Yazarlar bu proje için mali destek sağlamak için Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi teşekkür etmek istiyorum.

1.. Kuru Alg Biyokütle İzolasyonu Floresan Okumalar için Standartlar olarak kullanılır edilecek <ol><li> Kuru biyo-kütle, en az 200 mg olan artan alg kültürden bir numune hacmi kaldırma, 400-600 mg tercih edilir. </li><li> 10,000 x g de 10 dakika süre ile 4 ° C&#39;de santrifüj örneği. Süpernatant atılır ve büyüme ortamı ile aynı pH&#39;a formüle fosfat tampon maddesinin eşit hacmi ile pelet yıkayın. </li><li> 3 yıkama işlemi bir toplam adım 1.2 tekrarlayın. </li><li> De-iyonize su içinde pelet yeniden askıya ve ağırlık önceden tartılmış çanak aktarın. 48 saat boyunca 50 ° C &#39;de kuru olsun. Not: vakum altında kurutma, kurutma süresini azaltmak ve 50 ° C üzerindeki sıcaklıklarda kurutulması yeniden süspansiyon kültürü zor hale getirebilir. </li><li> Ileride kullanmak için oda sıcaklığında saklayınız kurutulmuş alg kültürleri. </li></ol> Hekzan Ekstraksiyon tarafından Nötr Lipidlerinin 2. Gravimetrik niceliksel (Bligh ve Dyer 4 uyarlanmıştır) <ol><li> Bir ağırlık tabak kuru alg biyokütlesinin yaklaşık 50 mg ölçün. Not: 40-80 mg kadar Kütleleri tekrarlanabilirlik kaybı olmadan kullanılabilir. </li><li> Bir havan heksan ile önceden yıkanmıştır biyokütle aktarın. Eğer gerekli ise, tam olarak harç için biyokütle transfer etmek için bir Pasteur pipeti kullanarak heksan küçük bir miktarı (1 mi) ile tartın çanak yıkayın. NOT: Hekzan derece uçucu ve zehirli bir maddedir. Bu uygun koruyucu giysi ile davlumbaz ele alınması gerekir. </li><li> Bir havan tokmağı kullanılarak 5 dakika boyunca alg biyokütlesinin öğütün. Nazik taşlama ile başlayan ve giderek şiddetini artırmak. 5 dakikalık bir süre içinde ince ve pürüzsüz bir hamur haline biyokütle öğütün. Harca biyokütle aktarırken fazla heksan kullanılırsa, bu heksan öğütme önce buharlaşması için beklemek en iyisidir. </li><li> Harç için heksan ile birkaç ml ilave edilir ve homojen hale gelinceye kadar havan tokmağı ile elde edilen bulamaç karıştırılır. Tüm hücre döküntüsü mor duvarlarına yapıştırılmış emin oluntar serbest kaldığında ve sıvı içinde süspansiyon haline getirilir. </li><li> Bir santrifüj tüpüne heksan-hücre kütlesi karışımı aktarın. Not: santrifüj tüpü cam ya da Teflon gibi heksan ile uyumlu uygun bir polimer şeklinde olmalıdır. </li><li> Tüm biyokütle santrifüj tüpüne (3-5x) transfer edilene kadar tekrar 2,4 ve 2,5 adımları tekrarlayın. </li><li> Santrifüj 10,000 x g &#39;de 20 dakika boyunca 4 ° C&#39; de örnek. </li><li> Dikkatli bir şekilde önceden tartılmış metal çanak içine tartın süpernatan pipetle. Davlumbaz saklayın. </li><li> Topağa heksan 3 ml ilave 1 dakika boyunca kuvvetlice girdaplanarak bir 2. heksan çıkarma yapın. </li><li> Tekrar 2.7 ve 2.8 adımları. Gerekirse, tüm hücre döküntüsü tam yerleşir sağlamak için ikinci çıkarma sırasında santrifüj içinde 30 dakika boyunca örneklerini yürüt. Hekzan tamamen buharlaşmış sonra gravimetrik çıkarılan yağın kütlesini belirlemek. </li></ol> Nil Kırmızı kullanma Nötr Lipidlerinin 3.. Florimetrik Kantitasyonu (RAPORU olarakted de la Hoz Siegler ve diğ. 11 oranında) Not: 5 g / L, bir alg süspansiyonu sadece 10 ul floresans okuma için gereklidir. Genel olarak, kültür sıvısının 1.5 ml kuru alg biyokütlesinin yeterli izolasyonu daha fazladır. Ayrıca, spektrofotometre içinde lambanın ışık yoğunluğu zamanla düşürebilir. Bu enstrüman varyasyonlar ölçümlerin gereksiz hata katmayan sağlamak için her deneyde standartlara dahil edilmesi önerilmektedir. <ol><li> Alkol reaktif dereceli etanol 10 ug / ml &#39;lik bir konsantrasyonda bir Nile Red çözelti hazırlayın. 