Tamara Zeric bu kağıt multiphoton görüntü elde etmek için yardım ettiğin için. Beyin ve davranış, Parkinson ve JPB Vakıflar, R01 MH108186 ve R01 DA07418 tarafından desteklenen. F31 bursu 1F31MH109293-01A1 S c

Tüm yordamlar içeren hayvanlar standartlara göre gerçekleştirilen Columbia Üniversitesi Tıp Merkezi Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından ayarlayın. Ötenazi ketamin ile anestezi altında servikal çıkığı üzerinden gerçekleştirilen 100 mg/kg ve xylazine 10 mg/kg intraperitoneally enjekte. Tüm cerrahi işlemler steril bir şekilde gerçekleştirilmiştir (cerrah baş kap, yüz maskesi, steril eldiven ve temiz tek kullanımlık önlük giymişti) ve cerrahi araçlar arasındaki her kullanım autoclaved.
1. presurgical adımları
<ol><li>Otoklav kısırlık emin olmak için tüm cerrahi aletler.</li>
	<li>C57bl6 fareler isoflurane (indüksiyon için % 4 ve ameliyat için % 1.5-2) ile anestezi. Arka ayak her 10 min uygun anestezi derinliği sağlamak için çimdik. Eğer konser veya arka bacak retraksiyon anestezi artırın.</li>
	<li>Veteriner göz yağ kurutma önlemek için gözler için geçerlidir.</li>
	<li>Saç saç temizleme jeli veya tıraş Tıraş ile 3 dk uygulama ile kafa derisi üzerinde kaldırın.</li>
	<li>Yer bir Isıtma yastığı veya battaniye seti 38 ° C'ye recirculating kalibre edilmiş su stereotaksik çerçeve içinde fare</li>
	<li>Subkutan presurgical analjezi sağlamak için buprenorfin (0.1 mg/kg) yönetmek için.</li>
	<li>Klorheksidin veya betadin ve % 70 etanol aplikatör uçlu bir pamuk kullanarak üç alternatif uygulamaları ile kafa derisi dezenfekte.</li>
	<li>Serum lokal anestezi sağlamak için kafa derisi altında seyreltilmiş bupivacaine %50 100 mL enjekte.</li>
</ol>2. piezoelektrik kafatası pencere cerrahi
<ol><li>Autoclaved steril cerrahi aletler kullanarak, kafa derisi 1 cm çemberi bir dairesel düzende Cerrahi makas ile kesme tarafından kafatası kaldırın. Kafa derisi kapaklarini doku kemik üzerinde açığa kafatası kapalı kaldırın.</li>
	<li>Pens ucu maruz kalan herhangi bir kapaklarini dokusunun açık kemik kazımak için kullanın. Bu diş çimento daha sonra düşmeyecek sağlamak önemlidir.</li>
	<li>En düşük ayarda titreşimle piezoelektrik cerrahi birimini ayarlayın. Daha yüksek ayarları yoğun titreşim nedeniyle kan damarlarının break unutmayın.</li>
	<li>Düzeltmek için el prob steril Dairesel ucu. Not: 4 mm Dairesel ucu ameliyatları için uygundur. Pencerenin tümünü aynı anda inceltilerek gibi büyük uç boyutu ameliyat hız için katkıda bulunur.</li>
	<li>Bir 10 mL şırınga buz soğuk yapay serebrospinal sıvı ile (ACSF) doldurmak ve el piezoelektrik el probu tutarak değil tutun.</li>
	<li>Alternatif olarak ACSF üzerine 1 mL/dk. hızında kafatası şırıngadan damlama tarafından kafatası sulamak, kafatası üzerinde konumlandırılmış bir Peristaltik pompa diğer el kullanımı ücretsiz için kullanın. Not: Sulama soğuk ACSF ile gelen yüksek frekanslı titreşimleri sürtünme nedeniyle aşırı ısınmayı önlemek önemlidir.</li>
	<li>Kafatası ile hafif dairesel hareketlerle hafifçe titreşimli cerrahi uç uygulamak (3 daire başına 1 s) ve ince ince kafatası hazırlık (5-10 dk) gerçekleştirmek için istenen derinlik kemiğe. Not: Burada, bunun için 20 µm inceltilerek 4 mm windows yapılmıştır. Ancak, pencerenin boyutunu cerrahi uç boyutu ile değişir. Kemik kalınlığı için harcanan süre kafatası için belgili tanımlık uç uygulama göre istenen derinlik ayarlanabilir.</li>
