Yazarlar, bu protokolün geliştirilmesi ile yardım için Rejeneratif Tıp Wake Forest Enstitüsü teşekkür ederim. Biz Great Ormond Street Hastanesi sadaka hibe ile destek kabul, Vakıf Eugenio Litta (Cenevre, İsviçre), Tıbbi Araştırma Konseyi, İngiltere için İngiltere Cerrahlar, Sparks Çocuk Tıp Charity, İngiliz Dışişleri Bakanlığı&#39;nın Kraliyet Koleji / ABD Hücre İşbirliği Ödülü ve Mittal Araştırma Fonu Stem. Biz de Çocuk Sağlığı Enstitüsü, Çocuk Cerrahisi Anabilim Dalı için elde doku mühendisliği laboratuvar yenileme hibe için Royal Society / Wolfson Vakfı&#39;na teşekkür etmek istiyorum. PDC ve SE Great Ormond Street Hastanesi Çocuk Vakfı tarafından desteklenmektedir.

1.. Rat Bağırsak İzolasyonu <ol><li> % 1 antibiyotik / antimikotik (Sigma, UK) (PBS / AA) ile fosfat tamponlu tuzlu çözeltisi (Sigma, UK) bir 1 L çözelti hazırlayın. Iki tüp ile peristaltik pompa (Masterflex L / S değişken hız) takınız. Başka bir 15 dakika boyunca PBS / AA ve ardından en yüksek hızda 15 dakika boyunca peristaltik pompanın tüpler aracılığıyla% 70 etanol (EtOH) çalıştırın. </li><li> CO 2 inhalasyon ve (İngiltere, Hayvanlar (Scientific Procedures) Yasası 1986 altında Home Office kurallar) Yerel hayvan kurallar ve onayları doğrultusunda, boyunları kırılarak yaklaşık 250-350 g ağırlığında Sprague-Dawley sıçanları Euthanize. </li><li> Kullanmadan önce cerrahi aletler otoklavlayın. Sprey ve% 70 EtOH ile hayvanın karın silin. </li><li> Net bir cerrahi alan sağlamak için karın üzerinde bir xifo-kasık laparotomik kesi gerçekleştirin. </li><li> % 70 EtOH ile püskürtülen bir kağıt havlu üzerine hayvanın sağ tarafında ince bağırsak Eviscerate. Takhücre dışı matrisin (ECM) &#39;nin doku ve denatürasyon su kaybını önlemek için sürekli bir şekilde PBS / AA bağırsak ıslak bakım e. </li><li> Bağırsak doğru aorta 90 ° açı ile çıkan superior mezenterik arter (SMA) bulun. Aort SMA girmek ve hızlı bir şekilde kabın duvarı yırtılmasını önlemek için iğnenin geri çekilmesi hususunda bir 27 G kanül kullanın. SMA içine kanül plastik tüp ilerlemek ve sütür (vicryl 5/0) tutturun. </li><li> PBS / AA 1 ml enjekte edilerek kanülasyon onaylayın. Kanül serbest şekilde SMA aorta proksimal ve distal kesilirken yaylı makas kullanın. </li><li> Kalın bağırsak üzerinden kesme zaman dışkı sızmasını önlemek için, bir (İpek 5/0) dikiş ileocaecal birleşme proksimal ucunda düğüm ve sigmoid kolon ve uzak ucunda bir yer. Daha sonra, iki düğüm arasındaki terminal ileum ve kolon kesme ve kalın bağırsak çıkarın. </li><li> Jejuno-duodenum kavşak a da bağırsak Cutnd karın ile olabilecek herhangi bir bağ dokusu bağlantıları bağırsak ücretsiz. </li><li> PBS / AA ile bir Petri kabındaki ince bağırsak aktarın. Bir plastik Pasteur pipet (LSL Laboratuvar Sarf) ile bağırsağın proksimal bölümünü Cannulate ve dikişlerle yerine sabitleyin. Bir 60 ml şırınganın luer-lok (BD Plastipak) uyacak şekilde pipet kesin. Intestinal lümen dışkı ve enkaz kaldırmak için PBS / AA 60 ml 2x yıkayın. </li></ol> 2. Decellularization Metodoloji <ol><li> Üç yollu musluk için damar kanülü bağlayın. Bu, kullanım kolaylığı vasküler ağacın üzerine gerginlik en aza indirmek ve boru gelen kabarcıkların çıkarılmasını sağlayacaktır. </li><li> 0.6 ml / st &#39;de Masterflex L / S değişken hızlı rulo pompa ile, iyonu giderilmiş su (18.2 MQ direnç / cm) çalışan başlatın. Kabarcıklar önce bağırsak lümen musluğu ile bağlantı için bir boru içinde mevcut olduğundan emin olun. Bazı kabarcıklar aşama lümen içinde mevcut olabilir,1.9, decellularization sürecini bozabilecek. Pompanın hızını Vary ve uzak ucundan itibaren en kabarcıklar çıkış sağlamak için dikkatli bir forseps ile doku kolu. Yüksek hızlarda damar ağaca zarar olabilir çünkü bu süreç tamamlanana kadar damar kanül bağlamayın. </li><li> Decellularization aşağıdaki aşama 4 ° C&#39;de gerçekleştirilir, çünkü soğuk odaya transfer aparatı Düşük sıcaklık doku ayrışmasını en aza indirgerken hücre çıkarılmasına izin verir. Taşan çözüm toplayacak bir kapta Petri yerleştirin. 0.6 ml / saat, 24 saat boyunca bağırsak lümeni ve deiyonize su ile damar ağacı (direnç M 18.2 / cm) iki serpmek. İlk saat tüm bağlantıların sağlam olduğundan emin olmak için düzenli olarak kontrol cihazı için, kaçak minimal ve hiçbir kabarcıklar bağırsak içinde mevcut. </li><li> Iyonu giderilmiş su ile tedavinin 24 saat sonra adımlardır geri kalanı gibi soğuk oda dışında decellularization cihaz hareketOda sıcaklığında (RT) olarak gerçekleştirilmiştir. </li><li> Iyonu giderilmiş su içinde% 4 solüsyon 300 ml hazırlamak için, sodyum deoksikolat (Sigma, UK) tartılır. Bir ağız ve göz tahriş edici olduğu gibi, bir emme başlık altında sodyum deoksişolat tartılır. Çözelti berrak olana kadar bir vorteks ile karıştırın. Çözelti, en fazla 1 ay boyunca 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Herhangi bir kabarcıkları ve 0.6 4 saat ml / saatte serpmek, bağlantılarını kontrol, sodyum deoksikolata deiyonize çözüm değiştirin. </li><li> Sodyum deoksikolat ve DNase-I arasındaki etkileşimi engellemek için 30 dakika boyunca PBS / AA sodyum deoksikolat yıkama aşaması sonrasında. </li><li> Deoksiribonükleaz-I (DNase I, Sigma) tartılır ve 1 M sodyum klorür, pH 7.4 içinde bir 2.000 kU çözeltisi 250 ml hazırlar. Çözelti berrak olana kadar bir vorteks ile karıştırın. Bu çözelti kullanımdan hemen önce hazırlanmalı ve depolanamaz. </li><li> 0.6 ml / saat &#39;lık bir hızda oda sıcaklığında 3 saat boyunca DNase-I ile serpmek. </li><li> DNase I-adımından sonra, aktarmaBir doku kültürü kaputu içine iskelesi ve tabak ve araçları değiştirmek. Bu aseptik teknik kullanılması tavsiye edilir. </li><li> Decellularization çözeltilerin her kalıntıları çıkarıldığından emin olmak için, 30 dakika boyunca PBS / AA ile yıkayın. Yeni bir Petri tabağına yerleştirin iskele ve bir UV çapraz bağlayıcı madde (Spectroline, ABD) ve transfer. İki sterilizasyon döngüleri çalıştırın. Her 3 günde bir% 5 PBS / AA saklamak ve çözüm değiştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Atala, A., Bauer, S. B., Soker, S., Yoo, J. J., Retik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+bladders+for+patients+needing+cystoplasty.">Tissue-engineered autologous bladders for patients needing cystoplasty.