The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

Hayvanları da içeren tüm prosedürler Bilimsel Amaçlarla Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Uygulama Avustralya Kanunu tavsiyeleri doğrultusunda yürütülmüştür. Bu çalışma için protokol Kraliyet North Shore Hastanesi Hayvan Bakım ve Etik Komitesi tarafından onaylandı. Kadın Fischer 344 fareleri (F344, 150-200 g), Kearns Tesisinde muhafaza edilmiştir, standart koşullar (12 saat ışık / karanlık döngüsü ve yiyecek ve suya serbest erişim) altında Kolling Enstitüsü. Not: Tüm deneysel işlemleri için bir akış şemasıdır, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1. <ol><li> (Aynı zamanda IL-45 olarak da bilinen krosidolit asbest periton sokulmasıyla elde edilen) Kültür sıçan mezotelyoma II-45 hücre hattı RPMI 1640 (RPMI) ortam (37 °,% 10 fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş ve standart koşullarda büyümeye % 5 CO2) C nemlendirilmiş bir kuluçka cihazı. Mainta75 cm 2 balonuna pasajlayarak ve iki alt kültürleme yaklaşık 01:50 Haftada tarafından. </li><li> 37 ° C&#39;de hücre kültürü ve sıcak alikotları için reaktifler hazırlayın. Gerekli reaktifler,% 10 FBS, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ve% 0.5 tripsin-EDTA ile, serum içermeyen RPMI ortamı (SFM), RPMI bulunmaktadır. </li><li> Yaklaşık 70-80% konfluansa implantasyon için kültür hücreleri. Bu da doğrusal büyüme aşamasında olmasını sağlar. </li><li> Medya atarak steril PBS, 5 ml ile bir kez yıkanması ve daha sonra 3 ml% 0.5 tripsin EDTA ekleyerek Hasat hücreleri. </li><li> Tüm hücreler, yapışmayan olana kadar yaklaşık 5 dakika boyunca inkübatör şişeler dönün. </li><li> Hücreler yapışmayan olduğunda, tripsin inaktive% 10 FBS ile RPMI 3 ilave edin. Toplama ve santrifüj hücreleri 3 dakika boyunca 300 xg&#39;de. </li><li> 3 dakika boyunca 300 x g hızında tekrar santrifüj SOY ve 10 ml hücre pelletini yıkayın. </li><li> 10 SOY ml ve santrifüj yukarıdaki gibi tekrar yıkayın hücre topağı. </li><li> SFM 10 ml hücrelerin tekrar ve bir hemasitometre ve benzeri cihazlar kullanılarak bir hücre sayımı gerçekleştirin. </li><li> 100 ul implante edilecek hücrelerin miktarını ihtiva ettiği şekilde hücreleri ile seyreltilir. Not: Tümör büyümesi 100 100 ul hücre fakat standart bir doz 100 ul 500,000 hücreleri gibi düşük bir dozda gösterilmiştir. </li><li> Sıçanların sayısı (yani, 100 ul / fare) implante edilebilir için ortam yeterli hücrelerini hazırlamak artı astarlama ve iğne ölü hacminden kayıplarını telafi etmek için, en az 0,5 ml ilave. </li><li> Hazırlama (hücreler olmadan) yeterli SFM kontrol farelerinde (örneğin, 100 ul / fare) içine implant edilmek üzere, ayrıca, en az 0,5 ml ilave. Hücreleri ve SFM artık implantasyon için hazırız: Not. Onlar 37 o C&#39;de tutuldu ve canlılığını korumak için hasat 2 saat içinde implante edilmelidir. </li></ol> Hücreler 2. in vivo İmplantasyon<ol><li> Indüksiyon odasına F344 sıçan (&gt; yaşı 13 hafta) yerleştirin ve% 1,4 izofluran inhalasyonu (ya da tesiste kullanılan yöntem) ile uyutmak. Sıçan (akan% 1.4 izofluran ile) burun konisi için odadan uykuda hareket onu olduğu göründüğünde, (ventral görünüm) yukarı bakacak şekilde göğüs ile sırtında yerleştirin. Bu iç organları uzakta göğüs boşluğundan yerleşmek için izin verir. Sıçan sağlamak için kurumsal protokollere göre refleksleri kontrol tamamen uyuşturulduktan. </li><li> Kürk çıkarmak için sağ regio costalis (göğüs) alan tıraş. </li><li> % 80 v / v etanol ile traşlı alanı temizleyin. </li><li> Enjeksiyon bölgesini belirleyin: Sağ tarafta, 2 bezi kranial başlayan bulabilirsiniz. Enjeksiyon sitesi göğüs kafesinin kuyruk ucundan 3. ve 4. kaburga arasında, bu 0.5 cm proksimalinde olduğunu. (Şekil 2A). </li><li> Yavaşça tekrar süspansiyon II-45 hücreleri karıştırın. Yavaşça 1 ml hücre süspansiyonu (veya kontrol sıçanlar için SFM) çizmek ve# 160; ekli bir iğne olmadan şırınga. Bir iğne hücrelerin çizim up bağlıysa hücreler iğne, enjeksiyon hattı boyunca büyümek için potansiyeli vardır. Bir 23G x 1 ¼ iğne takın. Başbakan makaralı ve herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarın. </li><li> Şırınga ve iğne astarlanmış sonra, iğne mili üzerinde 20 mm uzunluğunda ve 5 mm çapında bir boşluk yerleştirin. Bu enjeksiyon sırasında plevra boşluğuna çok derin nüfuz iğne önlemek için kullanılır. Maruz kalan iğne Yaklaşık olarak 5 mm-12 mm bir organların zarar vermeden kaburga nüfuz için yeterlidir. </li><li> Yavaşça, kaburgaların arasındaki iğneyi bir kan damarı (kan şırınga içinde görünmelidir) daha sonra 100 ul hücreleri veya SFM enjekte delinmiş olmamıştır sağlamak için şırınga geri çekin. (Şekil 2B). </li><li> İğneyi çıkarın ve yavaşça göğüs boşluğunda hücreleri yaymak için yanlara doğru sıçan yuvarlayın. </li><li> Bir kafese sıçan yerleştirin ve kurtarma için kontrol edin. The sıçan 1 dakika içinde uyanık ve hareket başlıyor olmalıdır. </li><li> Yeni bir iğne kullanarak her sıçan için tekrarlayın. Aynı iğne tekrar kullanımı iğnenin enjeksiyon hattı boyunca hücre büyümesinin neden olur. </li><li> Günlük hayvanların refahını izleyin. </li><li> Kurumsal hayvan etik komitesi tarafından yönetilir olarak etik tanımlanan uç noktaları hayvanların Euthanize. Bu deneylerde sıçanlar için etik son nokta 10&#39;dan daha fazla veya% da zor nefes alma ve ağırlık kaybı vardı. </li></ol> 3. Kuyruk Ven Kan Toplama <ol><li> Kan sonrası hücre implantasyonu hemen tahsil edilecek olursa, anestezi sıçan tutun. Başka bir zaman noktasında kan örnekleme ise,% 1.4 izofluran inhalasyonu ile sıçan uyutmak. Sıçan sağlamak için kurumsal protokollere göre refleksleri kontrol tamamen anestezi edilir. </li><li> Onun yüzüne sıçan yerleştirin ve bir yanal kuyruk damarı bulun. </li><li> % 80 etanol ile kuyruk sterilize ve 0.5 ml EDTA c etiketollection tüpü. </li><li> Kan toplamak için, her zaman (boyunca yol yaklaşık üçte biri) kuyruk kaudal ucunda başlar. Bu ilk girişim başarısız olması halinde kuyruk kafa ucuna daha yakın girişimleri verir. Bu bir kan pıhtısı neden olabilir kaudal resample asla. </li><li> Yanal ven bir 23G x 1 ¼ iğne paralel yerleştirin