Prior work with regard to susceptibility testing of dalbavancin has been valuable in development of a standardized methods and acknowledgement for this work is given to JMI Laboratories, Robert Rennie and Beth Goldstein.

Antimikrobiyal duyarlılık 2, 3, 4 referans sıvı mikrodilüsyon yöntemi tüm detaylar için CLSI belgeler M7-A10 ve M100-S25 ve / veya ISO / FDIS 20776-1 bakın referans yöntemleri bazı seçenekleri için izin: Not. inokulum hazırlama ve MIC paneli üretimine özel prosedürler aynı sonuca ulaşmak için. Burada açıklanan yöntem, bir antimikrobiyal madde, Dalbavansin ilişkindir ve bazı adımlar referans prosedürü yapılabilir potansiyel çeşitli yollardan temsil eder. (Biyogüvenlik seviye 2 ile uyumlu) uygun güvenlik önlemleri 10 kullanılmalıdır. Bu Video yayın amacıyla kullanılan MIC panel format Tablo 1 &#39;de gösterilmiştir. 1. Mağaza dalbavansin Toz <ol><li> Olmayan bir defrost dondurucuda bir kurutulmuş ortamda -20 o C&#39;de tanı dereceli dalbavansin tozu, mağaza aldıktan sonra. Kullanımdan önce, toz dengelenmeye olmalıdıraçmadan önce RT ulaşır. </li></ol> 2. MIC Panel dilüsyonlarının hazırlayın <ol><li> Steril cam ya da plastik tüplerde, temiz (saf), DMSO Dalbavansin hiç daha yüksek 1600 ug / ml stok çözelti hazırlayın ve -60 ° C&#39;nin altında veya gelecekte kullanılmak üzere -20 ° C&#39;de işleme ve hazırlama deposu aynı gün kullanmak olmayan bir buz çözme dondurucu. Toz ağırlığında olduğunda toz ile alınan belgelerde verilen olarak dikkate Dalbavansin potens al, (örneğin, 800 ug / ml stok hazırlanması için Denklem 1 e bakınız). </li><li> Steril cam ya da plastik tüplerde saf DMSO ile Tablo 2&#39;de kolon 1 e (&quot;Kaynak Konsantrasyon&quot;) &#39;de gösterildiği gibi şemaya benzer hazır seyreltme ile seyreltilir. Seyreltici ve birinci tüp başlangıç ​​dalbavansin stok eklemek için başka bir pipet ölçmek için, bir pipet kullanın. Sonraki her dalbavansin stok konsantrasyonu için yeni bir pipet kullanın. </li><li> 100X son MIC paneli concent hazırlayınsaf DMSO ile tayın seyreltileri (ara konsantrasyonlar). Sütun 2, Tablo 2-4 de gösterildiği gibi, (yapılacak MIC panelleri sayısına bağlıdır kullanılacak hacim) istenen ara madde konsantrasyonu elde etmek için kaynak ve DMSO, uygun hacimleri birleştirir. </li><li> % 0.004 P80 hazırlayın: 4.9 ml dH 2 O 0.1 ml P80 eklenerek% 2 P80 taze çalışma stok çözeltisi hazırlayın Hazırlık aynı gün 0.22 mikron filtre ve kullanım çözeltisi geçirilerek sterilize edin. (CAMHB içinde 149,7 ml örneğin, 0.3 ml% 2 P80) 500 seyreltme% 2 P80: 1 yaparak% 0.004 P80 seyreltici hazırlayın. </li><li> Bundan başka Aşama 1 2,2 &#39;da hazırlanan ara konsantrasyonları sulandırmak 100% 0.004 ile takviye edilmiş bir katyon arındırılmış, Mueller Hinton suyu (CAMHB) içindeki bir (h / h) polisorbat-80 (P-80), P-80 ve / veya LHB (streptokok için) ilave 2 seyreltme: iki nihai konsantrasyonda aşılama (adım 4.3) ilave bir 1 sonuçlanacaktır. Tablo 2&#39;de sütun 6 ve 7 görün </st&gt; Rong. </li></ol> 3. MIC Panelleri hazırlayın <ol><li> MIC panelin uygun oyuklara adım 2.3 hazırlanan her dalbavansin çözeltisi 50 ul koyun ve (de büyüme kontrolü), yalnızca bir kuyuda ortamı içerir. Steril uçları bir çok kanallı pipet bu aşama için kullanılabilir. </li><li> Hemen panelleri kullanın ya da plastik torbalarda plastik film, yer mühür ve hemen ≤-20 o C (tercihen ≤-60 o C de) ihtiyaç duyulana kadar az olmayan bir defrost dondurucuda yerleştirin. Donmuş paneller kullanılması halinde, mühürleri kaldırmak ve (iyi içeriği çözülmüş kadar) Panel aşılamadan geçmeden önce 15-30 dakika süreyle laboratuvar bankta tek tek panelleri yerleştirin. </li></ol> 4. MIC Panelleri inoküle Saflık ve Kurulum Koloni Sayısı gerçekleştirin <ol><li> Bir 18-24 saat kan agar veya diğer non-selektif agar plakasından birkaç iyi izole edilmiş koloniler seçin. 1-5 ml CAMHB veya s steril döngü veya bez ve transferi ile her koloninin üst dokununbulanık oluncaya dek aline 0,5 McFarland standart eşdeğerdir. 0.5 McFarland veya fotometrik bir cihaz ile karşılaştırma yapılarak bulanıklık değerlendirin. </li><li> CAMHB içinde 100 (100 ul, 10 ml CAMHB da): preparatın 15-30 dakika içinde, inokulum 1 seyreltin. S. hariç Dalbavansin karşı test Çoğu bakteriler için pneumoniae, bu seyreltme 5 x 10 5 CFU / ml&#39;lik bir son konsantrasyonda (kabul edilebilir aralık 2-8 x 10 5 CFU / ml) sağlar. S. pneumoniae, 0.5 McFarland türbidite karşılaştırılmasına dayanarak bakteri konsantrasyonu, bu nedenle, (10 mi CAMHB +% 10 + LHB içine 400 ul) inokulum 1:25 seyreltin, daha az, tipik olarak. </li><li> Aşı hazırlama sonra 15 dakika içerisinde, steril uçları kullanarak bir çok kanallı pipet bu aşama için kullanılabilecek adım 3&#39;te hazırlanan MIC panelin (sterilite kontrolü hariç kuyu) her nihai bir inokulum 50 ul aktarma. </li><li> Bir saflık kontrolü yapıntransfer ve iyi bir seçici olmayan agar (% 5 koyun kanı ile, örneğin, triptikaz soya agar) steril döngü kullanarak pozitif büyüme denetimden 1-10 ul kısım yayarak. </li><li> (: 1000 seyreltme 1) tuzlu su 10 ml büyüme kontrolü de bir tek kanal pipet steril ucu transfer 10 ul çıkararak Kur koloni sayısı. Farklı yönlerde iki kez karıştırın ve uygun bir selektif olmayan agar ortamında (örneğin, triptikaz soya,% 5 koyun kanı agar) ve steril bir çerçevenin bulunduğu tüm agar yüzeyi üzerine yayılmış, tekrar için tek bir kanal pipet steril ucu ile 100 ul aktarma inokulum (1:10 seyreltme) eşit dağılımı sağlamak için. </li></ol> 5. inkübe MIC Paneller, Koloni Sayımı ve Saflık Tabaklar <ol><li> Plastik bantla veya kuluçka önce dar plastik kapaklı, plastik bir torba içinde en fazla 4 panellerin her MIC panelini veya yığını Seal. Alternatif olarak, t boş MIC paneli yerleştirmeken fazla 4 MIC panellerinin yığınının op, bir plastik kap içinde nemli bir kağıt havlu koyun, plastik kap ve güvenli kapaklı yakın kapta yer MIC panelleri. </li><li> 16-20 saat (stafilokoklar ve enterokoklar) ile inokülasyon 30 dakika içinde 20-24 saat (streptococci) için 35 ° C ± 2 ° C &#39;de ortam hava kuluçka makinesi içinde MIC panelleri inkübe edin. % 5 CO2 inkübatöründe inkübe streptokoklar dışında aynı koşullar altında, koloni sayımını ve saflık inkübe edin. </li></ol> 6. MIC okuyun ve Koloni Sayım Plakası; Saflık Plakası Kontrol <ol><li> Tamamen çıplak gözle tespit edilen kuyulardan bakteri üremesini engeller düşük konsantrasyon olarak MIC okuyun. </li><li> Koloni sayımı plaka üzerinde koloniler sayın. Seyreltme faktörü (1: 10,000), her bir koloni çarpın (örneğin, 50 koloni 5 x 10 5 CFU / ml&#39;ye eşittir). Kabul edilebilir bir aralık 20-80 kolonidir (2-8 x 10 5 CFU / ml) ve beğenme olarak kullanılanximate kılavuz. </li><li> Saflık plakasını kontrol edin. Tüm koloni aşama 4,1 kullanılan koloniler benzer ise, o zaman aşı saf olarak kabul edilebilir. Mevcut başka bir koloniler varsa bir kirletici MIC panelinde mevcut olması ve test tekrar edilmelidir, daha sonra bir potansiyel vardır. </li></ol> 7. Kontrol Kalite Kontrol Sonuçları. <ol><li> CLSI kalite kontrol suşları beklenen aralıkları için Tablo 3&#39;e bakınız. Sadece kalite kontrol organizmanın (ler) için dalbavansin MIC sonuçlar beklenen kapsama alanında izolatları ise testin sonuçlarını rapor. </li><li> ≥0.25 ug / ml&#39;lik bir MIC herhangi bir klinik S. elde edilirse aureus dalbavansin MIC testi tekrarlamak ve / veya doğrulama için bir referans laboratuvarına gönderin, izole. </li></ol>

