YL NIH hibe (R43/44CA122444) ve DOD BRCP hibe (W81XWH-06-1-0682) tarafından kısmen destekleniyor.

1.. Örnek, Ekipman ve Reaktif Hazırlama <ol><li> Oda sıcaklığında (25 ° C) &#39;de 16-32 saat boyunca taze,% 10 nötr tamponlu formalin içinde çözmek ve parafin içine gömmek, 3-4 mm kalınlığında bloklar halinde doku numune kesin. FFPE bloklardan 5 ± 1 mikron kalınlığında bölüme FFPE kesilmiş, slaytlar ve kuru hava ile ilgili bölümleri monte. Not: Slaytlar kadar 3 ay boyunca kurutulması altında oda sıcaklığında saklanabilir. Monte edilmiş doku slaytlar önce RNAscope tahlile 1 saat boyunca 60 ° C &#39;de fazla bir kuru pişmiş olmalıdır. </li><li> 40 ° C hibridizasyon Fırın getirmek Nem Kontrol Tepsi bir nemlendirme Kağıt yerleştirin. Tamamen ıslak Nemlendirme Kağıt 50 ml dH 2 O ekleyin. Kullanmadan önce en az 30 dakika boyunca prewarm için Fırın içine kapalı Kaset yerleştirin. </li><li> Kazanmak 700 ml 1x önceden işleyin dH 2 O. 10x Tedavi öncesi Çözüm sulandırarak 2 Çözüm (10 nl, pH 6 sitrat tamponu) 1x önceden işleyin 2 kaynamaya Çözüm ve mai ısıtınaşırı kaynama engellerken, 100-104 ° C arasındaki sıcaklık ntain. </li><li> DH 2 O&#39;da prewarmed 50x Wash Buffer seyreltilmesi ile 3 L 1x Yıkama Tamponu (0.1x SSC) Yap </li><li> Bir davlumbaz altında Parafinden arındırmadan boyunca 2 x 200 ml iksilen ve% 100 EtOH &#39;ın 2 x 200 ml hazırlayın. </li><li> Davlumbaz altında post-boyama için% 50 Hematoksilen boyama çözüm ve bluing reaktifi (0.01% amonyaklı su) hazırlayın. </li><li> Bir davlumbaz altında dehidrasyon için ksilen ve 200 ml, 200 ml% 70 ve 2 x 200 ml% 100 EtOH hazırlayın. </li><li> 10 dakika boyunca 40 ° C&#39;de ve DAB Kromojen Brown ve-A-B Brown dışında, RTU Amp1, Amp2, AMP3, Amp4, Amp 5-Brown ve Amp6-Brown da dahil olmak üzere, oda sıcaklığına kadar RTU Algılama Kit reaktif getirmek ön ısıtılması Hedef probları . </li></ol> 2. RNAscope Deneyi Parafinden arındırma lamların ve Dehidrasyon Pişirmeden sonra, sık çalkalama ile 2 x 5 dakika boyunca ksilen içinde doku bölümleri deparaffinize ve kurutmaksık çalkalama ile 2 x 3 dakika boyunca% 100 EtOH içinde. Hava 5 dakika boyunca, kuru ve hidrofobik bir bariyer kalem ile doku