li>Lee, W. G., Demirci, U., Khademhosseini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscale+electroporation:+challenges+and+perspectives+for+clinical+applications.">Microscale electroporation: challenges and perspectives for clinical applications.</a> Integr. Biol. 1, 242-251 (2009).</li><li>Boukany, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanochannel+electroporation+delivers+precise+amounts+of+biomolecules+into+living+cells.">Nanochannel electroporation delivers precise amounts of biomolecules into living cells.</a> Nature Nanotechnology. 6, 747-754 (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu video yazıda siRNA karıştırılmış dizisi ile HeLa hücrelerinin siteye özgü transfeksiyon için MEA kullanımını göstermektedir. Bu teknolojinin avantajlarından biri primer hücre hatları da dahil olmak üzere farklı hücre hatları uygulanabilmesidir. Bizim laboratuarında önce E18 gün yaşlı sıçan ve pişmiş siRNA dizileri ve plazmid GFP 18, 19 ile NIH-3T3 hücreleri primer hipokampal nöronal kültür siteye özgü transfeksiyon için bu teknolojinin kullanımını göstermiştir. Bi...

<table border="1"><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Hücre ortamı: Gelişmiş MEM L-Glutamine 200 mM Penisilin / Streptomisin Fetal bovin serumu </td><td> Gibco / Invitrogen HIMEDIA Laboratuvarlar / VWR Lonza grup Ltd Gibco / Invitrogen </td><td> 12492-013 95057-448 09-757F 16000-044 </td><td> Hücre ortamı bileşimi: Peşin MEM içinde% 2 FCS,% 2 L-glutamin ve% 2 Pennstrep </td></tr><tr><td> Tripsin EDTA </td><td> Mediatech, Inc </td><td> 25-053-CL </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Mediatech, Inc </td><td> 21-040-CV </td><td></td></tr><tr><td> Tagged Alexa 488 ve rodamin sequ şifrelience siRNA </td><td> Qiagen, Inc </td><td> 1027292 </td><td></td></tr><tr><td> Elektroporasyon tampon </td><td> BioRad Laboratuvarlar </td><td> 165-2677 </td><td></td></tr><tr><td> Dalga jeneratörü </td><td> Pragmatik </td><td> 2414A </td><td> İstediğiniz darbe sunabilirsiniz Herhangi dalga / puls üreteci kullanılabilir. </td></tr></table>

high efficiency, site-specific transfection of adherent cells with sirna using microelectrode arrays (mea)

Ökaryotlarda ve böyle siRNA ve shRNA olarak RNAi ajanlar, sonraki gelişimi RNAi yolunun keşfi, fonksiyonel genomik ve tedavi için spesifik genler 1-8 susturmak için güçlü bir yöntem elde ettik. RNAi temelli çalışmalarda görev alan önemli bir sorun hedeflenen hücrelere RNAi ajanların teslimat. Böyle toplu elektroporasyon ve kimyasal transfeksiyon yöntemleri gibi geleneksel olmayan viral dağıtım teknikleri, genellikle teslimi üzerinde gerekli mekansal kontrol eksikliği ve 9-12 kötü transfeksiyon verimliliği göze. Bu tür katyonik lipidler, katyonik polimerler ve nanopartiküller olarak kimyasal transfeksiyon yöntemleri son gelişmeler son derece gelişmiş transfeksiyon verimliliği 13 sonuçlandı. Ancak, bu teknikler hala son derece yüksek verimli teknolojiler, tek hücre çalışmaları ve hücre-hücre etkileşimleri soruşturma minyatürize yararlanabilir teslimat üzerinde kesin mekansal kontrol sunmak için başarısız. nt &quot;gen teslimat&gt; En son teknolojik gelişmeler. yapışık hücrelere yüksek-throughput transfeksiyon 14-23, mikro elektroporasyon kullandığınız bir çoğunluğu sağlamıştır Microscale elektroporasyon (kadar tek hücrelere) teslimi üzerinde hassas uzay-zamansal kontrol sunuyor ve kanıtlanmıştır Ayrıca yüksek verimlilik 19, 24-26. ulaşmak için, elektroporasyon temelli yaklaşımlar kimyasal bazlı transfeksiyon yöntemleri gerekli siRNA ve DNA kompleksleri ile inkübasyon uzun bir süre (genellikle 4 saat) gerektirir ve çıplak siRNA ve DNA&#39;nın doğrudan giriş yol açmaz hücre sitoplazması içine molekülleri. Bunun bir sonucu olarak gen ekspresyonu transfeksiyondan 27 saat sonra altı gibi erken elde edilebilir. Laboratuarımız önceden yapışık memeli hücre kültürleri 17-19 site-spesifik transfeksiyon için mikroelektrot dizilerin kullanımı (MEA) göstermiştir. MEA temelli yaklaşım, genetik yükü teslim lokalize mikro ölçekli electroporati yoluyla elde edilirhücreleri üzerinde. Seçilen elektrotlar ile elektrik sinyalinin bir uygulama uyarılan elektrot bölgesinde mevcut hücrelerin elektroporasyonu yol açar lokal elektrik alanı oluşturur. Mikro elektrotların bağımsız denetim transfeksiyon üzerinde mekansal ve zamansal kontrolü sağlar ve deneysel verim artırılması ve kültür-to-kültür değişkenliği azaltarak aynı kültürü üzerinde yapılacak birden transfeksiyon tabanlı deneyler sağlar. Burada deneysel kurulum ve elektroporasyon kullanarak bir floresan etiketli karıştırılmış dizisi siRNA ile yapışık HeLa hücrelerinin hedef transfeksiyon için protokol açıklar. Aynı protokol de plazmit vektörlerinin transfeksiyon için de kullanılabilir. Buna ek olarak, burada tarif edilen protokol küçük değişikliklerle kolaylıkla ile memeli hücre çizgileri, çeşitli için genişletilebilir. Önceden tanımlanmış ve özel her iki elektrot desenleri ile ÇÇA&#39;lar Ticari durumu bu teknik erişilebilir t olunTemel hücre kültürü ekipmanları ile o en fazla araştırma laboratuarları.