	<li>Yavaşça el prob açısı ayarlamak ve kafatası düzgün ince için kafatası basıncı uygulanırken ucu açısını değiştirmek.</li>
	<li>Herhangi bir ince kemik geride bırakmadan tam kemik kaldırma işlemini gerçekleştirmek için kemik ince çatlaklar pencere alanının görünür hale gelene kadar. İnce kemik kalan pul Forseps ile alttaki dura zarar vermeden kaldırmak.</li>
	<li>1 mm biteviye-in Kan durdurucu sargı kollajen köpük soğuk ACSF emmek. Islak köpük Forseps ile tutun ve ince kafatasında yerleştirin. Yaklaşık 30 için ince kafatası oturmak izin herhangi bir mikro durdurmak için s kanamaları gelişmekte olan.</li>
	<li>Forseps kemiğin içine inceltilerek penceresi üzerinde 4 mm cam coverslip yanal eklemenizi sağlar.</li>
	<li>Küçük bir plastik veya ahşap pamuklu aplikatör uçlu arka pencere tutmak için kafatasının yaklaşık 100 µL diş akrilik uygulamak için kullanın.</li>
</ol>3. sonrası cerrahi bakım
<ol><li>Fare cerrahi cihaz kaldır ve kurtarma için ısıtmalı bir kafeste yerleştirin. Monitör sürekli kadar (normal hareketlilik, yürüyüş ve davranış tarafından değerlendirildi) tam bilinci yerine geldi.</li>
	<li>Hayvanlar günde iki kez ameliyat sonrası ağrı azalmış aktivite, damat, yiyecek ve su tüketimi, davranış (aksakörneğin veya bir Kambur duruş) koruma veya saldırganlık artar da dahil olmak üzere belirtileri için üç gündür değerlendirmek. Tamamen iyileşmiş kadar hayvan diğer hayvanlar şirkete iade etmeyin.</li>
	<li>Buprenorfin yönetmek (0,05-0,1 mg/kg) subkutan olarak bir analjezik 8 – 12 h ameliyattan 3 gün sonra. Yakından takip ameliyat yırtılması, inflamasyon ve Enfeksiyon belirtileri için pencerenin alanını izleyin. Hayvan besleme ve davranışları damat taban çizgisine döndürmezse, olası müdahaleler veya ötenazi ile ilgili bir veteriner danışın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4, 1128-1144 (2009).</li><li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long+term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice.">Thinned-skull cranial window technique for long term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat protoc. 12, 213-220 (2010).</li><li>Dorand, D. R., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+intravital+thinned+skull+and+cranial+window+approaches+to+study+CNS+immunobiology+in+the+mouse+cortex.">Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex.</a> Intravital. 3, e29728-1-e29728-8 (2014).</li><li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull.">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat Methods. 7, 981-984 (2010).</li><li>Wang, J., Zhang, Y., Xu, T. H., Luo, Q. M., Zhu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+innovative+transparent+cranial+window+based+on+skull+optical+clearing.">An innovative transparent cranial window based on skull optical clearing.</a> Laser Physics Letters. 9, (2012).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skull+Optical+Clearing+Solution+for+Enhancing+Ultrasonic+and+Photoacoustic+Imaging.">Skull Optical Clearing Solution for Enhancing Ultrasonic and Photoacoustic Imaging.</a> IEEE Trans Med Imaging. 35, (2016).</li><li>Vercellotti, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+in+implantology:+a+case+report--a+new+piezoelectric+ridge+expansion+technique.">Piezoelectric surgery in implantology: a case report--a new piezoelectric ridge expansion technique.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 358-365 (2000).