4 ° C de karanlıkta bu çözüm saklayın </li><li> 4 ° C&#39;de deiyonize su ve mağaza içinde% 30 (v / v) etanol çözeltisi hazırlayın </li><li> Aynı biyokütle konsantrasyonu (/ L 5 g önerilir) de ve ölçümünde kullanılan standartlar ile aynı şekilde tüm alg örnekleri hazırlayın. Olan uygun miktarda ya da süspansiyon önceden kurutulmuş numuneler ile bu Yapılacakfosfat tamponu (0.6 g / L potasyum fosfat dibazik, 1.4 g / L potasyum fosfat monobazik) ya da bulanıklık ölçüm sonra fosfat tampon maddesi ile 5 g / L büyüyen alg kültür konsantrasyonunun ayarlanması. NOT: Canlı alg kültürleri üzerinde yapılan ölçümler genellikle bulanıklık kalibrasyon eğrisinin hassas bağlı olarak onlarla ilgili büyük bir hata olacaktır. Kurutuldu örnekleri tam olarak yeniden süspanse biyokütle dağıtılması için bir homojenleştiricinin kullanımını gerektirebilir. </li><li> Her bir örnek için, 96 oyuklu bir plaka tek bir oyuk içinde% 30 etanol çözeltisi içinde 80 ul, Nile Red çözeltisinin 10 ul ve alg süspansiyonu 10 ul karıştırın. Uygun şekilde floresan ölçüm arasındaki farklılıkları hesaba amacıyla, her bir örnek 5 çoğaltır. </li><li> Enstrüman ve hazırlanmasında gün-gün varyasyonları için hesap için önceden hazırlanmış standartlar ile iki noktalı kalibrasyon eğrisi. S kullanarak floresan ölçümü için standartlar hazırlamak, örnek olarak ame prosedür. NOT: Genellikle iki nokta aletin kalibrasyon için, üç puan doğrusallık doğrulamak için çalıştırılabilir yeterlidir. </li><li> Bir çok-yuvalı plaka okuyucu spektrofotometre içinde floresans ölçümleri yapın. Aşağıdaki koşullar en tutarlı sonuçlar 11 elde bulundu: <ol><li> 30 saniye için, 1.200 rpm, yörünge 3 mm çalkalayın. </li><li> 10 dakika boyunca 40 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> 30 saniye için, 1.200 rpm, yörünge 3 mm çalkalayın. </li><li> Tutanak floresan, 530 nm&#39;de eksitasyon, 604 nm emisyon. </li></ol></li><li> Iç standartları elde edilen sonuçları kullanarak yağ içeriği için floresans ölçümleri dönüştürme. </li></ol> 4. Floresan Mikroskopi Tekniği NOT: Bölüm 3 açıklanan boyama protokolü kantitatif analiz için tasarlanmış, ama aynı zamanda eğitici ve açıklayıcı pu için leke dayalı tekniklerin görsel temsillerini sağlamak için yararlı olabilirrposes. Örnek floresan biri görüntülerini üretmek için geleneksel iletim ve ek epifluorışıma aydınlatma kaynakları ile bir optik mikroskop gerektirir. 530 nm (yeşil) ve 604 nm (kırmızı) aralığında Eksitasyon ve emisyon ışık filtreleri, sırasıyla, Nile Red leke hem de yazılım ile bağlantılı bir mikroskop monte edilmiş bir kamera için ihtiyaç vardır. Bu çalışmada (Şekil 1) de gösterilen görüntüler RGB dönüştürücü ünite için bir kamera ve Monokrom ile donatılmış aydınlık alan mikroskobu kullanılarak elde edildi. Bu araçları kullanarak Nil Kırmızı floresan görüntüleri üretmek için prosedür aşağıda özetlenmiştir: <ol><li> Protokol bölümü 3&#39;e uygun Nil kırmızı leke ile bir kültür örnek hazırlayın. Not: 5 g / L konsantrasyon aralığı içinde bir örnek aşırı kalabalık olmadan yeterli hücre yoğunluğunun slaytlar üretir. </li><li> Boyama protokolü adım 3.6 tamamladıktan sonra, standart laboratuar prosedürlere göre işlenen numunenin bir mikroskop slaydı hazırlar. </li><li> Iletim modunda mikroskop ile başlayarak, mikroskop içine hazırlanan slayt yük ve istenen büyütme (bu yazıda gösterilen görüntüler 100X amacı ile satın alındı) de hücreleri bulmak. </li><li> Odaklı kez epifluorışıma aydınlatma moduna iletim gelen mikroskop geçiş. Işık kaynağı artık (bu slayt ve objektif lens arasındaki boşluk gözlemleyerek görsel olarak teyit edilebilir) objektif lens doğrudan gelen edilmelidir. </li><li> Gözlem ışık yoluna ışık kaynağı ve kırmızı emisyon filtre içine yeşil bir uyarım filtre takın; boyalı hücrelerin floresans artık mercek doğrudan görünür olmalıdır. </li><li> Monte kameraya Mercekten mikroskop gözlem moduna geçmek ve floresanlama hücrelerin bir görüntü yakalamak için görüntüleme yazılımı kullanın. Kameranın duyarlılığına bağlı olarak, örnek başlangıçta (önizleme penceresinde görünmeyebilir ekranında yani olacak) siyah olacak; Bu durumu düzeltmek için, hücreler görebilir bir düzeye maruz kalma süresi ve kameranın kazancını kontrol etmektedir. Özel ayarlar alet, ekipman ve hücre tipleri ile değişecektir. </li></ol>