Watch this Scientific Journal Video about High efficiency, Site-specific Transfection of Adherent Cells with siRNA Using Microelectrode Arrays MEA at JoVE.com

High efficiency, Site-specific Transfection of Adherent Cells with siRNA Using Microelectrode Arrays MEA

Bir mikroelektrot dizisi (MEA) kullanarak bir yapışkan memeli hücre kültüründe siRNA karıştırılmış dizi site-spesifik transfeksiyon için madde ayrıntılar protokolü.

Mikroelektrod Diziler Kullanarak siRNA Bağlanan Hücre Yüksek verim, Siteye özgü Transfeksiyon (MEA)

The discovery of RNAi pathway in eukaryotes and the subsequent development of RNAi agents, such as siRNA and shRNA, have achieved a potent method for ...

high-efficiency-site-specific-transfection-adherent-cells-with-sirna

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High efficiency, Site-specific Transfection of Adherent Cells with siRNA Using Microelectrode Arrays (MEA)

13.4K Görüntüleme.  Arizona State University. Bir mikroelektrot dizisi (MEA) kullanarak bir yapışkan memeli hücre kültüründe siRNA karıştırılmış dizi site-spesifik transfeksiyon için madde ayrıntılar protokolü.

Video: High efficiency, Site-specific Transfection of Adherent Cells with siRNA Using Microelectrode Arrays MEA

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus replication. Here we present the application of this technology to uncovering host targets that specifically modulate the replication of Maraba virus, an oncolytic rhabdovirus, and vaccinia virus with the goal of enhancing therapy. While the protocol has been tested for use with oncolytic Maraba virus and oncolytic vaccinia virus, this approach is applicable to other oncolytic viruses and can also be utilized for identifying host targets that modulate virus replication in mammalian cells in general. This protocol describes the development and validation of an assay for high-throughput RNAi screening in mammalian cells, the key considerations and preparation steps important for conducting a primary high-throughput RNAi screen, and a step-by-step guide for conducting a primary high-throughput RNAi screen; in addition, it broadly outlines the methods for conducting secondary screen validation and tertiary validation studies. The benefit of high-throughput RNAi screening is that it allows one to catalogue, in an extensive and unbiased fashion, host factors that modulate any aspect of virus replication for which one can develop an in vitro assay such as infectivity, burst size, and cytotoxicity. It has the power to uncover biotherapeutic targets unforeseen based on current knowledge.

Here we describe a protocol for employing high-throughput RNAi screening to uncover host targets that can be manipulated to enhance oncolytic virus therapy, specifically rhabodvirus and vaccinia virus therapy, but it can be readily adapted to other oncolytic virus platforms or for discovering host genes that modulate virus replication generally.