</a> Lancet. 367 (9518), 1241-1246 (2006).</li><li>Raya-Rivera, A., Esquiliano, D. R., Yoo, J. J., Lopez-Bayghen, E., Soker, S., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+urethras+for+patients+who+need+reconstruction:+an+observational+study.">Tissue-engineered autologous urethras for patients who need reconstruction: an observational study.</a> Lancet. 377 (9772), 1175-1182 (2011).</li><li>Macchiarini, P., Jungebluth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+transplantation+of+a+tissue-engineered+airway.">Clinical transplantation of a tissue-engineered airway.</a> Lancet. 372 (9655), 2023-2030 (2008).</li><li>Macchiarini, P., Walles, T., Biancosino, C., Mertsching, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+human+transplantation+of+a+bioengineered+airway+tissue.">First human transplantation of a bioengineered airway tissue.</a> J. Thorac. Cardiov. Surg. 128 (4), 638-641 (2004).</li><li>Elliott, M. J., de Coppi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell-based,+tissue+engineered+tracheal+replacement+in+a+child:+a+2-year+follow-up+study.">Stem-cell-based, tissue engineered tracheal replacement in a child: a 2-year follow-up study.</a> Lancet. 380 (9846), 994-1000 (2012).</li><li>Grikscheit, T. C., Siddique, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+small+intestine+improves+recovery+after+massive+small+bowel+resection.">Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection.</a> Ann. Surg. 240 (5), 748-754 (2004).</li><li>Sala, F. G., Matthews, J. A., Speer, A. L., Torashima, Y., Barthel, E. R., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multicellular+Approach+Forms+a+Significant+Amount+of+Tissue-Engineered+Small+Intestine+in+the+Mouse.">A Multicellular Approach Forms a Significant Amount of Tissue-Engineered Small Intestine in the Mouse.</a> Tissue Eng. Part A. , (2011).</li><li>Matthews, J. A., Sala, F. G., Speer, A. L., Warburton, D., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF+optimizes+the+formation+of+tissue-engineered+small+intestine.">VEGF optimizes the formation of tissue-engineered small intestine.</a> Regen. Med. 6 (5), 559-567 (2011).</li><li>Chen, M. K., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+bowel+tissue+engineering+using+small+intestinal+submucosa+as+a+scaffold.">Small bowel tissue engineering using small intestinal submucosa as a scaffold.</a> J. Surg. Res. 99 (2), 352-358 (2001).</li><li>Wang, Z. Q., Watanabe, Y., Toki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+assessment+of+small+intestinal+submucosa+as+a+small+bowel+graft+in+a+rat+model.">Experimental assessment of small intestinal submucosa as a small bowel graft in a rat model.</a> J. Pediatr. Surg. 38 (11), 1596-1601 (2003).</li><li>Wang, Z. Q., Watanabe, Y., Noda, T., Yoshida, A., Oyama, T., Toki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+evaluation+of+regenerated+small+bowel+by+small+intestinal+submucosa.">Morphologic evaluation of regenerated small bowel by small intestinal submucosa.</a> J. Pediatr. Surg. 40 (12), 1898-1902 (2005).</li><li>Hori, Y., Nakamura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+study+on+tissue+engineering+of+the+small+intestine+by+mesenchymal+stem+cell+seeding.">Experimental study on tissue engineering of the small intestine by mesenchymal stem cell seeding.</a> J. Surg. Res. 102 (2), 156-160 (2002).</li><li>Gardner-Thorpe, J., Grikscheit, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+tissue-engineered+small+intestine.">Angiogenesis in tissue-engineered small intestine.</a> Tissue Eng. 9 (6), 1255-1261 (2003).</li><li>Conconi, M. T., Coppi, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+matrices,+obtained+by+a+detergent-enzymatic+method,+support+in+vitro+the+adhesion+of+chondrocytes+and+tracheal+epithelial+cells.">Tracheal matrices, obtained by a detergent-enzymatic method, support in vitro the adhesion of chondrocytes and tracheal epithelial cells.</a> Transpl. Int. 18 (6), 727-734 (2005).</li><li>Ott, H. C., Matthiesen, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion-decellularized+matrix:+using+nature's+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart.">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nat. Med. 14 (2), 213-221 (2008).</li><li>Uygun, B. E., Soto-Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat. Med. , 1-8 (2010).</li><li>Uygun, B. E., Price, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+recellularization+of+whole+livers.">Decellularization and recellularization of whole livers.</a> J. Vis. Exp. (48), e2394 (2011).