<ol>
	<li>Chisti, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodiesel+from+microalgae.">Biodiesel from microalgae.</a> Biotechnol. Adv. 25, 294-306 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Algal+Biofuels+Technology+Roadmap.+Energy+Efficiency+&amp;+Renewable+Energy.">National Algal Biofuels Technology Roadmap. Energy Efficiency &amp; Renewable Energy.</a> U.S. Department of Energy, Office of Energy Efficiency and Renewable Energy, Biomass Program. , (2010).</li><li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+microalgal+productivity+using+an+adaptive,+non-linear+model+based+strategy.">Optimization of microalgal productivity using an adaptive, non-linear model based strategy.</a> Bioresour. Technol. 104, 537-546 (2012).</li><li>Bligh, E. G., Dyer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Rapid+method+of+total+lipid+extraction+and+purification.">A Rapid method of total lipid extraction and purification.</a> Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959).</li><li>Hara, A., Radin, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+extraction+of+tissues+with+a+low-toxicity+solvent.">Lipid extraction of tissues with a low-toxicity solvent.</a> Anal. Biochem. 90, 420-426 (1978).</li><li>Han, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+methods+used+for+microalgal+lipid-content+analysis.">Review of methods used for microalgal lipid-content analysis.</a> Energ. Procedia. 12, 944-950 (2011).</li><li>Pino, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+high+throughput+microscopic+assessment+of+fat+mass+in+Caenorhabditis+elegans.">Biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (73), (2013).</li><li>Sitepu, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+high-throughput+Nile+red+fluorescence+assay+for+estimating+intracellular+lipids+in+a+variety+of+yeast+species.">An improved high-throughput Nile red fluorescence assay for estimating intracellular lipids in a variety of yeast species.</a> J. Microbiol. Meth. 91, 321-328 (2012).</li><li>Izard, J., Limberger, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+method+for+quantitation+of+bacterial+cell+lipids+from+whole+cells.">Rapid screening method for quantitation of bacterial cell lipids from whole cells.</a> J. Microbiol. Meth. 55, 411-418 (2003).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+Nile+red+method+for+quantitative+measurement+of+neutral+lipids+in+microalgae.">A high throughput Nile red method for quantitative measurement of neutral lipids in microalgae.</a> J. Microbiol. Meth. 77, 41-47 (2009).</li><li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+reliability+of+fluorescence-based+neutral+lipid+content+measurements+in+microalgal+cultures.">Improving the reliability of fluorescence-based neutral lipid content measurements in microalgal cultures.</a> Algal Res. 1, 176-184 (2012).</li><li>de la Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+determination+of+lipid+content+in+a+marine+dinoflagellate,+Crypthecodinium+cohnii.">Flow cytometric determination of lipid content in a marine dinoflagellate, Crypthecodinium cohnii.</a> J. Appl. Phycol. 15, 433-438 (2003).</li><li>Elsey, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+measurement+of+microalgal+neutral+lipids.">Fluorescent measurement of microalgal neutral lipids.</a> J. Microbiol. Meth. 68, 639-642 (2007).</li><li>Feng, G. -. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+FT-IR+and+Nile+Red+methods+for+microalgal+lipid+characterization+and+biomass+composition+determination.">Evaluation of FT-IR and Nile Red methods for microalgal lipid characterization and biomass composition determination.</a> Bioresour. Technol. 128, 107-112 (2013).</li><li>Guzm&#225;n, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimate+by+means+of+flow+cytometry+of+variation+in+composition+of+fatty+acids+from+Tetraselmis+suecica+in+response+to+culture+conditions.">Estimate by means of flow cytometry of variation in composition of fatty acids from Tetraselmis suecica in response to culture conditions.</a> Aquacult. Int. 18, 189-199 (2010).</li><li>Huang, G. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+method+for+lipid+production+in+alga+based+on+Nile+red+fluorescence.">Rapid screening method for lipid production in alga based on Nile red fluorescence.</a> Biomass Bioenerg. 33, 1386-1392 (2009).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+method+for+the+determination+of+lipid+from+the+green+alga+Botryococcus+braunii.">Rapid method for the determination of lipid from the green alga Botryococcus braunii.</a> Biotechnol. Tech. 12, 553-556 (1998).</li><li>Montero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+high-lipid+content+strains+of+the+marine+microalga+Tetraselmis+suecica+for+biodiesel+production+by+flow+cytometry+and+single-cell+sorting.">Isolation of high-lipid content strains of the marine microalga Tetraselmis suecica for biodiesel production by flow cytometry and single-cell sorting.</a> J. Appl. Phycol. 23, 1053-1057 (2011).</li><li>Vigeolas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+partial+characterization+of+mutants+with+elevated+lipid+content+in+Chlorella+sorokiniana+and+Scenedesmus+obliquus.">Isolation and partial characterization of mutants with elevated lipid content in Chlorella sorokiniana and Scenedesmus obliquus.</a> J. Biotechnol. 162, 3-12 (2012).</li><li>Bertozzini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+the+standard+addition+method+for+the+absolute+quantification+of+neutral+lipids+in+microalgae+using+Nile+red.">Application of the standard addition method for the absolute quantification of neutral lipids in microalgae using Nile red.</a> J. Microbiol. Meth. 87, 17-23 (2011).</li><li>Kou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+measurement+of+lipid+content+in+the+model+organism+Chlamydomonas+reinhardtii.">Fluorescent measurement of lipid content in the model organism Chlamydomonas reinhardtii.</a> J. Appl. Phycol. , 1-9 (2013).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Standart eğri kullanılan yosunlar, bu ölçülen ile aynı deney koşulları altında ekilen aynı tür olmalıdır. Medyum kompozisyonu, yetiştirme tekniği ve boyama protokolü önemli değişiklikler floresans okuma yoğunluğunu etkileyebilir. (Bölümler 1 ve 2&#39;de tarif edilmiştir) ekstre Heksan, standart eğri kullanılan numunelerin nötr lipid içeriğini belirlemek için kullanılmıştır. Doğru floresan yoğunluğu ölçümleri için, bütün numuneler aynı biyokütle konsantrasyonu (5 g / L, bu ça...

