The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

Hayvanları da içeren tüm prosedürler Bilimsel Amaçlarla Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Uygulama Avustralya Kanunu tavsiyeleri doğrultusunda yürütülmüştür. Bu çalışma için protokol Kraliyet North Shore Hastanesi Hayvan Bakım ve Etik Komitesi tarafından onaylandı. Kadın Fischer 344 fareleri (F344, 150-200 g), Kearns Tesisinde muhafaza edilmiştir, standart koşullar (12 saat ışık / karanlık döngüsü ve yiyecek ve suya serbest erişim) altında Kolling Enstitüsü. Not: Tüm deneysel işlemleri için bir akış şemasıdır, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1. <ol><li> (Aynı zamanda IL-45 olarak da bilinen krosidolit asbest periton sokulmasıyla elde edilen) Kültür sıçan mezotelyoma II-45 hücre hattı RPMI 1640 (RPMI) ortam (37 °,% 10 fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş ve standart koşullarda büyümeye % 5 CO2) C nemlendirilmiş bir kuluçka cihazı. Mainta75 cm 2 balonuna pasajlayarak ve iki alt kültürleme yaklaşık 01:50 Haftada tarafından. </li><li> 37 ° C&#39;de hücre kültürü ve sıcak alikotları için reaktifler hazırlayın. Gerekli reaktifler,% 10 FBS, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ve% 0.5 tripsin-EDTA ile, serum içermeyen RPMI ortamı (SFM), RPMI bulunmaktadır. </li><li> Yaklaşık 70-80% konfluansa implantasyon için kültür hücreleri. Bu da doğrusal büyüme aşamasında olmasını sağlar. </li><li> Medya atarak steril PBS, 5 ml ile bir kez yıkanması ve daha sonra 3 ml% 0.5 tripsin EDTA ekleyerek Hasat hücreleri. </li><li> Tüm hücreler, yapışmayan olana kadar yaklaşık 5 dakika boyunca inkübatör şişeler dönün. </li><li> Hücreler yapışmayan olduğunda, tripsin inaktive% 10 FBS ile RPMI 3 ilave edin. Toplama ve santrifüj hücreleri 3 dakika boyunca 300 xg&#39;de. </li><li> 3 dakika boyunca 300 x g hızında tekrar santrifüj SOY ve 10 ml hücre pelletini yıkayın. </li><li> 10 SOY ml ve santrifüj yukarıdaki gibi tekrar yıkayın hücre topağı. </li><li> SFM 10 ml hücrelerin tekrar ve bir hemasitometre ve benzeri cihazlar kullanılarak bir hücre sayımı gerçekleştirin. </li><li> 100 ul implante edilecek hücrelerin miktarını ihtiva ettiği şekilde hücreleri ile seyreltilir. Not: Tümör büyümesi 100 100 ul hücre fakat standart bir doz 100 ul 500,000 hücreleri gibi düşük bir dozda gösterilmiştir. </li><li> Sıçanların sayısı (yani, 100 ul / fare) implante edilebilir için ortam yeterli hücrelerini hazırlamak artı astarlama ve iğne ölü hacminden kayıplarını telafi etmek için, en az 0,5 ml ilave. </li><li> Hazırlama (hücreler olmadan) yeterli SFM kontrol farelerinde (örneğin, 100 ul / fare) içine implant edilmek üzere, ayrıca, en az 0,5 ml ilave. Hücreleri ve SFM artık implantasyon için hazırız: Not. Onlar 37 o C&#39;de tutuldu ve canlılığını korumak için hasat 2 saat içinde implante edilmelidir. </li></ol> Hücreler 2. in vivo İmplantasyon<ol><li> Indüksiyon odasına F344 sıçan (&gt; yaşı 13 hafta) yerleştirin ve% 1,4 izofluran inhalasyonu (ya da tesiste kullanılan yöntem) ile uyutmak. Sıçan (akan% 1.4 izofluran ile) burun konisi için odadan uykuda hareket onu olduğu göründüğünde, (ventral görünüm) yukarı bakacak şekilde göğüs ile sırtında yerleştirin. Bu iç organları uzakta göğüs boşluğundan yerleşmek için izin verir. Sıçan sağlamak için kurumsal protokollere göre refleksleri kontrol tamamen uyuşturulduktan. </li><li> Kürk çıkarmak için sağ regio costalis (göğüs) alan tıraş. </li><li> % 80 v / v etanol ile traşlı alanı temizleyin. </li><li> Enjeksiyon bölgesini belirleyin: Sağ tarafta, 2 bezi kranial başlayan bulabilirsiniz. Enjeksiyon sitesi göğüs kafesinin kuyruk ucundan 3. ve 4. kaburga arasında, bu 0.5 cm proksimalinde olduğunu. (Şekil 2A). </li><li> Yavaşça tekrar süspansiyon II-45 hücreleri karıştırın. Yavaşça 1 ml hücre süspansiyonu (veya kontrol sıçanlar için SFM) çizmek ve# 160; ekli bir iğne olmadan şırınga. Bir iğne hücrelerin çizim up bağlıysa hücreler iğne, enjeksiyon hattı boyunca büyümek için potansiyeli vardır. Bir 23G x 1 ¼ iğne takın. Başbakan makaralı ve herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarın. </li><li> Şırınga ve iğne astarlanmış sonra, iğne mili üzerinde 20 mm uzunluğunda ve 5 mm çapında bir boşluk yerleştirin. Bu enjeksiyon sırasında plevra boşluğuna çok derin nüfuz iğne önlemek için kullanılır. Maruz kalan iğne Yaklaşık olarak 5 mm-12 mm bir organların zarar vermeden kaburga nüfuz için yeterlidir. </li><li> Yavaşça, kaburgaların arasındaki iğneyi bir kan damarı (kan şırınga içinde görünmelidir) daha sonra 100 ul hücreleri veya SFM enjekte delinmiş olmamıştır sağlamak için şırınga geri çekin. (Şekil 2B). </li><li> İğneyi çıkarın ve yavaşça göğüs boşluğunda hücreleri yaymak için yanlara doğru sıçan yuvarlayın. </li><li> Bir kafese sıçan yerleştirin ve kurtarma için kontrol edin. The sıçan 1 dakika içinde uyanık ve hareket başlıyor olmalıdır. </li><li> Yeni bir iğne kullanarak her sıçan için tekrarlayın. Aynı iğne tekrar kullanımı iğnenin enjeksiyon hattı boyunca hücre büyümesinin neden olur. </li><li> Günlük hayvanların refahını izleyin. </li><li> Kurumsal hayvan etik komitesi tarafından yönetilir olarak etik tanımlanan uç noktaları hayvanların Euthanize. Bu deneylerde sıçanlar için etik son nokta 10&#39;dan daha fazla veya% da zor nefes alma ve ağırlık kaybı vardı. </li></ol> 3. Kuyruk Ven Kan Toplama <ol><li> Kan sonrası hücre implantasyonu hemen tahsil edilecek olursa, anestezi sıçan tutun. Başka bir zaman noktasında kan örnekleme ise,% 1.4 izofluran inhalasyonu ile sıçan uyutmak. Sıçan sağlamak için kurumsal protokollere göre refleksleri kontrol tamamen anestezi edilir. </li><li> Onun yüzüne sıçan yerleştirin ve bir yanal kuyruk damarı bulun. </li><li> % 80 etanol ile kuyruk sterilize ve 0.5 ml EDTA c etiketollection tüpü. </li><li> Kan toplamak için, her zaman (boyunca yol yaklaşık üçte biri) kuyruk kaudal ucunda başlar. Bu ilk girişim başarısız olması halinde kuyruk kafa ucuna daha yakın girişimleri verir. Bu bir kan pıhtısı neden olabilir kaudal resample asla. </li><li> Yanal ven bir 23G x 1 ¼ iğne paralel yerleştirin ve yaklaşık 10 mm (Şekil 3A) nüfuz böylece sığ bir açıyla damara doğru kaydırın. </li><li> Not: Damar başarıyla delinirse olmuşsa, kan iğne (Şekil 3B) bağlanma sonunda görünür olacaktır. </li><li> Bir damla kan iğne ponksiyon yerinde kuyruk oluşacaktır. Etiketli 0.5 ml (veya daha küçük) EDTA toplama tüpüne bir pipet ve transfer kullanarak bu kan toplayın. Immün hücre deneyi 25 ul için yeterlidir. Kanama durana kadar siteyi delinme basıncı ile gazlı bez uygulayın. </li><li> Pr kan ve EDTA karıştırmak için kan tüpü FlickOlay pıhtılaşması. Kan toplama ve pıhtılaşmayı önlemek için mümkün olduğu kadar kısa EDTA ile karıştırılarak arasındaki süre devam edin. </li><li> Analize kadar oda sıcaklığında rafa birden fareler mağaza EDTA kan örneklerinde kan toplarken. Koleksiyonun 2 saat içinde Süreç kan. </li></ol> Boncuk merkezli Yöntemiyle Bağışıklık Hücre Profil Oluşturma 4. Numune Hazırlama Not: Bu tek bir platform yöntemi, her numune için boncuk bilinen bir dizi var piyasada mevcut mutlak sayım tüpleri kullanılarak dayanır. Bu tüpler boncuk serbest numune hazırlama sırasında çözülür liyofilize pelet, içerirler. Boncuklar flüoresan olarak etiketlenir ve boncuk nüfus yolluk mutlak sayımlar hesaplanabilir. <ol><li> EDTA tam kan örneği birkaç dakika yavaş döner mikser üzerine yerleştirerek iyice karıştırılır olduğundan emin olun. Her numune için tek mutlak sayma tüp etiketleyin. Boncuklar içeren bir pelet t altında görünür olmalıdırtüpün dibinde o metal boncuk tutucu. </li><li> Etiketli mutlak sayım tüpüne EDTA tam kan 25 ul aktarın. Boncuk pelet kanın ilave edilmesi üzerine eriyecektir. </li><li> Her bir tüpe, anti-sıçan T / B / Doğal Katil (NK) hücre kokteyli 20 ul anti-sıçan CD8a PE 10 ul anti-fare CD4 (alan 1) FITC 10 ul ve anti-sıçan 10 ul CD45 PE / Cy7 (Şekil 4A). Flüoroforlar Tablo 1 &#39;de tanımlandığı gibidir. </li><li> Antikorlar ve hücreler, tüpün alt ve tüpün yanına yapışmış olmayan sağlamak için boru kısa bir süre (300 xg) santrifüjleyin. Girdap karıştırın ve oda sıcaklığında 15 dakika