Tedavi Oncolytic virusu modüle ana faktörleri tanımlamak için genom çapında RNAi tarama

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

Kanser Araştırmaları

Drug-induced Sensitization of Adenylyl Cyclase: Assay Streamlining and Miniaturization for Small Molecule and siRNA Screening Applications

Sensitization of adenylyl cyclase (AC) signaling has been implicated in a variety of neuropsychiatric and neurologic disorders including substance abuse and Parkinson&#39;s disease. Acute activation of G&#945;i/o-linked receptors inhibits AC activity, whereas persistent activation of these receptors results in heterologous sensitization of AC and increased levels of intracellular cAMP. Previous studies have demonstrated that this enhancement of AC responsiveness is observed both in vitro and in vivo following the chronic activation of several types of G&#945;i/o-linked receptors including D2 dopamine and &#956; opioid receptors. Although heterologous sensitization of AC was first reported four decades ago, the mechanism(s) that underlie this phenomenon remain largely unknown. The lack of mechanistic data presumably reflects the complexity involved with this adaptive response, suggesting that nonbiased approaches could aid in identifying the molecular pathways involved in heterologous sensitization of AC. Previous studies have implicated kinase and Gb&#947; signaling as overlapping components that regulate the heterologous sensitization of AC. To identify unique and additional overlapping targets associated with sensitization of AC, the development and validation of a scalable cAMP sensitization assay is required for greater throughput. Previous approaches to study sensitization are generally cumbersome involving continuous cell culture maintenance as well as a complex methodology for measuring cAMP accumulation that involves multiple wash steps. Thus, the development of a robust cell-based assay that can be used for high throughput screening (HTS) in a 384&#160;well format would facilitate future studies. Using two D2 dopamine receptor cellular models (i.e.&#160;CHO-D2L and HEK-AC6/D2L), we have converted our 48-well sensitization assay (&#62;20 steps 4-5 days) to a five-step, single day assay in 384-well format. This new format is amenable to small molecule screening, and we demonstrate that this assay design can also be readily used for reverse transfection of siRNA in anticipation of targeted siRNA library screening.

Persistent activation of inhibitory G protein-coupled receptors results in sensitization of adenylyl cyclase signaling. To identify the essential molecular pathways, nonbiased approaches are necessary; however, this strategy requires the development of a scalable cell-based cAMP sensitization assay. Herein, we describe a sensitization assay for small molecule and siRNA screening.

Adenilat siklaz uyuşturucu kaynaklı Sensitizasyonu: Küçük Molekül ve siRNA Tarama Uygulamaları için Deney düzene ve minyatür

Sensitization of adenylyl cyclase (AC) signaling has been implicated in a variety of neuropsychiatric and neurologic disorders including substance abuse ...

Biyomühendislik

Porous Silicon Microparticles for Delivery of siRNA Therapeutics

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the successful implementation of siRNA therapy requires the use of delivery platforms that can overcome the major challenges of siRNA delivery, such as enzymatic degradation, low intracellular uptake and lysosomal entrapment. Here, a protocol for the preparation and use of a biocompatible and effective siRNA delivery system is presented. This platform consists of polyethylenimine (PEI) and arginine (Arg)-grafted porous silicon microparticles, which can be loaded with siRNA by performing a simple mixing step. The silicon particles are gradually degraded over time, thereby triggering the formation of Arg-PEI/siRNA nanoparticles. This delivery vehicle provides a means for protecting and internalizing siRNA, without causing cytotoxicity. The major steps of polycation functionalization, particle characterization, and siRNA loading are outlined in detail. In addition, the procedures for determining particle uptake, cytotoxicity, and transfection efficacy are also described.

Delivery remains the main challenge for the therapeutic implementation of small interfering RNA (siRNA). This protocol involves the use of a multifunctional and biocompatible siRNA delivery platform, consisting of arginine and polyethylenimine grafted porous silicon microparticles.

SiRNA Therapeutics teslimi için Gözenekli Silikon Mikropartiküller

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Macrophages are key phagocytic innate immune cells. When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the pathogen, produce various cytokines and chemokines to recruit and stimulate other immune cells, and present antigens to stimulate the adaptive immune response. Thus, being able to efficiently manipulate macrophages with techniques such as RNA-interference (RNAi) is critical to our ability to investigate this important innate immune cell. However, macrophages can be technically challenging to transfect and can exhibit inefficient RNAi-induced gene knockdown. In this protocol, we describe methods to efficiently transfect two mouse macrophage cell lines (RAW264.7 and J774A.1) with siRNA using the Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System and describe procedures to maximize the effect of siRNA on gene knockdown. Moreover, the described methods are adapted to work in 96-well format, allowing for medium and high-throughput studies. To demonstrate the utility of this approach, we describe experiments that utilize RNAi to inhibit genes that regulate lipopolysaccharide (LPS)-induced cytokine production.