<ol>
	<li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Once-weekly+dalbavancin+versus+daily+conventional+therapy+for+skin+infection.">Once-weekly dalbavancin versus daily conventional therapy for skin infection.</a> The New England journal of medicine. 370, 2169-2179 (2014).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M07-A10. Methods for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically.: Approved Standard. , (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M100-S25. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Fifth Informational Supplement. , (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+laboratory+testing+and+in+vitro+diagnostic+test+systems+--+Susceptibility+testing+of+infectious+agents+and+evaluation+of+performance+of+antimicrobial+susceptibility+test+devices+--+Part+1:+Reference+method+for+testing+the+in+vitro+activity+of+antimicrobial+agents+against+rapidly+growing+aerobic+bacteria+involved+in+infectious+diseases.">Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems -- Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices -- Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases.</a> ISO/FDIS. 20776-1, (2006).</li><li>Jones, R. N., Farrell, D. J., Flamm, R. K., Sader, H. S., Dunne, M. W., Mendes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surrogate+analysis+of+vancomycin+to+predict+susceptible+categorization+of+dalbavancin.">Surrogate analysis of vancomycin to predict susceptible categorization of dalbavancin.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. , (2015).</li><li>Turnidge, J., Paterson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Setting+and+revising+antibacterial+susceptibility+breakpoints.">Setting and revising antibacterial susceptibility breakpoints.</a> Clinical microbiology reviews. 20, 391-408 (2007).</li><li>Rennie, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+broth+microdilution+antimicrobial+susceptibility+test+results+for+dalbavancin,+a+new+glycopeptide+agent.">Factors influencing broth microdilution antimicrobial susceptibility test results for dalbavancin, a new glycopeptide agent.</a> Journal of clinical microbiology. 45, 3151-3154 (2007).</li><li>Arhin, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polysorbate+80+on+oritavancin+binding+to+plastic+surfaces:+implications+for+susceptibility+testing.">Effect of polysorbate 80 on oritavancin binding to plastic surfaces: implications for susceptibility testing.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 52, 1597-1603 (2008).</li><li>Farrell, D. J., Mendes, R. E., Rhomberg, P. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+reference+broth+microdilution+method+for+testing+telavancin:+effect+on+MIC+results+and+correlation+with+other+testing+methodologies.">Revised reference broth microdilution method for testing telavancin: effect on MIC results and correlation with other testing methodologies.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 58, 5547-5551 (2014).</li><li>Ribbon Panel, B. l. u. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Safe+Work+Practices+in+Human+and+Animal+Medical+Diagnostic+Laboratories.">Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories.</a> MMWR Supplements. 61 (01), 1-101 (2012).</li><li>Anderegg, T. R., Biedenbach, D. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+quality+control+evaluations+for+susceptibility+testing+of+Dalbavancin+(BI397),+an+investigational+glycopeptide+with+potent+gram-positive+activity.">Initial quality control evaluations for susceptibility testing of Dalbavancin (BI397), an investigational glycopeptide with potent gram-positive activity.</a> Journal of clinical microbiology. 41, 2795-2796 (2003).</li><li>Koeth, L. M., Windau, A. R., Goldstein, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Broth+Microdilution+and+Agar+Dilution+Dalbavancin+and+Vancomycin+MIC+Results+for+42+Aerobic+Gram-positive+Bacteria.+Poster+132.">Comparison of Broth Microdilution and Agar Dilution Dalbavancin and Vancomycin MIC Results for 42 Aerobic Gram-positive Bacteria. Poster 132.</a> ASM. , (2012).</li><li>Fritsche, T. R., Rennie, R. P., Goldstein, B. P., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+dalbavancin+MIC+values+determined+by+Etest+(AB+BIODISK)+and+reference+dilution+methods+using+gram-positive+organisms.">Comparison of dalbavancin MIC values determined by Etest (AB BIODISK) and reference dilution methods using gram-positive organisms.</a> Journal of clinical microbiology. 44, 2988-2990 (2006).</li><li>Mushtaq, S., Warner, M., Johnson, A. P., Livermore, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+dalbavancin+against+staphylococci+and+streptococci,+assessed+by+BSAC+and+NCCLS+agar+dilution+methods.">Activity of dalbavancin against staphylococci and streptococci, assessed by BSAC and NCCLS agar dilution methods.</a> The Journal of antimicrobial chemotherapy. 54, 617-620 (2004).</li><li>Jones, R. N., Flamm, R. K., Sader, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+of+dalbavancin+potency+and+spectrum+in+the+United+States+(2012).">Surveillance of dalbavancin potency and spectrum in the United States (2012).</a> Diagnostic microbiology and infectious disease. 76, 122-123 (2013).</li></ol>