süreyle inkübe. </li><li> Kırmızı kan hücreleri 10 mM Tris, 400 ul lize etmek için, 0.15 M amonyum klorür tamponu (pH 7.5) ve vorteks karıştırın. Numune saydam ve bulanık değil (Şekil 4B ve C) göründüğünde lizis tamamlandı. Numune tamamen artmasına sebep olacağı parçalamak için başarısızlıkd arka plan ve flow sitometri ile analiz ederken yanlışlıkla sayıları yüksek. </li></ol> Numunelerin 5. Akış Sitometrik İşleme Not: akış sitometresi 4 renk gerçekleştirin. <ol><li> Şekil 5 de gösterildiği gibi, tedarik etme kipi ve 8 parsel ile yeni bir şablon yazılım açın. </li><li> Tablo 1&#39;de listelenen ve kapı R1 kurmak olanlara cihaz ayarlarını yapın (FITC [FL-1] APC [FL-4] karşı), Şekil 5ai) floresan boncuk saymak için. Diğer kapılar bu satın alma aşamasında önemli değildir ama analiz için gerekli olacaktır. Bu protokolde kullanılan mutlak sayım boncuk floresan boyalar içeren ve mavi kanalda zayıf olmasına rağmen herhangi bir kanalda tespit edilebilir. </li><li> Hazırlanmış bir kontrol kan örneği, vorteks kullanarak ve sonra Sitometre üzerine yüklemek ve veri toplama kapıları ayarlanabilir, böylece kurulum modunda düşük hızda (12 ul / dak) çalışacak. </li><li> Edinimi ayarlayınR1 boncuk kapısı 10.000 olayları toplamak. </li><li> Veri kaydetmek ve satın alma menüsünden dosya numarasını ve etiket örnek dosya ayarlamak için bir klasör oluşturun. </li><li> Numune sitometresinin üzerine analiz edilecek yerleştirin ve orta (35 ul / dk) akış hızını ayarlamak. Aynı akış hızında her bir örnek çalıştırın. Akış hızı (12 ul / dakika) düşük ya da (60 ul / dakika) yüksekten değiştirilebilir gerekebilir, ancak orta genellikle uygundur. Bu hızla her numune için 10,000 boncuk olayları elde etmek için yaklaşık 90 ila 120 saniye sürüyor. </li><li> Numune emin olaylar R1 boncuk kapısında görünen emin olmak için dağılım araziler izlemek yüklendikten sonra. Başlangıçta saçılım araziler sürüklenme neden örnek baskısı bazı istikrarsızlık olabilir. Bu stabilize etmek için bekleyin. </li><li> Stabilize sonra edinilen tıklayın ve örnek çalışmasına izin. Sitometresinin R1 10.000 boncuk olayları satın bittikten sonra sitometresinin elde durdurmak ve tüm verileri kaydetmek olacaktır. </li><li> Numuneyi çıkarın ve tu akış atınolacak. Sitometresinin şimdi bir sonraki numune için hazırdır. Tüm örnekleri çalıştırın ve daha sonra analiz moduna geçin. </li></ol> 6. Bağışıklık Hücre Analizi Not: yolluk stratejileri ve Boole cebri her hücre popülasyonu tanımlamak için kullanılır. Boole cebri, tek bir tanımı birden operasyonlar için izin veren bir mantık tabanlı analiz yöntemidir. (Örneğin, BD CELLQuest) Akış Sitometre analiz yazılımı Boole cebri kullanımı için izin verir. Denklemler daha özel olarak her bir hücre popülasyonu tespit hücre tanımlanmasında yardımcı önemli bir negatif reaktiflik için aktif hesap için kullanılır. &#39;Bölgeler&#39; bir &#39;kapıyı&#39; tanımlamak için kullanılır. (- Tablo 2 &#39;de tanımlandığı +, *) kapıları cebirsel operatörler tarafından bağlanmış bir çok bölgesine oluşur, oysa bölgeler 2 boyutlu bir boşluk tanımlar. <ol><li> Analiz moduna yazılımı geçin. Bir analiz şablonu maç için oluşturulan edilmelidir <strong&gt; gösterilen araziler ve kapıları ile Şekil 5. </li><li> Ayrı ayrı her bir dosyayı (örn, her numune) analiz edin. Tablo 2&#39;de tarif edildiği gibi ayarlama kapıları R1 R9 üzerine ve sonra, (aynı zamanda, Şekil 5&#39;de gösterildiği gibi), her hücre türü için algoritmaları ayarlayın. </li><li> Kapıları ve algoritmalar (Tablo 2 ve Şekil 5) tarafından tanımlanan bireysel hücre popülasyonlarının hesaplamak için hücre istatistik sayacı kullanın. Algoritmalar hücre istatistik sayaç otomatik olarak hücre sayıları ayarlayacaktır. </li><li> Aşağıdaki denklem kullanılarak hücre alt hesaplayın: <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/53019/53019eq1.jpg" /> Not: sayılan hücre olayların sayısı (örneğin, CD4 T hücre olaylar) kan ul başına hücre sayısını vermek için yukarıdaki denklemi kullanılarak numaralandırılmış. Örnekleri, Şekil 5 de gösterilmiştir. </li></ol>

