DN AB 7.ÇP projelerinin PEPDIODE (GA 256672) ve REGPOT-2012-2013-1 (GA 316157), ve İsrail Bilim Vakfı kişisel bir araştırma bursu (No 268/10) destek kabul eder. Biz konfokal mikroskopi görüntüleri çekmek için Prof. Shmuel Rubinstein, Mühendislik Okulu ve Uygulamalı Bilimler, Harvard Üniversitesi, Cambridge MA, ABD teşekkür ederim.

1. Chl bir stok Çözümler hazırlanması <ol><li> KRİTİK ADIM: ışık zararını minimuma indirmek için yeşil ışık (520 nm) veya karanlıkta altında kimyasal bir kaput klorofil hazırlık tüm adımları. Her depolama için pigmentler dondurma işleminden önce nitrojen veya argon ekleyin. Tüm çözücüler analitik dereceli olduğundan emin olun. </li><li> Tilakoit membranlarda tek Chl A içeren liyofilize Spirulina platensis&#39;in hücreleri veya diğer siyanobakteriyi hücrelerin yaklaşık 5 mg tartılır ve bir havan ve havan tokmağı kullanarak ezmek. </li><li> cam kolonuna ezilmiş hücreleri yükleyin ve karotenoidler uzaklaştırmak için yaklaşık 50-100 ml% 100 aseton ile yıkanır. akıtılarak turuncu / yeşil fraksiyonu atın. Not: turuncu fraksiyonu 100 ml aseton ile yıkanır ise yeşil fraksiyon elüte başlayana kadar aseton ile hücrelerin yıkanması devam eder. </li><li> Değişim% 100 metanol ile aseton ve CHL bir içeren yeşil kısmını toplamak. yıkandı, Fract hacmiiyon 50-100 ml arasında değişebilir. Başlangıçta, Elüe edilen fraksiyon elüsyonun sonunda soluk yeşil dönüşür koyu yeşil bir renge sahiptir. yıkandı, fraksiyonun rengi soluk yeşil içine döndüğünde elüsyon durdurun. </li><li> Ekstre tamamen kuruyana kadar bir döner buharlaştırıcı kullanılarak metanol buharlaştırın. çözüm ısı uygulamayın; evaporatör su banyosu sıcaklığı 30 ° C&#39;yi aşmayacak şekilde sağlar. Not: buharlaşma süresi buharlaştırılmadan Metanol fraksiyonunun hacmine bağlıdır ve 10-60 dakika arasında değişebilir. Tamamen kurutun önemlidir. </li><li> dietil eter (5-10 ml), küçük bir hacim içinde kurutuldu ekstreden pigmentler çözülür ve pamuk süzülür. pigmentler tam filtrelemeden önce eter emin olun. </li><li> pigmentler (10-30 dk) tamamen kuruyana kadar dietil eter buharlaşır. Not: Kuru pigment ile temizlendi ve nitrojen veya argon altında tutulabilir -20 ° C, daha sonra işlenene kadar karanlıkta. </li><li> her şey tamamen askıya bile, 100% metanol (1 mi) mümkün olan en küçük hacimde, kuru pigment çözülür. çözeltiye 4 ml aseton ekleyin ve tümüyle pigmentleri eritmek için hafifçe cam itin. </li><li> Pasteur pipeti kullanılarak, DEAE sütun% 100 aseton içinde dengelenmiş Sefaroz üzerine yavaşça örnek yüklemek. </li><li> % 100 aseton ile elüte karotenoidler (turuncu-sarı bir bant). 1 h / h oranında aseton / metanol karışımı: Daha sonra, 3 Chl bir (yeşil bant) yıkayın. Not: aseton, aseton / metanol karışımının hacmi sütunu üzerine yüklenmiş Sefaroz DEAE hacmine yaklaşık olarak eşittir. </li><li> Elüent 17 olarak 2 diklorometan / n-heksan / izopropanol / metanol (h / h) karışımı: 25: 5: CHL 68 kullanılarak ince tabaka kromatografisi ile bir saflığa edin. </li><li> Chl tamamen kuruyana kadar (bir döner buharlaştırıcı kullanılarak çözücü buharlaştırılmakta 1060 dakika). Not: Kuru Chl bir nitrojen veya argon ile temizlendi ve karanlıkta -20 ° C&#39;de argon atmosferi altında depolanır. </li><li> % 100 etanol 2-4 ml kuru Chl a yeniden eriterek CHL bir stok solüsyonu hazırlayın. Not: 663 nm&#39;de Chl a ekstinksiyon katsayısı 74.400 cm-1 M-1 (83.3 cm-1 (mg / mL) -1), etanol bulunmaktadır. Tipik bir stok çözeltisi, 25 mM (23 mg / ml) &#39;in bir konsantrasyonuna karşılık gelen 1.860 OD olmalıdır. Chl 10 kat molar fazlası, bir genel ile bir karışım içinde, organik faz 5 ml, ve sulu faz 1 ve sonuçlar ml WSCP 1 mg içeren bir emülsiyon, bu stoğun 20 ul ekleyerek WSCP. </li></ol> 2. Emülsiyon Organik fazın hazırlanması Emülsiyonun Organik faz (h / h) Span 80% 4.5 ihtiva eden mineral yağ oluşur ve% 0.4 (v / v) Tween 80: edin. <ol><li> T bir 50 ml tüp 0.2 g tartılır80 Span 80, 1.8 g, ve mineral yağı 38 g kavuştu. de tüm bileşenleri karıştırın ve buz üzerinde soğumasını. Not: Organik faz, bir haftaya kadar 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol> 3. Emülsiyonun sulu fazın hazırlanması Not: emülsiyonun sulu fazı saflaştırılmış WSCP veya WSCP Aşırı Sunan Bakteriler ham ekstresi, ya meydana gelebilir. <ol><li> Saflaştırılmış WSCP ihtiva eden bir sulu fazın hazırlanması. <ol><li> 0.3-0.6 OD kadar 37 ° C&#39;de LB ortamı, 1 L WSCP plazmidi 12 içeren E.coli BL21 bakteri büyütün. </li><li> 1 mM IPTG eklenmesi ile, protein ifadesini teşvik eder. İndüksiyondan sonra 12-16 saat boyunca 30 ° C&#39;de bakterileri büyür. </li><li> 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 5000 x g&#39;de santrifüjleme ile hasat bakteri. </li><li> buz üzerinde tampon ve sonikasyon bağlama pelet (30 sn, 15 sn kapalı, beş kez) eritin. 