Bu çalışma, NCI 1R01CA154656 NIAID 1R21AI092299, Kanser Araştırma Enstitüsü, St. Baldrick Vakfı, Dana Vakfı, Gabrielle Angel Vakfı ve Amerika Hyundai Motors &quot;Umut-on Wheels&quot; Programı hibe tarafından desteklenmektedir.

1. Fare Tutucu Meclisi <ol><li> Kapak aşağı bakan bir 100-mm plastik Petri kapağı üstüne bir 100-mm cam Petri Overlay. Zorlukla cam, plastik çanak merkez noktası dokunmadan edilmelidir. Cam kullanarak bir şablon gibi, plastik tabak üzerine bir iz iz. </li><li> Bir hilal şeklinde bir platform oluşturmak için bir 100-mm plastik tabak kapağı bir kısmını kaldırmak için bir el matkabı (yani Dremel) kullanın. Bu hilal şekilli plastik kapak fare (Şekil 1a) üst gövde için bir destek olarak hizmet verecek. Hilal şeklinde kapak gaz maskesi bir metal büküm kravat ile güvence altına iki delik delin. Süper yapıştırıcı veya eşdeğer güçlü bir yapıştırıcı (Şekil 1b) kullanarak cam Petri kenarına plastik kapak sabitleyin. </li><li> Tutkal kubbeli iki kapaklı PCR tüpleri (menteşe kesilmiş) 1 cm arayla, popliteal deri flepleri demirlemenin amaç için alt çanağı merkezi kapaklar. </li></ol> 2. Fare Hazırlık <strong&gt; Not: Yeterli pratikle, bir 20-30 dakika içinde fare hazırlanması ve cerrahi basamakları gerçekleştirmek mümkün olmalıdır. <ol><li> (% 2-2,5 indüksiyonu için, cerrahi / görüntüleme için% 1,5-2) 01:01 O 2 izofluran karıştırılabilen fare uyuştur onaylı IACUC bir prosedür kullanılarak hava karışımı 1L/min bir akış hızında. Sonra fare anestezi, bir gaz maskesi bant ile burun üzerinde sabitleyin. Fare ayak ve / veya kuyruk tutam yanıt eksikliği ile tam bir anestezi olup olmadığını belirlemek. İzofluran hayvan tamamen 60-80 solunum / dk arasında sürekli olmayan, emek solunum hızı, sedasyon düzeyi sağlamak için uygun şekilde ayarlanabilir. </li><li> Farenin sağ arka bacak ve kasık bölgesine saç kaldırmak için bir elektrik düzeltici kullanın. </li><li> Uzak gevşek saç fırçalayın ve bir pamuklu çubukla hafifçe, traşlı alan üzerine, Nair losyon mütevazı bir kat uygulayın. Bir dakika sonra, ilk uygulama Nair çıkarın ve nemli bir maruz kalan deri temizkağıt havlu. Fare devam etmeden önce temiz ve kuru olduğundan emin olun. </li><li> Ekstansör tendon ortaya çıkarmak için, sağ diz makasla küçük bir 2 ila 3 mm insizyon olun. </li><li> Merkezinde, fare vücut ve bacak yerleştirilmiş edilecektir fare tutucunun boyunca Vetbond uygula Dikkatlice, aşağı doğru diz sağ popliteal fossa maruz tutucuya fare sabitleyin. Sağ diz tendonu, görüntüleme alanda istikrara kavuşturmak için, 2 flep sahipleri arasında Vetbond ile sabitleyin. </li><li> Stretch ve bant kol ve sol bacak üst platforma sahibinin. </li><li> Gaz maskesi yerine sabitlemek için bir büküm kravat kullanın. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında tutucu yerleştirin. LN, kesinlikle hala fare nefes alıp verme hareketi bağımsız kalmalıdır. Bu nedenle, ameliyat yaparken bacak istikrar optimize etmek için önlemler alınmalı. Büyük katkıda bulunacaktır, kuyruk (tipik olarak kafa yukarıda) pozisyonunu belirlemekSağ bacak ve bant aşağı kuyruk istikrar. </li></ol> 3. Cerrahi <ol><li> , Diseksiyon kapsamında iken, bir ısıtıcı veya bir ısıtma pedi kullanarak fare vücut ısısını korumak. Başarılı popliteal LN görüntüleme için, bu gibi ılık PBS maruz doku için sürekli olarak uygulayarak doku nem korumak için, ameliyat boyunca vücut ısısı sürdürmek kritik önem taşır. </li><li> Betadine ile cildin sterilize edin. Steril makas kullanırken, sağ orta buzağı deri yoluyla orta hat kesi yapmak ve sağ uyluk üst kısmına dik keserek devam edin. </li><li> Iki yatay cilt insizyonlar üst kısmında her iki tarafında cilt flepleri oluşturmak için, dikey insizyonu satırı