</li><li>Petersen, T. H., Calle, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Engineered+Lungs+for+in+Vivo+Implantation.">Tissue-Engineered Lungs for in Vivo Implantation.</a> Science. 329 (5991), 538-541 (2010).</li><li>Ott, H. C., Clippinger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung.">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nat. Med. 16 (8), 927-933 (2010).</li><li>Calle, E. A., Petersen, T. H., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedure+for+lung+engineering.">Procedure for lung engineering.</a> J. Vis. Exp. (49), e2651 (2011).</li><li>Totonelli, G., Maghsoudlou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+decellularized+small+bowel+scaffold+that+preserves+villus-crypt+architecture+for+intestinal+regeneration.">A rat decellularized small bowel scaffold that preserves villus-crypt architecture for intestinal regeneration.</a> Biomaterials. 33 (12), 3401-3410 (2012).</li><li>Sala, F. G., Kunisaki, S. M., Ochoa, E. R., Vacanti, J., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+small+intestine+and+stomach+form+from+autologous+tissue+in+a+preclinical+large+animal+model.">Tissue-engineered small intestine and stomach form from autologous tissue in a preclinical large animal model.</a> J. Surg. Res. 156 (2), 205-212 (2009).</li><li>Demirbilek, S., Kanmaz, T., Ozardali, I., Edali, M. N., Y&#252;cesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+porcine+small+intestinal+submucosa+in+intestinal+regeneration.">Using porcine small intestinal submucosa in intestinal regeneration.</a> Pediatr. Surg. Int. 19 (8), 588-592 (2003).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu denemeyi kurarken en zor adımlar SMA kanülasyon ve kuruluş ve kısırlık bakımını içerir. Duvar yırtmadan kemirgenlerde SMA kanülü nedeniyle kabın boyutu ve konumu oldukça zor olabilir. Seçenek olarak ise, bir ameliyat dikiş ipliği SMA içine plastik kanül yönlendirilmesi, distal aort kendisinin kanül, ardından önceki SMA orijine proksimal aort etrafına yerleştirilebilir. Decellularization sırasında kötü kanül yerleştirilmesi ve yüksek akış oranları bir arada damar erişimi kaybetmenize neden olabilir. Sterilite, ince bağırsakta mevcut bakteri florasının miktarı nedeniyle önemli bir konudur. Hasat sonrası PBS / AA ile yıkanması çok önemlidir, ve dışkı veya enkaz herhangi bir işaret lumeninden kaldırılması gerekir. Kısırlık elde edilmiş ise UV sterilizasyondan sonra inkübatör içerisinde DMEM ile bir Falcon tüpüne iskeletin bir kısmını yerleştirme göstergesi olmalıdır. Durumdabakteriyel kolonizasyon, medya kendi rengi sarı kırmızı dönüm ile pH değişecek. Bu başa çıkmak için, daha fazla UV çevrimi PBS antibiyotik / antimikotik ajanın yüksek bir konsantrasyon içeren yıkama hem de tavsiye edilir. Damar ve venöz hem de erişimi olan bir iskele elde etmek için olası bir değişiklik inferior vena kava (IVC) yanı sıra, SMA kanüle olacaktır. Venöz ve damar taraftan Decellularization her üç çözelti için aralıklı olarak denenmelidir. Sürekli decellularization iki tarafta pozitif basınç alarak kılcal damarları patlayabilir. Yıllar boyunca in vitro ve in vivo 6,9,12 farklı hücre-iskelet kombinasyonları kullanılarak bağırsak TE içinde çabaları bir dizi olmuştur. Işin çoğunluğu kolajen tip I 6,7,13,22 ile kaplanmış boru şeklindeki dokuma olmayan% 95 PGA-PLGA% 5 yapı iskelesi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Intestinal ile ardından mibzerepitel organoid birimleri (OU) ve farelerin omentum içine implantasyon dönemi, daha sonra tübülerize edilebilir iç dış ve epiteli üzerinde kas kist oluştururlar. Bununla birlikte, bu iskelelerinin tasarımında gözeneklilik ve basitlik bir biyoreaktör edilen gibi bir in vitro ortamda yapay bağırsak büyük parçalarının üretimi için izin vermez. Buna ek olarak, ayrıca alıcıya bağlı olabilir bir doğal damar ağının eksikliği klinik çeviri için bu iskele kullanımını sınırlar. PGA-PLGA iskeleler olan deneylerde yanı sıra, diğer gruplar bağırsak yolunun karışıklık kopyalamazlar, her ikisi de kollajen veya SIS iskeleleri, kullandık. SIS özellikle intestinal doku mühendisliği sadece daha önce yayınlanmış bir yöntemdir ve mekanik sağlamlık sağlamak ve talebi sırasında hücre büyümesini teşvik etmek için hücresizleştirilmiş iskelelerinin yeteneğini gösteren, 150&#39;den tıbbi ortamlarda kullanılmaktadırhiçbir immünojenik tepki meydana getirmez ing. Ancak, uygun makro-ve mikro-mimarisi eksikliği, bağırsak TE amaçlar 9-11,23 için onun &#39;kullanımı kötü sonuçlara yol açmıştır. Tarif ettiğimiz decellularization metodolojisinin faydaları bağırsak kök hücre niş tarafından repopulation uygun bir ortamı temsil gibi lümen crypt-villus mimarisi gibi mikroskobik özelliklerinin korunmasını içerir. Makroskopik açıdan, hiyerarşik bir damar ağının varlığının, TE-bağırsak 21 her katmana besin ve oksijen sağlanmasını sağlayan, alıcıya eki sağlayacaktır. Dahası, örneğin kolajen, elastin ve glyocosaminoglycans gibi ECM bileşenlerin bakım mekanik özellikleri için değil, aynı zamanda, hücre proliferasyonunu ve farklılaşmasını yönlendirilmesi de önemli bir rolü vardır. En önemlisi, decellularization metodolojinin yeteneği geniş içine ölçeklendirilebiliraynı özellikleri muhafaza ederken r dokular TE klinik çeviri için önemli bir özelliktir. Vasküler ağ ile doğal intestinal matrisin gelişme ana bağlanabilir yapay bağırsak daha bölümlerinin oluşturulmasını sağlar.