In this protocol, we describe methods to efficiently transfect murine macrophage cell lines with siRNAs using the Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System, stimulate the macrophages with lipopolysaccharide, and monitor the effects on inflammatory cytokine production.

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only to study the effects of downregulating single genes, but also to interrogate signaling pathways and other complex interaction networks.  These pathway analyses require both the use of relevant cellular models and methods that cause less perturbation to the cellular physiology.  Electroporation is increasingly being used as an effective way to introduce siRNA and other nucleic acids into difficult to transfect cell lines and primary cells without altering the signaling pathway under investigation. There are multiple critical steps to a successful siRNA experiment, and there are ways to simplify the work while improving the data quality at several experimental stages.  To help you get started with your siRNA mediated gene knockdown project, we will demonstrate how to perform a pathway study complete from collecting and counting the cells prior to electroporation through post transfection real-time PCR gene expression analysis.  The following study investigates the role of the transcriptional activator STAT6 in IL-4 dependent gene expression of CCL17 in a Burkitt lymphoma cell line (Namalwa).  The techniques demonstrated are useful for a wide range of siRNA-based experiments on both adherent and suspension cells.  We will also show how to streamline cell counting with the TC10 automated cell counter, how to electroporate multiple samples simultaneously using the MXcell electroporation system, and how to simultaneously assess RNA quality and quantity with the Experion automated electrophoresis system.

This procedure describes a quick and easy workflow to introduce siRNA into difficult to transfect cell lines and follow gene expression by real-time PCR. Use of an automated cell counter, multi-well electroporation plate, and automated electrophoresis station provide quick and reliable results without the need for expensive robotic handling.

Gen İfadesi Çalışmaları basitleştirin Otomatik Hücre Sayıcı kullanma: Namalwa Hücreler IL-4 Bağımlı Gen İfadesi siRNA demonte

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Biyoloji

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as small interfering RNAs (siRNAs). The short double-stranded RNAs originate from longer double stranded precursors by the activity of Dicer, a protein of the RNase III family of endonucleases. The resulting fragments are components of the RNA-induced silencing complex (RISC), directing it to the cognate target mRNA. RISC cleaves the target mRNA thereby reducing the expression of the encoded protein1,2,3. RNAi has become a powerful and widely used experimental method for loss of gene function studies in mammalian cells utilizing small interfering RNAs.
Currently two main methods are available for the production of small interfering RNAs. One method involves chemical synthesis, whereas an alternative method employs endonucleolytic cleavage of target specific long double-stranded RNAs by RNase III in vitro. Thereby, a diverse pool of siRNA-like oligonucleotides is produced which is also known as endoribonuclease-prepared siRNA or esiRNA. A comparison of efficacy of chemically derived siRNAs and esiRNAs shows that both triggers are potent in target-gene silencing. Differences can, however, be seen when comparing specificity. Many single chemically synthesized siRNAs produce prominent off-target effects, whereas the complex mixture inherent in esiRNAs leads to a more specific knockdown10.
In this study, we present the design of genome-scale MISSION esiRNA libraries and its utilization for RNAi screening exemplified by a DNA-content screen for the identification of genes involved in cell cycle progression. We show how to optimize the transfection protocol and the assay for screening in high throughput. We also demonstrate how large data-sets can be evaluated statistically and present methods to validate primary hits. Finally, we give potential starting points for further functional characterizations of validated hits.

Here we use a human esiRNA library in a high-throughput screen for genes involved in cell division. We demonstrate how to set up and conduct an esiRNA screens, as well as how to analyze and validate the results.

Memeli Hücreleri RNAi Tarama MİSYON esiRNA

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

<meta charset="utf8"></head><body>A431 Hücrelerinde Elektroporasyon Analizi ve İletim Tahmini için TEEI Yöntemi

Porous Substrate-Based Electroporation with Transepithelial Electrical Impedance Monitoring

Porous substrate electroporation (PSEP) is an emerging method of electroporation that provides high throughput and consistent delivery. Like many other types of intracellular delivery, PSEP relies heavily on fluorescent markers and fluorescent microscopy to determine successful delivery. To gain insight into the intermediate steps of the electroporation process, a PSEP platform with integrated transepithelial electrical impedance (TEEI) monitoring was developed. Cells are cultured in commercially available inserts with porous membranes. After a 12 h incubation period to allow for the formation of a fully confluent cell monolayer, the inserts are placed in transfection media located in the wells of the PSEP device. The cell monolayers are then subjected to a user-defined waveform, and delivery efficiency is confirmed through fluorescent microscopy. This workflow can be significantly enhanced with TEEI measurements between pulsing and fluorescent microscopy to collect additional data on the PSEP process, and this additional TEEI data is correlated with delivery metrics such as delivery efficiency and viability. This article describes a protocol for performing PSEP with TEEI measurements.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Gündemi: Gelişmiş İzleme ve Ara Aşama Karakterizasyonu için Mikro ve Nanokanallar Aracılığıyla Gözenekli Substrat Elektroporasyonunu Optimize Etme