bölümü etrafında bir hidrofobik bariyer çizin. Önmuameleler <ol><li> Ön muamele 1 ile doku bölümleri inkübe endojen peroksidaz aktivitesi söndürülmesi, oda sıcaklığında 10 dakika süre ile, dH 2 O. durulama </li><li> DH 2 O. iki kere yıkayın, RNA alma için 15 dakika süre ile, kaynama sıcaklığında muhafaza edilen bir ön işlem 2 ile doku bölümleri inkübe </li><li> DH 2 O. iki kere yıkayın, HybEZ fırında protein sindirimi için 40 ° C&#39;de 30 dakika boyunca ön-işleme tabi 3 ile doku bölümleri inkübe </li></ol> Hedef Probe Hibridizasyon Hedef prob HPV-HR 7 pool şunlardır: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52, ve 58,. Ayrı olarak, üç bitişik doku bölümleri üzerine HPV sondalar, Ubiquitin C (UBC) ve bakteriyel gen probları dapB ekleyin. 2 için fırın içinde 40 ° C&#39;de hibridizasyonhr, daha sonra oda sıcaklığında 2 x 2 dk için 1x Yıkama tampon maddesi içinde yıkayın. Sinyal Amplifikasyon <ol><li> 40 ° C&#39;de 30 dakika boyunca 40 ° C, AMP3 (amplifikatör) ile 15 dakika boyunca 40 ° C, Amp2 (arka plan azaltıcı), 30 dakika boyunca Amp1 (amplifikatör) ile doku bölümleri inkübe ve Amp4 (etiket prob), 15 dakika boyunca HybEZ bir fırında 40 ° C&#39;de. Her bir hibridizasyon aşamasından sonra, oda sıcaklığında 2 x 2 dk için 1x Yıkama tampon maddesi içinde yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 15 dakika boyunca, 30 dakika ve Amp6 için Amp5 doku bölümleri ile inkübe edin. Her inkubasyon aşamasından sonra, oda sıcaklığında 2 x 2 dk için 1x Yıkama tampon maddesi içinde yıkayın. </li></ol> Sinyal Algılama Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca Brown ve-A-B Brown eşit hacim karıştırılarak 01:01 DAB karışımı ile inkübe doku bölümleri, dH 2 O. içinde iki kez yıkayın Counterstaining <pdoku mor kalırken slaytlar berrak kadar class = &quot;jove_content&quot;&gt; oda sıcaklığında 2 dakika için% 50 Hematoksilen çözeltisi ile Leke doku bölümleri, dH 2 O ile durulayın. Dip 5x için dH 2 O% 0,01 amonyak slaytlar ve dH 2 O. 5 dips ile takip Slayt Montaj 2 dakika her biri için,% 70,% 100 ve% 100 EtOH içinde doku bölümleri dihidrat, ksilen, 5 dakika için, ksilen bazlı montaj ortamı ile monte edilir.