Sandra McCurdy Durata Therapeutics bir çalışanı olduğu; Laboratuvar Uzmanları, Inc., Laura Koeth ve Jeanna Fisher işveren, yazının hazırlamak için Durata Therapeutics tarafından ihale edildi. Bu yazı için Yayın ücretleri Laboratuvar Uzmanları, Inc. tarafından ödendi

Dalbavansin MIC testi için hazırlarken aşağıdaki yöntem detayları ek hususlar için sunulmuştur. Antimikrobiyal maddeler sayısı (yani., Tek başına ya da çok sayıda dalbavansin maddeler) ve bakteri türleri, test edilecek test edilecek MIC panelinin tasarımı bağlı olacaktır. Dalbavansin konsantrasyonları en az bir QC suşu için beklenen test edilecek tüm bakteri türlerinin ve dilüsyonlarının tüm aralığı için yorumlayıcı kesme noktalarını içermelidir. Antimikrobiyal seyreltme serisi, antimikrobiyal maddeler ve / veya / plaka ve inokülasyon yöntemini yalıtır sayısına bağlı olarak satırlar veya sütunlar ya organize edilebilir. Dalbavansin tozu ve suyu hacmi optimal miktarlarının üretildiği ve atık az olduğundan emin olmak için hesaplanmalıdır. Bu yayında kullanılan Örneğin, cildi, iki MIC panellerin hazırlanması dayanmaktadır. Katyon düzeltilmiş Mueller Hinton suyu adama göre hazırlanan ve otoklavlanmalıdırolarak üreticinin talimatları ve medya sterilite doğrulandı. MIC panel yapılmıştır ve hazırlık aynı günde veya kullanılmış, uygun kalite kontrol organizmalar ve gelecekte kullanılmak üzere dondurulabilir saklanan doğrulanmış paneller ile test edilebilir edilebilir. Bu prosedür boyunca steril teknikleri kullanmak önemlidir. Koloni sayıları ile inokulum konsantrasyonu doğrulanması için kesin kriter yoktur. Koloni sayımları aşama 4,2 gerçekleştirilen seyreltme adımı doğrulamak için periyodik olarak test ve / veya her tür için, başlangıçta kontrol edilebilir. Bu 0,5 McFarland standardına geçerliliği de E. ile rutin olarak kontrol edilmesi önemlidir 4.5 adım e benzer bir prosedür kullanılarak E. coli ATCC 25922. Sonuçlar 1-2 x 10 8 CFU denk değilse / ml, yeni 0,5 McFarland standart alınmalıdır. MIC kuyulardan koloni sayımları kabul edilebilir aralığın dışında ise (klinik izolat (ler) için 2-8 x 10 5 CFU / ml ve MIC sonuçları inci değişirE beklenen normal dağılım (örn. 0,03-0,12 ug / S. aureus için ml) ve / veya kalite kontrol izolatı (ler) için MIC sonuçlar beklenen aralıkların dışında, doğrulama testleri gereklidir ve yöntem değiştirme garantili olabilir. Bir valide 0,5 McFarland standart koloni sayısı (ler) tekrar için kullanılan ileri sürülmektedir ve sonuçları beklenen sonuçların dışında yine eğer, adım 4.2 gerçekleştirilen şekilde aşı seyreltme buna göre ayarlanmalıdır ve MIC tekrarladı. Koloni sayımı işlemi mutlaka kirletici organizmaların düşük konsantrasyonlarda tespit olmayabilir seyreltilmiş hacmi kullanır çünkü koloni sayımı yapılır bile saflık kontrolü gerekli olduğunu unutmayın. MIC testi geçerli sayılabilmesi için, kabul edilebilir bir büyüme de büyüme kontrolü yapılmalıdır. Dalbavansin karşı test edilecektir çoğu bakteriler için (yani., Stafilokoklar, streptokoklar ve enterokoklar, büyüme bir düğme (genellikle&gt; 2 mm) ve daha az fr olarak görülecektirequently büyüme kuyuda bulanıklık olarak görünebilir. Konsantrasyonları arttıkça etkisi sondaki görülebilir bazı antimikrobiyal ajanların aksine, dalbavansin uç noktaları genellikle iyi tanımlanmıştır. Sürece kuyularda büyümeyi ayırt yeteneği hiçbir uzlaşma olmadığı için dalbavansin içeren plakalar okumak için kullanılan olabilir okuma mikrodilüsyon testleri kolaylaştırmak amacıyla çeşitli görüntüleme cihazları vardır. Protokol içindeki kritik adım Dalbavansin ve P80 eklenmesi çözünürlük ile ilişkili prosedür parçaları ile ilgilidir. Bu besiyeri seyreltmeleri hale getirmek için bu DMSO çözücü olarak kullanılır ve bu ara ürün konsantrasyonları DMSO içinde hazırlanmaktadır, kullanılan Dalbavansin maksimum konsantrasyonu büyük olmayan 1.600 den ug / ml olması özellikle önemlidir, böylece MIC nihai DMSO konsantrasyonu, Panel kuyuları% 1 daha büyüktür. DMSO higroskopiktir ve bu nedenle, DMSO eski şişelerin kullanımı considerat oldudalbavansin çözünürlüğü ile ilgili olarak iyon. Kalite kontrol suşları ile küçük BMD çalışma bu göstermiştir Ancak, (sonuçlar bölümüne bakınız) önemli bir değişken olarak değil, bu DMSO yeni veya yakın zamanda açılan şişe kullanmak iyi bir uygulamadır. Bu P80, ilaç seyreltme hazırlama son aşamada çorbasına eklendiği de önemlidir ve de MIC% 0.002 nihai konsantrasyondadır. BMD prosedürü buraya dahil iyi Dalbavansin ve P-80 konsantrasyonları iki kez nihai konsantrasyon ve 50 ul inokulum ek olarak / de öylesine nihai hacim / kuyu 100 ul olduğunu 50 ul / kullanarak MIC panellerin hazırlanmasını kullanır. Tek MIC paneli biçimi, hem S. test için üretilecek için bu yöntem veriyor aureus ve S. pneumoniae lize at kanı inokulum eklenebilir, çünkü. 100 ul / oyuk ile 10 ul ilave kullanarak MIC panellerin hazırlanması için alternatif yöntemler / göz tarif edilmektedirCLSI ve ISO işlemleri. S. dalbavansin duyarlı kesme noktası aureus ≤0.12 ug / ml (FDA paket eki) &#39;dir. Son gözetim de gösterildiği gibi, izolatların çoğunluğu 0,06 ug / ml 15 seviyelerinde dalbavansin ile inhibe edilir. Kapat modal MIC duyarlı kesme, yöntem farklılıkların sonucu olarak MIC herhangi bir değişiklik duyarlılık oranları etkileyebilir. Dalbavansin için BMD prosedürü (bazı benzersiz adımları içerdiğinden, özellikle de MIC stoklar ve orta sulandırılmış ilaç ve% 0.002 P80 hazırlanması DMSO kullanımı, bu yöntem tam olarak takip etmesi zorunludur. S. aureus QC organizma 0.06 mg / ml çok açık dalbavansin modal MIC ile (ATCC 29213), yöntem varyasyon iyi bir göstergesi olmuştur ve BMD yöntemini doğrulamak için rutin olarak kullanılmalıdır. MIC sonuçları 0.03-0.12 ug beklenen yelpazesi ile iseniz / ml, ama ya düşük ya da HIG için trend olanBu aralığın h tarafı, yöntemin ayrıca doğrulama garanti edilir. % 0.002 P80 eklenmesi tüm ilgili gram-pozitif organizmalar için önerilir (staphylococcci, enterokoklar ve streptokoklar). Bununla birlikte, bu bağlayıcı, anti onun P-80 nisbetle benzer hareket at kanı lize gösterilmiştir dikkat çekicidir yeteneği ve + LHB dalbavansin streptokoklar MIC sonuçlarına ek bir etkiye sahip CAMHB P-80 eklenmesi bu. Orada test Dalbavansin hiçbir disk difüzyon yöntemi şu anda olduğundan ve yoksul KMY korelasyon ve AD sonuçları, AD yöntemi kullanılarak Dalbavansin duyarlılık testi 12, 14 tavsiye edilmez. BMD yöntemi dalbavansin yatkınlığın gelecekteki değerlendirilmesi için kullanılmalıdır ve ticari antimikrobiyal duyarlılık testlerinin geliştirilmesi için altın standart olarak.