250 ml santrifüj elde edilen topak tampon için 10 ml,protein aşırı eksprese eden hücrelere sahip LB ortamı. Not: saflaştırma yöntemine bağlı olarak, bağlama tamponu, 100 mM fosfat tamponu, pH 7.2 ya da 50 mM Tris, pH 7.5, 500 mM NaCI, 5 mM EDTA imal edilebilir. </li><li> 4 ° C&#39;de 30 dakika boyunca 12,000 xg&#39;de hücre lizatının Spin. </li><li> afinite kromatografisi ile WSCP saflaştınlır. WSCP kaynaşmış etiketi bağlı olarak, üreticinin talimatlarına aşağıdaki protein saflaştırma için uygun ticari olarak mevcut afinite kromatografisi sistemini kullanarak rekombinant proteinleri arındırmak. </li><li> Emülsiyon hazırlanması için, 50 mM saflaştırılmış WSCP fosfat tamponu, pH 7.8 kullanımı. Sulandırma için kullanılan son protein miktarı, 1 ml tampon başına 0.5-1.0 mg olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> WSCP Ham bakteriyel lizat içeren bir sulu fazın hazırlanması. <ol><li> OD 0.3-0.6 kadar 37 ° C&#39;de LB ortamı, 250 ml plazmid ifade WSCP ihtiva eden E. coli BL21 hücrelerinden büyütün. </li><li> protein ifadesini uyarmak1 mM IPTG ve 30 ° C&#39;de gece boyunca bakteri büyür. </li><li> santrifüj ile hasat bakteri hücreleri 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 5000 x g&#39;de. </li><li> 4 ° C&#39;de 30 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de 1-2 mi 50 mM sodyum fosfat tampon maddesi, pH 7.8, sonikasyon (30 saniye, 15 saniye kapalı, üç kez) ve santrifüj pelet çözülür. </li><li> 50 mM sodyum fosfat tampon maddesi, pH 7.8 içinde 0.875 ml süpernatan 0.125 ml karıştırılarak emülsiyonun sulu fazı hazırlanır. </li></ol></li></ol> Emülsiyon Chl a ile WSCP 4. Montaj <ol><li> Bir cam şişenin içine transfer yağı yüzey aktif madde karışımının 5 ml buz üzerinde soğutulur. pipetleme önce, organik fazın tüm bileşenler iyice karıştırıldığı emin olun ve yüzey aktif maddeler ve mineral yağı ile herhangi bir faz ayrılması bulunmaktadır. </li><li> organik faz 5 ml bölüm 3&#39;te gibi hazırlanan buz soğukluğunda sulu faz 1 ml ilave edilir. </li><li> Buz üzerinde 9,500 rpm&#39;de 2 dakika boyunca, bir doku homojenleştirici kullanarak, her iki faz karıştırılır.</li><li> KRİTİK ADIM: Bu aşamadan sonra, fotohasar en aza indirmek için yeşil ışık (520 nm) altında diğer tüm adımları uygulayın. 25 mM Chl stok çözeltisi 20 ul ekle emülsiyona (bölüm 1.13 bakınız). Flicking ve cam şişe tersini dağılırlar. Chl eşit emülsiyon dağıtılır emin olun. </li><li> karanlıkta buz üzerinde 1-2 saat boyunca emülsiyonun inkübe edin. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika 14,000 x g&#39;de 1.5 ml&#39;lik plastik tüplere ve santrifüj emülsiyonun aktarmak organik fazdan emülsiyonu ve ayrı su damlacıklarının parçalamak için. Not: Montaj başarılı olursa, alt sulu faz yeşil bir renge sahip olmalıdır. </li><li> Üst yağ fazı imha ve mineral yağ 1 ml. girdap ya da iyice tüpü çevirerek pelet haline emülsiyon iyi madeni yağ karıştırın. Oda sıcaklığında 5 dakika 14,000 x g&#39;de örnek Spin. sulu ve madenci ayıran net bir menisküs kadar bu adımı yineleyinherhangi bir ara madde emülsiyon olmayan ark yağ safhaları, elde edilir. </li><li> Bir kimyasal kaputu bu adımı gerçekleştirin. Sulu ve mineral yağ safhaları, birbirinden ayrılır sonra madeni yağ çıkarın ve su ile doyurulmuş dietil eter 1 ml. Vortex ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 14.000 xg örnek aşağı doğru döndürün. İki kez bu adımı yineleyin. </li><li> İkinci santrifüj işleminden sonra dietil eter uzaklaştırılmış ve kaputu 5-20 dakika açık tüpler bırakın. </li><li> Son olarak, bir tuz giderme kolonu üzerine WSCP / Chl bir kompleks ihtiva eden sulu bir faz yük ve ileri deneyler için uygun bir tampon ile elüte. Not: Protein pH (6.0-7.5) arasında geniş bir aralıkta fosfat ve Tris tampon stabildir. Örnek bir aya kadar ışıktan korunan 4 ° C&#39;de saklanabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Bryant, D. A., Frigaard, N. -. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prokaryotic+photosynthesis+and+phototrophy+illuminated.">Prokaryotic photosynthesis and phototrophy illuminated.</a> Trends Microbiol. 14, 488-496 (2006).</li><li>Tronrud, D. E., Wen, J. Z., Gay, L., Blankenship, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+for+the+difference+in+absorbance+spectra+for+the+FMO+antenna+protein+from+various+green+sulfur+bacteria.">The structural basis for the difference in absorbance spectra for the FMO antenna protein from various green sulfur bacteria.</a> Photosynth. Res. 100, 79-87 (2009).</li><li>Schulte, T., Johanning, S., Hofmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+native+and+refolded+peridinin-chlorophyll-proteins+from+dinoflagellates.">Structure and function of native and refolded peridinin-chlorophyll-proteins from dinoflagellates.</a> Eur. J. Cell Biol. 89, 990-997 (2010).</li><li>Renger, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water+soluble+chlorophyll+binding+protein+of+higher+plants:+a+most+suitable+model+system+for+basic+analyses+of+pigment-pigment+and+pigment-protein+interactions+in+chlorophyll+protein+complexes.">Water soluble chlorophyll binding protein of higher plants: a most suitable model system for basic analyses of pigment-pigment and pigment-protein interactions in chlorophyll protein complexes.</a> J. Plant Physiol. 168, 1462-1472 (2011).</li><li>Satoh, H., Uchida, A., Nakayama, K., Okada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-soluble+chlorophyll+protein+in+Brassicaceae+plants+is+a+stress-induced+chlorophyll-binding+protein.">Water-soluble chlorophyll protein in Brassicaceae plants is a stress-induced chlorophyll-binding protein.</a> Plant Cell Physiol. 42, 906-911 (2001).</li><li>Bektas, I., Fellenberg, C., Paulsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-soluble+chlorophyll+protein+(WSCP)+of+Arabidopsis+is+expressed+in+the+gynoecium+and+developing+silique.">Water-soluble chlorophyll protein (WSCP) of Arabidopsis is expressed in the gynoecium and developing silique.