<ol>
	<li>Parkin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+health+burden+of+infection-associated+cancers+in+the+year+2002.">The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002.</a> Int. J. Cancer. 118 (12), 3030-3044 (2006).</li><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+rising+oropharyngeal+cancer+incidence+in+the+United+States.">Human papillomavirus and rising oropharyngeal cancer incidence in the United States.</a> J. Clin. Oncol. 29 (32), 4294-4301 (2011).</li><li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer.">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> N. Engl. J. Med. 363 (1), 24-35 (2010).</li><li>Smeets, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+algorithm+for+reliable+detection+of+human+papillomavirus+in+paraffin+embedded+head+and+neck+cancer+specimen.">A novel algorithm for reliable detection of human papillomavirus in paraffin embedded head and neck cancer specimen.</a> Int. J. Cancer. 121 (11), 2465-2472 (2007).</li><li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAscope:+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J. Mol. Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+regulation+of+NRG1+isoform+expression+by+neuronal+activity.">Specific regulation of NRG1 isoform expression by neuronal activity.</a> J. Neurosci. 31 (23), 8491-8501 (2011).</li><li>Yan, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+stem+cell+markers+Bmi1+and+Lgr5+identify+two+functionally+distinct+populations.">The intestinal stem cell markers Bmi1 and Lgr5 identify two functionally distinct populations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 466-471 (2012).</li><li>Payne, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viable+circulating+tumour+cell+detection+using+multiplex+RNA+in+situ+hybridisation+predicts+progression-free+survival+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Viable circulating tumour cell detection using multiplex RNA in situ hybridisation predicts progression-free survival in metastatic breast cancer patients.</a> Br. J. Cancer. 106 (11), 1790-1797 (2012).</li><li>Bordeaux, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+situ+measurement+of+estrogen+receptor+mRNA+predicts+response+to+tamoxifen.">Quantitative in situ measurement of estrogen receptor mRNA predicts response to tamoxifen.</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantitative+RNA+in+situ+hybridization+for+resolution+of+equivocal+and+heterogeneous+ERBB2+(HER2)+status+in+invasive+breast+carcinoma.">Automated quantitative RNA in situ hybridization for resolution of equivocal and heterogeneous ERBB2 (HER2) status in invasive breast carcinoma.</a> J. Mol. Diagn. 15 (2), 210-219 (2013).</li><li>Tubbs, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+RNA+in+situ+Hybridization+for+Detection+of+Restricted+Clonal+Expression+of+Low+Abundance+Immunoglobulin+Light+Chain+mRNA+in+B-Cell+Lymphoproliferative+Disorders.">Ultrasensitive RNA in situ Hybridization for Detection of Restricted Clonal Expression of Low Abundance Immunoglobulin Light Chain mRNA in B-Cell Lymphoproliferative Disorders.</a> Am. J. Surg. Pathol. In press, (2013).</li><li>Ukpo, O. C., Flanagan, J. J., Ma, X. J., Luo, Y., Thorstad, W. L., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-risk+human+papillomavirus+E6/E7+mRNA+detection+by+a+novel+in+situ+hybridization+assay+strongly+correlates+with+p16+expression+and+patient+outcomes+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">High-risk human papillomavirus E6/E7 mRNA detection by a novel in situ hybridization assay strongly correlates with p16 expression and patient outcomes in oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Am. J. Surg. Pathol. 35 (9), 1343-1350 (2011).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptionally-active+high-risk+human+papillomavirus+is+rare+in+oral+cavity+and+laryngeal/hypopharyngeal+squamous+cell+carcinomas--a+tissue+microarray+study+utilizing+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization.">Transcriptionally-active high-risk human papillomavirus is rare in oral cavity and laryngeal/hypopharyngeal squamous cell carcinomas--a tissue microarray study utilizing E6/E7 mRNA in situ hybridization.</a> Histopathology. 60 (6), 982-991 (2012).</li><li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+p16+staining+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma:+extent+and+pattern+correlate+with+human+papillomavirus+RNA+status.">Partial p16 staining in oropharyngeal squamous cell carcinoma: extent and pattern correlate with human papillomavirus RNA status.</a> Mod. Pathol. 25 (9), 1212-1220 (2012).</li><li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+transcriptionally+active+high-risk+HPV+in+patients+with+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+as+visualized+by+a+novel+E6/E7+mRNA+in+situ+hybridization+method.">Detection of transcriptionally active high-risk HPV in patients with head and neck squamous cell carcinoma as visualized by a novel E6/E7 mRNA in situ hybridization method.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li><li>Schache AG, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+novel+diagnostic+standard+in+HPV-positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">Validation of a novel diagnostic standard in HPV-positive oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Br. J. Cancer. 108 (6), 1332-1339 (2013).</li><li>Mehrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Papillary+Squamous+Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck:+Clinicopathologic+and+Molecular+Features+With+Special+Reference+to+Human+Papillomavirus.">Papillary Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck: Clinicopathologic and Molecular Features With Special Reference to Human Papillomavirus.</a> Am. J. Surg. Pathol. Jun. , (2013).</li><li>Jordan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methods+for+oropharyngeal+cancer+HPV+status+determination+in+US+cooperative+group+trials.">Validation of methods for oropharyngeal cancer HPV status determination in US cooperative group trials.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36, 945-954 (2012).</li><li>Hammond, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Society+of+Clinical+Oncology/College+of+American+Pathologists+guideline+recommendations+for+immunohistochemical+testing+of+estrogen+and+progesterone+receptors+in+breast+cancer+(unabridged+version).">American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version).</a> Arch. Pathol. Lab. Med. 134 (7), 48-72 (2010).</li></ol>