Doku mühendisliği (TE) immünosüpresyon ve organ sıkıntısı konuları atlayarak, organ nakli için bir tedavi alternatifi sunar. TE son zamanlarda bu tür yetişkinler 3,4 ve çocuklarda 5 hem de mesane 1, üretra 2 ve trakea gibi organların değiştirilmesi ile, klinikte başarılı uygulamaları olmuştur. Bir doku mühendisliği organı Bina uygun hücreler ile bir iskele kombinasyonunu gerektirmektedir. Bir skafold doğal kaynaklı (örneğin, kolajen) kullanılarak hazırlandı ve sentetik (örneğin, poli-L-glikolik asit, PLGA) olabilir maddeler ya da doğal organ ve dokuların decellularization ile elde edilebilir. Intestinal TE için, şimdiye kadar kullanılmış olan iskele esas olarak 6-13 (poli-L-glikolik asit ve poli-laktik asit) decellularized (ince bağırsak mukoza) ya da sentetik ya da olmuştur. Bu biyomalzemeler, makro ve mikro-mimarisi hem de çok basit olandoku mühendisliği bağırsak klinik tercüme edilmesi için ise ideal olmayabilir. Bağırsak için optimal bir biyo materyal ile yardımcı olmak için lumen tarafında konağın kan gitmesi, bağırsak duvarının katmanları yansıtmak için, farklı özelliklere sahip bir katmanlı bir boru şeklinde duvar ve bir villus-kript eksenine bağlanabilir doğuştan gelen bir damar ağacı olmalıdır epitel kök hücreleri tarafından repopulation. Decellularization kendi özgün mimarisini 14 koruyarak bütün organların hücrelerini kaldırarak iskeleleri üreten bir roman yöntemdir. Bu, organ yapısını taklit değil, aynı zamanda hücre dışı matris (ECM) yardım hücre çoğalması ve farklılaşması içinde gömülü kimyasal ipuçları içeriyor sadece önceden bu yana yapı iskelesi mevcut olan tercih edilir. 2008 yılında kadavra trakea hastanın kendi hücreleri ile seribaşı, 14 decellularized ve genç bir adam sol ana bronşu yerine nakil oldu <sup&gt; 3. O zamandan beri, grup bir dizi küçük ve büyük hayvanlarda kalp 15, 16,17, karaciğer ve akciğer 18-20 için hücresizleştirilmiş iskeleler üretimini bildirmiştir. Ayrıca küçük bağırsak decellularized iskele 21 üretilmesi için aynı metodoloji adapte edilmiştir. Burada tarif edilen yöntemin amacı bu kan akımı gibi orijinal doku, hem de bağırsak lümeninde villus-kript ekseninin mikroskobik mimarisinin makroskopik özelliklerini korumak decellularized bağırsak matrisleri üretmektir. Biz bu metodoloji sonuçta decellularization verimliliğini artırmak için diğer organlar için kabul edilebilir inanıyorum.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol solution, 70% in H20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>02877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline tablets</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>79382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic Antimycotic Solution (100x)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6750</td>
			<td>Oral and eye irritant; use protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decellularization methodology for the production of a natural acellular intestinal matrix

