Bu çalışma Sağlık Hibeler Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir K08 NS061039-01A2, Nöroloji Araştırma ve Keşif ve Michigan Üniversitesi&#39;nde A. Alfred Taubman Tıp Araştırma Enstitüsü için Programı. Bu çalışma, Morfoloji ve Diyabet ve Sindirim ve Böbrek Hastalıkları Ulusal Enstitüsü&#39;nden Sağlık Hibe 5P90 DK-20572 Ulusal Enstitüleri tarafından finanse edilen Michigan Diyabet Araştırma ve Eğitim Merkezi, resmi Analizi Çekirdek kullanılır. Yazarlar nosiseptif biyolojik immünhistokimya tekniği ilk gelişimini desteklemek için insan deri örneklerinde kendi cömert bağış için Robinson Singleton ve Gordon Smith (Utah Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum.

Bir Bölüm: İmmünohistokimya Arka plan boyama Delme deri biyopsisi 96 oyuklu plaka hazırlanması ve önlenmesi insan denekler toplandı ve sabitleştirici çözelti içinde 12-24 saat (2% 0.75 M L-Lizin çözeltisi (pH 7.4) ile paraformaldehit ve 0,05 mM sodyum periodat) inkübe edilir 4 ° C sıcaklıkta, daha önce tarif edildiği 8. Örnekler daha sonra daha sonra montaj medya optimum kesim sıcaklık (OCT), bir kriyostat 50 mikron kalınlığında bölüme kesitli gömülü, en fazla 1 hafta için 4 az 20% gliserol ° C ile tuzlu su (PBS) tamponlu fosfat cryoprotected vardır. Aşağıda tarif edilen protokole eden bir 96-çukurlu plaka içinde serbest bir immünohistokimya geçmesi deri kesitleri, maksimum sayıda olası, 8 deri kesitleri için tasarlanmıştır. 1. GÜN: 1. Stratum corneum Non-spesifik İmmünreaktivitesi önlenmesi <ol><li> Etiket 96 oyuklu plaka Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi. </li&gt; <li> Resim-IT 96-plaka Satır 1 her kuyuya arka plan boyama 11,12, engelleme etkili FX Sinyal (Resim-IT), 150 ul ekleyin. </li><li> 96-kuyulu plakanın Sıra 2 ve 3, her kuyuya 1X PBS 150 ul ekle. </li><li> Hasta başına iki adet 50 mikron bölümleri edinin: DL alınan biyopsi itibaren bir bölümü, PT alınan biyopsi gelen bir bölüm. Bir aşılama döngü (LeLoop) morfolojik zarar görmemesi için bir sonraki durulama birinden bölümleri aktarmak için kullanılır. Yavaşça Resim-IT içeren, iyi Satır 1 bir birey haline, bir aşılama döngü kullanarak, her 50 mikron bölümü aktarmak. Düz rocker oda sıcaklığında 30 dakika için Resim-IT bölümleri inkübe edin. </li><li> Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca PBS 1X (satırlar 2 ve 3) ile iki kez bölümleri durulayın. Durulama arasında düz bir rocker plaka yerleştirin. </li></ol> 2. % 5 BSA Engelleme Çözümü ve% 1 Yıkama Çözüm hazırlanması <ol><li> Biyopsi bölümleri Resim-BT kuluçka olsa da, çözüm engelleme 5% hazırlamaktın (% 5 BSA tamamen eriyene kadar BSA,% 0.3 TX-100, 0.1 M PBS-Vortex çözelti) eklenmiştir. </li><li> Satır 4 her kuyuya% 5 BSA engelleme çözeltisi 150 ul ekle. </li><li> , Bir aşılama döngü kullanılarak,% 5 BSA bloke çözeltisinin bireysel kuyulara bölümleri transfer. Düz rocker 1-2 oda sıcaklığında saat 5% BSA engelleme çözümü bölümleri inkübe edin. </li></ol> 3. Primer Antikorlar 1% BSA Durulama Çözüm ve Seyreltme hazırlanması <ol><li> Kesitler% 5 BSA çözeltisi içinde bloke kuluçka iken,% 1 durulama çözeltisi (% 1 BSA,% 0.3 TX-100, 0.1 M PBS-BSA çözeltisi Vorteks tamamen eriyene kadar) hazırlanması. </li><li> Kesitler% 5 BSA engelleme çözeltisi içinde inkübe edilir olsa da,% 1 çözeltisi durulama primer antikorlar seyreltin. <ol><li> Sekiz bölümden (8 x 150 ul = 1.200 ml) 1.200 ul toplam gereklidir. Primer antikor 1.500 ul (% 20 ilave hacim kadar) içinde yapılır. </li><li> Birincil antikor çözeltiler: PGP, 1:500; Trk A,1:500 1% BSA çözeltisi durulama. </li></ol></li></ol> 4. İlköğretim Antikor içinde Kesitli Biyopsiler inkübasyonu <ol><li> 96-kuyulu plakanın belirlenmiş oyuklara (sıra 5) içine seyreltilmiş birincil antikor 150 ul ekle. </li><li> Belirlenen primer antikor kuyular (Satır 5) içine% 5 engelleme çözümü (Satır 4) bölümleri aktarın. </li><li> Kurutma ve hafif etkilenmemesi için parafilm ve alüminyum folyo ile 96 plaka mühür. </li><li> Düz bir rocker 96-plaka 4 O / N ° C inkübe edin. </li></ol> 2. GÜN: 5. % 1 BSA Yıkama Çözüm Biyopsiler durulayın <ol><li> Her Serisi 6 iyi, 7, ve 8 içine% 1 BSA durulama solüsyonu 150 ul ekleyin. </li><li> 1 saat oda sıcaklığında her bir kez% 1 BSA durulama çözeltisi (satır 6, 7 ve 8) ile bölümler üç kez yıkayın. Durulama arasında düz rocker alüminyum folyo ve yer ile plaka Kapak. </li></ol> 6. İkincil antikorlar seyreltilmesi &lt;ol&gt; <li> Bölümler (Satır 