ve yaklaşık 10 mm (Şekil 3A) nüfuz böylece sığ bir açıyla damara doğru kaydırın. </li><li> Not: Damar başarıyla delinirse olmuşsa, kan iğne (Şekil 3B) bağlanma sonunda görünür olacaktır. </li><li> Bir damla kan iğne ponksiyon yerinde kuyruk oluşacaktır. Etiketli 0.5 ml (veya daha küçük) EDTA toplama tüpüne bir pipet ve transfer kullanarak bu kan toplayın. Immün hücre deneyi 25 ul için yeterlidir. Kanama durana kadar siteyi delinme basıncı ile gazlı bez uygulayın. </li><li> Pr kan ve EDTA karıştırmak için kan tüpü FlickOlay pıhtılaşması. Kan toplama ve pıhtılaşmayı önlemek için mümkün olduğu kadar kısa EDTA ile karıştırılarak arasındaki süre devam edin. </li><li> Analize kadar oda sıcaklığında rafa birden fareler mağaza EDTA kan örneklerinde kan toplarken. Koleksiyonun 2 saat içinde Süreç kan. </li></ol> Boncuk merkezli Yöntemiyle Bağışıklık Hücre Profil Oluşturma 4. Numune Hazırlama Not: Bu tek bir platform yöntemi, her numune için boncuk bilinen bir dizi var piyasada mevcut mutlak sayım tüpleri kullanılarak dayanır. Bu tüpler boncuk serbest numune hazırlama sırasında çözülür liyofilize pelet, içerirler. Boncuklar flüoresan olarak etiketlenir ve boncuk nüfus yolluk mutlak sayımlar hesaplanabilir. <ol><li> EDTA tam kan örneği birkaç dakika yavaş döner mikser üzerine yerleştirerek iyice karıştırılır olduğundan emin olun. Her numune için tek mutlak sayma tüp etiketleyin. Boncuklar içeren bir pelet t altında görünür olmalıdırtüpün dibinde o metal boncuk tutucu. </li><li> Etiketli mutlak sayım tüpüne EDTA tam kan 25 ul aktarın. Boncuk pelet kanın ilave edilmesi üzerine eriyecektir. </li><li> Her bir tüpe, anti-sıçan T / B / Doğal Katil (NK) hücre kokteyli 20 ul anti-sıçan CD8a PE 10 ul anti-fare CD4 (alan 1) FITC 10 ul ve anti-sıçan 10 ul CD45 PE / Cy7 (Şekil 4A). Flüoroforlar Tablo 1 &#39;de tanımlandığı gibidir. </li><li> Antikorlar ve hücreler, tüpün alt ve tüpün yanına yapışmış olmayan sağlamak için boru kısa bir süre (300 xg) santrifüjleyin. Girdap karıştırın ve oda sıcaklığında 15 dakika süreyle inkübe. </li><li> Kırmızı kan hücreleri 10 mM Tris, 400 ul lize etmek için, 0.15 M amonyum klorür tamponu (pH 7.5) ve vorteks karıştırın. Numune saydam ve bulanık değil (Şekil 4B ve C) göründüğünde lizis tamamlandı. Numune tamamen artmasına sebep olacağı parçalamak için başarısızlıkd arka plan ve flow sitometri ile analiz ederken yanlışlıkla sayıları yüksek. </li></ol> Numunelerin 5. Akış Sitometrik İşleme Not: akış sitometresi 4 renk gerçekleştirin. <ol><li> Şekil 5 de gösterildiği gibi, tedarik etme kipi ve 8 parsel ile yeni bir şablon yazılım açın. </li><li> Tablo 1&#39;de listelenen ve kapı R1 kurmak olanlara cihaz ayarlarını yapın (FITC [FL-1] APC [FL-4] karşı), Şekil 5ai) floresan boncuk saymak için. Diğer kapılar bu satın alma aşamasında önemli değildir ama analiz için gerekli olacaktır. Bu protokolde kullanılan mutlak sayım boncuk floresan boyalar içeren ve mavi kanalda zayıf olmasına rağmen herhangi bir kanalda tespit edilebilir. </li><li> Hazırlanmış bir kontrol kan örneği, vorteks kullanarak ve sonra Sitometre üzerine yüklemek ve veri toplama kapıları ayarlanabilir, böylece kurulum modunda düşük hızda (12 ul / dak) çalışacak. </li><li> Edinimi ayarlayınR1 boncuk kapısı 10.000 olayları toplamak. </li><li> Veri kaydetmek ve satın alma menüsünden dosya numarasını ve etiket örnek dosya ayarlamak için bir klasör oluşturun. </li><li> Numune sitometresinin üzerine analiz edilecek yerleştirin ve orta (35 ul / dk) akış hızını ayarlamak. Aynı akış hızında her bir örnek çalıştırın. Akış hızı (12 ul / dakika) düşük ya da (60 ul / dakika) yüksekten değiştirilebilir gerekebilir, ancak orta genellikle uygundur. Bu hızla her numune için 10,000 boncuk olayları elde etmek için yaklaşık 90 ila 120 saniye sürüyor. </li><li> Numune emin olaylar R1 boncuk kapısında görünen emin olmak için dağılım araziler izlemek yüklendikten sonra. Başlangıçta saçılım araziler sürüklenme neden örnek baskısı bazı istikrarsızlık olabilir. Bu stabilize etmek için bekleyin. </li><li> Stabilize sonra edinilen tıklayın ve örnek çalışmasına izin. Sitometresinin R1 10.000 boncuk olayları satın bittikten sonra sitometresinin elde durdurmak ve tüm verileri kaydetmek olacaktır. </li><li> Numuneyi çıkarın ve tu akış atınolacak. Sitometresinin şimdi bir sonraki numune için hazırdır. Tüm örnekleri çalıştırın ve daha sonra analiz moduna geçin. </li></ol> 6. Bağışıklık Hücre Analizi Not: yolluk stratejileri ve Boole cebri her hücre popülasyonu tanımlamak için kullanılır. Boole cebri, tek bir tanımı birden operasyonlar için izin veren bir mantık tabanlı analiz yöntemidir. (Örneğin, BD CELLQuest) Akış Sitometre analiz yazılımı Boole cebri kullanımı için izin verir. Denklemler daha özel olarak her bir hücre popülasyonu tespit hücre tanımlanmasında yardımcı önemli bir negatif reaktiflik için aktif hesap için kullanılır. &#39;Bölgeler&#39; bir &#39;kapıyı&#39; tanımlamak için kullanılır. (- Tablo 2 &#39;de tanımlandığı +, *) kapıları cebirsel operatörler tarafından bağlanmış bir çok bölgesine oluşur, oysa bölgeler 2 boyutlu bir boşluk tanımlar. <ol><li> Analiz moduna yazılımı geçin. Bir analiz şablonu maç için oluşturulan edilmelidir <strong&gt; gösterilen araziler ve kapıları ile Şekil 5. </li><li> Ayrı ayrı her bir dosyayı (örn, her numune) analiz edin. Tablo 2&#39;de tarif edildiği gibi ayarlama kapıları R1 R9 üzerine ve sonra, (aynı zamanda, Şekil 5&#39;de gösterildiği gibi), her hücre türü için algoritmaları ayarlayın. </li><li> Kapıları ve algoritmalar (Tablo 2 ve Şekil 5) tarafından tanımlanan bireysel hücre popülasyonlarının hesaplamak için hücre istatistik sayacı kullanın. Algoritmalar hücre istatistik sayaç otomatik olarak hücre sayıları ayarlayacaktır. </li><li> Aşağıdaki denklem kullanılarak hücre alt hesaplayın: <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/53019/53019eq1.jpg" /> Not: sayılan hücre olayların sayısı (örneğin, CD4 T hücre olaylar) kan ul başına hücre sayısını vermek için yukarıdaki denklemi kullanılarak numaralandırılmış. Örnekleri, Şekil 5 de gösterilmiştir. </li></ol>