Dalbavansin Gram-pozitif organizmaların 1 kaynaklanan akut bakteriyel deri ve deri eklerinin enfeksiyonlarının tedavisinde Mayıs 2014 yılında FDA tarafından onaylanmış bir yarı sentetik lipoglycopeptide olduğunu. Bir video formatında bu yöntemi ayrıntılı birincil hedefi doğru ve tekrarlanabilir dalbavansin duyarlılık sonuçlarının test edilmesi ve raporlanması için klinik laboratuvar ve araştırma bilim adamları açık bir rehberlik sağlamaktır. Ticari yöntemlerle antimikrobiyal bir madde MIC tespiti rutin patojenik bakterilere karşı bir ajan, in vitro etkinliğinin değerlendirilmesi için klinik laboratuarlarda gerçekleştirilir. CLSI ve ISO 2,3,4 tarafından tavsiye edilen Burada anlatılan yöntem sıvı mikrodilüsyon yöntemidir. Ve disk difüzyon ve agar dilüsyon yöntemleri (Bu yayının anda) ticari duyarlılık yöntemleri henüz mevcut değildir dalbavansin beri halen f tavsiye edilmezveya dalbavansin, referans suyu seyreltme yöntemleri 12,14 mevcut akım seçenekleridir. Bu referans yöntem ticari olmayan ve FDA laboratuvar geliştirilen testte (LDT) için düzenleyici gerekliliklere uymak zorundadır hasta testi için bu yordamı kullanabilirsiniz ABD&#39;de in vitro diagnostik yöntem, klinik laboratuvarlar temizlenir gibi. Bu dalbavansin kullanım arttıkça, daha fazla laboratuvarlar bu bileşiği test etmek için bir ihtiyaç olacağı tahmin edilmektedir. S. dalbavansin karşı hassasiyetlerinin belirlenmesi için bir vekil olarak vankomisin testi aureus 5 onaylanmıştır. Bununla birlikte, dalbavansin vankomisin ara madde S. karşı etkin olabilir aureus (VISA) ve bu nedenle, klinisyenlerin dalbavansin MIC sonuçlarını isteyebilir. Buna ek olarak, diğer bakteri türleri için MIC sonuçları istenebilir. S. karşı Dalbavansin FDA duyarlı kesme aureus ≤0.12 ug / ml&#39;de kurulmuştur. FDA atanmış yalnızca susceptiÇünkü dirençli izolatların verilerinin eksikliği ble kategorisi. Vahşi tip S. arasında, normal dağılım MIC aureus 0.06 ug / ml &#39;lik bir açık modal MIC ug 0,03-0,12 arası / ml vardır. Sözü geçen yöntemin farkı MIC sonuçları küçük bir farklılık, ±, bir seyreltme doğasında BMD değişime ek olarak, potansiyel olarak duyarlılık oranları üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Diğer lipoglycopeptide ajanlara benzer 6, dalbavansin duyarlılık testi sonucu zor olabilir Çözünürlük ve molekülün nispeten büyük bir boyutu ve bağlanma özellikleri 7,8,9 arasında. Burada tarif edilen bir referans BMD yöntemi çözülmeyen maddeler ve / veya lipoglycopeptide maddeler için benzersiz olan iki spesifik adımları içerir: (1) Nihai MIC panelinde Stok çözeltilerin hazırlanması ve% 0.002 P-80 (2) ek olarak DMSO kullanımı dilüsyonları. Bu videoyu yayının amacı dalbavansin BMD yöntemi ve Istenen özelliklere netlik sağlamak içinLly doğru ve tekrarlanabilir MIC sonuçları sağlamak için, bu önemli adımlar odaklanın.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dalbavancin</td>
			<td>Metrics, Inc.</td>
			<td>Greenville, NC</td>
			<td>BI-397</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>St. Louis, MO</td>
			<td>C5793</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cation Adjusted Mueller Hinton Broth</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>Sparks, MD</td>
			<td>212322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysed horse blood</td>
			<td>Cleveland Scientific</td>
			<td>Bath, OH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dose-it peristaltic pump</td>
			<td>Integra Biosciences</td>
			<td>Hudson, NH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel pipet (Viaflo II)</td>
			<td>Integra</td>
			<td>Hudson, NH</td>
			<td>4164</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 channel pipet (Matrix)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Waltham, MA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channelpPipets (Ovation 10 &#181;L - 100 &#181;L)</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>Brewster, NY</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well microplate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>Monroe, NC</td>
			<td>650161</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL flat cap conical bottom centrifuge tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Waltham, MA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16x125mm disposable glass tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Waltham, MA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12x17mm snap cap, polystyrene tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Waltham, MA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 mL centrifuge tubes</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>Kaysville, UT</td>
			<td>C-3394-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent reservoirs</td>
			<td>Integra Biosciences</td>
			<td>Hudson, NH</td>
			<td>4312</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterilelLoops (1 uL &#38; 10 uL)</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>Lenexa, KA</td>
			<td>65-0001,65-0010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy agar + 5% sheep blood</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>Sparks, MD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator (ambient)</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator (5% CO2)</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Waltham, MA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td></td>
			<td>52817</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a reference broth microdilution method for dalbavancin in vitro susceptibility testing of bacteria that grow aerobically