<ol>
	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+incidence+of+malignant+mesothelioma+after+exposure+to+asbestos+during+home+maintenance+and+renovation.">Increasing incidence of malignant mesothelioma after exposure to asbestos during home maintenance and renovation.</a> Med J Aust. 195 (5), 271-274 (2011).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymidylate+synthase+and+excision+repair+cross-complementing+group-1+as+predictors+of+responsiveness+in+mesothelioma+patients+treated+with+pemetrexed/carboplatin.">Thymidylate synthase and excision repair cross-complementing group-1 as predictors of responsiveness in mesothelioma patients treated with pemetrexed/carboplatin.</a> Clin Cancer Res. 17 (8), 2581-2590 (2011).</li><li>Vogelzang, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+III+study+of+pemetrexed+in+combination+with+cisplatin+versus+cisplatin+alone+in+patients+with+malignant+pleural+mesothelioma.">Phase III study of pemetrexed in combination with cisplatin versus cisplatin alone in patients with malignant pleural mesothelioma.</a> J Clin Oncol. 21 (14), 2636-2644 (2003).</li><li>Lowenstein, P. R., Castro, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncertainty+in+the+translation+of+preclinical+experiments+to+clinical+trials.+Why+do+most+phase+III+clinical+trials+fail?.">Uncertainty in the translation of preclinical experiments to clinical trials. Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Algorithm+for+the+Preclinical+Screening+of+Anticancer+Drugs+Effective+against+Brain+Tumors.">An Algorithm for the Preclinical Screening of Anticancer Drugs Effective against Brain Tumors.</a> ISRN Pharmacol. 2012, 513580 (2012).</li><li>Basu, D., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+microenvironments+within+mouse+models+that+enhance+tumor+aggressiveness.">Defining microenvironments within mouse models that enhance tumor aggressiveness.</a> Cancer Biol Ther. 8 (4), 380-381 (2009).</li><li>Abolhassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+well-established+drugs+targeting+cancer+metabolism:+reproducibility+of+the+efficacy+of+a+highly+effective+drug+combination+in+mice.">Screening of well-established drugs targeting cancer metabolism: reproducibility of the efficacy of a highly effective drug combination in mice.</a> Invest New Drugs. 4 (4), 1331-1342 (2011).</li><li>Hudson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+panel+of+chemo-resistant+mesothelioma+models+for+investigating+chemo-resistance+and+identifying+new+treatments+for+mesothelioma.">Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma.</a> Sci Rep. 4, 6152 (2014).</li><li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rats!.">Rats!.</a> Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).</li><li>Craighead, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu yazıda plevral mezotelyoma bir sıçan singenik ortotopik model ve boyuna kan örneklemesi yoluyla hastalığın ilerlemesini izlemek için basit bir yöntem oluşturulması için bir yöntem ayrıntıları. II-45 modeli asbest liflerine 13 Fischer 344 fareleri açığa tarafından geliştirilmiştir. Bu poz mezotelyoma patogenezinde konak-asbest bağışıklık sistemi etkileşimlerinin gerçek dinamiklerini temsil rağmen, uzun bir gecikme süresi (üretmek için yıllar ala...