<ol>
	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+incidence+of+malignant+mesothelioma+after+exposure+to+asbestos+during+home+maintenance+and+renovation.">Increasing incidence of malignant mesothelioma after exposure to asbestos during home maintenance and renovation.</a> Med J Aust. 195 (5), 271-274 (2011).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymidylate+synthase+and+excision+repair+cross-complementing+group-1+as+predictors+of+responsiveness+in+mesothelioma+patients+treated+with+pemetrexed/carboplatin.">Thymidylate synthase and excision repair cross-complementing group-1 as predictors of responsiveness in mesothelioma patients treated with pemetrexed/carboplatin.</a> Clin Cancer Res. 17 (8), 2581-2590 (2011).</li><li>Vogelzang, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+III+study+of+pemetrexed+in+combination+with+cisplatin+versus+cisplatin+alone+in+patients+with+malignant+pleural+mesothelioma.">Phase III study of pemetrexed in combination with cisplatin versus cisplatin alone in patients with malignant pleural mesothelioma.</a> J Clin Oncol. 21 (14), 2636-2644 (2003).</li><li>Lowenstein, P. R., Castro, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncertainty+in+the+translation+of+preclinical+experiments+to+clinical+trials.+Why+do+most+phase+III+clinical+trials+fail?.">Uncertainty in the translation of preclinical experiments to clinical trials. Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Algorithm+for+the+Preclinical+Screening+of+Anticancer+Drugs+Effective+against+Brain+Tumors.">An Algorithm for the Preclinical Screening of Anticancer Drugs Effective against Brain Tumors.</a> ISRN Pharmacol. 2012, 513580 (2012).</li><li>Basu, D., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+microenvironments+within+mouse+models+that+enhance+tumor+aggressiveness.">Defining microenvironments within mouse models that enhance tumor aggressiveness.</a> Cancer Biol Ther. 8 (4), 380-381 (2009).</li><li>Abolhassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+well-established+drugs+targeting+cancer+metabolism:+reproducibility+of+the+efficacy+of+a+highly+effective+drug+combination+in+mice.">Screening of well-established drugs targeting cancer metabolism: reproducibility of the efficacy of a highly effective drug combination in mice.</a> Invest New Drugs. 4 (4), 1331-1342 (2011).</li><li>Hudson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+panel+of+chemo-resistant+mesothelioma+models+for+investigating+chemo-resistance+and+identifying+new+treatments+for+mesothelioma.">Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma.</a> Sci Rep. 4, 6152 (2014).</li><li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rats!.">Rats!.</a> Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).</li><li>Craighead, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu yazıda plevral mezotelyoma bir sıçan singenik ortotopik model ve boyuna kan örneklemesi yoluyla hastalığın ilerlemesini izlemek için basit bir yöntem oluşturulması için bir yöntem ayrıntıları. II-45 modeli asbest liflerine 13 Fischer 344 fareleri açığa tarafından geliştirilmiştir. Bu poz mezotelyoma patogenezinde konak-asbest bağışıklık sistemi etkileşimlerinin gerçek dinamiklerini temsil rağmen, uzun bir gecikme süresi (üretmek için yıllar ala...