8),% 1 BSA durulama çözeltisinin son durulama içerisinde inkübe edilir olsa da,% 1 BSA durulama çözeltisi içinde seyreltilmiş sekonder antikor: <ol><li> Sekiz bölümden (8 x 150 ul = 1.200 ml) 1.200 ul toplam gereklidir. İkincil antikorlar 1.500 ul (% 20 ilave hacim kadar) içinde yapılır. </li><li> İkincil antikor seyreltileri:% 1 BSA durulama çözeltisi içinde Trk A (Alexa Fluor 647 eşek anti-keçi, 1:250) PGP (Alexa Fluor 488 eşek anti-tavşan, 1:250) için. </li></ol></li></ol> 7. İkincil Antikor içinde Kesitli Biyopsiler inkübasyonu <ol><li> 96-kuyulu plakanın kendi belirlenmiş oyuklara (satır 9) içine seyreltilmiş sekonder antikor, 150 ul ekleyin. </li><li> De ikincil antikor içine% 1 BSA engelleme çözümü (Satır 8) (Row 9) bölümleri aktarın. </li><li> Kurutma ve hafif etkilenmemesi için parafilm ve alüminyum folyo ile 96 plaka mühür. </li><li> Belirlenen sekonder antikor O bölümleri inkübe4 de / N ° düz rocker C. </li></ol> 8. % 1 BSA Yıkama Çözüm Biyopsiler durulayın <ol><li> Sıra 10, 11, ve 12 her kuyuya% 1 BSA yıkama çözeltisi 150 ul ekle. </li><li> 1 saat oda sıcaklığında her bir kez% 1 BSA durulama çözeltisi (satır 10, 11, ve 12) ile bölümler üç kez yıkayın. Durulama arasında düz bir rocker alüminyum folyo ve yer ile plaka Kapak. </li></ol> 9. Mikroskop Slaytlar ve Montaj Kesitli Biyopsiler hazırlanması <ol><li> Biyopsi bölüm 1% BSA durulama solüsyonu (Satır 12) Son yıkamada kuluçka olsa da, mikroskop slaytlar hazırlamak. </li><li> Her seferinde bir slayt üzerinde% 1 BSA yıkama çözeltisi 50 ul koyun. </li><li> 1% BSA durulama solüsyonu (Satır 12) bölümleri çıkarın ve belirlenen mikroskop lamı üzerine 1% BSA durulama çözüm 50 ul damla yerleştirin. Bölümün konumunu optimize sonra, önlemlerin alınması, bir soğan biçiminde cam pipet ile fazla% 1 BSA durulama çözüm kaldırmakörnek dokunmamak için. </li></ol> NOT: bölümünün üzerine katlanmış olmadığından emin olun, numune mikroskop lamı yüzeyine karşı düz olmalıdır. <ol start="4"><li> Yeri 1 damla mikroskop lamı üzerine biyopsi yakın DAPI ile reaktif montaj Altın antifade uzatır. Bir 22x22 mm mikroskop cam lamel alın ve yavaşça biyopsi üzerine yerleştirin ve bir damla DAPI damla ile Altın antifade reaktif uzatmak. Her bölüm için tekrarlayın. </li><li> Karanlıkta oda sıcaklığında O / N mikroskop slaytlar kurumasını bekleyin. </li></ol> NOT: Bir pipet kullanarak herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarın. Altın antifade reaktif uzatmak uzak aşırı silin. Bölüm B: Konfokal Görüntüleme 10. Konfokal Görüntüleme <ol><li> 40X yağ daldırma (1.3 NA) objektif ve Fluoview sürüm 5.0 yazılımı ile zoom iki kez konfokal mikroskop tarama bir Olympus Fluoview 500 lazer kullanarak görüntü floresan sinyalleri. </li&gt; <li> Sırasıyla 543-nm HeNe yeşil lazer ve 633-nm HeNe Kırmızı lazer, heyecanlandırmak için Alexa Fluor 488 ve Alexa Fluor 647 kullanın. Alexa Fluor 488 sinyal kırmızı bir LUT tarafından masa yeşil bir görünüm (LUT) ve Alexa Fluor 647 ile temsil edilir. </li><li> Sinyalleri geliştirmek için 400 mikron her dedektör için konfokal diyafram ayarlayın. Sıralı tarama sinyal ayırma üst düzeye çıkarmak için 1.024 x 1.024 çözünürlükte alınmalıdır. </li><li> Kalman ortalama (iki kare) ile 1.2 mikron z adım aralıklarla (Fluoview yazılımı tarafından hesaplanan en uygun tarama ünitesi dayalı) kullanarak üç boyutlu z serisi yakalamak. </li></ol> Bölüm C: Üç boyutlu Görselleştirme ve Animasyon 11. Üç boyutlu (3D) Görselleştirme ve Animasyon <ol><li> Imaris x64 yazılım açık Fluoview dosyaları (sürüm 7.3, Bitplane AG) 3D görüntü setleri görselleştirmek için. </li><li> Ayarlayın gibi sinir belirli bir sinyal kontrast arttırmak için gerekli görüntüler. </li><li> Bir su oluşturmakdermal-epidermal sınır görselleştirmek için RFaCe. Sınır çizmek için beraberlik modunda Kontur aracını kullanın. </li><li> Temel floresan sinyalleri görmek için sınır bir yarı saydam yüzey atayın. </li><li> 3D film Anlık görüntüler oluşturmak için 3D floresan sinyallerin fotoğraf yakalayın. </li><li> Bir 3D film oluşturmak için animasyon özelliğini kullanın. Görüntüler (Şekil 2, 3, ve 4) ayrı ayrı ve birleştirilmiş her sinyal göstermek için 360 derece birkaç kez döndürülebilir. Saniyede 15 kare animasyon 200 kare oluşan filmleri oluşturmak için animasyon ayarlayın. Bir ham AVI dosyası olarak her bir film kaydedin. </li><li> VirtualDub yazılımı (versiyon 1.9.4) ile son AVI film sıkıştırın. </li></ol>

