Bu yöntem, doku mühendisliği alanının gerçekten Kutsal Kase olan vaskülarize iskeleler, üreten hakkında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, ters yönde ki basınçlı bir kesenin nakledilemeyen insan organlarının hücre dışılaştırılmasını iyileştirmesi ve bunu uygun bir zaman dilimi içinde steril bir şekilde yapmamıza olanak sunmasıdır. Decellularization için kalp hazırlamak için, ilk olası kusurları için bir iç muayene yapmak.
Septal defekt varsa, kusuru uygun dikişlerle düzeltin. Sonra, 2-0 ipek sütür ile superior ve inferior vena cavas ligate. 5-0 PROLENE ile sağ atriyum duvar dikiş, ve sonraki kanülasyon için ana pulmoner arter uzak aort incelemek.
Konektörleri damarın çapına göre aort ve pulmoner artere yerleştirin ve konektörleri 2-0 ipek sütürle sabitlayın. Pulmoner ven deliklerinden birini kullanarak, sol atriyumdan sol ventriküle doğru bir tüp hattı yerleştirin ve aorttaki konektöre bir infüzyon hattı ve pulmoner arterdeki konektöre bir çıkış hattı bağlayın. Hazırlanan kalbi ters yönde bir polyester kese içine yerleştirin ve keseyi perfüzyon kabına yerleştirin.
Konteynerin çapına göre, her bir hattı kauçuk durdurucudaki ilgili bağlantı noktalarına bağlayın ve polyester keseyi kapatmak için durdurucuyu perfüzyon kabının kapağına takın. Daha sonra, pulmoner arterden ve sol ventriküle yerleştirilen çizgiden çıkışını doğrulamak için kauçuk durdurucu infüzyon portu üzerinden PBS perfuse, vaskülature içinde kan herhangi bir kalıntı izlerini organ temizlemek için bu akışı kullanarak. Kalp hazır olduğunda, dik bir yönde monte biyoreaktör yerleştirin ve perfüzyon biyoreaktör üstüne kauçuk kapak yüzey bağlantı noktalarına infüzyon hattı, basınç-baş hattı, pulmoner arter-outflow hattı ve biyoreaktör drenaj hattı bağlayın.
Daha sonra, hipertonik solüsyon ile dört saat boyunca kalbi hücredışıhale getirin, hipotonik solüsyonla iki saat, sodyum dodecyl sülfat veya SDS ile 120 saat, ve 120 litre PBS ile son bir yıkama, hepsi aort kökünde ölçülen 120 milimetrelik cıva basıncının altında. PBS yıkama son 10 litre sırasında, iskele sterilize etmek için perfüzyon çözeltisi için 10 normal sodyum hidroksit ile nötralize steril 500 mililitre 2.1% perastik asit çözeltisi ekleyin. Tipik olarak, decellularization işlemi sırasında aort içine akış hızı yavaş yavaş perfüzyon çözeltisi hipertonik hipotonik değişiklikler olarak azalır.
Buna karşılık, perfüzyon çözeltisi hipotonik bir çözeltiden SDS'ye dönüştürüldüğünde akış hızı artar ve bu noktada infüzyon akış hızı dalgalanmaları gösterir. Pulmoner arterden çıkış hızı hiper ve hipotonik çözeltilerde benzer bir eğilim göstermektedir. Ancak, SDS perfüzyonu sırasında ki çıkış hızı genel bir düşüş sergiler.
Farklı reaktifler vaskülatür yoluyla perfüzyon olarak koroner perfüzyon verimliliği de zamanla azalır. Pulmoner arter ve sol ventrikülden kaynaklanan akıntı aynı anda toplandığı için, enkaz içeriği spektroskopi ile karşılaştırılabilir. Pulmoner arterden gelen bulanıklık ilk perfüzyon döneminde sol ventrikülden gözlenene göre daha ani bir renk değişikliği sergilemesine rağmen, her iki damardan gelen atıkların bulanıklığı perfüzyon sırasında zaman içinde azalır.
Altı hücreli insan kalbinin bir bicinchoninic asit protein idraki ile çıkış bulanıklığı ve hücre enkazı arasındaki korelasyonun değerlendirilmesi protein konsantrasyonu ve atık bulanıklığı arasında doğrusal bir korelasyon ortaya koymaktadır. Bu yordamı denerken, akış hızını izlemek ve perfüzyon işlemini izlemek için perfusate periyodik olarak toplamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, mekanik değerlendirme veya sterilite testi gibi diğer teknikler iskelenin sadakatini ve fonksiyonel bir kardiyak doku oluşturmak için yeniden hücreleşme için potansiyel kullanımını değerlendirmek için kullanılabilir.
Bu teknik, geliştirildikten sonra, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği alanında araştırmacıların tüm vaskülarize organların neslini keşfetmelerinin önünü açmış ve katı organ nakli alanını tam anlamıyla değiştirmektedir. İnsan organları ve dokuları ve SDS gibi kimyasallarla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi yaparken her zaman uygun kişisel koruma ekipmanı takmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.