</a> Planta. 236, 251-259 (2012).</li><li>Damaraju, S., Schlede, S., Eckhardt, U., Lokstein, H., Grimm, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+the+water+soluble+chlorophyll-binding+protein+in+plants.">Functions of the water soluble chlorophyll-binding protein in plants.</a> J. Plant Physiol. 168, 1444-1451 (2011).</li><li>Horigome, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+mechanism+and+photoprotective+function+of+water-soluble+chlorophyll-binding+protein.">Structural mechanism and photoprotective function of water-soluble chlorophyll-binding protein.</a> J. Biol. Chem. 282, 6525-6531 (2007).</li><li>Reinbothe, C., Satoh, H., Alcaraz, J. -. P., Reinbothe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Role+of+Water-Soluble+Chlorophyll+Proteins+in+the+Transitory+Storage+of+Chorophyllide.">A Novel Role of Water-Soluble Chlorophyll Proteins in the Transitory Storage of Chorophyllide.</a> Plant Physiol. 134, 1355-1365 (2004).</li><li>Satoh, H., Nakayama, K., Okada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+and+functional+expression+of+a+water-soluble+chlorophyll+protein,+a+putative+carrier+of+chlorophyll+molecules+in+cauliflower.">Molecular cloning and functional expression of a water-soluble chlorophyll protein, a putative carrier of chlorophyll molecules in cauliflower.</a> J. Biol. Chem. 273, 30568-30575 (1998).</li><li>Schmidt, K., Fufezan, C., Krieger-Liszkay, A., Satoh, H., Paulsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+water-soluble+chlorophyll+protein+from+Brassica+oleracea+var.+Botrys+binds+various+chlorophyll+derivatives.">Recombinant water-soluble chlorophyll protein from Brassica oleracea var. Botrys binds various chlorophyll derivatives.</a> Biochemistry. 42, 7427-7433 (2003).</li><li>Takahashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning,+characterization+and+analysis+of+the+intracellular+localization+of+a+water-soluble+Chl-binding+protein+from+Brussels+sprouts+(Brassica+oleracea+var.+gemmifera).">Molecular cloning, characterization and analysis of the intracellular localization of a water-soluble Chl-binding protein from Brussels sprouts (Brassica oleracea var. gemmifera).</a> Plant Cell Physiol. 53, 879-891 (2012).</li><li>Takahashi, S., Ono, M., Uchida, A., Nakayama, K., Satoh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+and+functional+expression+of+a+water-soluble+chlorophyll-binding+protein+from+Japanese+wild+radish.">Molecular cloning and functional expression of a water-soluble chlorophyll-binding protein from Japanese wild radish.</a> J. Plant Physiol. 170, 406-412 (2013).</li><li>Boex-Fontvieille, E., Rustgi, S., von Wettstein, D., Reinbothe, S., Reinbothe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-soluble+chlorophyll+protein+is+involved+in+herbivore+resistance+activation+during+greening+of+Arabidopsis+thaliana.">Water-soluble chlorophyll protein is involved in herbivore resistance activation during greening of Arabidopsis thaliana.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 112, 7303-7308 (2015).</li><li>Hughes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magneto-optic+spectroscopy+of+a+protein+tetramer+binding+two+exciton-coupled+chlorophylls.">Magneto-optic spectroscopy of a protein tetramer binding two exciton-coupled chlorophylls.</a> J. Am. Chem. Soc. 128, 3649-3658 (2006).</li><li>Bednarczyk, D., Takahashi, S., Satoh, H., Noy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+of+water-soluble+chlorophyll-binding+proteins+with+native+hydrophobic+chlorophylls+in+water-in-oil+emulsions.">Assembly of water-soluble chlorophyll-binding proteins with native hydrophobic chlorophylls in water-in-oil emulsions.</a> BBA - Bioenergetics. 1847, 307-313 (2015).</li><li>Fiedor, L., Rosenbach-Belkin, V., Scherz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stereospecific+interaction+between+chlorophylls+and+chlorophyllase.+Possible+implication+for+chlorophyll+biosynthesis+and+degradation.">The stereospecific interaction between chlorophylls and chlorophyllase. Possible implication for chlorophyll biosynthesis and degradation.</a> J. Biol. Chem. 267, 22043-22047 (1992).</li><li>Kamimura, Y., Mori, T., Yamasaki, T., Katoh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+properties+and+a+possible+function+of+a+water-soluble+chlorophyll+a/b-protein+from+brussels+sprouts.">Isolation, properties and a possible function of a water-soluble chlorophyll a/b-protein from brussels sprouts.</a> Plant Cell Physiol. 38, 133-138 (1997).</li><li>Murata, T., Itoh, R., Yakushiji, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallization+of+water-soluble+chlorophyll-proteins+from+Lepidium+virginicum.">Crystallization of water-soluble chlorophyll-proteins from Lepidium virginicum.</a> Biochim. Biophys. Acta. 593, 167-170 (1980).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Amacımız, hidrofobik pigmentler ile suda çözünür klorofil bağlama proteinlerinin kurulması için bir yeni genel sistem geliştirmektir. Burada W / O emülsiyon dayalı yeni sulandırma sistemi rekombinant olarak E. ifade Brüksel lahanası, karnabahar, Japon horseradish ve Virginia pepperweed gelen WSCP apoproteinlerden montajı için çalışmaya kanıtlanmış genel bir yaklaşım olduğu gösterilmiştir E. coli. Burada sonuç Chl, bir 10-misli molar fazlası ile WSCP 1 mg yeniden o...