<ol>
	<li>Lauria, G., Holland, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+innervation:+changes+with+aging,+topographic+location,+and+in+sensory+neuropathy.">Epidermal innervation: changes with aging, topographic location, and in sensory neuropathy.</a> J. Neurol. Sci. 164 (2), 172-178 (1999).</li><li>Sullivan, K. A., Hayes, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+diabetic+neuropathy.">Mouse models of diabetic neuropathy.</a> Neurobiol. Dis. 28 (3), 276-285 (2007).</li><li>McArthur, J. C., Stocks, E. A., Hauer, P., Cornblath, D. R., Griffin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+nerve+fiber+density:+normative+reference+range+and+diagnostic+efficiency.">Epidermal nerve fiber density: normative reference range and diagnostic efficiency.</a> Arch. Neurol. 55 (12), 1513-1520 (1998).</li><li>Griffin, J. W., McArthur, J. C., Polydefkis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cutaneous+innervation+by+skin+biopsies.">Assessment of cutaneous innervation by skin biopsies.</a> Curr. Opin. Neurol. 14 (5), 655-659 (2001).</li><li>Cheng, H. T., Dauch, J. R., Hayes, J. M., Yanik, B. M., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+growth+factor/p38+signaling+increases+intraepidermal+nerve+fiber+densities+in+painful+neuropathy+of+type+2+diabetes.">Nerve growth factor/p38 signaling increases intraepidermal nerve fiber densities in painful neuropathy of type 2 diabetes.</a> Neurobiol. Dis. 45 (1), 280-287 (2012).</li><li>Lauria, G., Lombardi, R., Camozzi, F., Devigili, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+biopsy+for+the+diagnosis+of+peripheral+neuropathy.">Skin biopsy for the diagnosis of peripheral neuropathy.</a> Histopathology. 54 (3), 273-285 (2009).</li><li>Vlckova-Moravcova, E., Bednarik, J., Dusek, L., Toyka, K. V., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+validity+of+epidermal+nerve+fiber+densities+in+painful+sensory+neuropathies.">Diagnostic validity of epidermal nerve fiber densities in painful sensory neuropathies.</a> Muscle Nerve. 37 (1), 50-60 (2008).</li><li>Casanova-Molla, J., Morales, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+fluorescence+quantitation+provides+a+new+approach+to+assess+cutaneous+innervation.">Axonal fluorescence quantitation provides a new approach to assess cutaneous innervation.</a> J. Neurosci. Methods. 200 (2), 190-198 (2011).</li><li>Wang, L., Hilliges, M., Jernberg, T., Wiegleb-Edstrom, D., Johansson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+gene+product+9.5-immunoreactive+nerve+fibres+and+cells+in+human+skin.">Protein gene product 9.5-immunoreactive nerve fibres and cells in human skin.</a> Cell Tissue Res. 261 (1), 25-33 (1990).</li><li>Lauria, G., Morbin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+capsaicin+receptor+immunoreactivity+in+human+peripheral+nervous+system+and+in+painful+neuropathies.">Expression of capsaicin receptor immunoreactivity in human peripheral nervous system and in painful neuropathies.</a> J. Peripher. Nerv. Syst. 11 (3), 262-271 (2006).</li><li>Penna, G., Fibbi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+benign+prostatic+hyperplasia+stromal+cells+as+inducers+and+targets+of+chronic+immuno-mediated+inflammation.">Human benign prostatic hyperplasia stromal cells as inducers and targets of chronic immuno-mediated inflammation.</a> J. Immunol. 182 (7), 4056-4064 (2009).</li><li>Lentz, S. I., Edwards, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+(mtDNA)+Biogenesis:+Visualization+and+Duel+Incorporation+of+BrdU+and+EdU+Into+Newly+Synthesized+mtDNA+In+Vitro.">Mitochondrial DNA (mtDNA) Biogenesis: Visualization and Duel Incorporation of BrdU and EdU Into Newly Synthesized mtDNA In Vitro.</a> J. Histochem. Cytochem. 58 (2), 207-218 (2010).</li><li>Polydefkis, M., Hauer, P., Griffin, J. W., McArthur, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+biopsy+as+a+tool+to+assess+distal+small+fiber+innervation+in+diabetic+neuropathy.">Skin biopsy as a tool to assess distal small fiber innervation in diabetic neuropathy.</a> Diabetes Technol. Ther. 3 (1), 23-28 (2001).</li><li>Lauria, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+fibre+neuropathies.">Small fibre neuropathies.</a> Curr. Opin. Neurol. 18 (5), 591-597 (2005).</li><li>Sorensen, L., Molyneaux, L., Yue, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+among+pain,+sensory+loss,+and+small+nerve+fibers+in+diabetes.">The relationship among pain, sensory loss, and small nerve fibers in diabetes.</a> Diabetes Care. 29 (4), 883-887 (2006).</li><li>Lauria, G., Morbin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+swellings+predict+the+degeneration+of+epidermal+nerve+fibers+in+painful+neuropathies.">Axonal swellings predict the degeneration of epidermal nerve fibers in painful neuropathies.</a> Neurology. 61 (5), 631-636 (2003).</li><li>Herrmann, D. N., McDermott, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+nerve+fiber+density,+axonal+swellings+and+QST+as+predictors+of+HIV+distal+sensory+neuropathy.">Epidermal nerve fiber density, axonal swellings and QST as predictors of HIV distal sensory neuropathy.</a> Muscle Nerve. 29 (3), 420-427 (2004).</li><li>Navarro, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+27:+Neural+plasticity+after+nerve+injury+and+regeneration.">Chapter 27: Neural plasticity after nerve injury and regeneration.</a> Int. Rev. Neurobiol. 87, 483-505 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etmek.