Antimikrobiyal duyarlılık testi (AST), çeşitli bakterilere karşı antimikrobik maddelerin in vitro aktivitesini değerlendirmek için gerçekleştirilmektedir. Minimum inhibe edici konsantrasyonlar (MIC) olarak ifade edilmiştir AST sonuçlar, direnç gelişme antimikrobiyal gelişimi ve izlenmesi için araştırma ve antimikrobiyal tedavisi rehberlik için klinik ortamda kullanılır. Dalbavansin Gram-pozitif organizmaların neden olduğu akut bakteriyel deri ve deri eklerinin enfeksiyonlarının tedavisinde Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından Mayıs 2014 yılında kabul edildi yarı sentetik lipoglycopeptide antimikrobiyal ajandır. Mevcut anti-stafilokok tedavileri karşısında Dalbavansin avantajı, haftada bir dozlama için izin veren, uzun yarılanma ömrü vardır. Dalbavansin, koagülaz-negatif stafilokoklar (hem metisiline duyarlı S. aureus [MSSA] ve metisilin dirençli S. aureus [MRSA] dahil) Staphylococcus aureus karşı aktiviteye sahiptir <em&gt; Streptococcus pneumoniae, Streptococcus anginosus grubu, β-hemolitik streptokoklar ve vankomisin duyarlı enterokok. Plastik maddenin yapışmasını azaltmak için stok solüsyonları ve polisorbat 80 (P80) hazırlarken diğer yeni lipoglycopeptide maddeleri, CLSI ve ISO suyu duyarlılık test yöntemleri optimizasyonu benzer şekilde, bir çözücü olarak dimetil sülfoksit (DMSO) kullanımını içerir. Klinik çalışmalarda ve Dalbavansin ilk gelişimi sırasında önce duyarlılık çalışmaları P-80 kullanılması ile gerçekleştirildi ve MIC sonuçları 2-4 kat daha yüksek ve daha yüksek bir MIC Benzer sonuçlar agar dilüsyon duyarlılık yöntemi ile elde edilen olma eğilimindeydi değildi. Dalbavansin ilk olarak 2005 yılında CLSI sıvı mikrodilüsyon yöntemi tablolara dahil ve DMSO ve P-80 kullanımını açıklamak için 2006 yılında değiştirilmiştir. Lapa mikro-seyreltme burada gösterilir (BMD) prosedürü Dalbavansin özgüdür ve adım adım detaylı ya da elverişli olan, CLSI ve ISO yöntemlere uygun olarak birKritik adımlar bize netlik eklendi.