Malign mezotelyoma (MM) membran (mesothelium) dönüştürülmüş hücrelerden kaynaklanan saldırgan malignite olduğu satırları akciğer ve karın boşlukları, kalp ve iç üreme organları ve akciğer boşluğuna veya plevra 1,2 en sık görülen primer tümör . Asbest liflerine maruz kalma tüm MM% 80&#39;ini ve asbest kullanımına ilişkin yasakları en batı ülkelerinde yıl önce tanıtıldı olurken, toplumdaki yaygın kullanımı ölümcül bir miras bırakmıştır. Dünya Sağlık Örgütü 107.000 kişi dünya çapında artmaya devam ölüm oranları ile, asbest ilgili hastalıklar her yıl ölmektedir tahmin ediyor. Yeni bir meslek dışı insidans dalgası da ortaya çıkmaktadır ve bu 3 zirve zaman ve hangi düzeyde küçük anlayış var. Sistemik kemoterapi tek geçerli seçenek 4 birini temsil ettiğinde MM ile insanların büyük çoğunluğu geç teşhis edilir. En effectikemoterapi ve (cisplatin 5 ile birlikte pemetrexed) geçerli &#39;bakım standardını&#39; ziyaretinde 10 yıl önce tespit edilmiştir. Bu tedavinin Ancak başarısızlık kaçınılmazdır ve sadece 12 ay 2 sert bir prognoz ve medyan sağkalım hastaları bırakarak kanıtlanmış ikinci satırı seçenekleri vardır. Bu nedenle, daha etkin tedavi için acil bir karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Klinik çalışmalarda yeni tedavilerin bir dizi incelemede karşın, hiçbiri uygulamada değişiklikler ile sonuçlanmıştır. Bu klinik 6-8 ayar genellikle ksenograft fare modellerinde gerçekleştirilen ön klinik sonuçlar, düşük (% 5) aktarım, kısmen bağlıdır. Bu tür modeller sadakatle sıklıkla bağışıklık sistemi 9 yokluğunda, fizyolojik olmayan yerlerde meydana gelen tümör mikro-ortamınm karmaşık yönleri özetlemek yoktur. Singenik ortotopik modeller c göre belirgin daha gerçekçi tümör ortamı yaratmaktümörler bozulmamış bağışıklık sistemi 10,11 ile doğru fizyolojik konumda ortaya gibi ommonly derialtı ksenograft modelleri kullanılmaktadır. Sıçan büyük boyutta özellikle seri kan tedavi yanıtını ve toksisite 12 değerlendirmek için gerekli olan berabere ilaç çalışmalarında, bir kemirgen hastalık modeli olarak kullanımını geliştirir. Bundan başka, bir model olduğu hastalık ilerlemesini takip dolaşımda bulunan faktörler son derece çekici kullanılarak hastalığın ilerlemesini izlemek için yeteneği nedeniyle, (plevral boşluğuna gibi) tümörlerin konuma zordur. Bağışıklık yetkili fareler kullanılarak plevral mezotelyoma bir singenik ortotopik model üretimi tarif edilmektedir. Buna ek olarak, dolaşımdaki immün hücre ölçülerek plevral hastalığı ilerlemesinin izlenmesi için kolay ve göreceli olarak invazif olmayan bir yöntem de tarif edilmektedir.