edin. </li><li> Vetbond her iki cilt kapakları aşağı çekin ve tutkal. Vetbond uygulamadan önce cildin gergin Çekme bacak istikrarı daha da teşvik edecek, ancak (vesse yani değişiklikler cilt gerginlik kan akışını tıkayan olmadığından emin olunl renk veya çapı). LN maruz kalmadan önce bacak istikrarı sağlamak için cildin diğer alanlarda aşağı tutkal devam edin. Fare boyutuna fazladan deri tutkal aşağı ne kadar belirleyecektir. Tipik olarak, büyük fareler, daha fazla deri sahibine yapıştırılabilir gerektirir. </li><li> LN sağa ya popliteal fossa içinde yalan veya popliteal ven sol,, tutucuya fare yerleştirme bağlı olmalıdır. Mikro diseksiyon cımbız ve forcepsi, çevreleyen yağ doku ve kasları LN dikkatle ayırın. Kanama ve travma en aza indirmek için, ayrı dokulara cımbız mikro diseksiyon ile ayırımını yapabilmek tekniklerini kullanın. Afferent ve efferent kan damarları ve afferent lenfatik damarların bütünlüğünü tehlikeye atmadan dikkatlice popliteal LN maruz kalmaktadır. </li><li> Kare cam kapak, eklenen doku istikrar için, damar tıkanıklığı kaçınarak sadece zar zor LN dokunmadan nemli LN üzerinde konumlandırılmış olabilir. Cam kapak secur olabilir, fare her iki tarafında kil modelleyerek ed. </li><li> Çeşitli boyutlarda (örneğin TRITC-dekstran, minimum 70kDa) Floresan gemi boyalar görüntüleme sırasında LN yapısal bir ilişki ve bütünlüğünü vurgulamak yardımcı olmak için bu noktada intravenöz sokulabilir. </li></ol> 4. 2-Foton Görüntüleme Toplama ** <ol><li> LN yeterince maruz kalır ve istikrar sağlandıktan sonra, hemen 37 tutulur bir çevre mikroskop odasında programlanabilir bir sıcaklık geri besleme kontrollü bir ısıtma yastığı ile donatılmış mikroskop sahne ° C üzerine tüm fare tutucu grubunu transfer Yeterince steril sıcak (37 ° C) PBS veya HBSS daldırın LN. Hacim, boyut ve yerleştirme fare bağlı olarak değişecektir. Alternatif olarak, sıcak PBS veya HBSS bir peristaltik pompa takılan ince bir cam pipet ile disseke LN doğrudan uygulanabilir ve daldırma objektif nesnel sütun bantlanmış olabilir. Sıvının akış olmalıdır biristikrarlı bir su sütunu lens ve doku arasında korunabilir. </li><li> Korumak PBS veya HBSS sıcaklık 37 ° C bir geri bildirim prob ile bir ısıtma pedi kullanarak. , 36.5 - 37.5 ° C aralığında bir sıcaklıkta PBS onaylamak için ayrı ayrı A sıcaklığı prob fare tutucu içindeki konulmalıdır Bir rektal prob görüntüleme oturum boyunca da deneysel fare çekirdek vücut ısısını izlemek için de kullanılıyor olabilir. </li><li> Objektif altında kılavuzu LN yerleştirme yardımcı olmak için bir epi-floresan lamba kullanın. Istediğiniz hücresel etkileşimi (her xyz görüntü yığını arasında genellikle 10 saniye ile 1 dakika) için uygun zaman aralıkları kullanılarak floresan görüntü yığınlarını edinin. </li><li> Monitör hayvan görsel kontrol ile veya bir hayvan izleme sistemi ile sık sık mikroskop odacık içinde durumu. Fare ayak ve / veya tırnak tutam yanıt eksikliği ile tam bir anestezi olup olmadığını belirlemek ve b 60-80 arasında istikrarlı bir olmayan emek, solunum hızıreaths / dak. Seviyesi arasında izofluran, hayvansal tamamen uyutulmamışsa emin olmak için, uygun şekilde ayarlanır. Uygun izleme ve hidrasyon ile, hayvanların 4-6 saat yansıması, ya da muhtemelen daha uzun olabilir. </li><li> Görüntüleme deneyden sonra, IACUC onaylı ötanazi protokolünü kullanarak CO 2 odasında hayvan euthanize. Hayvan, ötanazi önce anestezi çıkmaya izin verilmemelidir. </li></ol> . ** Cerrahi Bu prosedür ayrıca, diğer şekillerde, diğer 2P-LSM den intravital görüntüleme için faydalı olabilir. 