Standardize MIC yöntemler direnç gelişimi, çeşitli antimikrobiyal gözetim programlarının önemli bir hedefi izlemek için gereklidir. 2011-2013 yılında Avrupa ve ABD&#39;de toplanan izolatlar için dalbavansin MİK sonuçları S.aureus% 99.9 ve streptokok% 100 (Tablo 4) için &lt;0.25 mg / ml idi. Taze (mühürlü) DMSO, QC suşları S. dalbavansin BMD MİK üçlü test kullanmanın önemini değerlendirmek için aureus ATCC 29213 ve E. ve ATCC 29212 faecalis S. test çoğaltmak pneumoniae ATCC 49619 son kullanma tarihini ve 2 yıl ve daha önce kullanılmış olan 1 L&#39;lik bir şişe sızdırmaz ampuller, (1) DMSO (2) DMSO kullanılarak gerçekleştirilmiştir (3), aynı 1 L bir DMSO alikosu kullanımdan önce 72 saat için bir açık çanak içinde kalmasına izin verilen bir şişe (Örnek 2). Her üç DMSO örnekleri ile yapılan paneller kullanılarak dalbavansin MIC sonuçları benzer ve w vardıolarak kabul edilebilir bir kalite kontrol aralıkları IŞIN (Tablo 5). P-80 ilave plastik olmadan stok çözeltisi maruz kaldıktan sonra dalbavansin aktivite kaybı de 7 belgelenmiştir. 2 ek çalışmalar, başlangıç ​​ve ara stok çözeltileri (Tablo 6), P-80 eklenmesi ve başlangıç ​​ve ara Stok çözeltilerin hazırlanması için, cam veya plastik boruların kullanımı (Tablo 7) üzerinde bir etkisi yoktu dalbavansin MIC sonuçları. Üç üreticilerin polipropilen ve polistiren levhalar (Tablo 7) kullanıldığı zaman dalbavansin MİK sonuçları üzerinde hiçbir etkisi yoktu. Streptokok test sıvısı ortamı içinde lize at kanı varlığı P-80 7, 8 ile kıyaslanabilir bir yüzey aktif madde benzeri bir aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir. Streptokoklar için dalbavansin referans yöntem her ikisi de P-80 ve lize at kanı dahil etmez ,Bununla birlikte, stafilokok ve enterokoklar farklı olarak, streptokoklar için dalbavansin MIC sonuçları ve P-80 ilavesi olmadan (+/- 1 seyreltme içinde) benzerdir. Daha önce sunulan ve Şekil 1 &#39;de gösterilmiş olduğu gibi, dalbavansin agar seyreltme (AD), MIC&#39;ler 2-8 kat daha yüksek akım BMD referans 12, 13, 14 ile karşılaştırıldığında. BMD,% 0.002 ilave aksine, P-80, tipik olarak değil MIC 12 sonuçları dalbavansin AD etkiler. <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028eq1.jpg" /> Denklem 1:. 800 ug / ml dalbavansin çözelti 25 ml dalbavansin Stok Çözeltisinin Hazırlanması Hazırlama aşamalarının örneği. <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028fig1.jpg" /> AD dalbavansin ve Vankomisin BMD Şekil 1. karşılaştırılması. Dalbava karşılaştırıldığında çalışmanın sonuçlarıprogramcısı tarafından araya ve vankomisin BMD basıp Gram-pozitif bakteri izolatları için AD MİK sonuçları. Ortalama (A) dalbavansin ve (B) 15 Staphylococcus aureus, 8 koagülaz negatif stafilokok (KNS), 5, Enterococcus faecalis ve 14 Streptokoklar için ug / ml Vankomisin sıvı mikrodilüsyon ve Agar Sulandırma MIC Sonuçları (Grup A, B, ve C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53028/53028fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> A </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL; 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> B </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> C </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> D </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> E </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td&gt; <td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> F </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> G </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 00,5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> H </td><td> DAL 0.002 </td><td> DAL 0.004 </td><td> DAL 0.008 </td><td> DAL 0.015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0.06 </td><td> DAL 0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> DAL </td><td colspan="2"> Dalbavansin </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td&gt; </td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="12"> Konsantrasyonlar 50 ul / oyuk aşılamadan sonra ug / ml olarak ifade edilmiştir </td></tr></tbody></table> Tablo 1. MIC Plaka Biçimi. Bu, video yayında, örnek olarak kullanılan dalbavansin seyreltici ve pozitif kontrol kuyuları 96 kuyucuklu plak format gösteren Yer <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Kaynak Kons. (ug / ml) </td><td> Hacim Kaynak (ml) </td><td> Hacim DMSO (mi) </td><td> Intermediate Kons. DMSO (ug / ml) </td><td> Ses Intermediate Kons. (mi) </td><td> Cilt CAMHB +% 0.004 P80 * (ml) </td><td> 2X Kons. 1 sonra: CAMHB 100 seyreltme (ug / ml) </td><td> Final Panel Kons. Mesaj aşılama (ug / ml) </td></tr><tr><td> 800 </td><td> 1.0 </td><td>1.0 </td><td> 400 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 4 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 200 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 2 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 100 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 50 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.5 </td><td> 0.25 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.25 </td><td> 0.125 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 12.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.125 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 6.25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 &lt;/ td&gt; <td> 0.5 </td><td> 3.13 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 1.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 3,5 </td><td> 0,8 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.008 </td><td> 0.004 </td></tr><tr><td> 0,8 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 0.4 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.004 </td><td> 0.002 </td></tr><tr><td colspan="5"> Bu tablo CLSI M100-S25, Tablo 8B 3 modifiye edilmiş </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Suda çözünmez Antimikrobiyal Ajanların seyreltiler hazırlanarak Tablo 2. Şema Broth seyreltileri Hassasiyet Testinde Kullanılacak. Dalbavansin çalışma çözümleri ve seyrelticilerin Birimleri nihai MIC hazırlanması için0,002-2 ug / ml dalbavansin çözümler. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Kalite Kontrol Gerginlik </td><td> Beklenen dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0,008-0,03 </td></tr></tbody></table> Önerilen suşları için Kalite Kontrol suşlar 3, 11. CLSI kalite kontrol sonuçları için Tablo 3. Beklenen dalbavansin MIC Sonuçlar doğru metodoloji doğrulamak için klinik izolatlar ile birlikte test edilecek <img alt="Tablo 4" src="/files/ftp_upload/53028/53028table4.jpg" /> ABD ve Avrupa 2011-2013 Surveill (her MIC at Number) dalbavansin MIC Sonuçlar Tablo 4. Dağılımıance Çalışması 15. In vitro aktivite geçerli Dalbavansin bir göstergesi olarak son klinik izolat yayımlanmış bir çalışmanın dalbavansin MİK sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><colgroup></colgroup><tbody><tr><td rowspan="2"> # Yalıtmak </td><td colspan="3"> Dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> DMSO 1 </td><td> DMSO 2 </td><td> DMSO 3 </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="2"><em&gt; S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 1 = Açılmamış alev 10 ml ampul kapalı </td></tr><tr><td colspan="2"> DMSO 2 = Sık açıldı 1L şişe </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 3 = Sık açıldı 1L şişe - 72 saat boyunca çıplak beher bankta oturdu </td></tr></tbody></table> Tablo 5. dalbavansin MIC sonuçları 3 Kaynaklardan DMSO DMSO stok ve Aramadde seyreltileri Hazırlama kullanılarak (ug / ml). Dalbavansin stoku ve ara-ürün seyreltileri hazırlanmasında, farklı DMSO çözücüler kullanılarak etkisini karşılaştırıldığında dalbavansin MIC çalışmanın sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> Numarasını yalıtmak </td><td rowspan="2"> Numarasını Çoğalt </td><td colspan="2"> Dalbavansin MIC (ug / ml) </td></tr><tr><td> DMSO içinde DALB ağırlık / P80 </td><td> DALB w DMSO içinde o P80 / </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. aureus, klinik DP80-002SA </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 700699 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td>S. pyogenes Klinik: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-004PY </td><td> 1 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> DP80-005PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-006PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> DP80-007PY </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-008PY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0.015 </td></tr><tr><td> S. Klinik agalactiae&#39;de: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-009AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.12 </td></tr><tr><td> DP80-010AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-011AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-012AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. dysgalactiae Clinical DP80-013DY </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae klinik: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-014SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-015SP </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-016SP </td><td> 1 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> DP80-017SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr></tbody></table> Ve% 0.002 olmadan DMSO Stok ve Orta Düzey Seyreltiler Hazırlık kullanarak Tablo 6. dalbavansin MIC Sonuçları P-80.% 0.002 P-80 stok ve ara seyreltilerini dalbavansin ekleyerek etkisini karşılaştırıldığında dalbavansin MIC çalışmanın sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="3"> Izole etmek </td><td rowspan="3"> Numarasını Çoğalt </td&gt; <td colspan="4" rowspan="2"> Stok Seyreltme Tüpler </td><td colspan="4"> Mikrotiter Plate (Plastik Türü) </td></tr><tr><td rowspan="2"> Poli-propilen, Greiner </td><td colspan="3"> Polistiren </td></tr><tr><td> Bardak </td><td> Plastik </td><td> Plastik 1saat </td><td> Plastik 1saat / Intermediate 1 saat </td><td> Greiner </td><td> Corning </td><td> Nunc </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td&gt; 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td><td> 0,03 </td><td> 0.06 </td><td> 0,03 </td></tr><tr><td rowspan="2"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.015 </td><td> 0.008 </td><td> 0.008 </td></tr><tr><td colspan="10"> Cam şişe yapılan cam = stoğu, ara madde konsantrasyonunu yapmak üzere hemen kullanılmıştırHemen kullanılan plastik tüpler, s suyu dilüsyonları yapmak. </td></tr><tr><td colspan="10"> Hemen kullanılan plastik bir santrifüj tüpüne yapılan ilk = plastik stok sıvısı seyreltiler yapmak üzere hemen kullanılmıştır plastik tüpler, içinde bir ara madde konsantrasyonları hazırlamak için. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastik bir santrifüj tüpüne yapılan plastik 1 hr = stoğu daha sonra suyu içinde konsantrasyonları hazırlamak için hemen kullanılmıştır plastik tüpler, içinde bir ara madde konsantrasyonlarını yapmak için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletin. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastik bir santrifüj tüpüne yapılan plastik 1 saat / Aramadde 1 hr = stoğu daha sonra, plastik borular içinde bir ara madde konsantrasyonları hazırlamak daha sonra suyu içinde konsantrasyonları hazırlamak için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletilir için kullanılan 1 st için tezgah üzerinde bekletin. </td></tr></tbody></table> Plastik ve Cam Tüpler ve MIC Levha Plastik Türleri Stok Seyreltiler Hazırlık kullanarak Tablo 7. dalbavansin MIC Sonuçları. O Sonuçlarfa dalbavansin da mikrotitre plakaları için farklı kaynaklardan ve plastik türlerini kullanarak etkisini stok çözelti hazırlamak ve ne zaman plastik ya da cam tüpler kullanarak etkisini karşılaştırıldı MIC çalışması.