<table><tbody><tr><td>EDTA Collection tube (0.5 ml)</td><td>Greiner Bio One GmbH</td><td>450480</td><td></td></tr><tr><td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td><td>BD Pharmingen</td><td>558509</td><td>anti-Rat CD3&amp;nbsp; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td></tr><tr><td>anti-RAT CD8a PE&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>200608</td><td>(IgG1vClone G28)</td></tr><tr><td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>203406</td><td>(IgG&lt;sub&gt;1&lt;/sub&gt; Clone OX-38)</td></tr><tr><td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&amp;nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>202214</td><td>(IgG&lt;sub&gt;1 &lt;/sub&gt;Clone OX-1)</td></tr><tr><td>TruCount Tubes</td><td>Becton Dickinson</td><td>340334</td><td>Box of 50 absolute counting tubes</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>Life Technologies</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>foetal bovine serum (FBS)</td><td>Scientifix</td><td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td><td></td></tr><tr><td>trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>PBS tablets</td><td>Medicago AB</td><td>09-9400-100</td><td></td></tr><tr><td>23Gx1&amp;frac14; Needle</td><td>Becton Dickinson</td><td>302008</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>Becton Dickinson</td><td>302 100</td><td></td></tr><tr><td>Fischer 344 Rat</td><td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td><td>F344</td><td></td></tr><tr><td>I.S.O (Isoflurane USP)</td><td>Veterinary Companys Australia (VCA)&amp;nbsp;</td><td>B7058</td><td></td></tr><tr><td>II-45 Rat Mesothelioma line</td><td>Zurich University</td><td></td><td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td></tr><tr><td>FACSCalibur 4 color</td><td>Becton Dickinson</td><td>342975</td><td></td></tr><tr><td>TRIS-HCL</td><td>SIGMA</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Chloride</td><td>SIGMA</td><td>9718</td><td></td></tr><tr><td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td><td>Advanced Anaesthesia specialists</td><td>#00449</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