Başarılı bir doku mühendisliği in vitro ya da in vivo olarak uygun bir hücre ile iskeleler kombinasyonunu içerir. Iskele, sentetik, doğal olarak türetilmiş ya da doku / organ türetilmiş olabilir. İkincisi decellularization adı verilen bir teknik kullanılarak elde edilir. Decellularization fiziksel, kimyasal ve enzimatik yöntemlerin bir arada içerebilir. Bu tekniğin amacı, orijinal doku makro-ve mikro-mimari muhafaza ederken, her hücresel izlerini ortadan kaldırmaktır. Bağırsak doku mühendisliği bugüne kadar yerli organın karmaşık mimarisini çoğaltmak değil nispeten basit iskeleleri kullandı. Bu çalışmanın odak noktası sıçan ince bağırsak için etkili bir decellularization tekniği tanımlamaktır. Ince bağırsağın izolasyon vasküler bağlantısının korunmasını sağlayacak şekilde tarif edilmiştir. Whil Hücreleri çıkarmak için kimyasal ve enzimatik çözümleri kombinasyonuiskele luminal açıdan villus-kript ekseni koruyucu st de belirtilmiştir. Son olarak, uygun özelliklere için üretilen iskelelerinin değerlendirilmesi tartışılmıştır.

Başarılı decellularization (Şekil 1) üzerine, skafold yerli bağırsağın benzer bir makroskopik bir görünüme sahip olmalıdır, ancak yarı saydam duvarlar (Şekil 2A) ile. Makro-mimarisinin korunması da vasküler ağacın açıklığının tarafından belirgin olmalıdır. Boya SMA kanülden enjekte edildiğinde, bu yapı iskeletinin her yerinde homojen bir şekilde dağılması ve kapiller ağaç (Şekil 2B) ulaşması gerekir. Iskele nükleer ve sitoplazmik malzeme, bir DNA miktar kiti ve basit histolojik analizi kullanılarak değerlendirilebilir şey özgür olmalıdır. Hematoksilin ve eozin boyama (H &amp; E), küçük bağırsak katmanları (Şekil 3A) muhafaza etmekte iken, nükleer ve sitoplazmik malzemesinin yokluğunu göstermelidir. Özellikle, luminal tarafta, villuslarda kript bakım tarama elektron mikroskobu (Şekil 4), aşağıdaki açık olmalıdır. Aörneğin kolajen, elastin ve glikozaminoglikanlar gibi hücre dışı matriks bileşenlerinin korunması da beklenmelidir. Örneğin, skafold (Şekil 3B) Masson trikrom görüntüler sağlam bağ dokusu. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/50658/50658fig1.jpg" width="600px" /> Şekil 1. . Decellularization prosedür deneysel planı Timeline; PBS / AA: antibiyotik-antimikotik, NaDeoxy ile fosfat tamponlu tuzlu su: Sodyum deoksikolatın, RT: oda sıcaklığı, DNAse-I: deoksiribonükleaz-I. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50658/50658fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/50658/50658fig2.jpg" width="600px" /> Şekil 2. İskele macroscopic özellikleri. başarılı decellularization sonra sıçan ince bağırsağın Makroskopik görünüm (A). Rosso Ponceau SMA ile boya enjeksiyon sağlam bir damar ağı (B) gösterir; SMA: superior mezenterik arter <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50658/50658fig2highres.jpg" target="_blank">büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/50658/50658fig3.jpg" width="600px" /> Şekil 3,. . Histoloji H &amp; E (A) ve MT (B) boyama bağ doku mimarisinin korunmasında hücresel malzemeden bir olmadığını gösterir; H &amp; E: hematoksilin ve eosin, MT: Masson trikrom. Ölçek çubuğu:. 100 mikron <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50658/50658fig3highres.jpg" target="_blank">büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın</a> . </p&gt; <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/50658/50658fig4.jpg" width="600px" /> Şekil 4. . Elektron Mikroskobu Taramalı elektron mikroskobu iskele lümen içinde korunmuş villus-kript mimarisini gösterir; Ölçek çubuğu:. 100 mikron <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50658/50658fig4highres.jpg" target="_blank">büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın</a> .

Watch this Scientific Journal Video about A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix at JoVE.com

A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix

Makalede, sıçan bağırsaktan bir hücresel olmayan matrisinin üretimi için bir yöntem anlatılmaktadır. Bağırsak iskelelerinin türetme hücre biyolojisi ve uyuşturucu testi kök, doku mühendisliği gelecekteki uygulamalar için önemlidir.