Nedeniyle bazı stres koşullarında lipit cesetleri saklamak için kendi yeteneği, yosun potansiyel yenilenebilir bir yakıt kaynağı 1,2 gibi son yıllarda ilgi büyük aldık. Nötr lipidler uygun büyüme koşulları altında 3 hücre kuru ağırlığının% 60&#39;ın üzerinde hesap. Oysa sanayi düzgün, biyoproses performansını izlemek kültürleri analiz etmek ve yeni suşları için ekran için alg hücrelerinin lipid içeriğini ölçmek için, basit, temiz, hızlı ve güvenilir standart bir protokol yoktur. Bligh-Dyer gravimetrik yöntem yaklaşık 50 yıl önce bugün gelişmiş 4,5 kullanılan en yaygın teknikler arasında kalır. Bu işlem, basit, güvenilir ve yürütmek kolay olsa da, bu, zaman alıcıdır büyük örnek hacmi gerektirir, ve toksik çözücülerin kullanımı yapar. Bu fermantasyon vadede birçok örnekleri analiz veya yeni petrol zengini suşları için tarama için pratik değildir. Diğer yöntemler b vareen geliştirdi, ancak genellikle gelişmiş donanım gerektirmez ve 6 standardize edilmemiştir. Ilgi bir hayli topladı alternatif Nil Kızıl leke. Nile Red, polar olmayan ortamlarda tercihen floresant bir boya, nematodlar 7, 8, maya, bakteri 9 ve 10-19 yosunu dahil olmak üzere çeşitli organizmalarda lipid organları belirlemek ve ölçmek için kullanılmıştır. Nile Red ilgili ilk teknikleri tek bir küvet spektrofotometri yöntemi ile ya da akış sitometrisi leke birleştirerek, niteliksel ya da yarı-nicel idi. Ayrıca, yeşil yosunu gibi yosun bazı sınıfları tekniği 10 aralığını sınırlı boya, çoğunlukla geçirmeyen kalın hücre kuyulara sahiptir. Nile Red boyama yöntemi için yeni gelişmeler protokol 10,11 ilk eksiklikleri bypass olduğu bildirilmiştir. Bir Carr mevcudiyetinde hücrelerin boyanmasıier 10, DMSO gibi bir çözücü veya etanol 10,11 güvenilir niceliksel ölçümler için izin veren, yağ içeriği ve absorbansı ile süre arasındaki ilişkiyi linearizes. Çözücü, Nile Red moleküllerin geçmesine ve böylece, hücre membran geçirgenliği sağlar. Buna ek olarak, mikro-plaka okuma yetenekleri olan bir spektrofotometre içeren kantitatif analiz için uygun olan yüksek verim protokolleri sağlar. Bu makale, detaylı olarak, etanol, bir uygun çözücü varlığında, Nil kırmızısı ile kültürleri boyanarak alg hücrelerinin yağ içeriğini ölçmek için basit bir yöntemdir. En doğru amacıyla ölçümlerde arka plan gürültü hesabı, yağ içeriği için floresan yoğunluğu ilişkilendirerek, standart bir eğri bilinen bir yağ bileşiminin yosun hücreleri kullanılarak geliştirilmiştir. Bu yöntem, daha önce yayınlanmış protokollere 10,11 uyarlanmıştır. 96 çukurlu bir spektrofotometre kullanılarak, tek bir saat tha numune aynı miktarda analiz edebilmektedirt gravimetrik yöntemlerle izlemek için gün alacaktı. Ayrıca, istenen alg türlerinin temsili numuneler kullanılarak kalibre bu yöntemi doğrudan yorumlanabilir nispeten hassas ölçümler üretir. Farklı suşları ve uygulamalar için optimize Nil Kırmızı yosun boyama yöntemlerini özetleyen birçok protokol var; Bu çok daha fazla türlere ve sınıflar için muhtemel uygun olmasına rağmen burada sunulan protokol başlangıçta, Auxenochlorella protothecoides için de la Hoz Siegler ve ark. 11 tarafından Chlorella vulgaris, Scenedesmus&#39;u dimorphus ve Scenedesmus Obliquus geliştirilmiştir. Bu izleme biyoproses performansı belirli bir uygulama ile dizayn edilmiştir ve bu büyüyen bir kültürden önce kurutulmuş bir numune ve sulu numuneler için aynı şekilde iyi çalışır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="817">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Dry Weight</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">25 ml disposable pipettes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-676-10K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Pipette Bulb</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-681-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">40 ml Nalgene Teflon Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-562-16A</td>
			<td>Teflon needed for hexane</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Weigh Dishes (polypropylene)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">2-202B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">1.5 ml micro-centrifuge tubes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:152px;">Sorvall</td>
			<td style="width:152px;">RC6plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Drying Oven (Fisher 625D)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-254-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Storage vials</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">0337-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Bench-top microcentrifuge (Eppendorf 5415D)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-40-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Gravimetric Quantification</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Porcelain Mortar (Coorstek)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-961A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Porcelain Pestle (Coorstek)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-961-5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">40 ml Centrifugation tubes (FEP)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">05-562-16A</td>
			<td>Could also use glass tubes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Pasteur Glass Pipettes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">13-678-20C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Aluminum weigh dishes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">08-732-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Hexanes</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">H292-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:347px;">Fluorometric quantification of oil content</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:347px;">Fluorescence multi-well plate reader</td>
			<td style="width:152px;">Thermo Lab Systems</td>
			<td style="width:152px;">Fluoroskan Ascent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Fluorescence reader software</td>
			<td style="width:152px;">Thermo Lab Systems</td>
			<td style="width:152px;">Ascent Software 2.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">COSTAR 96 well plate with round bottom</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">06-443-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Nile Red&#160;</td>
			<td style="width:152px;">Sigma</td>
			<td style="width:152px;">N3013-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Ethanol (Alcohol reagent grade)</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">AC65109-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Imaging Fluorescent cells</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Leica DMRXA2 (or equivalent) microscope</td>
			<td style="width:152px;">Leica</td>
			<td style="width:152px;">DMRXA2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Microscope cover slips</td>
			<td style="width:152px;">Fisher</td>
			<td style="width:152px;">12-541B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Camera</td>
			<td style="width:152px;">Qimaging</td>
			<td style="width:152px;">Retiga Ex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:347px;">Imaging software</td>
			<td style="width:152px;">Qimaging</td>
			<td style="width:152px;">QCapture v.1.1.8</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple and rapid protocol for measuring neutral lipids in algal cells using fluorescence