Bu tür aşıların ve bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri ve tedavi yanıt tümör mikro rolü artmış anlayış kanseri için bağışıklık bazlı tedavilerde ilgi muazzam kabarış, toplu klinik öncesi testler için immün yetkili ortotopik modellere ihtiyaç işaret Bu yeni tedavilerin. Bu yazıda plevral malign mezotelyoma ortotopik bağışıklık yetkili sıçan modeli kurmak için nasıl gösterir. Ortotopik modellerde İzleme hastalığın ilerlemesi tümörlerin iç konuma göre şaşırmış. Uzunlamasına hastalığın ilerlemesini bu ve diğer kanser fare modellerinde immün hücreleri, dolaşımdaki üzerindeki etkisini izlemek için, tek bir tüp sadece 25 ul tam kan açıklanan gerektiren tahlilinde akış sitometrisi. Toplam lenfositler, monositler ve nötrofiller, hem de T-hücre alt CD4 ve CD8, B-hücreleri ve doğal katil hücreler: bu, doğru yedi bağışıklık parametrelerinin ölçümü sağlar. Farklı subsBu parametrelerin ets mezotelyoma modelde hastalığın ilerlemesinin izlenmesi için en büyük yararı olan lenfosit oranı nötrofil ile farklı koşulları ve model yararlıdır. Ayrıca bağışıklık bazlı tedavilere yanıtın izlenmesinde ve tedavi başarı ya da başarısızlığa yol açan altta yatan mekanizmaların anlaşılmasında yardımcı olabilir bu tek tüp yöntemi kullanarak bağışıklık hücre düzeylerinin dolaşan Analiz.

II-45 hücreleri kullanılarak plevral mezotelyoma ortotopik modeli üretimi için bu çalışmada kullanılan yöntem, hiçbir sıçan implantasyon yöntemi nedeniyle ölüyor ile, tekrarlanabilir ve hızlı bir süre içinde mezotelyoma yenik hayvanlarda sonuçlandı. Implante edilen hücre sayısı titrasyon 1 x 10 3 hücreleri, tam nüfuz modeli (100% melezleme) için gerekli olan en az sayıda olduğunu tespit ettik. Sıçanlarda implante hücrelerin farklı sayıda hastalığın şiddetini etkileyen gö...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

II-45 Singeneik Sıçan Mezotelyoma Modelinde Ortotopik İmplantasyon ve Periferik İmmün Hücre İzleme | Tıp | Video

Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Bağışıklık yetkili sıçanların plevra boşluğuna II-45 mezotelyoma hücrelerin nakledilmesi ile plevra malign mezotelyoma ortotopik sıçan modelinin üretimi sunulmuştur. Bir akış sitometrik yöntemi de tanımlanan bir 25 ul kan örneğinden, bu hayvanlarda, yedi immün hücre alt analiz etmek.

II-45 singenik Rat Mezotelyoma Modelinde Ortotopik Yerleştirilmesi ve Periferik Bağışıklık Hücre İzleme

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

orthotopic-implantation-peripheral-immune-cell-monitoring-ii-45

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Human Biology

Immune System

SCIENTISTS IN ACTION

9.1K Görüntüleme.  Royal North Shore Hospital, University of Sydney.  Bağışıklık yetkili sıçanların plevra boşluğuna II-45 mezotelyoma hücrelerin nakledilmesi ile plevra malign mezotelyoma ortotopik sıçan modelinin üretimi sunulmuştur. Bir akış sitometrik yöntemi de tanımlanan bir 25 ul kan örneğinden, bu hayvanlarda, yedi immün hücre alt analiz etmek. 

Video: Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT)

Various techniques of cardiac tissue engineering have been pursued in the past decades including scaffolding strategies using either native or bioartificial scaffold materials, entrapment of cardiac myocytes in hydrogels such as fibrin or collagen and stacking of myocyte monolayers 1. These concepts aim at restoration of compromised cardiac function (e.g. after myocardial infarction) or as experimental models (e.g. predictive toxicology and substance screening or disease modelling). Precise monitoring of cell survival after implantation of engineered heart tissue (EHT) has now become possible using in-vivo bioluminescence imaging (BLI) techniques 2. Here we describe the generation of fibrin-based EHT from a transgenic rat strain with ubiquitous expression of firefly luciferase (ROSA/luciferase-LEW Tg; 3). Implantation is performed into the greater omentum of different rat strains to assess immune responses of the recipient organism following EHT implantation. Comparison of results generated by BLI and the Enzyme Linked Immuno Spot Technique (ELISPOT) confirm the usability of BLI for the assessment of immune responses.

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue EHT

This video demonstrates the use of in vivo bioluminescence imaging to study immune responses after implantation of Engineered Heart Tissue (EHT) in rats.

Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme

Various techniques of cardiac tissue engineering have been pursued in the past decades including scaffolding strategies using either native or ...

Biyomühendislik

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

PET and MRI Guided Irradiation of a Glioblastoma Rat Model Using a Micro-irradiator