Doğal Aselüler Bağırsak Matrix&#39;in üretimi için bir Decellularization Metodoloji

Successful tissue engineering involves the  combination of scaffolds with appropriate cells in vitro or in vivo.  Scaffolds may be synthetic, ...

a-decellularization-methodology-for-production-natural-acellular

Research

JoVE Journal

Bioengineering

29.1K Görüntüleme.  University College London.  Makalede, sıçan bağırsaktan bir hücresel olmayan matrisinin üretimi için bir yöntem anlatılmaktadır. Bağırsak iskelelerinin türetme hücre biyolojisi ve uyuşturucu testi kök, doku mühendisliği gelecekteki uygulamalar için önemlidir. 

Video: A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung tissue from porcine, rat, or mouse, the tissue is perfused and submerged in subsequent chemical detergents to remove the cellular debris. Histological comparison of the tissue before and after processing confirms removal of over 95% of double stranded DNA and alpha galactosidase staining suggests the majority of cellular debris is removed. After decellularization, the tissue is lyophilized and then cryomilled into a powder. The matrix powder is digested for 48 hr in an acidic pepsin digestion solution and then neutralized to form the pregel solution. Gelation of the pregel solution can be induced by incubation at 37 &#176;C and can be used immediately following neutralization or stored at 4 &#176;C for up to two weeks. Coatings can be formed using the pregel solution on a non-treated plate for cell attachment. Cells can be suspended in the pregel prior to self-assembly to achieve a 3D culture, plated on the surface of a formed gel from which the cells can migrate through the scaffold, or plated on the coatings. Alterations to the strategy presented can impact gelation temperature, strength, or protein fragment sizes. Beyond hydrogel formation, the hydrogel stiffness may be increased using genipin.

This is a method to create a 3-dimensional cell culture scaffold from pulmonary extracellular matrix. Intact lung is processed into hydrogels that can support the growth of cells in three-dimensions.

3D Hücre Kültürü için Pulmoner Ekstrasellüler Matrix Ayarlanabilir Hidrojellerinin

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

Biyomühendislik

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and poor patency. Tissue engineering offers a novel solution to generate personalized grafts with a natural extracellular matrix containing the recipient&#39;s cells using the method of decellularization and recellularization. We show a detailed method for performing decellularization of the human saphenous vein and recellularization by perfusion of peripheral blood. The vein was decellularized by perfusing 1% Triton X-100, 1% tri-n-butyl-phosphate (TnBP) and 2,000 Kunitz units of deoxyribonuclease (DNase). Triton X-100 and TnBP were perfused at 35 mL/min for 4 h while DNase was perfused at 10 mL/min at 37 &#176;C for 4 h. The vein was washed in ultrapure water and PBS and then sterilized in 0.1% peracetic acid. It was washed again in PBS and preconditioned in endothelial medium. The vein was connected to a bioreactor and perfused with endothelial medium containing 50 IU/mL heparin for 1 h. Recellularization was performed by filling the bioreactor with fresh blood, diluted 1:1 in Steen solution, and adding endocrine gland-derived vascular endothelial growth factors (80 ng/mL), basic fibroblast growth factors (4 &#181;L/mL), and acetyl salicylic acid (5 &#181;g/mL). The bioreactor was then moved into an incubator and perfused for 48 h at 2 mL/min while maintaining glucose between 3 - 9 mmol/L. Later, the vein was washed with PBS, filled with endothelial medium and perfused for 96 h in the incubator. Treatment with Triton X-100, TnBP and DNase decellularized the saphenous vein in 5 cycles. The decellularized vein looked white in contrast to normal and recellularized veins (light red). The hematoxylin &#38; eosin (H&#38;E) staining showed the presence of nuclei only in normal but not in decellularized veins. In the recellularized vein, H&#38;E-staining showed the presence of cells on the luminal surface of the vein.

Here, we describe a protocol for the saphenous vein decellularization using detergents and recellularization by perfusion of the peripheral blood and the endothelial medium.

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ultimately rejection can occur. Creating a functional, autologous bio-artificial heart could solve these challenges. Biofabrication of a heart comprised of scaffold and cells is one option. A natural scaffold with tissue-specific composition as well as micro- and macro-architecture can be obtained by decellularizing hearts from humans or large animals such as pigs. Decellularization involves washing out cellular debris while preserving 3D extracellular matrix and vasculature and allowing &#34;cellularization&#34; at a later timepoint. Capitalizing on our novel finding that perfusion decellularization of complex organs is possible, we developed a more &#34;physiological&#34; method to decellularize non-transplantable human hearts by placing them inside a pressurized pouch, in an inverted orientation, under controlled pressure. The purpose of using a pressurized pouch is to create pressure gradients across the aortic valve to keep it closed and improve myocardial perfusion. Simultaneous assessment of flow dynamics and cellular debris removal during decellularization allowed us to monitor both fluid inflow and debris outflow, thereby generating a scaffold that can be used either for simple cardiac repair (e.g. as a patch or valve scaffold) or as a whole-organ scaffold.

This method enables decellularization of a complex solid organ using a simple protocol based on osmotic shock and perfusion of ionic detergent with minimal organ matrix disruption. It comprises a novel decellularization technique for human hearts inside a pressurized pouch with real-time monitoring of flow dynamics and cellular debris outflow.