Tüm yazarlar İleri Hücre Tanı, Inc stoklar tarafından ve kendi istihdam edilmektedir

RNAscope HPV tahlil HPV-ilişkili baş ve boyun skuamöz hücreli karsinom in situ E6/E7 mRNA doğrudan görselleştirme izin verdi. RNAscope tahlil rutin sabit tümör dokusu ile tamamen uyumludur ve histopatolojik korelasyon için doku morfolojisi (Şekil 2) korur. Geleneksel yöntemlere göre CISH RNAscope deneyinin önemli bir avantajı, özel olarak arka plan gürültüsünü (Şekiller 2C ve 2F) amplifiye olmayan hibridizasyon sinyalleri (Şekil 2B ve 2E) kuvvetlendirir olmasıdır. Uygulamada, RNAscope HPV deney prosedürü 8 saat içinde tamamlanabilir ya da uygun bir iki gün boyunca bölünmüş. RNAscope HPV tahlil referans yöntem olarak 16 Mah-PCR kullanarak% 97 duyarlılık ve% 93 özgüllük göstererek, baş ve boyun skuamöz hücreli karsinom 12-16 HPV durumunu belirlemek için kullanılır olmuştur. Konvansiyonel chrHR-HPV DNA omogenic ISH yüksek düzeyde spesifik olduğunu fakat% 80 ~ 12 bir hassasiyete sahiptir. Hücresel vekil işaretleyici p16 immünhistokimyasal (İHK) boyama mükemmel hassasiyet gösterir ama özellikle nonoropharyngeal baş ve boyun kanserlerinde 15 yanlış pozitif sonuçlar 15,18 oluşturabilir. HPV E6/E7 mRNA tespiti için Mah-PCR mevcut &quot;altın standart&quot; yöntem, yalnızca araştırma laboratuvarında kendi kullanımını sınırlar, en iyi sonuçlar için taze dondurulmuş doku gerektirir ve teknik olarak karmaşık. Buna ek olarak, bu imkansız histopatoloji ile HR-HPV E6/E7 mRNA ifadesini ilişkili kolaylaştırır RNA ekstraksiyonu gerektirir. RNAscope tahlil başarısı için çok önemli bir faktör vardır. İlk olarak, en iyi sonuçlar için, dokular ASCO / CAP kılavuzlar 19 göre 16-32 saat boyunca oda sıcaklığında, taze,% 10 nötr tamponlu formalin içine sabitlenmiş olmalıdır. O etkinleştirmek beri İkincisi, HybEZ fırın tavsiye edilirprob hibridizasyon ve sinyal amplifikasyon adımlar için sıcaklık ve nem kontrol optimal s. Üçüncü olarak, her adımda daha önce fazla kalıntı tamponlar çıkaracaklardır, fakat yine de bu adımların sırasında herhangi bir kurutma bölümü doku tutmak önemlidir. Burada anlatılan manuel RNAscope prosedür tamamen ticari bir slayt oto boyama sisteminde 10 otomatik olmuştur. Bu büyük ölçüde deney koşulları ve klinik patoloji laboratuvarlarında tasarrufu değerli el emeği standardizasyon kolaylaştırmak gerekir. Buna ek olarak, özel bir görüntü analiz yazılımı otomatik olarak öznelliği ortadan kaldırmak ve puanlama üretilebilirliğe geliştirmek için yardımcı olmalıdır dijitalize slayt üzerinde hücreleri ve boyama sinyalleri belirlemek için 10 geliştirilmiştir. Özet olarak, RNAscope HPV deney FFPE dokularda in situ HR-HPV E6/E7 mRNA varlığını algılar. Klinik patoloji laborant tanıdık bir iş akışı vardoku bölümlerinde bu doğrudan görselleştirme izin vererek Tories. Bu (FFPE) doku örneklerini inceleyerek için ideal bir platform sunuyor ve kolayca teşhis patoloji laboratuarları tarafından kabul edilebilir.