For decades, small animal radiation research was mostly performed using fairly crude experimental setups applying simple single-beam techniques without the ability to target a specific or well-delineated tumor volume. The delivery of radiation was achieved using fixed radiation sources or linear accelerators producing megavoltage (MV) X-rays. These devices are unable to achieve sub-millimeter precision required for small animals. Furthermore, the high doses delivered to healthy surrounding tissue hamper response assessment. To increase the translation between small animal studies and humans, our goal was to mimic the treatment of human glioblastoma in a rat model. To enable a more accurate irradiation in a preclinical setting, recently, precision image-guided small animal radiation research platforms were developed. Similar to human planning systems, treatment planning on these micro-irradiators is based on computed tomography (CT). However, low soft-tissue contrast on CT makes it very challenging to localize targets in certain tissues, such as the brain. Therefore, incorporating magnetic resonance imaging (MRI), which has excellent soft-tissue contrast compared to CT, would enable a more precise delineation of the target for irradiation. In the last decade also biological imaging techniques, such as positron emission tomography (PET) gained interest for radiation therapy treatment guidance. PET enables the visualization of e.g., glucose consumption, amino-acid transport, or hypoxia, present in the tumor. Targeting those highly proliferative or radio-resistant parts of the tumor with a higher dose could give a survival benefit. This hypothesis led to the introduction of the biological tumor volume (BTV), besides the conventional gross target volume (GTV), clinical target volume (CTV), and planned target volume (PTV).
At the preclinical imaging lab of Ghent University, a micro-irradiator, a small animal PET, and a 7 T small animal MRI are available. The goal was to incorporate MRI-guided irradiation and PET-guided sub-volume boosting in a glioblastoma rat model.

In the past, small animal irradiation was usually performed without the ability to target a well-delineated tumor volume. The goal was to mimic the treatment of human glioblastoma in rats. Using a small animal irradiation platform, we performed MRI-guided 3D conformal irradiation with PET-based sub-volume boosting in a preclinical setting.

Bir mikro-irradiator kullanarak Glioblastoma fare modeli ışınlama güdümlü evde beslenen hayvan ve MRI

For decades, small animal radiation research was mostly performed using fairly crude experimental setups applying simple single-beam techniques without ...

Kanser Araştırmaları

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, including genetically engineered models as well as transplantation models. However, genetically engineered mouse models are time-consuming and expensive, whereas some orthotopic transplantation models are difficult to reproduce. Here, a non-invasive intratracheal delivery method of lung tumor cells as an alternative orthotopic transplantation model is described. The use of mouse lung adenocarcinoma cells and syngeneic graft recipients allows studying tumorigenesis under the presence of a fully active immune system. Furthermore, genetic manipulations of tumor cells before transplantation makes this model an attractive time-saving approach to study the impact of genetic factors on tumor growth and tumor cell gene expression profiles under physiological conditions. Using this model, we show that lung adenocarcinoma cells express increased levels of the T-cell suppressor programmed death-ligand 1 (PD-L1) when grown in their natural environment as compared to cultivation in vitro.

Here we describe a minimally invasive syngeneic orthotopic transplantation model of mouse lung adenocarcinoma cells as a time- and cost-reducing model to study non-small cell lung cancer.

Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop better therapeutic strategies, understanding tumor microenvironmental factors that contribute to the treatment resistance is important. A major impediment to understanding disease mechanisms and improving therapy has been a lack of murine cell lines that resemble the aggressive and metastatic nature of human HNSCCs. Furthermore, a majority of murine models employ subcutaneous implantations of tumors which lack important physiological features of the head and neck region, including high vascular density, extensive lymphatic vasculature, and resident mucosal flora. The purpose of this study is to develop and characterize an orthotopic model of HNSCC. We employ two genetically distinct murine cell lines and established tumors in the buccal mucosa of mice. We optimize collagenase-based tumor digestion methods for the optimal recovery of single cells from established tumors. The data presented here show that mice develop highly vascularized tumors that metastasize to regional lymph nodes. Single-cell multiparametric mass cytometry analysis shows the presence of diverse immune populations with myeloid cells representing the majority of all immune cells. The model proposed in this study has applications in cancer biology, tumor immunology, and preclinical development of novel therapeutics. The resemblance of the orthotopic model to clinical features of human disease will provide a tool for enhanced translation and improved patient outcomes.

Here we present a reproducible method for developing an orthotopic murine model of head and neck squamous cell carcinoma. Tumors demonstrate clinically relevant histopathological features of the disease, including necrosis, poor differentiation, nodal metastases, and immune infiltration. Tumor-bearing mice develop clinically relevant symptoms including dysphagia, jaw displacement, and weight loss.

Skuamöz Hücre Karsinomu Hücre Tümörü bağışıklık profil oluşturma için fareler ve tedaviye yanıt değerlendirme intramucosal aşı

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival compared to surgery alone. To address this problem, the aim of the study is to refine a lesser-known model of OS in rats with a comprehensive histologic, imaging, biologic, implantation, and amputation surgical approach that prolongs survival. We used an immunocompetent, outbred Sprague-Dawley (SD), syngeneic rat model with implanted UMR106 OS cell line (originating from a SD rat) with orthotopic tibial tumor implants into 3-week-old male and female rats to model pediatric OS. We found that rats develop reproducible primary and metastatic pulmonary tumors, and that limb amputations at 3 weeks post implantation significantly reduce the incidence of pulmonary metastasis and prevent unexpected deaths. Histologically, the primary and metastatic OSs in rats were very similar to human OS. Using immunohistochemistry methods, the study shows that rat OS are infiltrated with macrophages and T cells. A protein expression survey of OS cells reveals that these tumors express ErbB family kinases. Since these kinases are also highly expressed in most human OSs, this rat model could be used to test ErbB pathway inhibitors for therapy.