5. Temsilcisi Sonuçlar Çeşitli dolaşan bağışıklık hücreleri evlatlık transferi sonrasında farklı oranlarda LN alınırlar. CD4 + ve CD8 + lenfositlerin, bu hücreler 2 ila 4 saat sonra 6,17-18, popliteal LN gelen önemli sayıda iv transferinden sonra yüksek endotelyal venül (HEV) dakika ile LN gelmeye başlar. B cel içinls, önemli bir sayı 8 ila 24 saat sonra, 19 birikebilir. Aktif, DC&#39;ler ayak tabanına enjekte 3,11,16-17 drenaj popliteal LN 8 ila 16 saat içinde görünmeye başlar. Şekil 2a diğer önemli yerleri bile olmadan, B hücresi folikül gibi yapılarda 2P-EKK 19 altında görülebilen yuvarlak küresel hücre birikimi ile kolayca ayırt edilebilir olduğunu gösterir. Ubikuitin-GFP splenositlerin (Şekil 2, Ek Videolar 1 ve 2) gibi endojen bir flüoresan raportör kullanarak, bir uyarıcı fizyolojik olmayan koşullarda haftada bir gün için bu lenfosit göçler ve davranışları izleyebilirsiniz. Multi-kanal yüksek hassasiyetli dedektörler sayesinde, birden fazla cep telefonu ortakları 17,19 arasında yapısal bilgilerin yanı sıra etkileşim dinamikleri kapsayan bir multipleks görüntüleme veri elde etmek mümkündür. cerrahi tekniklerin düzgün bir şekilde yürütülen ve çevre koşulları dikkatle izlenmelidir, lymphocytes karakteristik göç hızı, başka 13-14,16 Şekil 2c, 2d ve gösterildiği gibi sergilemesi gerekir. Lenfositler de göç hızı LN uygulanan görüntüleme alt-bölgelere göre farklılık gösterebilir, kan damarları (gemi boyalarının giriş vurgulanır) kadar ek yerlerinden genel görüntü kalitesi (örneğin, uygun sıcaklık kontrolü belirlemenize yardımcı olacaktır , LN, vb minimal travma) 3,6,20. <img alt="Şekil 1." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig1.jpg" /> Şekil 1. Fare popliteal LN Görüntüleme için bir fare sahibinin İnşaat) fare sahibinin montaj Şemalar; b) Temsilcisi intravital fare hazırlanması; c) Tamamlanan fare tutucu grubunu; d) cerrahi maruz kaldıktan sonra popliteal LN görünümleri kapatın. <img alt="Şekil 2." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig2.jpg" /> Şekil 2. GFP + lenfositlerin Göç analizipopliteal LN. (a) 6 / C57BL alıcı fare, popliteal LN 2P-EKK görüntüleme dizisi alınan 3D anlık adoptively öncesi görüntüleme ile 1x10 7 GFP + lenfositlerin 1 gün transfer. Dash çizgi B hücreli köklerinin sınır ifade eder; (b) 1 saat boyunca sürekli görüntüleme lenfosit göç Tracks; genel lenfosit göç hızı c) Dağıtım. Ortalama hız = 10.04 ± 4.26 mm / dak (incelendi 15.125 parça toplam), d) B hücresi folikül hücreleri Diferansiyel hücresel göç hız dağılımı (açık çubuklar; ortalama toplam 1.525 parça incelendi; hız = 8.79 ± 3.90 mm / dak ) ve T hücre bölgesi (kapalı bar, ortalama hız = 13.77 ± 5.93 mikron / dk; toplam analiz 1.250 parçaları). Ölçek çubuğu = 50 mikron. Ek Video 1, Şekil 2 &#39;de anlatıldığı gibi bir fare popliteal LN Zaman aralıklı intravital 2P-LSM görüntüleme. Toplam 1x10 7 lenfositler izole edildi from bir ubikuitin-GFP + donör fare ve C57BL / 6 alıcının fare içinde bir görüntüleme 24 saat önce damardan aktarılmasına adoptively. Xy (750 mm x 750 mm) bir dizi her 20 saniyede tekrarlanan bir xyz görüntüleme yığını (750 mm x 750 mm x 65 mm), floresans görüntüler elde etmek için sabit z yığınlarının (5 mikron adım, 13 adım) üzerinden alındı toplam 60 dakika, hız analizi (Şekil 2c, 2d) için bir xyzt görüntüleme sırası ile sonuçlanır. Çalma hızı = 450x. Ölçek çubuğu = 50 mikron. Zaman damgası = dk: sn. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video1.avi" target="_blank">ek video izlemek için buraya tıklayın</a> . Ek B hücreli folikülü Kilavuz Video 1 görüntüleme dizisi görünümü Yakınlaştırırken - Video 2 T hücre bölgesine sınır. Çalma hızı = 450x. Ölçek çubuğu = 25 mikron. Zaman damgası = dk: sn <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video2.avi" target="_blank">C</a>ek video izlemek için buraya yalamak.