</li><li>Vercellotti, T., De Paoli, S., Nevins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+piezoelectric+bony+window+osteotomy+and+sinus+membrane+elevation:+introduction+of+a+new+technique+for+simplification+of+the+sinus+augmentation+procedure.">The piezoelectric bony window osteotomy and sinus membrane elevation: introduction of a new technique for simplification of the sinus augmentation procedure.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 6, 561-567 (2001).</li><li>Vercellotti, T., Podesta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthodontic+microsurgery:+a+new+surgically+guided+technique+for+dental+movement.">Orthodontic microsurgery: a new surgically guided technique for dental movement.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 325-331 (2007).</li><li>Stubinger, S., Stricker, A., Berg, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+in+implant+dentistry.">Piezoelectric surgery in implant dentistry.</a> Clin Cosmet Investig Dent. 7, 115-124 (2015).</li><li>Basheer, S. A., Govind, R. J., Daniel, A., Sam, G., Adarsh, V. J., Rao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Study+of+Piezoelectric+and+Rotary+Osteotomy+Technique+for+Third+Molar+Impaction.">Comparative Study of Piezoelectric and Rotary Osteotomy Technique for Third Molar Impaction.</a> J Contemp Dent Pract. 18, 60-64 (2017).</li><li>Pavlikova, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezoelectric+surgery+prevents+brain+tissue+damage:+an+experimental+study+on+a+new+rat+model.">Piezoelectric surgery prevents brain tissue damage: an experimental study on a new rat model.</a> Int J Oral Maxillofac Surg. 40, 840-844 (2011).</li></ol>

Hiçbir açıklamalar vardır.

Ameliyat cerrahi uç tarafından değiştirilebilir. El probu için uygulanabilir uç çok farklı boyutları vardır. Boyutunu veya şeklini uç değiştirme farklı ölçekli pencerelerde neden olur. 4 mm ipucu ek olarak Ayrıca güvenilir 3 mm uç ve aynı zamanda iyi çalıştı bulundu. Hatta ile sulama buz ile soğuk ACSF, biz çok (yaklaşık 0,25 mm) konsantre titreşimler neden çok fazla ısı ve zarar için alttaki dura önde gelen kemik yakma nedeniyle dar olduğunu ipuçları ile iyi sonuçlar elde etmek mümkün değildi. Biz-si olmak değil güvenilir kullanılabilir diğer ipuçları çok sayıda ve biz diğer labs yeni uygulamalar için farklı ipuçlarını bulabilirsiniz bekliyorlar. Ameliyat nispeten basit olmakla birlikte, sorun giderme gerekebilir birkaç adım vardır bulundu. Titreşimli ipucu bir sürü görünürlüğü azalır ve kemik derinlik adım cerrahinin inceltme kemik sırasında ascertaining zorluk üreten ACSF, türbülans üretir ilkidir. Ne kadar ince kemik olduğunu görmek, kafatası ve pencere kemik kenarına bir steril pamuklu çubukla uygulayarak kuru bir mola çok zor geldiğinde önerilir. Pütürlü yüzeyi ince kemiğe zarar beri pamuklu çubukla doğrudan penceresine, geçerli değildir. Derinliği kontrol sonra ACSF yeniden uygulayın ve cerrahi ile devam edin. Ayrıca beyin zarı hasar varsa, bu genellikle ucunda çok fazla baskı cerrah nedeniyle olduğunu bulduk. Büyük olasılıkla daha nazikçe el probu holding ve daha az kuvvet uygulayarak bu sorunu çözecektir. Cerrah zorla kemik ucunda kazıma, ince kemik bir ara neden ve kafatası zarar. Kemik inceltme sonra alttaki dura çürük görüntülenirse, son olarak, bu titreşimler aşırı ısı nedeniyle muhtemeldir. ACSF akış oranı artan bu sorunu çözecektir.