Decellularization ters yönde bir basınçlı bir kese içinde bütün insan kalp

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ...

Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an allogeneic or xenogeneic source with human cells. A demonstration of methods for the efficient dissection, decellularization, and recellularization of porcine pancreas might benefit the field. Akin to human pancreases, porcine pancreases have a special anatomical arrangement with three lobes (splenic, duodenal, and connection) rounded by the duodenum and small intestine. The duodenal lobe of the pancreas connects to the duodenum by several small blood vessels. Tissue engineering of the pancreas is complicated because of its exocrine and endocrine nature. In this paper, we show a detailed protocol to dissect the whole porcine pancreas and decellularize it with detergents while saving its structure and some extracellular matrix components. To achieve complete perfusion, the aorta is chosen as inlet and the portal vein as outlet. The other blood vessels (hepatic artery, splenic vein, splenic artery,&#160;mesenteric artery and vein tree) and bile duct are ligated. To prevent the formation of thrombus, the pig is heparinized and, immediately after dissection, the organ is flushed with cold heparin. To inhibit the action of exocrine enzymes, the pancreas decellularization is set at 4 &#176;C. The decellularization is performed by perfusion of Triton X-100, sodium deoxycholate, and deoxyribonuclease, with an intermittent and final extensive washing. With a successful decellularization, the pancreas appears white, and a histological evaluation with hematoxylin and eosin shows an absence of nuclei with a preserved extracellular matrix structure. Thus, the proposed method can be used to successfully dissect and decellularize whole porcine pancreas.

Tissue engineering of the whole pancreas is a challenge because of its exocrine and endocrine functions. We show a method for the dissection of an intact porcine pancreas and the process of successful decellularization by perfusion of detergents Triton X-100, sodium deoxycholate, and deoxyribonuclease.

Yalıtım ve bütün domuz pankreas Decellularization

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an ...

Fabricating a Kidney Cortex Extracellular Matrix-Derived Hydrogel

Extracellular matrix (ECM) provides important biophysical and biochemical cues to maintain tissue homeostasis. Current synthetic hydrogels offer robust mechanical support for in vitro cell culture but lack the necessary protein and ligand composition to elicit physiological behavior from cells. This manuscript describes a fabrication method for a kidney cortex ECM-derived hydrogel with proper mechanical robustness and supportive biochemical composition. The hydrogel is fabricated by mechanically homogenizing and solubilizing decellularized human kidney cortex ECM. The matrix preserves native kidney cortex ECM protein ratios while also enabling gelation to physiological mechanical stiffnesses. The hydrogel serves as a substrate upon which kidney cortex-derived cells can be maintained under physiological conditions. Furthermore, the hydrogel composition can be manipulated to model a diseased environment which enables the future study of kidney diseases.

Here we present a protocol to fabricate a kidney cortex extracellular matrix-derived hydrogel to retain the native kidney extracellular matrix (ECM) structural and biochemical composition. The fabrication process and its applications are described. Finally, a perspective on using this hydrogel to support kidney-specific cellular and tissue regeneration and bioengineering is discussed.

Bir böbrek korteks ekstraselüler matrisi elde edilen hidrojel imalatı

Extracellular matrix (ECM) provides important biophysical and biochemical cues to maintain tissue homeostasis. Current synthetic hydrogels offer robust ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of cellular function. The ECM plays a particularly important role in adipose tissue function in obesity, and alterations in adipose tissue ECM deposition and composition are associated with metabolic disease in mice and humans. Tractable in vitro models that permit dissection of the roles of the ECM and cells in contributing to global tissue phenotype are sparse. We describe a novel 3D in vitro model of human ECM-adipocyte culture that permits study of the specific roles of the ECM and adipocytes in regulating adipose tissue metabolic phenotype. Human adipose tissue is decellularized to isolate ECM, which is subsequently repopulated with preadipocytes that are then differentiated within the ECM into mature adipocytes. This method creates ECM-adipocyte constructs that are metabolically active and retain characteristics of the tissues and patients from which they are derived. We have used this system to demonstrate disease-specific ECM-adipocyte crosstalk in human adipose tissue. This culture model provides a tool for dissecting the roles of the ECM and adipocytes in contributing to global adipose tissue metabolic phenotype and permits study of the role of the ECM in regulating adipose tissue homeostasis.

We describe a 3D human extracellular matrix-adipocyte in vitro culture system that permits dissection of the roles of the matrix and adipocytes in contributing to adipose tissue metabolic phenotype.

Bir İnsan 3D Ekstrasellüler Matrix-Adiposit Kültür Modeli Matrix-Hücre Metabolik Crosstalk Çalışma için

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

A Quantitative Fluorescence Microscopy-based Single Liposome Assay for Detecting the Compositional Inhomogeneity Between Individual Liposomes

Most research employing liposomes as membrane model systems or drug delivery carriers relies on bulk read-out techniques and thus intrinsically assumes all liposomes of the ensemble to be identical. However, new experimental platforms able to observe liposomes at the single-particle level have made it possible to perform highly sophisticated and quantitative studies on protein-membrane interactions or drug carrier properties on individual liposomes, thus avoiding errors from ensemble averaging. Here we present a protocol for preparing, detecting, and analyzing single liposomes using a fluorescence-based microscopy assay, facilitating such single-particle measurements. The setup allows for imaging individual liposomes in a massive parallel manner and is employed to reveal intra-sample size and compositional inhomogeneities. Additionally, the protocol describes the advantages of studying liposomes at the single liposome level, the limitations of the assay, and the important features to be considered when modifying it to study other research questions.