Watch this Scientific Journal Video about A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically at JoVE.com

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology.

Dalbavansin için Başvuru sıvı mikrodilüsyon yöntemi<em&gt; İn Vitro</emAerobik Olarak Büyüyen Bakterilerin&gt; Duyarlılık Testi

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

a-reference-broth-microdilution-method-for-dalbavancin-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

28.7K Görüntüleme.  Laboratory Specialists, Inc. Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology. 

Video: A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third most common infection in US hospitals. Different manifestations of candidiasis are associated with biofilm formation, both on host tissues and/or medical devices (i.e. catheters). Biofilm formation carries negative clinical implications, as cells within the biofilms are protected from host immune responses and from the action of antifungals. We have developed a simple, fast and robust in vitro model for the formation of C. albicans biofilms using 96 well microtiter-plates, which can also be used for biofilm antifungal susceptibility testing. The readout of this assay is colorimetric, based on the reduction of XTT (a tetrazolium salt) by metabolically active fungal biofilm cells. A typical experiment takes approximately 24 h for biofilm formation, with an additional 24 h for antifungal susceptibility testing. Because of its simplicity and the use of commonly available laboratory materials and equipment, this technique democratizes biofilm research and represents an important step towards the standardization of antifungal susceptibility testing of fungal biofilms.

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

We describe a simple, rapid and robust method for the formation of Candida albicans biofilms using 96 well microtiter plates and its utility in antifungal susceptibility testing of cells within biofilms.

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. Biofilms are community-associated bacteria attached to a surface and encased in a matrix. The role of the extracellular matrix is multifaceted, including facilitating nutrient acquisition, and offers significant protection against environmental stresses (e.g. host immune responses). In an effort to acquire a better understanding as to how the bacteria within a biofilm respond to environmental stresses we have used a protocol wherein we visualize bacterial biofilms which have formed in an 8-well chamber slide. The biofilms were stained with the BacLight Live/Dead stain and examined using a confocal microscope to characterize the relative biofilm size, and structure under varying incubation conditions. Z-stack images were collected via confocal microscopy and analyzed by COMSTAT. This protocol can be used to help elucidate the mechanism and kinetics by which biofilms form, as well as identify components that are important to biofilm structure and stability.

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

This article describes the procedure for the formation and visualization of a bacterial biofilm grown within an 8-well chamber slide

8-iyi Odası Slayt in vitro Biyofilm Oluşumu

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). Antimicrobial susceptibility testing (AST) of Mtb has traditionally been performed by the agar method of proportion or by 
macrobroth testing on an instrument such as the BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Diagnostics, Cleveland, OH) or BacT/ALERT (bioM&eacute;rieux, Hazelwood, MO). The agar proportion method, while considered the &#x201C;gold&#x201D; standard of AST, is labor intensive and requires calculation of resistance by performing colony counts on drug-containing agar as compared to drug-free agar. If there is &ge;1% growth on the drug-containing medium as compared to drug-free medium, the organism is considered resistant to that drug. The macrobroth methods require instrumentation and test break point ("critical") drug concentrations for the first line drugs (isoniazid, ethambutol, rifampin, and pyrazinamide). The method described here is commercially available in a 96 well microtiter plate format [MYCOTB (TREK Diagnostics)] and contains increasing concentrations of 12 antimicrobials used for treatment of tuberculosis including both first (isoniazid, rifampin, ethambutol) and second line drugs (amikacin, cycloserine, ethionamide, kanamycin, moxifloxacin, ofloxacin, para-aminosalicylic acid, rifabutin, and streptomycin). Pyrazinamide, a first line drug, is not included in the microtiter plate due to its need for acidic test conditions. Advantages of the microtiter system include both ease of set up and faster turn around time (14 days) compared with traditional agar proportion (21 days). In addition, the plate can be set up from inoculum prepared using either broth or solid medium. Since the microtiter plate format is new and since Mtb presents unique safety challenges in the laboratory, this protocol will describe how to safely setup, incubate and read the microtiter plate.

Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis is challenging but critical for patient care. This microtiter plate format offers testing of 12 antimycobacterial drugs and provides minimum inhibitory concentration (MIC) values, which will aid in appropriate treatment.

Microtiter Plate Format Broth Seyreltme Birinci ve İkinci Line İlaçları Mycobacterium tuberculosis kompleksi Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in the thymus proper vasculature formation and patterning is essential for thymocyte entry into the organ and mature T-cell exit to the periphery. The spatial arrangement of blood vessels in the thymus is dependent upon signals from the local microenvironment, namely thymic epithelial cells (TEC). Several recent reports suggest that disruption of these signals results in thymus blood vessel defects 1,2. Previous studies have described techniques used to label the neonatal and adult thymus vasculature 1,2. We demonstrate here a technique for labeling blood vessels in the embryonic thymus. This method combines the use of FITC-dextran or Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I (GSL 1 - isolectin B4) facial vein injections and CD31 antibody staining to identify thymus vascular structures and PDGFR-&beta; to label thymic perivascular mesenchyme 3-5. The option of using cryosections or vibratome sections is also provided. This protocol can be used to identify thymus vascular defects, which is critical for defining the roles of TEC-derived molecules in thymus blood vessel formation. As the method labels the entire vasculature, it can also be used to analyze the vascular networks in multiple organs and tissues throughout the embryo including skin and heart 6-10.

This article describes a method for labeling embryonic skin and thymus blood vessels.

Embriyonik Farelerde damarları Etiketleme Bir Yöntem

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional identification requires the sub-culture of signaled blood culture broth with identification available only after colonies on solid agar have matured. MALDI-TOF MS is a reliable, rapid method for identification of the majority of clinically relevant bacteria when applied to colonies on solid media. The application of MALDI-TOF MS directly to blood culture broth is an attractive approach as it has potential to accelerate species identification of bacteria and improve clinical management. However, an important problem to overcome is the pre-analysis removal of interfering resins, proteins and hemoglobin&#160;contained in blood culture specimens which, if not removed, interfere with the MS spectra and can result in insufficient or low discrimination identification scores. In addition it is necessary to concentrate bacteria to develop spectra of sufficient quality. The presented method describes the concentration, purification, and extraction of Gram negative bacteria allowing for the early identification of bacteria from a signaled blood culture broth.