Yosun doğal lipit depolama yetenekleri nedeniyle yenilenebilir yakıt kaynaklarından için mükemmel bir aday olarak kabul edilir. Alg fermantasyon süreçleri ve yeni petrol zengini suşları için tarama güçlü izleme hücre içi lipit içeriğinin belirlenmesi için hızlı ve güvenilir bir protokolü gerektirir. Güncel uygulamalar yağ içeriğini belirlemek büyük ölçüde gravimetrik yöntemler güvenmek, teknikler zaman alıcı ve büyük örnek hacimleri gerektiren onlarca yıl önce geliştirdi. Bu yazıda, Nile Red, organizmaların çok sayıda türleri lipid cisimlerin varlığının belirlenmesi için kullanılan bir floresan boya, Auxenochlorella protothecoides nötr lipid içeriği, yeşil bir ölçmek için basit, hızlı ve güvenilir bir protokole zikredilen alg. Yöntem, boyama önce hücre zarı ve fluoresans yoğunluğu ölçümleri sırasında örnek kapasitesini artırmak için, 96 oyuklu bir mikro-plaka nüfuz edilebilir kılınması için, etanol, nispeten hafif bir çözücü kullanmaktadır. Bu tasarım olmuşturİzleme biyoproses performansı belirli bir uygulama ile ed. Büyüyen bir kültürden önce kuru numune veya canlı numuneleri deneyde kullanılabilir.