Malign mezotelyoma (MM) membran (mesothelium) dönüştürülmüş hücrelerden kaynaklanan saldırgan malignite olduğu satırları akciğer ve karın boşlukları, kalp ve iç üreme organları ve akciğer boşluğuna veya plevra 1,2 en sık görülen primer tümör . Asbest liflerine maruz kalma tüm MM% 80&#39;ini ve asbest kullanımına ilişkin yasakları en batı ülkelerinde yıl önce tanıtıldı olurken, toplumdaki yaygın kullanımı ölümcül bir miras bırakmıştır. Dünya Sağlık Örgütü 107.000 kişi dünya çapında artmaya devam ölüm oranları ile, asbest ilgili hastalıklar her yıl ölmektedir tahmin ediyor. Yeni bir meslek dışı insidans dalgası da ortaya çıkmaktadır ve bu 3 zirve zaman ve hangi düzeyde küçük anlayış var. Sistemik kemoterapi tek geçerli seçenek 4 birini temsil ettiğinde MM ile insanların büyük çoğunluğu geç teşhis edilir. En effectikemoterapi ve (cisplatin 5 ile birlikte pemetrexed) geçerli &#39;bakım standardını&#39; ziyaretinde 10 yıl önce tespit edilmiştir. Bu tedavinin Ancak başarısızlık kaçınılmazdır ve sadece 12 ay 2 sert bir prognoz ve medyan sağkalım hastaları bırakarak kanıtlanmış ikinci satırı seçenekleri vardır. Bu nedenle, daha etkin tedavi için acil bir karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Klinik çalışmalarda yeni tedavilerin bir dizi incelemede karşın, hiçbiri uygulamada değişiklikler ile sonuçlanmıştır. Bu klinik 6-8 ayar genellikle ksenograft fare modellerinde gerçekleştirilen ön klinik sonuçlar, düşük (% 5) aktarım, kısmen bağlıdır. Bu tür modeller sadakatle sıklıkla bağışıklık sistemi 9 yokluğunda, fizyolojik olmayan yerlerde meydana gelen tümör mikro-ortamınm karmaşık yönleri özetlemek yoktur. Singenik ortotopik modeller c göre belirgin daha gerçekçi tümör ortamı yaratmaktümörler bozulmamış bağışıklık sistemi 10,11 ile doğru fizyolojik konumda ortaya gibi ommonly derialtı ksenograft modelleri kullanılmaktadır. Sıçan büyük boyutta özellikle seri kan tedavi yanıtını ve toksisite 12 değerlendirmek için gerekli olan berabere ilaç çalışmalarında, bir kemirgen hastalık modeli olarak kullanımını geliştirir. Bundan başka, bir model olduğu hastalık ilerlemesini takip dolaşımda bulunan faktörler son derece çekici kullanılarak hastalığın ilerlemesini izlemek için yeteneği nedeniyle, (plevral boşluğuna gibi) tümörlerin konuma zordur. Bağışıklık yetkili fareler kullanılarak plevral mezotelyoma bir singenik ortotopik model üretimi tarif edilmektedir. Buna ek olarak, dolaşımdaki immün hücre ölçülerek plevral hastalığı ilerlemesinin izlenmesi için kolay ve göreceli olarak invazif olmayan bir yöntem de tarif edilmektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EDTA Collection tube (0.5ml)</td>
			<td>Greiner Bio One GmbH</td>
			<td>450480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>558509</td>
			<td>anti-Rat CD3&#160; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-RAT CD8a PE&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>200608</td>
			<td>(IgG1vClone G28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>203406</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-38)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202214</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruCount&#8482; Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>340334</td>
			<td>Box of 50 absolute counting tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>foetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Scientifix</td>
			<td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Medicago AB</td>
			<td>09-9400-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23Gx1&#188; Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fischer 344 Rat</td>
			<td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td>
			<td>F344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I.S.O (Isoflurane USP)</td>
			<td>Veterinary Companys Australia (VCA)&#160;</td>
			<td>B7058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>II-45 Rat Mesothelioma line</td>
			<td>Zurich University</td>
			<td></td>
			<td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur&#8482; 4 colour</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>342975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCL</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td>
			<td>Advanced Anaesthesia specialists</td>
			<td>#00449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