The application of matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry (MS) directly to blood culture broth expedites the identification of bacteria. The presented method is a rapid and reliable method for identification of Gram negative bacteria directly from blood culture broth.

MALDI-TOF kütle spektrometrisi kullanılarak kan kültür besi yerinden, Gram negatif bakterilerin hızlı belirlenmesi

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a rapid identification of the infectious agent to guide optimal antibiotic treatment. The analysis of Gram stains from positive blood culture can be rapidly conducted and already significantly impact the antibiotic regimen. However, the accurate identification of the infectious agent is still required to establish the optimal targeted treatment. We present here a simple and fast bacterial pellet preparation from a positive blood culture that can be used as a sample for several essential downstream applications such as identification by MALDI-TOF MS, antibiotic susceptibility testing (AST) by disc diffusion assay or automated AST systems and by automated PCR-based diagnostic testing. The performance of these different identification and AST systems applied directly on the blood culture bacterial pellets is very similar to the performance normally obtained from isolated colonies grown on agar plates. Compared to conventional approaches, the rapid acquisition of a bacterial pellet significantly reduces the time to report both identification and AST. Thus, following blood culture positivity, identification by MALDI-TOF can be reported within less than 1 hr whereas results of AST by automated AST systems or disc diffusion assays within 8 to 18 hr, respectively. Similarly, the results of a rapid PCR-based assay can be communicated to the clinicians less than 2 hr following the report of a bacteremia. Together, these results demonstrate that the rapid preparation of a blood culture bacterial pellet has a significant impact on the identification and AST turnaround time and thus on the successful outcome of patients suffering from bloodstream infections.

A rapid bacterial pellet preparation from a positive blood culture can be used as a sample for applications such as identification by MALDI-TOF, Gram staining, antibiotic susceptibility testing and PCR-based test. The results can be rapidly communicated to clinicians to improve the outcome of patients suffering from bloodstream infections.

Hızlı Bakteriyel Teşhis ve Antibiyotik Duyarlılık Testi için bir Kan Kültürü Peleti hazırlanması

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus (IAV), virus fusion with the endosomal membrane as well as the subsequent disassembly of the viral capsid, called uncoating, is governed by the ionic conditions inside endocytic vesicles. The early steps in the virus life cycle are hard to study because endosomes cannot be directly accessed experimentally, creating the need for an in vitro approach. Here, we describe a method based on velocity gradient centrifugation of purified virions through a two-layer glycerol gradient, which enables analysis of the IAV core and its stability. The gradient contains a non-ionic detergent (NP-40) in its lower layer to remove the viral membrane by solubilization as the virus sediments toward the bottom. At neutral pH, viral cores are pelleted as stable structures. The major core components, matrix protein (M1) and the viral ribonucleoproteins (vRNPs), can be clearly identified in the pellet fraction by SDS-PAGE. Decreasing the pH to 6.0 or lower in the bottom layer selectively removes M1 from the pellet followed by release of vRNPs at more acidic conditions. Viral protein bands on Coomassie-stained gels can be subjected to densitometric quantification to monitor intermediate states of IAV disassembly. Besides pH, other factors that influence viral core stability can be assessed, such as salt concentration and putative viral uncoating factors, simply by modifying the detergent-containing glycerol layer accordingly. Taken together, the presented technique allows highly reproducible and quantitative analysis of viral uncoating in vitro. It can be applied to other enveloped viruses that undergo complex uncoating processes.

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

Disassembly of influenza A virus cores during virus entry into host cells is a multistep process. We describe an in vitro method to analyze the early stages of viral uncoating. In this approach, velocity gradient centrifugation is used to biochemically dissect the steps that initiate uncoating under defined conditions.

Gradient Santrifüj tarafından İnfluenza A Virüsü Kapsidlerin Vitro Demontaj içinde

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. Regulatory systems that utilize intracellular cyclic di-GMP (c-di-GMP) as a second messenger are one such class of target. c-di-GMP is a signaling molecule found in almost all bacteria that acts to regulate an extensive range of processes including antibiotic resistance, biofilm formation and virulence. The understanding of how c-di-GMP signaling controls aspects of antibiotic resistant biofilm development has suggested approaches whereby alteration of the cellular concentrations of the nucleotide or disruption of these signaling pathways may lead to reduced biofilm formation or increased susceptibility of the biofilms to antibiotics. We describe a simple high-throughput bioreporter protocol, based on green fluorescent protein (GFP), whose expression is under the control of the c-di-GMP responsive promoter cdrA, to rapidly screen for small molecules with the potential to modulate c-di-GMP cellular levels in Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa). This simple protocol can screen upwards of 3,500 compounds within 48 hours and has the ability to be adapted to multiple microorganisms.

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

This article describes the high-throughput assay that has been successfully established to screen large libraries of small molecules for their potential ability to manipulate cellular levels of cyclic di-GMP in Pseudomonas aeruginosa, providing a new powerful tool for antibacterial drug discovery and compound testing.

Modüle c-di-GMP sinyal İşte Küçük Moleküller Tarama için Yüksek verim Kur kurulması<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in the caseous cores of cavities and lesions is especially crucial because they harbor subpopulations of drug-tolerant bacteria also commonly referred to as persisters. Existing methods for the measurement of drug penetration in tuberculosis lesions involve costly and time-consuming in vivo pharmacokinetic studies coupled to bioanalytical or imaging techniques. The in vitro measurement of drug binding to caseum macromolecules was proposed as an alternative to such techniques since this binding hinders the passive diffusion of drug molecules through caseum. Rapid equilibrium dialysis is a fast and reliable system for performing plasma protein and tissue binding studies. In this protocol, we used a rapid equilibrium dialysis (RED) device to measure drug binding to homogenates of caseum that is excised from the lesions and cavities of tuberculosis-infected rabbits. The protocol also describes how to generate a surrogate matrix from lipid loaded THP-1 macrophages to use in place of caseum. This caseum/surrogate binding assay is an important tool in tuberculosis drug discovery and can be adapted to help study drug distribution in lesions or abscesses caused by other diseases.

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

Here we describe a rapid equilibrium dialysis (RED) method to measure drug binding to caseum from pulmonary tuberculosis lesions and cavities. The protocol is also used with a foamy macrophage-derived matrix that is an effective surrogate to caseum.

bir<em&gt; In vitro</emTüberküloz Lezyonlarında İlaç Penetrasyonunu Öngören Caseum Bağlanma Testi

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

Floresans tabanlı Nöraminidaz İnhibisyonu Tahlili antivirallerin nöraminidaz inhibitörü Class Nezle Virüslerinden eğilimi değerlendirilebilir

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...