Nile Red boya ile boyanmış Örnek yosun hücreleri, Şekil 1 &#39;de tasvir edilmektedir. Parça A ve A Şekil 1 ekran görüntülerinin B protothecoides oldukça düşük hücre içi lipid birikimine neden fazla nitrojen içinde büyütülür. A, C ve D parçaları, örneklerde azot sınırlaması altında yetiştirilen protothecoides gösterilmiştir. Iletim aydınlatma altında, ...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence at JoVE.com

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

Bir Nile Red boyama prosedürü kullanılarak alg hücrelerinin nötral lipid içeriğini belirlemek için basit bir protokol tarif edilmektedir. Bu zaman tasarrufu tekniği geleneksel gravimetrik esaslı lipid miktar protokoller için bir alternatif sunuyor. Bu izleme biyoproses performansı belirli bir uygulama için tasarlanmıştır.

Floresan kullanma Alg hücrelerinde nötral Lipidler Ölçüm Basit ve Hızlı Protokolü

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

a-simple-rapid-protocol-for-measuring-neutral-lipids-algal-cells

Research

JoVE Journal

Chemistry

35.3K Görüntüleme.  University of Alberta.  Bir Nile Red boyama prosedürü kullanılarak alg hücrelerinin nötral lipid içeriğini belirlemek için basit bir protokol tarif edilmektedir. Bu zaman tasarrufu tekniği geleneksel gravimetrik esaslı lipid miktar protokoller için bir alternatif sunuyor. Bu izleme biyoproses performansı belirli bir uygulama için tasarlanmıştır. 

Video: A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Kimya

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over large or small sample areas. It has been applied in many areas of science, including materials science, geoscience, studying works of cultural heritage, and in chemical biology. In the case of chemical biology, for example, visualizing the metal distributions within cells allows us to study both naturally-occurring metal ions in the cells, as well as exogenously-introduced metals such as drugs and nanoparticles. Due to the fully hydrated nature of nearly all biological samples, cryo-fixation followed by imaging under cryogenic temperature represents the ideal imaging modality currently available. However, under the circumstances that such a combination is not easily accessible or practical, aldehyde based chemical fixation remains useful and sometimes inevitable. This article describes in as much detail as possible in the preparation of adherent mammalian cells by chemical fixation for X-ray fluorescent imaging.

Here, we present a protocol on how to determine the quantity and distribution of metals in a sample using synchrotron X-ray fluorescence. We focus on adherent cells, and describe the chemical fixation method to prepare this sample. We then describe how to mount and image the sample using synchrotron X-rays.

Kimyasal Fiksasyon X-ışını Floresans Görüntüleme Değme Hücreleri hazırlanması

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, and that these chemical fingerprints can be used for plant species identification. The mass spectral data can be acquired rapidly and in a high throughput manner without the need for sample extraction, derivatization or pH adjustment steps. The use of this technique bypasses challenges presented by more conventional techniques including lengthy chromatography analysis times and resource intensive methods. The high throughput capabilities of the direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry protocol, coupled with multivariate statistical analysis processing of the data, provide not only class characterization of plants, but also yield species and varietal information. Here, the technique is demonstrated with two psychoactive plant products, Mitragyna speciosa (Kratom) and Datura (Jimsonweed), which were subjected to direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry followed by statistical analysis processing of the mass spectral data. The application of these tools in tandem enabled the plant materials to be rapidly identified at the level of variety and species.

A method for species identification of botanical material by direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry and multivariate statistical analysis is presented.