Bu tür klorofil (Chls), bacteriochlorophylls (BChls) ve karotenoidler gibi hidrofobik pigmentler elektron taşıma ve ışık enerjisi yakalama ve transfer yürütmek fotosentetik reaksiyon merkezleri ve hafif hasat proteinler birincil kofaktörleridir. Reaksiyon merkezleri ve Chl bağlayıcı ışık toplayıcı komplekslerinin en transmembran proteinlerdir. Olmayan oksijenik fotosentez yeşil-sülfür bakterilerin 1,2 Fenna-Matthews-Olson (FMO), protein, ve dinoflagellatlar 3 peridinin-Chl proteini (PCP) suda çözünür ışık toplayıcı proteinlerin olağanüstü örneklerdir. Suda çözünür klorofil bağlama proteinleri (WSCPs) Brassicaceae, Polygonaceae, Chenopodiaceae ve Amaranthaceae bitkiler 4, 5, başka bir eşsiz bir örnek, henüz FMO ve PCP aksine, bu hafif hasat ne de birincil fotosentetik reaksiyon herhangi de katılmaktadırlar ve onların kesin physiological fonksiyonları henüz 5-8 belirsizdir. Bunların yüksek Chl-bağlama çekiciliği, geçici Chls taşıyıcıları ve CHİ türevleri 9,10 olarak önerilen bir işleve yol açmıştır. Seçenek olarak ise, bu WSCP zarar hücrelerde Chls tutucu bir rol oynar ve Chl kaynaklı fotooksidatif hasara 7,11-13 karşı koruma olduğu varsayılmıştır. Daha yakın zamanda, bir proteaz inhibitörü olarak bu WSCP işlevleri ileri ve otçul direnci sırasında önemli bir rol oynar gibi çiçek gelişimi 14 esnasında hücre ölümünü düzenlemektedir. WSCPs kendi fotofiziksel özelliklere göre iki ana sınıfa ayrılır. Birinci sınıf (sınıf I, örneğin. Chenopodium albümünden) aydınlatma üzerine Fotoçevrim uğrayabilir. Fotoçevrim 5,10 uğramayan Brassica bitkileri, gelen Sınıf II WSCPs, başka bir sınıfı IIa bölünmüştür (örn., Brassica oleracea, Raphanus sativus elde edilmiş) ve IIb (örn., Lepidium virginicum gelen </em&gt;). Lepidium virginicum Sınıf IIb WSCP yapısı 2.0 Å çözünürlükte 8 X-ışını kristalografisi tarafından çözüldü. Bu protein alt-birimleri, bir hidrofobik çekirdek oluşturan bir simetrik homotetramer ortaya koymaktadır. Her bir alt-birimi, tüm Chl düzenlemesi Chl-protein kompleksleri bağlanmasını ve montaj çalışmaları için WSCPs potansiyel olarak yararlı bir model sistemi sağlar, basit core.This içinde dört yakından dolu Chls sıkı bir düzenleme ile sonuçlanan tek bir CHL ve Chls komşu etkilerini bağlanan ve bireysel Chls spektral ve elektronik özellikleri protein ortamları. Ayrıca, yapay fotosentetik cihazlar ışık hasat modüller için kullanılabilir yapay Chl bağlayıcı proteinler oluşturmak için şablon sağlayabilir. Bitkilerden izole kompleksleri her Chl a farklı kombinasyonları ile tetramerleri heterojen bir karışımı içerdiğinden nativ WSCPs titiz çalışmaları mümkün değildirve Chl b 9. Bu nedenle, in vitro Chls ile rekombinant olarak ifade WSCPs monte edilmesi için bir yöntem olup gereklidir. Bu 15 gösterilmiştir tilakoit membranlarla apoprotein karıştırarak. Imkansız basit sulu çözeltiler içinde pigmentler ile suda çözünür apoprotein karıştırılmasıyla in vitro kompleks montajı yapar Chls ihmal edilebilir suda çözünürlüğü ile in vitro olarak toplanması meydan, ama Bu yöntem, Thylakoid&#39;in nativ Chls mevcut sınırlıdır. Schmidt ve ark. rekombinant olarak E. bir histidin-etiketli proteini ifade ederek karnıbahar (CaWSCP) den WSCP ile birkaç Chl ve BChl türevleri montaj bildirildi E. coli, bir Ni-afinite sütunu üzerine hareketsiz ve deterjanlar 11 içinde çözünür Chl türevleri sokulması. Başarıyla A. Rekombinant WSCPs yeniden oluşturulması thaliana 6, ve Brüksel lahanası (BoWSCP), Japon turp (RshWSCP) birbenzer bir yöntemle D Virginia pepperweed (LvWSCP) bildirilmiştir. Burada, bir roman, proteinler etiketleme gerektirmez WSCP ile Chls montaj veya immobilize genel, basit bir yöntem mevcut. Mineral yağ içinde suda çözünür apoproteinlerden sulu çözeltilerden emülsiyonları hazırlamak dayanır. Proteinleri, hacim oranı 16 su-içinde-yağ (o / w), çok yüksek bir yüzey ile mikro damlacıklar içinde kapsüllenir. hidrofobik kofaktör daha sonra yağ içinde eritilir ve hali hazırda yağ fazından damlacıklar halinde yerleştirilir. Biz rekombinant olarak E. ifade WSCP apoproteinlerden çeşitli türevleri montajı için yöntem kullanılarak rapor Chl bir ile E. coli. Bu yeni Chl bağlayıcı proteinler geliştirmek için bir eleme sistemi olarak kullanılabilir WSCP-aşırı ifade eden bakteriler, ham lizat düzeneğini göstermektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="614">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M5904</td>
			<td style="width:196px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Span80</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">85548</td>
			<td style="width:196px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween80</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P8074</td>
			<td style="width:196px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bio-Scale Mini Profinity eXact Cartridges</td>
			<td style="width:83px;">Bio Rad</td>
			<td style="width:119px;">10011164</td>
			<td style="width:196px;">Affinity chromatography for WSCP purification with native sequence.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">His Trap HF column</td>
			<td style="width:83px;">GE Healthcare Life Science</td>
			<td style="width:119px;">17-5248-02</td>
			<td style="width:196px;">Affinity chromatography for WSCP purification with His-tag</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">DEAE Sepharose Fast Flow</td>
			<td style="width:83px;">GE Healthcare Life Science</td>
			<td style="width:119px;">17-0709-01</td>
			<td style="width:196px;">Chromatography medium for chlorophyll purification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