IENFD ölçümü yaygın periferik nöropatiler 13,14 derecesini belirlemek için kullanılmıştır. Şu anda, en sık kullanılan protokol sadece epidermisin bazal membran nüfuz sinir liflerinin yoğunluğu ölçer, bu dikkate aksonal dallanma ve / veya sinirlerin morfolojik değişiklikler almaz. Buna ek olarak, mevcut IENFD analiz PN 15 ağrı varlığı ile IENFD ilişkili olduğu gösterilmiştir olmamıştır. Daha önce nosiseptif IENFD artan sayıda db / db fa...

Şu anda, küçük lif nöropatiler 3, 6-8 teşhis etmek için kullanılabilir deri punch biyopsi, gelen intraepidermal sinir lifi yoğunluğu, (IENFD) ölçmek için hekimler için yaygın bir uygulamadır. Biyopsiler distal bacak (DL), lateral malleol üzerinde 10 cm, ve proksimal uyluk (PT), anterior iliyak 9 aşağıda 20 cm alınır. Tüm İESL protein gen ürünü 9.5 (PGP), bir pan nöronal belirteç 10-12 kullanılarak etiketlenir. Şu anda, standart kullanarak küçük lif nöropati teşhis etmek için uygulama aydınlık mikroskobu 6 ile PGP boyama tarafından belirlenir IENFD. Olduğu Ayrıca, çeşitli araştırma grupları PGP immünhistokimya 7-9 için immunofluorescent protokolleri kullandık. Küçük lif nöropati genellikle nöropatik ağrı ile ilişkilidir. Daha fazla ağrı işlem için gerekli İESL rolünü anlamak için, biz ağrı oluşturmak lifleri ile birlikte etiket toplam İESL için bir teknik geliştirdi. Nocicepözellikle Aö tive İESL ve C lifleri, PGP ile İESL bir arada-etiketleme ve nosiseptif işaretleyici, tropomiyozin-reseptör-kinaz A (Trk A) 5 üzerinden incelenebilir. Trk A nosisepsiyon gelişimi için gerekli olan bir sinir büyüme faktörü için yüksek afiniteli reseptördür. Trk A pozitif nosiseptif sinir lifleri peptiderjik lifleri olduğunu ifade P maddesi (SP) ve kalsitonin gen ilişkili peptid (CGRP). Daha önce, Lauria ve arkadaşları PN, 10 bir nosiseptif işaretleyici ile birlikte etiketleme PGP pozitif İESL incelemek için çift etiketleme tekniği uygulanır. Daha önceki çalışmada, Trk A pozitif İESL, ancak Trk A-negatif İESL, ağrılı diyabetik nöropati 5 bir hayvan modelinde upregulated olduğunu göstermiştir. Bu ortak etiketleme tekniği IENFD ve PN ile ilişkili morfolojik çalışma yeteneği toplam nosiseptif IENFD ölçümü karşılaştırmak için yeteneği sağlar. Nosiseptif İESL ve iştigal görselleştirmek için yeteneğinosiseptif IENFD toplam IENFD yeniden ölçümü PN ile ilişkili ağrının şiddeti içine objektif ağrı varlığı için kanıt, ve muhtemelen fikir verebilir. Bu teknik ayrıca, hayvan modelleri arasında cilde uygulanabilir. Daha önceki çalışmalarda ile karşılaştırıldığında, mevcut protokol 2D görüntü analizi oluşabilir hataları önlemek için fırsat yaratmak, 3D görüntü analizi için yöntemler anlatılmaktadır.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td>To make up 1X PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image-IT FX Signal</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I36933</td>
			<td>Image-IT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Gene Product 9.5 (Polyclonal rabbit)</td>
			<td>AbD Serotec</td>
			<td>7863-0504</td>
			<td>PGP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropomyosin Related-Kinase A (Polyclonal goat)</td>
			<td>R&amp;D Systems</td>
			<td>AF1056</td>
			<td>Trk A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey &alpha;-rabbit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21206</td>
			<td>AF488 donkey &alpha;-goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 donkey &alpha;-goat</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21447</td>
			<td>AF647 donkey &alpha;-goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin, from Bovine Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906-100</td>
			<td>BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X- 100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td>TX-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-calibrated Loop</td>
			<td>LeLoop</td>
			<td>MP 199025</td>
			<td>inoculating Loop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well assay plate</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3603</td>
			<td>Well plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold antifade reagent with DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36931</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass 22x22 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-541-B</td>
			<td>Coverslips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td>Microscope Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus Fluoview Laser Scanning Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV500</td>
			<td>Confocal Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum Cutting Temperature</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1850</td>
			<td>Cryostat</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional imaging of nociceptive intraepidermal nerve fibers in human skin biopsies