<ol><li>Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Cell+activation+by+dendritic+cells+in+the+lymph+node%3A+lessons+from+the+movies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">T-Cell activation by dendritic cells in the lymph node: lessons from the movies.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 675-684 (2008).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+friends+in+out-of-the-way+places%3A+how+cells+of+the+immune+system+get+together+and+how+they+conduct+their+business+as+revealed+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Making friends in out-of-the-way places: how cells of the immune system get together and how they conduct their business as revealed by intravital imaging.</a> Immunol. Rev. 221, 163-181 (2008).</li>
<li>Huang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+landscape+of+in+vivo+immunity%3A+insights+from+dynamic+in+situ+imaging+of+secondary+lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Illuminating the landscape of in vivo immunity: insights from dynamic in situ imaging of secondary lymphoid tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-recognition+promotes+the+foreign+antigen+sensitivity+of+naive+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-recognition promotes the foreign antigen sensitivity of naive T lymphocytes.</a> Nature. 420, 429-434 (2002).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+self-recognition+in+T+cell+responses+to+foreign+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">On the role of self-recognition in T cell responses to foreign antigen.</a> Immunol. Rev. 191, 97-106 (2003).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li>
<li>Celli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+dynamics+of+T+cell-dendritic+cell+interactions+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Decoding the dynamics of T cell-dendritic cell interactions in vivo.</a> Immunol. Rev. 221, 182-187 (2008).</li>
<li>Mempel, T. R., Junt, T., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rulers+over+randomness%3A+stroma+cells+guide+lymphocyte+migration+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Rulers over randomness: stroma cells guide lymphocyte migration in lymph nodes.</a> Immunity. 25, 867-869 (2006).</li>
<li>Worbs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR7+ligands+stimulate+the+intranodal+motility+of+T+lymphocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">CCR7 ligands stimulate the intranodal motility of T lymphocytes in vivo.</a> J. Exp. Med. 204 (3), 489-495 (2007).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((byways+and+breadcrumbs%3A+directing+lymphocyte+traffic+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">byways and breadcrumbs: directing lymphocyte traffic in the lymph node.</a> Trends Immunol. 28, 346-352 (2007).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li>
<li>Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomous+T+cell+trafficking+examined+in+vivo+with+intravital+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).</li>
<li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+visualizing+immunity+in+context%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: visualizing immunity in context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li>
<li>von Andrian, U. H., Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+and+cellular+traffic+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Homing and cellular traffic in lymph nodes.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 867-878 (2003).</li>
<li>Bousso, P., Robey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+CD8%2B+T+cell+priming+by+dendritic+cells+in+intact+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of CD8+ T cell priming by dendritic cells in intact lymph nodes.</a> Nat. Immunol. 4, 579-585 (2003).</li>
<li>Castellino, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8%2B+T+cells+to+sites+of+CD4%2B+T+cell-dendritic+cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li>
<li>Halin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 581-603 (2005).</li>
<li>Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrafollicular+activation+of+lymph+node+B+cells+by+antigen-bearing+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Extrafollicular activation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.</a> Science. 312, 1672-1676 (2006).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extended+vision+for+dynamic+high-resolution+intravital+immune+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">An extended vision for dynamic high-resolution intravital immune imaging.</a> Semin. Immunol. 17, 431-441 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar, ifşa etmek için bir şey gerekmez.