water in oil emulsions: a new system for assembling water-soluble chlorophyll-binding proteins with hydrophobic pigments

Klorofil (Chls) ve bacteriochlorophylls (BChls) fotosentez ışık hasat ve elektron taşıma yürütmek birincil kofaktörleridir. Onların işlevselliği eleştirel büyük ve ayrıntılı birden fazla alt transmembran protein komplekslerinin içinde kendi özel organizasyon bağlıdır. Bu kompleksler güneş enerjisi dönüşüm nasıl kolaylaştıracağını moleküler düzeyde anlamak için, protein-pigment ve pigment pigment etkileşimleri ve heyecanlı dinamikleri üzerindeki etkisini anlamak için önemlidir. Bu bulgu elde etmenin bir yolu oluşturmak ve basit suda çözünür rekombinant proteinlerle Chls komplekslerini inceleyerek gereğidir. Bununla birlikte, suda çözünür protein halinde lipofilik Chls ve BChls içeren zordur. Ayrıca, hidrofobik pigmentler ile suda çözünür proteinler montajı için kullanılabilir genel bir yöntem vardır. Burada, eşek sağlayan su içinde yağ emülsiyonları dayalı basit ve yüksek verimli sistemi göstermektedirhidrofobik Chls suda çözünür proteinlerin embly. Yeni yöntem Chl, bir ile Brassicaceae bitki (WSCP) suda çözünür klorofil bağlayıcı proteinin rekombinan versiyonları monte ile doğrulandı. Biz Chl başarılı derleme E. ifade WSCP bir kullanarak ham lizatları göstermek suda çözülebilen yeni bir Chl bağlayıcı proteinler için genetik ekran sistemi geliştirmek için kullanılabilir ve Chl-protein etkileşimleri ve montaj işlemlerinin çalışmalar için edilebilir coli hücre.

Rekombinant WSCP apoproteinler önceki bölümde tarif edilen protokole göre W / O emülsiyonları Chl A ile birleştirildi. Protokol saf WSCPs veya lizatları E. coli hücreleri WSCP aşırı eksprese eden (Şekil 1) ya da ihtiva eden sulu fazlar kullanılarak uygulanmıştır. protokol hızlı, basit ve bir doku homojenleştirici dışında herhangi bir özel ekipman gerektirmez. Bu, ilgil...

