Bu protokol, bir sıçan modelinde böbrekler kullanılarak damarlı iskelelerin geliştirilmesini mümkün kılar. Böbrek, farklılaşmış kök hücrelerin iskeleleri için en uygun organdır. Bu, böbreğin hücreden arındırılması için oldukça başarılı bir protokoldür.
ECM ultrayapısının minimum tahribatı ile çekirdekleri etkili bir şekilde temizler. Bu teknik transplantasyon tıbbı ve doku mühendisliğine uygulanabilir. Prosedürü gösteren kim Joo Hyoung, laboratuvarımdan plastik cerrahi yüksek lisans/doktora doçenti.
Başlamak için, sekiz haftalık Sprague Dawley sıçanını bir ısınma yastığına yerleştirin ve çekirdek sıcaklığını izlemek için rektumda bir rektal termometre probu yerleştirin. Sıçanı uyuşturuyorktan sonra, bir supine pozisyonuna getirin ve dört uzvu bantla masaya sabitleyin. Karnı mikrop öldürücü sabunla tıraş edin ve temizleyin.
%2 Betadin'i en az bir ila iki dakika uygulayın, ardından% 70 etanol çözeltisi ile silin. Bu sırayı üç kez tekrarlayın. Ameliyat alanını steril, fenestratlı bir örtü ile örtün.
Dikey bir karın kesiği yapın ve sol böbreği, üretteri, abdominal aortu ve alt vena kavayı ortaya çıkarın. Pedileyi kesmeden hemen önce dokuyu parçalara ayrıştırın. PBS'yi mililitre heparin başına yaklaşık 10 ünite ile karıştırarak sıçan başına 50 mililitre perfüzyon çözeltisi hazırlayın.
%4 PFA çözümünü yapmak için PBS ile %8 PFA eşit hacimleri karıştırın. Dikey karın kesisini krank olarak uzatın, hasar görmemesi için keserken makası organlardan uzaklaştırdığınızdan emin olun. Kesiği göğüs kafesinden devam ettirin ve ardından sternumu kaldırarak diyaframı kesin.
Bir Allis kelepçesi ile gevşek deri kapağını geri çekin ve herhangi bir bağ dokusunups ile yırtarak kalbi serbest bırakın. PBS hattını açın ve iğneyi sol ventriküle yerleştirmeden önce aktığından emin olun. Kalbi künt tokmaklarla hafifçe tutun ve iğneyi kontrol etmek için bir hemostat kullanın.
İğne en fazla çeyrek inç sokulmalıdır. İğne ve hemostat ile kalbi desteklerken, sağ kulakçığı bulun ve iridektomi makası ile içinden kesin. Hemostat farenin vücuduna yaslanın ve iğnenin hala kalbin içine yerleştirilmiş olduğundan emin olun.
Böbrek ve karaciğerde hala kan görünüyorsa, PBS'ye dört dakika veya daha uzun süre perfüzyona devam edin. Sol böbreği abdominal aort ve inferior vena kava ile hasat edin. Üretter, torasik aort, üstün vena kava ve abdominal aortu dallarını ligat.
Organı 10 santimetrelik petri kabında DPBS'de nemlendirin. Abdominal aort ve inferior vena kavayı 23-gauge kateter ile yalıtın. Artık kanı çıkarmak için, kanülleri peristaltik bir pompaya bağlayın ve organı 500 mililitre DPBS ve mililitre heparin başına 16 ünite ile beş rpm ve 37 santigrat derecede 90 dakika yıkayın.
Böbreği hücreden çıkarmak için, üç saat boyunca% 1 Triton X-100 ve ardından 40 mililitre cıva sabit basıncında altı saat boyunca% 0.75 SDS çözeltisi ile perfuse edin. Artık SDS'yi çıkarmak için, numuneyi damıtılmış suda%1 penisilin ile 18 saat ve daha sonra steril DPBS ve mililitre heparin başına 16 ünite ile 90 dakika boyunca perfuse edin. Sıçan böbreklerinin brüt morfolojisi koyu kırmızıydı.
Hücreden arındırma sonrasında böbrek soluk ve yarı saydam hale geldi. Artık genomik DNA hücre dışı böbrek iskelelerinde ölçüldü ve yerli böbreklerdekiyle karşılaştırıldığında, doku genomik DNA'sının hücreden arındırıldıktan sonra neredeyse ortadan kaldırıldığını doğruladı. 14 vakadan ortalama DNA içeriği kontrol için mikroliter başına 115,05 nanogram, hücreden çıkarılanmış iskele için mikroliter başına 1,96 nanogramdı.
Toplamda DNA'nın %98,3'ü çıkarıldı. Kortikal parenkimde üç boyutlu yapı korunmuş ve asellüler glomeruli korunmuştur. İğneyi sol ventrikül içine yerleştirirken, çeyrek inçten fazla yerleştirilmemelidir.
Başka bir ekleme diğer taraftan çıkabilir. Bu tekniğin doku mühendisliği alanında yeni bir umut açacağına olan güvenimiz tamdır.