Bu tür aşıların ve bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri ve tedavi yanıt tümör mikro rolü artmış anlayış kanseri için bağışıklık bazlı tedavilerde ilgi muazzam kabarış, toplu klinik öncesi testler için immün yetkili ortotopik modellere ihtiyaç işaret Bu yeni tedavilerin. Bu yazıda plevral malign mezotelyoma ortotopik bağışıklık yetkili sıçan modeli kurmak için nasıl gösterir. Ortotopik modellerde İzleme hastalığın ilerlemesi tümörlerin iç konuma göre şaşırmış. Uzunlamasına hastalığın ilerlemesini bu ve diğer kanser fare modellerinde immün hücreleri, dolaşımdaki üzerindeki etkisini izlemek için, tek bir tüp sadece 25 ul tam kan açıklanan gerektiren tahlilinde akış sitometrisi. Toplam lenfositler, monositler ve nötrofiller, hem de T-hücre alt CD4 ve CD8, B-hücreleri ve doğal katil hücreler: bu, doğru yedi bağışıklık parametrelerinin ölçümü sağlar. Farklı subsBu parametrelerin ets mezotelyoma modelde hastalığın ilerlemesinin izlenmesi için en büyük yararı olan lenfosit oranı nötrofil ile farklı koşulları ve model yararlıdır. Ayrıca bağışıklık bazlı tedavilere yanıtın izlenmesinde ve tedavi başarı ya da başarısızlığa yol açan altta yatan mekanizmaların anlaşılmasında yardımcı olabilir bu tek tüp yöntemi kullanarak bağışıklık hücre düzeylerinin dolaşan Analiz.