Watch this Scientific Journal Video about Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments at JoVE.com

Yağ İçinde Su Emülsiyonları: Suda Çözünür Klorofil Bağlayıcı Proteinlerin Hidrofobik Pigmentlerle Birleştirilmesine Yönelik Yeni Bir Sistem | Kimya | Video

Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

Bu yazıda, su içinde yağ emülsiyonları göre hidrofobik pigmentler ile suda çözünür proteinler monte edilmesi için, basit ve yüksek verimli bir yöntem tarif eder. Biz Brassica bitkileri E. ifade rekombinant suda çözünür-klorofil dört varyant bağlayıcı proteinler (WSCPs) ile yerli klorofil montajında ​​yöntemin etkinliğini gösteren E. coli.

Petrol Emülsiyonlar Su: Hidrofobik Pigmentler ile Suda çözünür Klorofil bağlayıcı Proteinler Montaj için Yeni Bir Sistem

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. ...

water-oil-emulsions-new-system-for-assembling-water-soluble

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Biology

Chemistry

Cellular Processes

Photosynthesis

SCIENTISTS IN ACTION

14.5K Görüntüleme.  Weizmann Institute of Science.  Bu yazıda, su içinde yağ emülsiyonları göre hidrofobik pigmentler ile suda çözünür proteinler monte edilmesi için, basit ve yüksek verimli bir yöntem tarif eder. Biz Brassica bitkileri E. ifade rekombinant suda çözünür-klorofil dört varyant bağlayıcı proteinler (WSCPs) ile yerli klorofil montajında ​​yöntemin etkinliğini gösteren E. coli. 

Video: Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. Specifically, the sapphire cell enables visual data collection from multiple loadings to solve a set of material balances to precisely determine phase composition. Ternary phase diagrams can then be established to determine the proportion of each component in each phase at a given condition. In principle, any ternary system can be studied although ternary systems (gas-liquid-liquid) are the specific examples discussed herein. For instance, the ternary THF-Water-CO2 system was studied at 25 and 40&#160;&#176;C and is described herein. Of key importance, this technique does not require sampling. Circumventing the possible disturbance of the system equilibrium upon sampling, inherent measurement errors, and technical difficulties of physically sampling under pressure is a significant benefit of this technique. Perhaps as important, the sapphire cell also enables the direct visual observation of the phase behavior. In fact, as the CO2 pressure is increased, the homogeneous THF-Water solution phase splits at about 2 MPa. With this technique, it was possible to easily and clearly observe the cloud point and determine the composition of the newly formed phases as a function of pressure.
The data acquired with the sapphire cell technique can be used for many applications. In our case, we measured swelling and composition for tunable solvents, like gas-expanded liquids, gas-expanded ionic liquids and Organic Aqueous Tunable Systems (OATS)1-4. For the latest system, OATS, the high-pressure sapphire cell enabled the study of (1) phase behavior as a function of pressure and temperature, (2) composition of each phase (gas-liquid-liquid) as a function of pressure and temperature and (3) catalyst partitioning in the two liquid phases as a function of pressure and composition. Finally, the sapphire cell is an especially effective tool to gather accurate and reproducible measurements in a timely fashion.

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus is a unique tool to study, without sampling, phase behavior under a wide range of pressures. Using a cathetometer, very precise volume measurements can be recorded to measure liquid expansion and phase composition. Thus, this synthetic method enables the study of (1) phase equilibria of multi-component mixtures and (2) the partition behavior of catalyst or model compounds as a function of pressure.

CO Faz Dengeleri Ölçümleri için yüksek basınçlı Safir Hücre<sub&gt; 2</sub&gt; / / Organik Su Sistemleri

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. ...

Kimya

In Situ Characterization of Hydrated Proteins in Water by SALVI and ToF-SIMS

This work demonstrates in situ characterization of protein biomolecules in the aqueous solution using the System for Analysis at the Liquid Vacuum Interface (SALVI) and time-of-flight secondary ion mass spectrometry (ToF-SIMS). The fibronectin protein film was immobilized on the silicon nitride (SiN) membrane that forms the SALVI detection area. During ToF-SIMS analysis, three modes of analysis were conducted including high spatial resolution mass spectrometry, two-dimensional (2D) imaging, and depth profiling. Mass spectra were acquired in both positive and negative modes. Deionized water was also analyzed as a reference sample. Our results show that the fibronectin film in water has more distinct and stronger water cluster peaks compared to water alone. Characteristic peaks of amino acid fragments are also observable in the hydrated protein ToF-SIMS spectra. These results illustrate that protein molecule adsorption on a surface can be studied dynamically using SALVI and ToF-SIMS in the liquid environment for the first time.

In Situ Characterization of Hydrated Proteins in Water by SALVI and ToF-SIMS

This work presents a protocol for liquid handling and sample introduction to a microchannel for in situ time-of-flight secondary ion mass spectrometry analysis of protein biomolecules in an aqueous solution.