This protocol describes the fabrication of liposomes and how these can be immobilized on a surface and imaged individually in a massive parallel manner using fluorescence microscopy. This allows for the quantification of the size and compositional inhomogeneity between single liposomes of the population.

Bireysel Lipozomlar Arasındaki Bileşimsel Homojenliği Saptamak için Kantitatif Floresan Mikroskopesi Bazlı Tek Lipozom Testi

Most research employing liposomes as membrane model systems or drug delivery carriers relies on bulk read-out techniques and thus intrinsically assumes ...

Production of Membrane-Filtered Phase-Shift Decafluorobutane Nanodroplets from Preformed Microbubbles

There are many methods that can be used for the production of vaporizable phase-shift droplets for imaging and therapy. Each method utilizes different techniques and varies in price, materials, and purpose. Many of these fabrication methods result in polydisperse populations with non-uniform activation thresholds. Additionally, controlling the droplet sizes typically requires stable perfluorocarbon liquids with high activation thresholds that are not practical in vivo. Producing uniform droplet sizes using low-boiling point gases would be beneficial for in vivo imaging and therapy experiments. This article describes a simple and economical method for the formation of size-filtered lipid-stabilized phase-shift nanodroplets with low-boiling point decafluorobutane (DFB). A common method of generating lipid microbubbles is described, in addition to a novel method of condensing them with high-pressure extrusion in a single step. This method is designed to save time, maximize efficiency, and generate larger volumes of microbubble and nanodroplet solutions for a wide variety of applications using common laboratory equipment found in many biological laboratories.

This protocol describes a method of generating large volumes of lipid encapsulated decafluorobutane microbubbles using probe-tip sonication and subsequently condensing them into phase-shift nanodroplets using high-pressure extrusion and mechanical filtration.

Önceden Biçimlendirilmiş Mikrobubbles'tan Membran Filtreli Faz KaydırmaLı Decafluorobutane Nanodroplets Üretimi

There are many methods that can be used for the production of vaporizable phase-shift droplets for imaging and therapy. Each method utilizes different ...

Light-Controlled Fermentations for Microbial Chemical and Protein Production

Microbial cell factories offer a sustainable alternative for producing chemicals and recombinant proteins from renewable feedstocks. However, overburdening a microorganism with genetic modifications can reduce host fitness and productivity. This problem can be overcome by using dynamic control: inducible expression of enzymes and pathways, typically using chemical- or nutrient-based additives, to balance cellular growth and production. Optogenetics offers a non-invasive, highly tunable, and reversible method of dynamically regulating gene expression. Here, we describe how to set up light-controlled fermentations of engineered Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae for the production of chemicals or recombinant proteins. We discuss how to apply light at selected times and dosages to decouple microbial growth and production for improved fermentation control and productivity, as well as the key optimization considerations for best results. Additionally, we describe how to implement light controls for lab-scale bioreactor experiments. These protocols facilitate the adoption of optogenetic controls in engineered microorganisms for improved fermentation performance.

Optogenetic control of microbial metabolism offers flexible dynamic control over fermentation processes. The protocol here shows how to set up blue light-regulated fermentations for chemical and protein production at different volumetric scales.

Mikrobiyal Kimyasal ve Protein Üretimi için Işık Kontrollü Fermantasyonlar

Microbial cell factories offer a sustainable alternative for producing chemicals and recombinant proteins from renewable feedstocks. However, ...

Kombinatoryal Plug Üretimi için Mikroakışkan Bir Cihazın Kurulumu

Bilayer Microfluidic Device for Combinatorial Plug Production

Droplet microfluidics is a versatile tool that allows the execution of a large number of reactions in chemically distinct nanoliter compartments. Such systems have been used to encapsulate a variety of biochemical reactions - from incubation of single cells to implementation of PCR reactions, from genomics to chemical synthesis. Coupling the microfluidic channels with regulatory valves allows control over their opening and closing, thereby enabling the rapid production of large-scale combinatorial libraries consisting of a population of droplets with unique compositions. In this paper, protocols for the fabrication and operation of a pressure-driven, PDMS-based bilayer microfluidic device that can be utilized to generate combinatorial libraries of water-in-oil emulsions called plugs are presented. By incorporating software programs and microfluidic hardware, the flow of desired fluids in the device can be controlled and manipulated to generate combinatorial plug libraries and to control the composition and quantity of constituent plug populations. These protocols will expedite the process of generating combinatorial screens, particularly to study drug response in cells from cancer patient biopsies.

Yazar Spotlight: Hesaplamalı ve Deneysel Yaklaşımları Hassas Onkolojiye Entegre Etme

The fabrication of a polydimethylsiloxane (PDMS)-based bilayer device for the production of combinatorial libraries in water-in-oil emulsions (plugs) is presented here. The necessary hardware and software required to automate plug production are detailed in the protocol, and the production of a quantitative library of fluorescent plugs is also demonstrated.

Kombinatoryal Fiş Üretimi için İki Katmanlı Mikroakışkan Cihaz

Droplet microfluidics is a versatile tool that allows the execution of a large number of reactions in chemically distinct nanoliter compartments. Such ...