Dünya çapında 1 tüm kanserlerin yaklaşık% 5 için yüksek riskli insan papilloma virüsü (HR-HPV) enfeksiyonu hesaplar. HPV-ilişkili orofarengeal kanser insidansı, özellikle erkekler arasında, son yıllarda artmıştır. HPV-pozitif orofaringeal skuamöz hücreli karsinom (OPSCC) muhtemelen önümüzdeki 20 yılda 2 Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde tüm baş ve boyun kanserlerinin çoğunluğu teşkil edecektir. HPV neden Orofarengeal skuamöz hücreli karsinom olumlu sağkalım ile ilişkili, ve tümör HPV durum hayatta kalma 3 için güçlü ve bağımsız bir prognostik faktör olduğunu vardır. Viral onkojenler E6 ve E7 transkripsiyonel aktivasyonu için kanıt klinik olarak ilgili HPV 4 varlığı için altın standardı olarak düşünülmektedir. Bununla birlikte, RT-PCR tekniği ile taze tümör dokusundan E6/E7 mRNA&#39;nın tespiti rutin klinik uygulamada pratik değildir ve araştırma laboratuarlarında ile sınırlı olmuştur. Son zamanlarda, biz havE formalin fikse parafine gömülü doku örneklerinden (FFPE) 5-10 tek RNA molekülü duyarlılık ile bireysel hücrelerin multipleks algılamayı sağlayan RNAscope adında yeni bir RNA ISH teknolojisini geliştirdi. Biz tek bir molekül tespiti 5 delil üç satır sağladı. İlk olarak, RNAscope prob tasarımı ve sinyal yükseltme sistemi HeLa ve SK-BR-3 hücre hatlarında tek kopya HER2 genomik DNA hedeflerinin tespiti izin verdi. HER2 genomik DNA sinyalleri ile karşılaştırıldığında İkincisi, HeLa hücrelerinde mRNA HER2 sinyal noktaların floresan yoğunluklarının dağıtım nokta başına bir molekülü ile tutarlıdır. Üçüncü olarak, hücre başına HER2 mRNA sinyali noktaların sayısı daha tek bir molekülün tespitini destekleyen, yakından bir çözüm-tabanlı ölçüm testiyle tahmin HER2 mRNA kopya sayısını eşleşti. Ayrıca, floresan mikroskopi veya aydınlık alan mikroskobu hematoksilen ile DAPI ile çekirdeklerin counterstaining WH, bireysel çekirdeklerin görselleştirme sağlarich da bir tek hücre bazında 10 tespiti ve RNA hedeflerin ölçümü sağlar. Rutin klinik örneklerinde in situ gen ifadesini analiz yeteneği, özellikle de FFPE doku bölümünde dayalı tahliller 10,11, RNAscope tanısal patoloji için umut verici bir platform yapar. Bu genotip özgü sondaların bir havuzu kullanılarak yedi yüksek riskli HPV genotipi (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52, ve 58) bir E6/E7 mRNA&#39;yı tespit etmek için bir RNAscope tabanlı bir HPV analiz geliştirdik. OPSCC Bizim son çalışmalar RNAscope HPV tahlil FFPE dokularda 12-17 HPV statüsünün belirlenmesinde son derece duyarlı ve özgül olduğunu ve aynı zamanda OPSCC 12,16 prognozu bilgilendirir göstermiştir. RNAscope teknolojinin ilkesi, daha önce 5 tarif edilmiştir. Burada, tam RNAscope deney protokolü tarif ve FFPE tümör doku kesitlerinde in HR-HPV saptanmasında kullanımını göstermektedir.

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="60" rowspan="2" style="height:60px;width:145px;">SuperFrost Plus slides</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-550-15</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">HybEZ Oven, Tray, and Rack</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310011, 310012, 310014</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:145px;">RNAscope 2.0 FFPE Reagent Kit - Brown</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">310035</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:145px;">RNAscope HPV-HR7 Probe for HPV 16,18,31,33,35,52 and 58, E6/E7 mRNA</td>
			<td style="width:145px;">Advanced Cell Diagnostics</td>
			<td style="width:145px;">312351</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:145px;">ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td style="width:145px;">Vector Laboratory</td>
			<td style="width:145px;">H-4000</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">100% EtOH</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">ALREAGAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Xylene&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">X3P-1GAL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Gill&#8217;s Hematoxylin I</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">American Master Tech Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">HXGHE1LT</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Ammonia hydroxide</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">320145-500mL</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:145px;">Cover Glass 24x50 mm</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">12-545-F</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:145px;">Hot Plate</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Fisher Scientific</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">11-300-49SHP</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Drying Oven</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 60 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="99">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:120px;width:145px;">Water Bath</td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:145px;">Capable of holding temperature at 40 &#177; 1&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
	</tbody>
</table>