SALVI ve TOF-SIMS tarafından Su Sönmüş Proteinlerin In Situ Karakterizasyonu içinde

This work demonstrates in situ characterization of protein biomolecules in the aqueous solution using the System for Analysis at the Liquid Vacuum ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

Protein Bioconjugatlar sentezi<em&gt; yoluyla</em&gt; Sistein-maleimid Kimya

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as Ru(II), Pt(II), and Rh(III). The compound, named as a water-soluble metal-organic complex array (WSMOCA), is obtained through 1) the conventional solution-chemistry-based preparation of the corresponding metal complex monomers having a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)-protected amino acid moiety and 2) their sequential coupling together with other water-soluble organic building units on the surface-functionalized polymeric resin by following the procedures originally developed for the solid-phase synthesis of polypeptides, with proper modifications. Traces of reactions determined by mass spectrometric analysis at the representative coupling steps in stage 2 confirm the selective construction of a predetermined sequence of metal centers along with the peptide backbone. The WSMOCA cleaved from the resin at the end of stage 2 has a certain level of solubility in aqueous media dependent on the pH value and/or salt content, which is useful for the purification of the compound.

A potential general method for the synthesis of water-soluble multimetallic peptidic arrays containing a predetermined sequence of metal centers is presented.

suda çözünür bir metal-organik kompleks dizi sentezi

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as ...

NMR Spectroscopy as a Robust Tool for the Rapid Evaluation of the Lipid Profile of Fish Oil Supplements

The western diet is poor in n-3 fatty acids, therefore the consumption of fish oil supplements is recommended to increase the intake of these essential nutrients. The objective of this work is to demonstrate the qualitative and quantitative analysis of encapsulated fish oil supplements using high-resolution 1H and 13C NMR spectroscopy utilizing two different NMR instruments; a 500 MHz and an 850 MHz instrument. Both proton (1H) and carbon (13C) NMR spectra can be used for the quantitative determination of the major constituents of fish oil supplements. Quantification of the lipids in fish oil supplements is achieved through integration of the appropriate NMR signals in the relevant 1D spectra. Results obtained by 1H and 13C NMR are in good agreement with each other, despite the difference in resolution and sensitivity between the two nuclei and the two instruments. 1H NMR offers a more rapid analysis compared to 13C NMR, as the spectrum can be recorded in less than 1 min, in contrast to 13C NMR analysis, which lasts from 10 min to one hour. The 13C NMR spectrum, however, is much more informative. It can provide quantitative data for a greater number of individual fatty acids and can be used for determining the positional distribution of fatty acids on the glycerol backbone. Both nuclei can provide quantitative information in just one experiment without the need of purification or separation steps. The strength of the magnetic field mostly affects the 1H NMR spectra due to its lower resolution with respect to 13C NMR, however, even lower cost NMR instruments can be efficiently applied as a standard method by the food industry and quality control laboratories.

Here, high-resolution 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy was used as a rapid and reliable tool for quantitative and qualitative analysis of encapsulated fish oil supplements.

Balık Yağı Takviyeler Lipid Profilinin Rapid Değerlendirilmesi için Sağlam Aracı Olarak NMR Spektroskopisi

The western diet is poor in n-3 fatty acids, therefore the consumption of fish oil supplements is recommended to increase the intake of these essential ...

Probing the Structure and Dynamics of Interfacial Water with Scanning Tunneling Microscopy and Spectroscopy

Water/solid interfaces are ubiquitous and play a key role in many environmental, biophysical, and technological processes. Resolving the internal structure and probing the hydrogen-bond (H-bond) dynamics of the water molecules adsorbed on solid surfaces are fundamental issues of water science, which remains a great challenge owing to the light mass and small size of hydrogen. Scanning tunneling microscopy (STM) is a promising tool for attacking these problems, thanks to its capabilities of sub-&#197;ngstr&#246;m spatial resolution, single-bond vibrational sensitivity, and atomic/molecular manipulation. The designed experimental system consists of a Cl-terminated tip and a sample fabricated by dosing water molecules in situ onto the Au(111)-supported NaCl(001) surfaces. The insulating NaCl films electronically decouple the water from the metal substrates, so the intrinsic frontier orbitals of water molecules are preserved. The Cl-tip facilitates the manipulation of the single water molecules, as well as gating the orbitals of water to the proximity of Fermi level (EF) via tip-water coupling. This paper outlines the detailed methods of submolecular resolution imaging, molecular/atomic manipulation, and single-bond vibrational spectroscopy of interfacial water. These studies open up a new route for investigating the H-bonded systems at the atomic scale.

Here, we present a protocol to investigate the structure and dynamics of interfacial water at the atomic scale, in terms of submolecular resolution imaging, molecular manipulation, and single-bond vibrational spectroscopy.

Tarama tünelleme mikroskobu ve spektroskopi ile Interfacial su dinamiği ve yapısını sondalama

Water/solid interfaces are ubiquitous and play a key role in many environmental, biophysical, and technological processes. Resolving the internal ...

Heterogeneous Removal of Water-Soluble Ruthenium Olefin Metathesis Catalyst from Aqueous Media Via Host-Guest Interaction

A highly efficient transition metal catalyst removal method is developed. The water-soluble catalyst contains a newly-designed NHC ligand for the catalyst removal via host-guest interactions. The new NHC ligand possesses an adamantyl (guest) tethered linear ethylene glycol units for hydrophobic inclusion into the cavity of a &#946;-cyclodextrin (&#946;-CD) host compound. The new NHC ligand was applied to a Ru-based olefin metathesis catalyst. The Ru catalyst demonstrated excellent activity in representative ring-closing metathesis (RCM) and ring-opening metathesis polymerization (ROMP) reactions in aqueous media as well as organic solvent, CH2Cl2. After the reaction was complete, the lingering Ru residue was removed from the aqueous solution with the efficiency of more than 99% (53 ppm of Ru residue) by simple filtration utilizing a host-guest interaction between insoluble silica-grafted &#946;-CD (host) and the adamantyl moiety (guest) on the catalyst. The new Ru catalyst also demonstrated high removal efficiency via extraction when the reaction is run in organic solvent by partitioning the crude reaction mixture between layers of diethyl ether and water. In this way, the catalyst stays in aqueous layer only. In organic layer, the residual Ru amount was only 0.14 ppm in the RCM reactions of diallyl compounds.