Bir deri punch biyopsi sık periferik polinöropati 1,2 tanısında intraepidermal sinir lifi yoğunluğu (IENFD) ölçmek için kullanılır. Şu anda, distal bacak (DL) ve uzunluk bağımlı polinöropatiler 3 değerlendirilmesi için proksimal uyluk (PT) 3 mm biyopsi toplamak için yaygın bir uygulamadır. Ancak, IENFs ve çok yönlü olması nedeniyle, iki boyutlu (2B) görüntüleme analizi yoluyla sinir yapıları üst üste incelemek zordur. Alternatif olarak, üç boyutlu (3D) görüntüleme Bu ikilem için daha iyi bir çözüm sağlayabilir. Mevcut raporda, ağrılı nöropati (PN) incelemek için 3D görüntüleme uygulamak için yöntemler mevcut. IENFs tespit etmek amacıyla, deri örneklerinde protein gen ürünü, 9.5 (PGP), bir pan nöronal belirteç immunofloresans analizi için işlenir. Şu anda, IENFD caydırmak kullanarak küçük lif nöropati teşhis etmek için standart bir uygulamadıraydınlık mikroskobu 4 kullanarak PGP immünohistokimyasal tarafından mayınlı. Mevcut çalışmada, PGP kullanılarak, toplam IENFD belirlemek için çift immunofloresans analizi uygulandı ve nosiseptif İESL, sinir büyüme faktörü 5 A (Trk A), yüksek afiniteli reseptör tropomiyozin-reseptör kinaz tanıyan antikorların kullanımı yoluyla. PGP ve Trk A antikorları ile birlikte boyama İESL avantajları açıkça PGP pozitif, nosiseptif lifler boyanarak PN çalışma yararlanır. Bu floresan sinyalleri PN ile ilişkili İESL nosiseptif IENFD ve morfolojik değişiklikleri belirlemek için ölçülebilir. Floresan görüntüler konfokal mikroskobu ile elde edilen ve 3D analiz için işlenir. 3D görüntüleme daha PN ile ilişkili morfolojik analiz dönme yetenekleri sağlar. Birlikte ele alındığında, floresan ortak boyama, konfokal görüntüleme ve 3D analiz açıkça PN çalışma yarar.

Biz PN hastalardan PT ve DL biyopsi İESL morfolojisini incelemek için geçerli protokol uygulanır. Cilt, üç konulardan, PN ile ilişkili pathomorphology göstermek için Utah Üniversitesi&#39;nde toplandı. Konular şunlardır: Durum 1: tip 2 diyabet (: 14 ay; ağrı skoru: süresi 51); PN öyküsü olan 51 yaşındaki erkek Durum 2: PN öyküsü olan 56 yaşındaki erkek ve Durum 3: Tip 2 diyabet (: 42 ay; ağrı skoru: süresi 46) PN bir geçmişi olan 66 yaşındaki erkek; tip 2 diyabet (:; 47 ağrı skoru 108 ...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies at JoVE.com

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Ağrılı nöropatiler (PN) olarak nosiseptif intraepidermal sinir lifleri (IENFs) değişiklikleri incelemek için, doğrudan nosiseptif IENFs gözlenen üç boyutlu morfolojik değişiklikleri incelemek olabilir protokolleri geliştirmiştir. IENFs üç boyutlu analiz PN İESL morfolojik değişiklikleri değerlendirmek için bir potansiyele sahiptir.

İnsan Cilt Biyopsiler içinde Nosiseptif İntraepidermal Sinir Elyaf üç boyutlu görüntüleme

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

three-dimensional-imaging-nociceptive-intraepidermal-nerve-fibers

Research

JoVE Journal

Medicine

13.0K Görüntüleme.  University of Michigan. Ağrılı nöropatiler (PN) olarak nosiseptif intraepidermal sinir lifleri (IENFs) değişiklikleri incelemek için, doğrudan nosiseptif IENFs gözlenen üç boyutlu morfolojik değişiklikleri incelemek olabilir protokolleri geliştirmiştir. IENFs üç boyutlu analiz PN İESL morfolojik değişiklikleri değerlendirmek için bir potansiyele sahiptir.