rnascope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma

Onkojenik HPV tespiti için &#39;altın standart&#39; tümör dokusunda transkripsiyonel aktif yüksek riskli HPV gösteri. Bununla birlikte, sayısal ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) ile E6/E7 mRNA&#39;nın tespiti morfolojik korelasyon için tümör dokusu bağlam kritik yok eder ve rutin klinik pratikte kabul edilmesi zor olmuştur RNA ekstraksiyonu gerektirir. In situ melezleme teknolojisi RNAscope bizim yeni geliştirilmiş bir RNA, tek bir molekül duyarlılık ve herhangi bir biyomarker RNA in situ analizi, son derece hassas ve spesifik sağlayan tek bir hücre çözünürlük, formalinle sabitlenmiş, parafine gömülmüş (FFPE) dokuda RNA doğrudan görselleştirme izin verir rutin klinik örneklerde. RNAscope HPV deney genotip özgü problar bir havuz kullanılarak E6/E7 yedi yüksek riskli HPV genotiplerinin mRNA&#39;nın (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52, ve 58) tespit etmek için tasarlanmıştır. Bu mükemmel hassasiyet göstermiştirve Mah-PCR ile E6/E7 mRNA tespit geçerli &#39;altın standart&#39; yöntemiyle karşı seçicilik. RNAscope tarafından belirlenen HPV durumu orofaringeal kanser hastalarında klinik sonucun güçlü prognostik olduğunu.

RNAscope HPV tahlil akışı RNAscope deneyi (Şekil 1) IHC benzer bir yüksek iş akışı vardır. Önmuameleler, melezleme, sinyal büyütmesi, ve algılama: Bu dört ana adımdan oluşur. Bu yüksek sadakat sinyal büyütmeye 5 sağlayan benzersiz bir prob tasarım stratejisini kullanır. RNAscope HPV tahlilde, yedi HR-HPV prob setleri her yaban turbu peroksidazı (HRP) bağlanmış olan aynı sinyal amplifikasyon sistemi tarafından tanınan, bir araya getirilmiştir. HRP ile oluşturulan kahverengi çökeltiler, hali hazırda standart parlak alan mikroskopi ile görüntülenmiştir olabilir alt-tabaka olarak DAB kullanılarak kromojenik reaksiyon katalize gibi özel hibridizasyon sinyalleri tespit edilir. HPV saptanması için Örnek lekeleme Şekil 2 baş ve boyun skuamöz hücreli karsinom lekeli FFPE kesimlerinden örnek görüntüleri gösterir. HPV-pozitif halinde (Şekil l&#39;deure 2A), HR-HPV problar, spesifik olarak tümör hücrelerinin güçlü noktalı sinyalleri tespit edildi. UBC prob tümör hücreleri ve stromal hücreleri (Şekil 2B) hem de çok noktalı sitoplazmik sinyal tespit edildi. Bakteriyel gen probu dapB temiz bir arka plan (Şekil 2C) gösterdi. Güçlü sinyaller UBC probu (Şekil 2E) kullanılarak tespit edilmiştir, oysa HPV-negatif durumda, HR-HPV prob ve dapB prob, hem herhangi bir sinyal (Şekil 2 ve 2F) tespit edildi. Bu deneyde, UBC arka plan sinyalleri için negatif kontrol olarak RNA, doku ve kalite dapB değerlendirmek için pozitif kontrol olarak hizmet vermektedir. HPV statüsünün belirlenmesi için puanlama, her durum için her üç slayt incelenmesini gerektirir. Negatif kontrol slayt (dapB) slayt üzerinde boyama düzeyi kesim olarak kullanılır: HPV pozitif noktalı sitoplazmik ve / veya dabpB slaytta sinyal üzerinde olan nükleer boyama varlığı ile tanımlanır. <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1.jpg" /> Şekil 1. RNAscope tahlil iş akışı RNAscope testinin Akış Şeması. İllüstrasyon. RNAscope tahlil 4 büyük adım, ön terbiye, hedef prob hibridizasyon, sinyal amplifikasyon ve sinyal algılama içerir. Tüm tahlil işlemi 8 saat içinde tamamlanabilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2.jpg" /> Şekil 2. RNAscope lekeli slaytlar Örnek görüntüler. HR-HPV, UBC (pozitif kontrol) ve dapB için sondalar ile boyandı FFPE bölümler (negatif kontrol)İki HNSCC olgulardan. ac. HPV-pozitif vaka. Tümör hücrelerinde A, HR-HPV E6/E7 mRNA ifadesi. Ankastre, noktasal sinyalleri göstermek için 40X büyütme. B ve C). DF) HPV-negatif durumda. D) sırasıyla, HPV E6/E7 mRNA için hiçbir boyama pozitif UBC boyanma (B) ve dapB (C için negatif) gösteren komşu doku kesitleri , dapB negatif kontrol (F) benzer. E) UBC pozitif boyanma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma at JoVE.com

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Baş ve boyun tümör dokusunda yüksek riskli HPV varlığı olumlu sonuçlar ile ilişkilidir. RNAscope denilen in situ hibridizasyon tekniği son zamanlarda geliştirilen RNA FFPE doku kesitlerinde HPV E6/E7 mRNA doğrudan görselleştirme sağlar.