II-45 hücreleri kullanılarak plevral mezotelyoma ortotopik modeli üretimi için bu çalışmada kullanılan yöntem, hiçbir sıçan implantasyon yöntemi nedeniyle ölüyor ile, tekrarlanabilir ve hızlı bir süre içinde mezotelyoma yenik hayvanlarda sonuçlandı. Implante edilen hücre sayısı titrasyon 1 x 10 3 hücreleri, tam nüfuz modeli (100% melezleme) için gerekli olan en az sayıda olduğunu tespit ettik. Sıçanlarda implante hücrelerin farklı sayıda hastalığın şiddetini etkileyen gö...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

II-45 Singeneik Sıçan Mezotelyoma Modelinde Ortotopik İmplantasyon ve Periferik İmmün Hücre İzleme | Tıp | Video

Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Bağışıklık yetkili sıçanların plevra boşluğuna II-45 mezotelyoma hücrelerin nakledilmesi ile plevra malign mezotelyoma ortotopik sıçan modelinin üretimi sunulmuştur. Bir akış sitometrik yöntemi de tanımlanan bir 25 ul kan örneğinden, bu hayvanlarda, yedi immün hücre alt analiz etmek.

II-45 singenik Rat Mezotelyoma Modelinde Ortotopik Yerleştirilmesi ve Periferik Bağışıklık Hücre İzleme

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

orthotopic-implantation-peripheral-immune-cell-monitoring-ii-45

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Human Biology

Immune System

SCIENTISTS IN ACTION

9.1K Görüntüleme.  Royal North Shore Hospital, University of Sydney.  Bağışıklık yetkili sıçanların plevra boşluğuna II-45 mezotelyoma hücrelerin nakledilmesi ile plevra malign mezotelyoma ortotopik sıçan modelinin üretimi sunulmuştur. Bir akış sitometrik yöntemi de tanımlanan bir 25 ul kan örneğinden, bu hayvanlarda, yedi immün hücre alt analiz etmek. 

Video: Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Tıp

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to inhibit tumor growth must be performed in a suitable animal model. The type of animal model that is best for this purpose is a topic of intense discussion. Some evidence indicates that preclinical trials examining drug effects on tumors arising in transgenic mice are more predictive of clinical outcome1and so candidate therapeutic agents are often tested in these models. Unfortunately, transgenic models are not available for many tumor types. Further, transgenic models often have other limitations such as concerns as to how well the mouse tumor models its human counterpart, incomplete penetrance of the tumor phenotype and an inability to predict when tumors will develop.
Consequently, many investigators use xenograft models (human tumor cells grafted into immunodeficient mice) for preclinical trials if appropriate transgenic tumor models are not available. Even if transgenic models are available, they are often partnered with xenograft models as the latter facilitate rapid determination of therapeutic ranges. Further, this partnership allows a comparison of the effectiveness of the agent in transgenic tumors and genuine human tumor cells. Historically, xenografting has often been performed by injecting tumor cells subcutaneously (ectopic xenografts). This technique is rapid and reproducible, relatively inexpensive and allows continuous quantitation of tumor growth during the therapeutic period2. However, the subcutaneous space is not the normal microenvironment for most neoplasms and so results obtained with ectopic xenografting can be misleading due to factors such as an absence of organ-specific expression of host tissue and tumor genes. It has thus been strongly recommended that ectopic grafting studies be replaced or complemented by studies in which human tumor cells are grafted into their tissue of origin (orthotopic xenografting)2. Unfortunately, implementation of this recommendation is often thwarted by the fact that orthotopic xenografting methodologies have not yet been developed for many tumor types.
Malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs) are highly aggressive sarcomas that occur sporadically or in association with neurofibromatosis type 13and most commonly arise in the sciatic nerve4. Here we describe a technically straightforward method in which firefly luciferase-tagged human MPNST cells are orthopically xenografted into the sciatic nerve of immunodeficient mice. Our approach to assessing the success of the grafting procedure in individual animals and subsequent non-biased randomization into study groups is also discussed.