Porous substrate electroporation (PSEP) pairs consistent, high throughput delivery with high cell viability. Introduction of transepithelial electrical impedance (TEEI) measurements provides insight into the intermediate processes of PSEP and allows for label-free delivery. This article discusses a method for performing PSEP delivery experiments and TEEI measurement analysis simultaneously.

Transepitelyal Elektriksel Empedans İzleme ile Gözenekli Substrat Bazlı Elektroporasyon

Porous substrate electroporation (PSEP) is an emerging method of electroporation that provides high throughput and consistent delivery. Like many other ...

Workflow for High-content, Individual Cell Quantification of Fluorescent Markers from Universal Microscope Data, Supported by Open Source Software

Advances in understanding the control mechanisms governing the behavior of cells in adherent mammalian tissue culture models are becoming increasingly dependent on modes of single-cell analysis. Methods which deliver composite data reflecting the mean values of biomarkers from cell populations risk losing subpopulation dynamics that reflect the heterogeneity of the studied biological system. In keeping with this, traditional approaches are being replaced by, or supported with, more sophisticated forms of cellular assay developed to allow assessment by high-content microscopy. These assays potentially generate large numbers of images of fluorescent biomarkers, which enabled by accompanying proprietary software packages, allows for multi-parametric measurements per cell. However, the relatively high capital costs and overspecialization of many of these devices have prevented their accessibility to many investigators.
Described here is a universally applicable workflow for the quantification of multiple fluorescent marker intensities from specific subcellular regions of individual cells suitable for use with images from most fluorescent microscopes. Key to this workflow is the implementation of the freely available Cell Profiler software1&#160;to distinguish individual cells in these images, segment them into defined subcellular regions and deliver fluorescence marker intensity values specific to these regions. The extraction of individual cell intensity values from image data is the central purpose of this workflow and will be illustrated with the analysis of control data from a siRNA screen for G1 checkpoint regulators in adherent human cells. However, the workflow presented here can be applied to analysis of data from other means of cell perturbation (e.g., compound screens) and other forms of fluorescence based cellular markers and thus should be useful for a wide range of laboratories.

Presented is a flexible informatics workflow enabling multiplexed image-based analysis of fluorescently labeled cells. The workflow quantifies nuclear and cytoplasmic markers and computes marker translocation between these compartments. Procedures are provided for perturbation of cells using siRNA and reliable methodology for marker detection by indirect immunofluorescence in 96-well formats.

Yüksek içerik, Open Source Software tarafından desteklenen Evrensel Mikroskop Verilerden Floresan Göstergeler, Bireysel Hücre Niceleme için iş akışı

Advances in understanding the control mechanisms governing the behavior of cells in adherent mammalian tissue culture models are becoming increasingly ...

Mikroelektrod Diziler Kullanarak siRNA Bağlanan Hücre Yüksek verim, Siteye özgü Transfeksiyon (MEA)

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Tedavi Oncolytic virusu modüle ana faktörleri tanımlamak için genom çapında RNAi tarama

Adenilat siklaz uyuşturucu kaynaklı Sensitizasyonu: Küçük Molekül ve siRNA Tarama Uygulamaları için Deney düzene ve minyatür

SiRNA Therapeutics teslimi için Gözenekli Silikon Mikropartiküller

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Gen İfadesi Çalışmaları basitleştirin Otomatik Hücre Sayıcı kullanma: Namalwa Hücreler IL-4 Bağımlı Gen İfadesi siRNA demonte

Memeli Hücreleri RNAi Tarama MİSYON esiRNA

Transepitelyal Elektriksel Empedans İzleme ile Gözenekli Substrat Bazlı Elektroporasyon

Transepitelyal Elektriksel Empedans İzleme ile Gözenekli Substrat Bazlı Elektroporasyon

Transepitelyal Elektriksel Empedans İzleme ile Gözenekli Substrat Bazlı Elektroporasyon

Yüksek içerik, Open Source Software tarafından desteklenen Evrensel Mikroskop Verilerden Floresan Göstergeler, Bireysel Hücre Niceleme için iş akışı