A removable water-soluble N-heterocyclic carbene (NHC) ligand in aqueous media via host-guest interaction has been developed. We demonstrated representative olefin metathesis reactions in water as well as in dichloromethane. Via either host-guest interaction or extraction, the residual ruthenium (Ru) catalyst was as low as 0.14 ppm after the reaction.

Türdeş olmayan suda çözünen Rutenyum Organik sentezde Catalyst ana bilgisayar-Konuk etkileşim yoluyla sulu ortamdan çıkarılması

A highly efficient transition metal catalyst removal method is developed. The water-soluble catalyst contains a newly-designed NHC ligand for the catalyst ...

Stereolithographic 3D Printing with Renewable Acrylates

The accessibility of cost-competitive renewable materials and their application in additive manufacturing is essential for an efficient biobased economy. We demonstrate the rapid prototyping of sustainable resins using a stereolithographic 3D printer. Resin formulation takes place by straightforward mixing of biobased acrylate monomers and oligomers with a photoinitiatior and optical absorber. Resin viscosity is controlled by the monomer to oligomer ratio and is determined as a function of shear rate by a rheometer with parallel plate geometry. A stereolithographic apparatus charged with the biobased resins is employed to produce complex shaped prototypes with high accuracy. The products require a post-treatment, including alcohol rinsing and UV irradiation, to ensure complete curing. The high feature resolution and excellent surface finishing of the prototypes is revealed by scanning electron microscopy.

A protocol for additive manufacturing with renewable photopolymer resins on a stereolithography apparatus is presented.

Stereolithographic 3D baskı ile yenilenebilir İnceltilebilen

The accessibility of cost-competitive renewable materials and their application in additive manufacturing is essential for an efficient biobased economy. ...

A New Straightforward Method for Lipophilicity (logP) Measurement using 19F NMR Spectroscopy

Fluorination has become an effective tool to optimize physicochemical properties of bioactive compounds. One of the applications of fluorine introduction is to modulate the lipophilicity of the compound. In our group, we are interested in the study of the impact of fluorination on lipophilicity of aliphatic fluorohydrins and fluorinated carbohydrates. These are not UV-active, resulting in a challenging lipophilicity determination. Here, we present a straightforward method for the measurement of lipophilicity of fluorinated compounds by 19F NMR spectroscopy. This method requires no UV-activity. Accurate solute mass, solvent and aliquot volume are also not required to be measured. Using this method, we measured the lipophilicities of a large number of fluorinated alkanols and carbohydrates.

A New Straightforward Method for Lipophilicity logP Measurement using 19F NMR Spectroscopy

A novel and straightforward variation of the shake-flask method was developed for accurate lipophilicity measurement of fluorinated compounds by 19F NMR spectroscopy.

19F NMR spektroskopi kullanarak Lipophilicity (logP) ölçüm için yeni bir basit Yöntem

Fluorination has become an effective tool to optimize physicochemical properties of bioactive compounds. One of the applications of fluorine introduction ...

Synthesis and Bioconjugation of Thiol-Reactive Reagents for the Creation of Site-Selectively Modified Immunoconjugates

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. Yet maleimide-based conjugates display limited stability in vivo because the succinimidyl thioether linkage can undergo a retro-Michael reaction. This, of course, can lead to the release of the radioactive payload or its exchange with thiol-bearing biomolecules in circulation. Both of these processes can produce elevated activity concentrations in healthy organs as well as decreased activity concentrations in target tissues, resulting in reduced imaging contrast and lower therapeutic ratios. In 2018, we reported the creation of a modular, stable, and easily accessible phenyloxadiazolyl methyl sulfone reagent &#8212; dubbed &#8216;PODS&#8217; &#8212; as a platform for thiol-based bioconjugations. We have clearly demonstrated that PODS-based site-selective bioconjugations reproducibly and robustly create homogenous, well-defined, highly immunoreactive, and highly stable radioimmunoconjugates. Furthermore, preclinical experiments in murine models of colorectal cancer have shown that these site-selectively labeled radioimmunoconjugates exhibit far superior in vivo performance compared to radiolabeled antibodies synthesized via maleimide-based conjugations. In this protocol, we will describe the four-step synthesis of PODS, the creation of a bifunctional PODS-bearing variant of the ubiquitous chelator DOTA (PODS-DOTA), and the conjugation of PODS-DOTA to the HER2-targeting antibody trastuzumab.

In this protocol, we will describe the synthesis of PODS, a phenyoxadiazolyl methyl sulfone-based reagent for the site-selective attachment of cargos to the thiols of biomolecules, particularly antibodies. In addition, we will describe the synthesis and characterization of a PODS-bearing bifunctional chelator and its conjugation to a model antibody.

Sentez ve Site seçici olarak oluşturulması için Thiol reaktif reaktif Bioconjugation Immunoconjugates modifiye

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. ...

Petrol Emülsiyonlar Su: Hidrofobik Pigmentler ile Suda çözünür Klorofil bağlayıcı Proteinler Montaj için Yeni Bir Sistem

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

CO Faz Dengeleri Ölçümleri için yüksek basınçlı Safir Hücre