Video: Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human malignancies.1 Other than surgery for the minority of patients who present with localized disease, there is little or no survival benefit of systemic therapy. Therefore, there is a great need to better understand the biology of NETs, and in particular define new therapeutic targets for patients with nonresectable or metastatic neuroendocrine tumors. 3D cell culture is becoming a popular method for drug screening due to its relevance in modeling the in vivo tumor tissue organization and microenvironment.2,3 The 3D multicellular spheroids could provide valuable information in a more timely and less expensive manner than directly proceeding from 2D cell culture experiments to animal (murine) models.
To facilitate the discovery of new therapeutics for NET patients, we have developed an in vitro 3D multicellular spheroids model using the human NET cell lines. The NET cells are plated in a non-adhesive agarose-coated 24-well plate and incubated under physiological conditions (5% CO2, 37 &deg;C) with a very slow agitation for 16-24 hr after plating. The cells form multicellular spheroids starting on the 3rd or 4th day. The spheroids become more spherical by the 6th day, at which point the drug treatments are initiated. The efficacy of the drug treatments on the NET spheroids is monitored based on the morphology, shape and size of the spheroids with a phase-contrast light microscope. The size of the spheroids is estimated automatically using a custom-developed MATLAB program based on an active contour algorithm. Further, we demonstrate a simple method to process the HistoGel embedding on these 3D spheroids, allowing the use of standard histological and immunohistochemical techniques. 
This is the first report on generating 3D spheroids using NET cell lines to examine the effect of therapeutic drugs. We have also performed histology on these 3D spheroids, and displayed an example of a single drug's effect on growth and proliferation of the NET spheroids. Our results support that the NET spheroids are valuable for further studies of NET biology and drug development.

We present a simple agarose overlay platform to grow 3D multicellular spheroids using neuroendocrine cancer cell lines. This method provides a very convenient way to examine the effect of therapeutic drugs on the neuroendocrine tumor cells. It could also help us establish human neuroendocrine tumor spheroids for cancer therapy.

İnsan Nöroendokrin Tümör Terapi Çalışmaları Üç Boyutlu Model İnsan nöroendokrin tümör hücre hatlarında

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Tıp

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods rely on the ability of cells either to attach to a solid substratum of a tissue culture dish or to grow in suspension in liquid medium. Multiple immortal cell lines have been created and grown using such approaches, however, these methods frequently fail when primary cells need to be grown ex vivo. Such failure has been attributed to the absence of the appropriate extracellular matrix components of the tissue microenvironment from the standard systems where tissue culture plastic is used as a surface for cell growth. Extracellular matrix is an integral component of the tissue microenvironment and its presence is crucial for the maintenance of physiological functions such as cell polarization, survival, and proliferation. Here we present a 3-dimensional tissue culture method where primary bone marrow cells are grown in extracellular matrix formulated to recapitulate the microenvironment of the human bone (rBM system). Embedded in the extracellular matrix, cells are supplied with nutrients through the medium supplemented with human plasma, thus providing a comprehensive system where cell survival and proliferation can be sustained for up to 30 days while maintaining the cellular composition of the primary tissue. Using the rBM system we have successfully grown primary bone marrow cells from normal donors and patients with amyloidosis, and various hematological malignancies. The rBM system allows for direct, in-matrix real time visualization of the cell behavior and evaluation of preclinical efficacy of novel therapeutics. Moreover, cells can be isolated from the rBM and subsequently used for in vivo transplantation, cell sorting, flow cytometry, and nucleic acid and protein analysis. Taken together, the rBM method provides a reliable system for the growth of primary bone marrow cells under physiological conditions.

In standard culture methods cells are taken out of their physiological environment and grown on the plastic surface of a dish. To study the behavior of primary human bone marrow cells we created a 3-D culture system where cells are grown under conditions recapitulating the native microenvironment of the tissue.

İlköğretim İnsan Kemik İliği ve Maligniteleri Eğitim Bir Üç boyutlu Doku Kültürü Modeli

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in particular (e.g., brain tumors such as glioblastoma multiforme and squamous cell carcinoma of the head and neck &#8211; SCCHN) it is a cause of severe morbidity and can be life-threatening even in the absence of distant metastases. In addition, cancers which have relapsed following treatment unfortunately often present with a more aggressive phenotype. Therefore, there is an opportunity to target the process of invasion to provide novel therapies that could be complementary to standard anti-proliferative agents. Until now, this strategy has been hampered by the lack of robust, reproducible assays suitable for a detailed analysis of invasion and for drug screening. Here we provide a simple micro-plate method (based on uniform, self-assembling 3D tumor spheroids) which has great potential for such studies. We exemplify the assay platform using a human glioblastoma cell line and also an SCCHN model where the development of resistance against targeted epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors is associated with enhanced matrix-invasive potential. We also provide two alternative methods of semi-automated quantification: one using an imaging cytometer and a second which simply requires standard microscopy and image capture with digital image analysis.