In vivo dinamik hücresel davranış çalışmada artan bir ilgi özellikle situ görüntüleme teknikleri, 2P-EKK, yüksek çözünürlüklü son gelişmeler eşlik etmiştir. Canlı bir farenin popliteal LN 4D görüntüleme tekniği, bağışıklık hücrelerinin undisrupted doku mikro-çevre içinde dinamik davranışı, bu tür analizlere olanak sağlar. Tüm görünür spektrum yayılan birden fazla dedektörleri ile 2P-EKK kullanımı, aynı anda birden fazla hücre popülasyonlarının görüntüleme veri toplama izin verir. Bu şimdi kullanımını, organik floresan hücre boyalarının kullanılarak etiketli farklı hücre popülasyonlarının adoptif transferi ile birleştirilmiş hücre vivo-belirli bir flüoresan raportör fareler (örn. Ubiquitin-EGFP, RFP, ya da-eCFP) kullanımı ile elde edilebilir (örn. KAKE , SNARF-1 ve, LN içinde hücresel mekanizmaları ve işlevini incelemek için Hücre Tracker Turuncu). Farklı izlenir c arasındaki etkileşimler doğrudan gözlem ek olarakell nüfus, multipleks görüntüleme veri kümesi hücre davranış ve işlevi daha aydınlatmak için piyasada bulunan görüntü işleme yazılım programlarını (örneğin Imaris, BitPlane Inc) ile daha fazla analiz geçirebilmektedir. Olanakları geniş bir dizi, bu in vivo ve siliko teknikleri kullanarak hücresel etkileşim mekanizmaları incelemek için var. Burada açıklanan deneysel yaklaşımın ana sınırlama cerrahi yaklaşım içinde doğasında olan teknik karmaşıklığı. Bu teknikle ilgili anatomi ve kesin bir teknik prosedürleri ve bu protokol gereği becerileri aşina olmak için sıkı bir eğitim gerektirir. Daha da karmaşık hale faktörler LN keşif sırasında doku hasarı en aza indirmek için zorluk, görüntüleme sırasında doku kararlılığını optimize eder ve önce LN termal ve lazer hasarı önlemede ve görüntüleme deney sırasında içerir. Bu faktörlerin biri Tedirgeme optimal daha az lenf neden olacaktırocyte motilite ve bu nedenle görüntüleme verileri analizler sonucunda uygun şekilde yorumlanması ile engel olacaktır.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Reaktif</strong</td&gt;<td<strong&gt; Şirket</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalog Numarası</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İsofluranın, USP</td&gt;<td&gt; Baxter Healthcare Corporation</td&gt;<td&gt; NDC 10019-773-60</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vetbond</td&gt;<td&gt; 3M</td&gt;<td&gt; 1469SB</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Nair - epilasyon losyon</td&gt;<td&gt; Nair</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;, AMS, 1X</td&gt;<td&gt; Cellgro</td&gt;<td&gt; 21-040-CV</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isıtma pedi</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isıtma Pedi Denetleyici</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Hava ve O<sub&gt; 2</sub</td&gt;<td&gt; Airgas</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Sıcaklık probu</td&gt;<td&gt; Harvard Apparatus</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Cımbız Dumont # 5</td&gt;<td&gt; Dünya Precision Instruments, Inc.</td&gt;<td&gt; 14101</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td7 cm kavisli&gt; Forseps, Graefe İris,</td&gt;<td&gt; Dünya Precision Instruments, Inc.</td&gt;<td&gt; 14141</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Makas</td&gt;<td&gt; Roboz Cerrahi Instrument Co, Inc.</td&gt;<td&gt; RS-5880</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td100x20 mm cam hücre kültürü çanak&gt; Kapak</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 70165-102</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td100x20 mm polistren hücre kültürü çanak&gt; Kapak</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 430.167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadine Çözüm (% 10 povidin İyot Topikal çözelti)</td&gt;<td&gt; Purdue Ürünler, LP</td&gt;<td&gt; NDC 67618-150-08</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