Için RNAscope<em&gt; In situ</em&gt; Head transkriptional Aktif Human Papilloma Virüs Tespiti ve Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

rnascope-for-situ-detection-transcriptionally-active-human

Research

JoVE Journal

Medicine

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

27.0K Görüntüleme.  Advanced Cell Diagnostics, Inc..  Baş ve boyun tümör dokusunda yüksek riskli HPV varlığı olumlu sonuçlar ile ilişkilidir. RNAscope denilen in situ hibridizasyon tekniği son zamanlarda geliştirilen RNA FFPE doku kesitlerinde HPV E6/E7 mRNA doğrudan görselleştirme sağlar. 

Video: RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Tıp

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in either sporadic or familial (neurofibromatosis type 2, NF2) forms, both associated with inactivating defects in the NF2 tumor suppressor gene. Treatment for VSs is generally surgical resection or radiosurgery, however the morbidity of such procedures has driven investigations into less invasive treatments. Historically, lack of access to fresh tissue specimens and the fact that schwannoma cells are not immortalized have significantly hampered the use of primary cultures for investigation of schwannoma tumorigenesis. To overcome the limited supply of primary cultures, the immortalized HEI193 VS cell line was generated by transduction with HPV E6 and E7 oncogenes. This oncogenic transduction introduced significant molecular and phenotypic alterations to the cells, which limit their use as a model for human schwannoma tumors. We therefore illustrate a simplified, reproducible protocol for culture of primary human VS cells. This easily mastered technique allows for molecular and cellular investigations that more accurately recapitulate the complexity of VS disease.

Vestibular Schwannomas (VSs) are non-malignant tumors of Schwann cell (SC) origin, associated with mutations in the NF2 tumor suppressor gene. We report a reproducible, efficient protocol for primary human VS cell culture that allows for molecular and cellular experimental manipulation and analysis and recapitulates the heterogeneous nature of human disease.

İnsan Vestibüler Schwannomalar İlköğretim Kültürü

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak&gt; Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local recurrence and distant metastasis. One hypothesis to explain this recurrence is the presence of cancer stem-like cells (CSCs) that present inherent chemo- and radio-resistance. In order to develop new therapeutic strategies, it is necessary to have experimental models that validate the effectiveness of targeted treatments and therefore to have reliable methods for the identification and isolation of CSCs. To this end, we present a protocol for the isolation of CSCs from human HNSCC cell lines that relies on the combination of two successive cell sortings performed by fluorescence activated cell sorting (FACS). The first one is based on the property of CSCs to overexpress ATP-Binding Cassette (ABC) transporter proteins and thus exclude, among others, vital DNA dyes such as Hoechst 33342. The cells sorted with this method are identified as a &#34;side population&#34; (SP). As the SP cells represent a low percentage (&#60;5%) of parental cells, a growing phase is necessary in order to increase their number before the second cell sorting. The next step allows for the selection of cells that possess two other HNSCC stem cell characteristics i.e. high expression level of the cell surface marker CD44 (CD44high) and the over-expression of aldehyde dehydrogenase (ALDHhigh). Since the use of a single marker has numerous limitations and pitfalls for the isolation of CSCs, the combination of SP, CD44 and ALDH markers will provide a useful tool to isolate CSCs for further analytical and functional assays requiring viable cells. The stem-like characteristics of CSCs was finally validated in vitro by the formation of tumorispheres and the expression of &#946;-catenin.

Understanding the role of cancer stem-like cells in tumor recurrence and resistance to therapies has become a topic of great interest in the last decade. This article describes the isolation and characterization of the sub-population of cancer stem-like cells from head and neck squamous carcinoma cell lines (HNSCC).

Bir Baş-Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu subpopülasyonu olması Kök Hücre Özellikleri İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of inner ear gene therapy is to find a delivery method which results in consistent transduction efficiency of targeted cell types while minimizing hearing loss. In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a viable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear. The easy anatomic identification of the posterior semicircular canal, as well as minimal manipulation of the temporal bone required, make this surgical approach an attractive option for inner ear gene delivery.