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is a defining characteristic of malignant tumors. We provide here a simple, semi-automated micro-plate assay of invasion into a natural 3D biomatrix that has been exemplified with a number of models of advanced human cancers.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from brown sea algae. Briefly, the tumor tissue is cut into small pieces and submitted to an enzymatic digestion with collagenase and trypsin. Next, a cell suspension is obtained. The tumor cell suspension is mixed with 1.2% sodium alginate and dropped into a CaCl2 solution, and the alginate/cell suspension is gelled on contact with the CaCl2 to form spherical beads. The cells embedded in the alginate beads are supplied with nutrients provided by the culture media enriched with 20% FBS. Three-dimensional culture in alginate beads maintains the viability of adenoma cells for long periods of time, up to four months. Moreover, the cells can be liberated from the alginate by washing the beads with sodium citrate and seeded on glass coverslips for further immunocytochemical analyses. The use of a cell culture model allows for the fixation and visualization of the actin cytoskeleton with minimal disorganization. In summary, alginate beads provide a reliable culture system for the maintenance of pituitary adenoma cells.

Three-dimensional culture in alginate beads, due to its simplicity and reproducibility, was chosen to maintain the pituitary adenoma cells. The procedures included an initial enzymatic digestion and mechanical dissociation of the tumor tissue, and the subsequent cell suspension was encapsulated in alginate beads.

İnsan Hipofiz Adenom Hücreleri üç boyutlu Aljinat-boncuk Kültür

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently labelled structures in large biological specimens, and is down to cellular resolution. Meanwhile, the constant refinement of underlying protocols and the enhanced availability of specialized commercial systems enable us to investigate the microstructure of whole mouse organs and even allow for the characterization of cellular behavior in various live-cell imaging approaches. Here, we describe a protocol for the spatial whole-mount visualization and quantification of the CD45+ leukocyte population in inflamed mouse hearts. The method employs a transgenic mouse strain (CD11c.DTR)that has recently been shown to serve as a robust, inducible model for the study of the development of fulminant fatal myocarditis, characterized by lethal cardiac arrhythmias. This protocol includes myocarditis induction, intravital antibody-mediated cell staining, organ preparation, and LSFM with subsequent computer-assisted image post-processing. Although presented as a highly-adapted method for our particular scientific question, the protocol represents the blueprint of an easily adjustable system that can also target completely different fluorescent structures in other organs and even in other species.

Here, we describe a light-sheet microscopy approach to visualize the cardiac CD45+ leukocyte infiltrate in a murine model of aseptic fulminant myocarditis, which is induced by the intratracheal diphtheria toxin treatment of CD11c.DTR mice.

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Objective Nociceptive Assessment in Ventilated ICU Patients: A Feasibility Study Using Pupillometry and the Nociceptive Flexion Reflex

The concept of objective nociceptive assessment and optimal pain management have gained increasing attention. Despite the known negative short- and long-term consequences of unresolved pain or excessive analgosedation, adequate nociceptive monitoring remains challenging in non-communicative, critically ill adults. In the intensive care unit (ICU), routine nociceptive evaluation is carried out by the attending nurse using the Behavior Pain Scale (BPS) in mechanically ventilated patients. This assessment is limited by medication use (e.g., neuromuscular blocking agents) and the inherent subjective character of nociceptive evaluation by third parties.
Here, we describe the use of two nociceptive reflex testing devices as tools for objective pain evaluation: the pupillary dilation reflex (PDR) and nociception flexion reflex (NFR). These measurement tools are non-invasive and well tolerated, providing clinicians and researchers with objective information regarding two different nociceptive processing pathways: (1)&#160;the pain-related autonomic reactivity&#160;and (2) the ascending component of the somatosensory system. The use of PDR and NFR measurements are currently limited to specialized pain clinics and research institutions because of impressions that these are technically demanding or time-consuming procedures, or even because of a lack of knowledge regarding their existence.
By focusing on the two abovementioned nociceptive reflex assessments, this study evaluated their feasibility as a physiological pain measurement method in daily practice. Pursuing novel technologies for evaluating the analgesia level in unconscious patients may further improve individual pharmacological treatment and patient related outcome measures. Therefore, future research must include large well-designed clinical trials in a real-life environment.

Pain assessment in anesthetized patients who cannot communicate with the outside world in any way remains challenging despite the development of innovative objective pain evaluation tools. In this project, the pupillary dilation reflex and the nociception flexion reflex are assessed in critically ill, mechanically ventilated adult patients.

Havalandırılmış yoğun bakım hastalarında objektif nosiseptif değerlendirme: Pupillometry ve nosiseptif fleksiyon refleks kullanarak bir fizibilite çalışması

The concept of objective nociceptive assessment and optimal pain management have gained increasing attention. Despite the known negative short- and ...

Three-Dimensional Printing of a Complex Aortic Anomaly

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal symptoms. These anomalies may be associated with other congenital heart diseases. It is hard to identify the accurate anatomic vessel location from two-dimensional imaging data, such as computed tomography. As an additive manufacturing method, three-dimensional (3-D) printing can covert the acquired imaging data into 3-D physical models. This protocol describes the procedure for modeling the volumetric DICOM imaging into 3-D data and printing it as an anatomically realistic 3-D model. Using this model, surgeons can identify the vessel location of complex aortic anomalies, which is helpful for pre-operative planning and intra-operative guidance.