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

A method for reliably grafting luciferase-tagged human malignant peripheral nerve sheath tumor cells into the sciatic nerve of immunodeficient mice is described. The use of bioluminescence imaging to demonstrate proper establishment of tumor grafts and criteria for random segregation of animals into study groups are also discussed.

İnsan Takip edilen-Lusiferaz Malign Periferik Sinir Kılıf Tümör Hücreleri Ortotopik Xenografting In vivo</emAday Terapötik Ajanlar> Test

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

The Polyvinyl Alcohol Sponge Model Implantation

Wound healing is a complicated, multistep process involving many cell types, growth factors and compounds1-3. Because of this complexity, wound healing studies are most comprehensive when carried out in vivo. There are many in vivo models available to study acute wound healing, including incisional, excisional, dead space, and burns. Dead space models are artificial, porous implants which are used to study tissue formation and the effects of substances on the wound. Some of the commonly used dead space models include polyvinyl alcohol (PVA) sponges, steel wire mesh cylinders, expanded polytetrafluoroethylene (ePTFE) material, and the Cellstick1,2.
Each dead space model has its own limitations based on its material's composition and implantation methods. The steel wire mesh cylinder model has a lag phase of infiltration after implantation and requires a long amount of time before granulation tissue formation begins1. Later stages of wound healing are best analyzed using the ePTFE model1,4. The Cellstick is a cellulose sponge inside a silicon tube model which is typically used for studying human surgery wounds and wound fluid2. The PVA sponge is limited to acute studies because with time it begins to provoke a foreign body response which causes a giant cell reaction in the animal5. Unlike other materials, PVA sponges are easy to insert and remove, made of inert and non-biodegradable materials and yet are soft enough to be sectioned for histological analysis2,5.
In wound healing the PVA sponge is very useful for analyzing granulation tissue formation, collagen deposition, wound fluid composition, and the effects of substances on the healing process1,2,5. In addition to its use in studying a wide array of attributes of wound healing, the PVA sponge has also been used in many other types of studies. It has been utilized to investigate tumor angiogenesis, drug delivery and stem cell survival and engraftment1,2,6,7. With its great alterability, prior extensive use, and reproducible results, the PVA sponge is an ideal model for many studies1,2.
Here, we will describe the preparation, implantation and retrieval of PVA sponge disks (Figure 1) in a mouse model of wound healing.

A useful tool to analyze the effects of drugs, growth factors, and/or manipulated cells in an animal model of wound repair is described. This technique utilizes the properties of a polyvinyl alcohol (PVA) sponge to deliver and contain the desired treatment and also provide a platform to be excised and analyzed.

Polivinil Alkol Sünger Model İmplantasyonu

Wound healing is a complicated, multistep process involving many cell types, growth factors and compounds1-3. Because of this complexity, wound healing ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current limitations in immunosuppression and functional neuromotor recovery. Many animal models have been developed for studying unique features of VCA, but here we present a robust reproducible model of orthotopic hind limb transplant in rats designed to simultaneously investigate both aspects of current VCA limitation: immunosuppression strategies and functional neuromotor recovery. At the core of the model rests a commitment to meticulous, time-tested microsurgical techniques such as hand sewn vascular anastomoses and hand sewn neural coaptation of the femoral nerve and the sciatic nerve. This approach yields durable limb reconstructions that allow for longer lived animals capable of rehabilitation, resumption of daily activities, and functional testing. With short-term treatment of conventional immunosuppressive agents, allotransplanted animals survived up to 70 days post-transplant, and isotransplanted animals provide long lived controls beyond 200 days post-operatively. Evidence of neurologic functional recovery is present by 30 days post operatively. This model not only provides a useful platform for interrogating immunological questions unique to VCA and nerve regeneration, but also allows for in vivo testing of new therapeutic strategies specifically tailored for VCA.

This protocol presents a robust, reproducible model of vascularized composite allotransplant (VCA) geared toward simultaneous study of immunology and functional recovery. The time invested in meticulous technique in a right mid-thigh hind limb orthotopic transplant with hand sewn vascular anastomoses and neural coaptation yields the ability to study functional recovery.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...