In this study, we describe the posterior semicircular canal approach as a reliable method for inner ear gene delivery in neonatal mice. We show that gene delivery through the posterior semicircular canal is able to perfuse the entire inner ear.

İç kulak gen teslim yenidoğan Mouse için posterior semisirküler kanal yaklaşım

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

In Vivo Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&#232;re's Disease Ears and Normal Hearing Ears

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this patient group but has yet to be confirmed. This protocol describes a method of in vivo evaluation of neural changes especially well suitable for cranial nerve analysis using magnetic resonance imaging (MRI). MD-patients and normal hearing persons were examined in a 3-T MR-scanner using a scan protocol including strongly T2-weighted 3D gradient-echo-sequence (3D-CISS). In the patient group, MD was additionally confirmed using MRI-based assessment of endolymphatic hydrops. Morphometric analysis was performed using a freeware DICOM viewer. Evaluation of cranial nerves included measurements of cross-sectional areas (CSAs) of the nerves at different levels as well as orthogonal diametric measurements.

&lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Morphometric Analysis of Human Cranial Nerves Using Magnetic Resonance Imaging in Meni&amp;#232;re&#039;s Disease Ears and Normal Hearing Ears

To evaluate morphological changes of cranial nerves such as loss of neural structures or swelling of cranial nerves in Meni&#232;re&#39;s Disease (MD) or in healthy persons in vivo, a protocol of evaluation has been developed using magnetic resonance imaging (MRI). Additional MRI-based confirmation of MD was performed.

Vivo Menière'nın hastalığı kulakları ve Normal işitme kulak manyetik rezonans görüntüleme kullanarak insan kranial sinirler xarakteristikaları analizi

Analysis of neural structures in Meni&#232;re's Disease (MD) is of importance, since a loss of such structures has previously been proposed for this ...

Porcine As a Training Module for Head and Neck Microvascular Reconstruction

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes have been available for years in many surgical fields. We used the female (because they are easy to handle for the procedure) Yorkshire pigs for the head and neck reconstruction by harvesting the deep inferior epigastric artery perforator or the superior epigastric artery perforator flap. The anastomosis site (neck skin defect or tracheal wall defect) was prepared via the dissection of the common carotid artery and the internal jugular vein, in which 3.5&#215; loupe magnification was used for anastomosis as we use on human cases in real life. This procedure demonstrates a new training method using a reliable learning model and provides a detailed anatomy in a live scenario. We focused on the ischemia time, harvesting, vessel anastomosis, and designing the flap to fit the defect site. This model improves tissue handling and with the use of proper instruments can be repeated many times so that the surgeon is fully confident before starting the surgery on humans.

Here we present a protocol for the use of the pig superior epigastric artery perforator flap as a learning module for head and neck microvascular reconstruction.

Baş ve boyun mikrovasküler rekonstrüksiyon için bir eğitim modülü olarak domuz

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes ...

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

Kafa ve boyun kanseri Perinevral Invazyonu değerlendirmek için Chick Chorioallantoik membran In vivo model

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is almost completely reserved to a few referral centers that deal with a large proportion of this pathology. Practice on human specimens is not always possible for ethical, economic, or availability reasons. The aim of this study is to provide a reproducible method for the organization of a laryngeal laboratory on ex vivo animal models where it is possible to approach, learn, and refine laryngeal techniques. Porcine and ovine larynges are ideal, affordable, models to simulate laryngeal surgery given their similarity to the human larynx in their anatomical layout and tissue composition. Herein, the surgical steps of transoral laser surgery, open partial horizontal laryngectomy, and total laryngectomy are reported. The merging of endoscopic and exoscopic views guarantees an inside-out perspective, which is vital for the comprehension of the complex laryngeal anatomy. The method was successfully adopted during three sessions of a dissection course &#34;Lary-Gym&#34;. Further perspectives on robotic surgical training are described.

The purpose of this paper is to illustrate how to organize a reproducible laboratory for laryngeal surgery on affordable and closely similar animal laryngeal models in order to improve anatomical and surgical knowledge and skills.

Diseksiyon Laboratuvarında Modern Laringeal Cerrahi Öğrenme

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...