Here, a syngeneic orthotopic implantation followed by an amputation procedure of the osteosarcoma with spontaneous pulmonary metastasis that can be used for preclinical investigation of metastasis biology and development of novel therapeutics is described.

Metastaz Oranını Kontrol Etmek için Amputasyonlu Syngeneic Ortotopik Osteosarkom Sprague Dawley Sıçan Modeli

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and has no cure. Laser interstitial thermal therapy (LITT) is a Food and Drug Administration (FDA)-approved treatment for GB and is used in patients who may not be candidates for conventional surgical resection. While the clinical efficacy of LITT has been established, research beyond clinical case studies and case series is limited and hindered by the lack of an established animal model. This protocol uses C57BL/6 mice and syngeneic CT2A glioma cancer cell line to closely recapitulate human GB&#160;while also using a 1064 nm Neodymium-doped Yttrium Aluminum Garnet (Nd:YAG) laser, such as is used in one of the two FDA-approved LITT systems, providing excellent pre-clinical relevance. The successful establishment of this LITT murine model will provide a valuable platform for investigating the unique features of LITT ablation and its effects on the tumor microenvironment, potentially leading to improved therapeutic strategies.

Glioblastoma is a devastating form of primary brain cancer, and laser interstitial thermal therapy is emerging as a promising alternative to conventional surgical resection for inoperable glioblastoma. This protocol describes an optimized pre-clinical mouse model that can be used to study treatment effects or adjuvant and combinatorial treatments.

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms requires reliable models. Here, we describe models of tolerance to cardiac allograft in rat, induced by blockade of costimulation signals or by upregulation of immunoregulatory molecules through gene transfer. Each of these models allowed in vivo generation of regulatory cells such as regulatory T cells (Tregs), regulatory B cells (Bregs) or regulatory myeloid cells (RegMCs). In this manuscript, we describe two complementary protocols that have been used to identify and define in vitro and in vivo regulatory cell activity to determine their responsibility in tolerance induction and maintenance. First, an in vitro suppressive assay allowed rapid identification of cells with suppressive capacity on effector immune responses in a dose dependent manner, and can be used for further analysis such as cytokine measurement or cytotoxicity. Second, the adoptive transfer of cells from a tolerant treated recipient to a newly irradiated grafted recipient, highlighted the tolerogenic properties of these cells in controlling graft directed immune responses and/or converting new regulatory cells (termed infectious tolerance). These methods are not restricted to cells with known phenotypic markers and can be extended to any cell population. Furthermore, donor directed allospecificity of regulatory cells (an important goal in the field) can be assessed by using third party donor cells or graft either in vitro or in vivo. Finally, to determine the specific tolerogenic capacity of these regulatory cells, we provide protocols to assess the humoral anti-donor antibody responses and the capacity of the recipient to develop humoral responses against new or former known antigens. The models of tolerance described can be used to further characterize regulatory cells, to identify new biomarkers, and immunoregulatory molecules, and are adaptable to other transplantation models or autoimmune diseases in rodent or human.

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Here, we present a protocol to induce tolerance in transplantation, and assess in vitro and in vivo the suppressive capacity of distinct cell subsets from the recipient and the immune status of the recipient toward donor or exogenous antigens.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Biyoloji

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. MPM development is mainly associated with asbestos. Treatments provide only modest survival since the median survival average is 9&#8211;18 months from the time of diagnosis. Therefore, more effective treatments must be identified. Most data describing new therapeutic targets were obtained from in vitro experiments and need to be validated in reliable in vivo preclinical models. This article describes one such reliable MPM orthotopic model obtained after injection of a human MPM cell line H2052/484 into the pleural cavity of immunodeficient athymic mice. Transplantation in the orthotopic site allows studying the progression of tumor in the natural in vivo environment. Positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) molecular imaging using the clinical [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose ([18F]FDG) radiotracer is the diagnosis method of choice for examining patients with MPM. Accordingly, [18F]FDG-PET/CT was used to longitudinally monitor the disease progression of the H2052/484 orthotopic model. This technique has a high 3R potential (Reduce the number of animals, Refine to lessen pain and discomfort, and Replace animal experimentation with alternatives) since the tumor development can be monitored non-invasively and the number of animals required could be significantly reduced.
This model displays a high development rate, a rapid tumor growth, is cost-efficient and allows for rapid clinical translation. By using this orthotopic xenograft MPM model, researchers can assess biological responses of a reliable MPM model following therapeutic interventions.

This article describes the generation of an orthotopic mouse model of human pleural mesothelioma by implantation of H2052/484 mesothelioma cells into the pleural cavity of immunocompromised athymic mice. The longitudinal monitoring of the development of intrapleural tumors was assessed by non-invasive multimodal [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography and computed tomography imaging.

Athymic Farelerde İnsan Plevral Mezotelyoma'nın Ortotopik Modelinin PET/BT ile İmplantasyonu ve İzlenmesi

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...