intravital imaging of the mouse popliteal lymph node

Lenf nodları (LN), stratejik adaptif immün yanıtı asal periferik dokularda yabancı antijenleri yakalama ve sunum için izin vermek için vücutta bulunan ikincil lenfoid organlara. Doğal ve adaptif immün yanıtları arasındaki yan yana, LN, bağışıklık hücre etkileşimleri 1,2 çalışmak için ideal bir yerdir. Lenfositler (T hücreleri, B hücreleri ve NK hücreleri), dendritik hücreler (DC), makrofaj, kemik iliği kaynaklı LN hücresel elemanlar toplu oluşmaktadır. Bu hücreler stratejik, öz antijenleri ve potansiyel yabancı antijenlere 3-5 verimli tarama izin LN konumlandırılmıştır. Lenfositler başarıyla soydaş antijen karşı karşıya tarafından son yıllarda yoğun bir araştırma süreci bir konudur ve antijen reseptörleri, adezyon molekülleri, kemokinler ve böyle fibro-retiküler ağ 2,6-12 gibi stromal yapılar da dahil olmak üzere moleküler kişileri bir entegrasyon içerir . </p&gt; Önce sadece morfoloji, konumu ve mimarisi ile ilgili cevaplar sunuyor in vivo görüntüleme, statik görüntüleme dayanıyordu araştırmacılar, yüksek çözünürlükte gerçek zamanlı floresan gelişimi. Bu soruların immün hücre davranışı anlayışımızın temel olmakla birlikte, bu teknik ile içsel sınırlamaları deşifre lenfosit trafiği ve dinamik hücre davranışını etkileyen çevresel ipuçlarını analiz izin vermez. Son zamanlarda, intravital gelişimi iki-foton lazer tarama mikroskobu (2P-EKK) araştırmacılar, 12-16 yerinde canlı LN içinde dinamik hareketler ve bireysel hücrelerin etkileşimlerini görüntülemek için izin verdi. Özellikle, biz ve diğerleri çeşitli doku alt yapıları 11,17-18 ile kompakt, doğada büyük bir doku alana multipleks veri toplama avantajı sunuyor popliteal LN, içinde görüntü hücresel davranış ve etkileşimler bu tekniği uyguladık . Bu iönemlidir bu tekniğin kan bozulması, lenf akışı ve sistemin eninde sonunda hücresel dinamikleri gerektiren eksplante doku görüntüleme teknikleri üzerine ilave avantajlar sunuyor unutmayın. Ayrıca, eksplante dokuları doku, eksplant sonra görüntüleme için geçerli olmaya devam eden bir zaman çok sınırlı bir pencere var. Hayvan çevre koşullarına uygun hidrasyon ve izleme sayesinde, görüntüleme süresi önemli ölçüde bu intravital tekniği ile uzatılabilir. Burada, gerçekleştirme intravital görüntüleme amacıyla, fare popliteal LN hazırlamak için ayrıntılı bir yöntem sunulmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node at JoVE.com

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

2-foton mikroskopi son gelişmeler, gerçek zamanlı sağladı<em&gt; &#39;De</em&gt; Hayvan modellerinde canlı dokuların yerinde görüntüleme, böylece hem fizyolojik ve patolojik koşullar hücresel davranışı araştırmak için kabiliyetinin artırılması. Burada, fare popliteal lenf nodu intravital görüntüleme gerçekleştirmek için gerekli hazırlıkları özetlemektedir.

Intravital Görüntüleme Fare Popliteal Lenf Nodu

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

intravital-imaging-of-the-mouse-popliteal-lymph-node

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

28.3K Görüntüleme.  Case Western Reserve University. 2-foton mikroskopi son gelişmeler, gerçek zamanlı sağladı 'De Hayvan modellerinde canlı dokuların yerinde görüntüleme, böylece hem fizyolojik ve patolojik koşullar hücresel davranışı araştırmak için kabiliyetinin artırılması. Burada, fare popliteal lenf nodu intravital görüntüleme gerçekleştirmek için gerekli hazırlıkları özetlemektedir.

Video: Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the initiation of an immune response 1. Here, we present methods for adoptive transfer of labeled T cells, isolation of lymph nodes, and imaging motility of CD4+ T cells in the explanted lymph node as first described in 2002 2. Two-photon imaging of immune cells requires that the cells are fluorescently labeled, either by staining with a cell tracker dye or by expressing a fluorescent protein. We demonstrate the adoptive transfer procedure of injecting cells derived from donor mice into the tail vein of a recipient animal, where they home to lymphoid organs within approximately 15-30 min. We illustrate the isolation of a lymph node and describe methods to ensure proper mounting of the excised lymph node. Other considerations such as proper oxygenation of perfused media, temperature, and laser power are discussed. Finally, we present 3D video images of naive CD4+ T cells exhibiting steady state motility at 37&deg;C.

Two-photon imaging has uncovered lymphocyte motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and durring an immune response 1. Here, we demonstrate adoptive transfer of T cells, isolation of lymph nodes, and imaging motility of CD4+ T cells in the explanted lymph node.

Farelerde Periferik lenf nodu diseksiyonu ve 2-Foton Görüntüleme

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

Biyoloji

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

Bir Mouse Lenfatik damarları Non-invaziv Optik Görüntüleme

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick tissue samples and organs in health and disease. By controlling the scanning pattern in multi-photon microscopy and applying appropriate numerical algorithms, we developed a striped-illumination approach, which enabled us to achieve 3-fold better axial resolution and improved signal-to-noise ratio, i.e. contrast, in more than 100 &#181;m tissue depth within highly scattering tissue of lymphoid organs as compared to standard multi-photon microscopy. The acquisition speed as well as photobleaching and photodamage effects were similar to standard photo-multiplier-based technique, whereas the imaging depth was slightly lower due to the use of field detectors. By using the striped-illumination approach, we are able to observe the dynamics of immune complex deposits on secondary follicular dendritic cells &#8211; on the level of a few protein molecules in germinal centers.