Gerçek Zamanlı Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometresi Doğrudan Analizi Kullanılarak Botanik Malzeme Hızlı Yüksek verim Türler Kimlik

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

A Simple and Efficient Protocol for the Catalytic Insertion Polymerization of Functional Norbornenes

Norbornene can be polymerized by a variety of mechanisms, including insertion polymerization whereby the double bond is polymerized and the bicyclic nature of the monomer is conserved. The resulting polymer, polynorbornene, has a very high glass transition temperature, Tg, and interesting optical and electrical properties. However, the polymerization of functional norbornenes by this mechanism is complicated by the fact that the endo substituted norbornene monomer has, in general, a very low reactivity. Furthermore, the separation of the endo substituted monomer from the exo monomer is a tedious task. Here, we present a simple protocol for the polymerization of substituted norbornenes (endo:exo ca. 80:20) bearing either a carboxylic acid or a pendant double bond. The process does not require that both isomers be separated, and proceeds with low catalyst loadings (0.01 to 0.02 mol%). The polymer bearing pendant double bonds can be further transformed in high yield, to afford a polymer bearing pendant epoxy groups. These simple procedures can be applied to prepare polynorbornenes with a variety of functional groups, such as esters, alcohols, imides, double bonds, carboxylic acids, bromo-alkyls, aldehydes and anhydrides.

We describe the catalytic insertion polymerization of 5-norbornene-2-carboxylic acid and 5-vinyl-2-norbornene to form functional polymers with a very high glass transition temperature.

Fonksiyonel norbornenler Katalitik Yerleştirme Polimerizasyon için Basit ve Etkin Protokol

Norbornene can be polymerized by a variety of mechanisms, including insertion polymerization whereby the double bond is polymerized and the bicyclic ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents warrants proper technique, thorough training, and proper personal protective equipment. To aid in the training of researchers using organolithium reagents, a thorough, step-by-step protocol for the safe and effective use of tert-butyllithium on an inert gas line or within a glovebox is described. As a model reaction, preparation of lithium tert-butyl amide by the reaction of tert-butyl amine with one equivalent of tert-butyl lithium is presented.

The safe and proper use of organolithium reagents is described.

Organolityum Reaktifleri kullanarak Güvenli litiasyon Reaksiyonlar için Protokol

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

Simultaneous Measurement of HDAC1 and HDAC6 Activity in HeLa Cells Using UHPLC-MS

The search for new histone deacetylase (HDAC) inhibitors is of increasing interest in drug discovery. Isoform selectivity has been in the spotlight since the approval of romidepsin, a class I HDAC inhibitor for cancer therapy, and the clinical investigation of HDAC6-specific inhibitors for multiple myeloma. The present method is used to determine the inhibitory activity of test compounds on HDAC1 and HDAC6 in cells. The isoform activity is measured using the ultra-high-performance liquid chromatography &#8211; mass spectrometry (UHPLC-MS) analysis of specific substrates incubated with treated and untreated HeLa cells. The method has the advantage of reflecting the endogenous HDAC activity within the cell environment, in contrast to cell-free biochemical assays conducted on isolated isoforms. Moreover, because it is based on the quantification of synthetic substrates, the method does not require the antibody recognition of endogenous acetylated proteins. It is easily adaptable to several cell lines and an automated process. The method has already proved useful in finding HDAC6-selective compounds in neuroblasts. Representative results are shown here with the standard HDAC inhibitors trichostatin A (non-specific), MS275 (HDAC1-specific), and tubastatin A (HDAC6-specific) using HeLa cells.

The present method serves to identify isoform-specific inhibitors of histone deacetylases (HDAC) in HeLa cells by the UHPLC-MS analysis of multiple substrates. This is an antibody-free method developed to reflect HDAC1 and HDAC6 activity in the living cell environment, in contrast to single-isoform cell-free assays.

Eş zamanlı ölçüm HDAC1 ve HDAC6 faaliyete HeLa hücreleri kullanarak UHPLC-MS

The search for new histone deacetylase (HDAC) inhibitors is of increasing interest in drug discovery. Isoform selectivity has been in the spotlight since ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical composition and elemental distribution within a material. Synchrotron-based XRF has become an integral characterization technique for a variety of research topics, particularly due to its non-destructive nature and its high sensitivity. Today, synchrotrons can acquire fluorescence data at spatial resolutions well below a micron, allowing for the evaluation of compositional variations at the nanoscale. Through proper quantification, it is then possible to obtain an in-depth, high-resolution understanding of elemental segregation, stoichiometric relationships, and clustering behavior.
This article explains how to use the MAPS fitting software developed by Argonne National Laboratory for the quantification of full 2-D XRF maps. We use as an example results from a Cu(In,Ga)Se2 solar cell, taken at the Advanced Photon Source beamline 2-ID-D at Argonne National Laboratory. We show the standard procedure for fitting raw data, demonstrate how to evaluate the quality of a fit and present the typical outputs generated by the program. In addition, we discuss in this manuscript certain software limitations and offer suggestions for how to further correct the data to be numerically accurate and representative of spatially resolved, elemental concentrations.