Here, we present a protocol to use three dimensional printed models for pre-operative planning and intra-operative reorganization of complicated vascular locations when handling a congenital aortic anomaly.

Karmaşık bir aort anomali üç boyutlu baskı

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal ...

Refined CLARITY-Based Tissue Clearing for Three-Dimensional Fibroblast Organization in Healthy and Injured Mouse Hearts

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of mortality worldwide and is often marked by heightened cardiac fibrosis that can lead to increased ventricular stiffness with altered cardiac function. This increase in cardiac ventricular fibrosis is due to activation of resident fibroblasts, although how these cells operate within the 3-dimensional (3-D) heart, at baseline or after activation, is not well understood. To examine how fibroblasts contribute to heart disease and their dynamics in the 3-D heart, a refined CLARITY-based tissue clearing and imaging method was developed that shows fluorescently labeled cardiac fibroblasts within the entire mouse heart. Tissue resident fibroblasts were genetically labeled using Rosa26-loxP-eGFP florescent reporter mice crossed with the cardiac fibroblast expressing Tcf21-MerCreMer knock-in line. This technique was used to observe fibroblast localization dynamics throughout the entire adult left ventricle in healthy mice and in fibrotic mouse models of heart disease. Interestingly, in one injury model, unique patterns of cardiac fibroblasts were observed in the injured mouse heart that followed bands of wrapped fibers in the contractile direction. In ischemic injury models, fibroblast death occurred, followed by repopulation from the infarct border zone. Collectively, this refined cardiac tissue clarifying technique and digitized imaging system allows for 3-D visualization of cardiac fibroblasts in the heart without the limitations of antibody penetration failure or previous issues surrounding lost fluorescence due to tissue processing.

A refined method of tissue clearing was developed and applied to the adult mouse heart. This method was designed to clear dense, autofluorescent cardiac tissue, while maintaining labeled fibroblast fluorescence attributed to a genetic reporter strategy.

Sağlıklı ve Yaralı Fare Kalplerinde Üç Boyutlu Fibroblast Organizasyonu için Rafine CLARITY Tabanlı Doku Temizleme

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of mortality worldwide and is often marked by heightened cardiac fibrosis that can lead to increased ...

High-Resolution Three-Dimensional Imaging of the Footpad Vasculature in a Murine Hindlimb Gangrene Model

Peripheral arterial disease (PAD) is a significant cause of morbidity resulting from chronic exposure to atherosclerotic risk factors. Patients suffering from its most severe form, chronic limb-threatening ischemia (CLTI), face substantial impairments to daily living, including chronic pain, limited walking distance without pain, and nonhealing wounds. Preclinical models have been developed in various animals to study PAD, but mouse hindlimb ischemia remains the most widely used. There can be significant variation in response to ischemic insult in these models depending on the mouse strain used and the site, number, and means of arterial disruption. This protocol describes a unique method combining femoral artery and vein electrocoagulation with the administration of a nitric oxide synthase (NOS) inhibitor to reliably induce footpad gangrene in Friend Virus B (FVB) mice that resembles the tissue loss of CLTI. While traditional means of assessing reperfusion such as laser Doppler perfusion imaging (LDPI) are still recommended, intracardiac perfusion of the lipophilic dye 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) is used to label the vasculature. Subsequent whole-mount confocal laser scanning microscopy allows for high-resolution, three-dimensional (3D) reconstruction of footpad vascular networks that complements traditional means of assessing reperfusion in hindlimb ischemia models.

The present protocol describes a unique, clinically relevant model of peripheral arterial disease that combines femoral artery and vein electrocoagulation with the administration of a nitric oxide synthase inhibitor to induce hindlimb gangrene in FVB mice. Intracardiac DiI perfusion is then used for high-resolution, three-dimensional imaging of the footpad vasculature.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Peripheral arterial disease (PAD) is a significant cause of morbidity resulting from chronic exposure to atherosclerotic risk factors. Patients suffering ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, pulpitis or apical periodontitis may develop in the long term. Root canal treatment of teeth with severe PCO and pulpal or periapical pathosis is challenging for general practitioners and even for well-equipped endodontic specialists. To ensure detection of the calcified root canal and avoid excessive loss of tooth structure or root perforation, static navigation using templates ("Guided Endodontics") was introduced a few years ago. The general workflow includes three-dimensional imaging using cone-beam computed tomography (CBCT), a digital surface scan, and superimposition of both in a planning software. This is followed by virtual planning of the access cavity and the design of a template that will guide the drill to the desired target point. To do this, a true-to-scale virtual image of the drill must be placed in a way that the tip of the drill reaches the orifice of the calcified root canal. Once the template has been fabricated using computer-aided design and computer-aided manufacturing (CAD/CAM) or a 3D printer, guided preparation of the access cavity can be performed clinically. For research purposes, a postoperative CBCT image can be used to quantify the accuracy of the access cavity performed. This work aims to present the technique of static guided endodontics from imaging to clinical implementation.

Guided endodontics describes a template-aided approach for access cavity preparation. The procedure requires cone-beam computed tomography and a surface scan to produce a template. An incorporated sleeve guides the drill to the target point. This allows the preparation of minimally invasive endodontic access cavities in calcified teeth.

Rehberli Endodonti: Üç Boyutlu Planlama ve Endodontik Erişim Boşluklarının Şablon Destekli Hazırlanması

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...