High-resolution intravital imaging with enhanced contrast up to 120 &#181;m depth in lymph nodes of adult mice is achieved by spatially modulating the excitation pattern of a multi-focal two-photon microscope. In 100 &#181;m depth we measured resolutions of 487 nm (lateral) and 551 nm (axial), thus circumventing scattering and diffraction limits.

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in vivo is crucial for understanding the molecular basis of leukocyte transendothelial migration and interaction with vascular endothelium. One powerful approach involves intravital microscopy on transgenic mice expressing fluorescent proteins in cells of interest.
Here we present a protocol for imaging monocytes and neutrophils in the CX3CR1gfp/wt mouse i.v. injected with orange dye-labeled neutrophils with an inverted confocal microscope. Time-lapse movies gathered from 30 min&#160;to several hours of imaging allow the analysis of leukocyte behavior in mesenteric veins under both steady state and inflammatory conditions. We also describe the steps to locally induce blood vessel inflammation with TLR2/TLR1 agonist Pam3SK4 and monitor the subsequent recruitment of neutrophils and monocytes.
The presented technique can also be used to monitor other populations of leukocytes and investigate molecules implicated in leukocyte recruitment or trafficking using other stimuli or transgenic mice.

We detail a protocol to monitor the behavior of neutrophils and monocytes in mesenteric veins under steady state and inflammatory conditions using intravital confocal microscopy on anaesthetized mice.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Intravital Imaging of Intraepithelial Lymphocytes in Murine Small Intestine

Intraepithelial lymphocytes expressing &#947;&#948; T cell receptor (&#947;&#948; IEL) play a key role in immune surveillance of the intestinal epithelium. Due in part to the lack of a definitive ligand for the &#947;&#948; T cell receptor, our understanding of the regulation of &#947;&#948; IEL activation and their function in vivo remains limited. This necessitates the development of alternative strategies to interrogate signaling pathways involved in regulating &#947;&#948; IEL function and the responsiveness of these cells to the local microenvironment. Although &#947;&#948; IELs are widely understood to limit pathogen translocation, the use of intravital imaging has been critical to understanding the spatiotemporal dynamics of IEL/epithelial interactions at steady-state and in response to invasive pathogens. Herein, we present a protocol for visualizing IEL migratory behavior in the small intestinal mucosa of a GFP &#947;&#948; T cell reporter mouse using inverted spinning disk confocal laser microscopy. Although the maximum imaging depth of this approach is limited relative to the use of two-photon laser-scanning microscopy, spinning disk confocal laser microscopy provides the advantage of high speed image acquisition with reduced photobleaching and photodamage. Using 4D image analysis software, T cell surveillance behavior and their interactions with neighboring cells can be analyzed following experimental manipulation to provide additional insight into IEL activation and function within the intestinal mucosa.

We describe a method to visualize GFP-labeled &#947;&#948; IELs using intravital imaging of murine small intestine by inverted spinning disk confocal microscopy. This technique enables the tracking of live cells within the mucosa for up to 4 h and can be used to investigate a variety of intestinal immune-epithelial interactions. &#160;

Murine Ince bağırsak INTRAEPİTELYAL lenfosit intravital görüntüleme

Intraepithelial lymphocytes expressing &#947;&#948; T cell receptor (&#947;&#948; IEL) play a key role in immune surveillance of the intestinal ...

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to draining lymph nodes (LNs). Interruption of lymph flow is an important method when studying the function of lymphatic vessels. The afferent lymphatic vessels from the murine footpad to the popliteal lymph nodes (pLNs) are well-defined as the only routes for lymph drainage into the pLNs. Suturing these afferent lymphatic vessels can selectively prevent lymph flow to the pLNs. This method allows for interference in lymph flow with minimal damage to the lymphatic endothelial cells in the draining pLN, the afferent lymphatic vessels, as well as other lymphatic vessels around the area. This method has been used to study how lymph impacts high endothelial venules (HEV) and chemokine expression in the LN, and how lymph flows through the adipose tissue surrounding the LN in the absence of functional lymphatic vessels. With the growing recognition of the importance of lymphatic function, this method will have broader applications to further unravel the function of lymphatic vessels in regulating the LN microenvironment and immune responses.

A protocol to block lymph flow by surgical suturing of afferent lymphatic vessels is presented.

Farelerde Afferent Lenfatik Damarlar Dikerek Lenf Akışını Engelleme

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...

Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for analyzing collateral arteries and leukocytes in arteriogenesis is ex vivo (immuno-) histological methodology. However, this technique does not allow the measurement of dynamic processes such as blood flow, shear stress, cell-cell interactions, and particle velocity. This paper presents a protocol to monitor in vivo processes in growing collateral arteries during arteriogenesis utilizing intravital imaging. The method described here is a reliable tool for dynamics measurement and offers a high-contrast analysis with minimal photo-cytotoxicity, provided by multiphoton excitation microscopy. Prior to analyzing growing collateral arteries, arteriogenesis was induced in the adductor muscle of mice by unilateral ligation of the femoral artery.
After the ligation, the preexisting collateral arteries started to grow due to increased shear stress. Twenty-four hours after surgery, the skin and subcutaneous fat above the collateral arteries were removed, constructing a pocket for further analyses. To visualize blood flow and immune cells during in vivo imaging, CD41-fluorescein isothiocyanate (FITC) (platelets) and CD45-phycoerythrin (PE) (leukocytes) antibodies were injected intravenously (i.v.) via a catheter placed in the tail vein of a mouse. This article introduces intravital multiphoton imaging as an alternative or in vivo complementation to the commonly used static ex vivo (immuno-) histological analyses to study processes relevant for arteriogenesis. In summary, this paper describes a novel and dynamic in vivo method to investigate immune cell trafficking, blood flow, and shear stress in a hindlimb model of arteriogenesis, which enhances evaluation possibilities notably.

The recruitment of leukocytes and platelets constitutes an essential component necessary for the effective growth of collateral arteries during arteriogenesis. Multiphoton microscopy is an efficient tool for tracking cell dynamics with high spatio-temporal resolution in vivo and less photo-toxicity to study leukocyte recruitment and extravasation during arteriogenesis.

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for ...

Tıp

Popliteal Vascular Lymph Node Resection in the Rabbit Hindlimb for Secondary Lymphedema Induction

Lymphedema is a common condition often associated with cancer and its treatment, which leads to damage to the lymphatic system, and current treatments are mostly palliative rather than curative. Its high incidence among oncologic patients indicates the need to study both normal lymphatic function and pathologic dysfunction. To reproduce chronic lymphedema, it is necessary to choose a suitable experimental animal. Attempts to establish animal models are limited by the regenerative capacity of the lymphatic system. Among the potential candidates, the rabbit hindlimb is easy to handle and extrapolate to the human clinical scenario, making it advantageous. In addition, the size of this species allows for better selection of lymphatic vessels for vascularized lymph node resection.
In this study, we present a procedure of vascular lymph node resection in the rabbit hindlimb for inducing secondary lymphedema. Anesthetized animals were subjected to circumferential measurement, patent blue V infiltration, and indocyanine green lymphography (ICG-L) using real-time near-infrared fluorescence, a technique that allows the identification of single popliteal nodes and lymphatic channels. Access to the identified structures is achieved by excising the popliteal node and ligating the medial and lateral afferent lymphatics. Special care must be taken to ensure that any lymphatic vessel that joins the femoral lymphatic system within the thigh without entering the popliteal node can be identified and ligated. 
Postoperative evaluation was performed at 3, 6, and 12 months after induction using circumferential measurements of the hindlimb and ICG-L. As demonstrated during follow-up, the animals developed dermal backflow that was maintained until the 12th month, making this experimental animal useful for novel long-term evaluations in the management of lymphedema. In conclusion, the approach described here is feasible and reproducible. Additionally, during the time window presented, it can be representative of human lymphedema, thus providing a useful research tool.

<meta charset="utf8"></head><body>Sekonder Lenfödem İndüksiyonu için Tavşan Arka Bacakta Popliteal Vasküler Lenf Nodu Rezeksiyonu

Here, the surgical induction of stable acquired lymphedema in the rabbit hindlimb is described. This experimental animal can be used to further investigate the effect of lymphedema treatment by microsurgical techniques.

Sekonder Lenfödem İndüksiyonu için Tavşan Arka Bacakta Popliteal Vasküler Lenf Nodu Rezeksiyonu

Lymphedema is a common condition often associated with cancer and its treatment, which leads to damage to the lymphatic system, and current treatments are ...

Intravital Görüntüleme Fare Popliteal Lenf Nodu

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Farelerde Periferik lenf nodu diseksiyonu ve 2-Foton Görüntüleme

Bir Mouse Lenfatik damarları Non-invaziv Optik Görüntüleme

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Murine Ince bağırsak INTRAEPİTELYAL lenfosit intravital görüntüleme

Farelerde Afferent Lenfatik Damarlar Dikerek Lenf Akışını Engelleme

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Sekonder Lenfödem İndüksiyonu için Tavşan Arka Bacakta Popliteal Vasküler Lenf Nodu Rezeksiyonu

Sekonder Lenfödem İndüksiyonu için Tavşan Arka Bacakta Popliteal Vasküler Lenf Nodu Rezeksiyonu