Here, we demonstrate the use of the X-ray fluorescence fitting software, MAPS, created by Argonne National Laboratory for the quantification of fluorescence microscopy data. The quantified data that results is useful for understanding the elemental distribution and stoichiometric ratios within a sample of interest.

HARİTALAR kullanarak x-ışını Floresans veri miktarının

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Fabrication and Testing of Catalytic Aerogels Prepared Via Rapid Supercritical Extraction

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three preparation methods are described: (a) the incorporation of metal salts into silica or alumina wet gels using an impregnation method; (b) the incorporation of metal salts into alumina wet gels using a co-precursor method; and (c) the addition of metal nanoparticles directly into a silica aerogel precursor mixture. The methods utilize a hydraulic hot press, which allows for rapid (&#60;6 h) supercritical extraction and results in aerogels of low density (0.10 g/mL) and high surface area (200-800 m2/g). While the work presented here focuses on the use of copper salts and copper nanoparticles, the approach can be implemented using other metal salts and nanoparticles. A protocol for testing the three-way catalytic ability of these aerogels for automotive pollution mitigation is also presented. This technique uses custom-built equipment, the Union Catalytic Testbed (UCAT), in which a simulated exhaust mixture is passed over an aerogel sample at a controlled temperature and flow rate. The system is capable of measuring the ability of the catalytic aerogels, under both oxidizing and reducing conditions, to convert CO, NO and unburned hydrocarbons (HCs) to less harmful species (CO2, H2O and N2). Example catalytic results are presented for the aerogels described.

Here we present protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms. Methods for preparing materials using copper salts and copper-containing nanoparticles are featured. Catalytic testing protocols demonstrate the effectiveness of these aerogels for three-way catalysis applications.

İmalat ve katalitik Aerogels hızlı süperkritik ayıklama hazırlanan test

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three ...

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity and convenient colorimetric readout. However, high densities of nanoparticles are typically needed for detection. The available synthesis-based enhancement protocols are either limited to gold and silver nanoparticles or rely on precise enzymatic control and optimization. Here, we present a protocol to enhance the colorimetric readout of gold, silver, silica, and iron oxide nanoprobes. It was observed that the colorimetric signal can be improved by up to a 10000-fold factor. The basis for such signal enhancement strategies is the chemical reduction of Au3+ to Au0. There are several chemical reactions that enable the reduction of Au3+ to Au0. In the protocol, Good&#39;s buffers and H2O2 are used and it is possible to favor the deposition of Au0 onto the surface of existing nanoprobes, in detriment of the formation of new gold nanoparticles. The protocol consists of the incubation of the microarray with a solution consisting of chloroauric acid and H2O2 in 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid pH 6 buffer following the nanoprobe-based detection assay. The enhancement solution can be applied to paper and glass-based sensors. Moreover, it can be used in commercially available immunoassays as demonstrated by the application of the method to a commercial allergen microarray. The signal development requires less than 5 min of incubation with the enhancement solution and the readout can be assessed by naked eye or low-end image acquisition devices such as a table-top scanner or a digital camera.

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

In this work, a protocol for signal enhancement of nanoprobe-based biosensing is presented. The protocol is based on the reduction of chloroauric acid onto the surface of existing nanoprobes that consist of gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles.

Hızlı Nanoprobe sinyal geliştirme içinde in Situ altın nanoparçacık sentezi tarafından

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer by generating a charged structure provides an opportunity to use extraction as a simple purification technique. By combining the use of a miscible organic solvent with saturated sodium bisulfite, aldehydes and reactive ketones can be successfully transformed into charged bisulfite adducts that can then be separated from other organic components of a mixture by the introduction of an immiscible organic layer. Here, we describe a simple protocol for the removal of aldehydes, including sterically-hindered neopentyl aldehydes and some ketones, from chemical mixtures. Ketones can be separated if they are sterically unhindered cyclic or methyl ketones. For aliphatic aldehydes and ketones, dimethylformamide is used as the miscible solvent to improve removal rates. The bisulfite addition reaction can be reversed by basification of the aqueous layer, allowing for the re-isolation of the reactive carbonyl component of a mixture.

Here, we present a protocol to remove aldehydes and reactive ketones from mixtures by a liquid-liquid extraction protocol directly with saturated sodium bisulfite in a miscible solvent. This combined protocol is rapid and facile to perform. The aldehyde or ketone can be re-isolated by the basification of the aqueous layer.

Aldehitler ve ketonlar reaktif ayrılması Bisülfit ayıklama protokolü kullanılarak karışımları

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...