Ana FAZÖR el probu kemik ince, ancak tüm kemik üzerinde dura kaldıramazsınız kısıtlamasıdır. Elmas kaplamalı ucu küçük kaba diken diken vardır. Kafatası ince için gerekli sürtünme dura aşındırmak ve tüm kemik kaldırmak için kullanıldıysa kanamaya neden. Böylece, forseps kullanımına kalan ince bir tabaka kaldırmak için gereklidir. Görüntüleme ince bir kafatası ile daha az inflamasyon ve microglia ve reaktif astrocytes daha az yaygın üretir devam eden tartışmalar sırasında bazı durumlarda hiçbir kemik kalan bir pencere Örneğin,3 görüntüleme daha büyük bir derinlik sağlamak için tercih edilen, .
Kafatası pencere hazırlık farelerde multiphoton görüntüleme için optimize edilmiş. FAZÖR, bilgimizi, kemirgen kafatası pencere ameliyat optik görüntüleme için ilk uygulamaya piezoelektrik tekniği var. Farelerde piezoelektrik cerrahi kullanımı artan hız avantajları paylaşır ve insanlar7,8,9,10' da bildirilen advers azalmıştır bul. Piezoelektrik cihaz kullanımı daha hızlı ameliyat (şekil 2A) sonuçlandı ve yüksek hızlı bir rotary karşılaştırıldığında kanama daha az olumsuz olayları (şekil 2B) matkap. Ayrıca, laboratuarımızın içinde FAZÖR kafatası pencere cerrahi geleneksel yaklaşımlar daha öğrenmek yeni cerrahlar için daha kolay bulduk. Avantajları hız ve kullanım kolaylığı cerrahlar arasında farklılık muhtemeldir. İnce kafatası hazırlıklar genellikle 30-45 dk FAZÖR yaklaşım genellikle az 10 dk gerektirir iken kemik matkap ve neşter2, ince gerektirir.
Windows FAZÖR ile hazırlanan biz kalsiyum göstergesi JRGECO1a kodlama ilişkili adeno virüs ile transfected motor korteks katman 4 piramidal nöronların kalsiyum geçişler resim bulduk (AAV9. Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40). bu, ayrıca bulduk bir döner matkap ve neşter ile hazırlanan bir ince kafatası kafatası pencere karşılaştırıldığında, görüntüleme bölge döner bir matkapla hazırlanmış ince bir kafatası ise daha büyük ise ve neşter 20 µm çapı2 bir görüntüleme penceresi . FAZÖR ile hızlı bir şekilde 3-4 mm bir alan ince başardık. Bu bağlantı noktaları4ile rapor görüntüleme penceresi benzer. Bu büyük pencere hızlı görüntüleme için bir diş matkap ve neşter ile hazırlanmış ince kafatası windows rapor parası korur. Ayrıca, FAZÖR ile hazırlanan pencere hemen görüntüsü, geleneksel kemik kaldırma karşı3hafta önce pencerenin en iyi şekilde olabilir iyileşmek için gerektirebilir windows görüntüsü.
Bu teknik, beyin zarı altında damarlarında kan akımı değişiklikleri incelemek için uygulanabilir. Önemli bir gelecekteki çalışma FAZÖR immunoreactivity kafatası penceresinin diğer yöntemlerle karşılaştırmaktır. Bu FAZÖR varolan yöntemleri ile karşılaştırıldığında daha az iltihap üretir eğer belirlemek önemli olacaktır. Biz burada belgelenmiş piezoelektrik cerrahi tekniğin kafatası windows gerçekleştirmek ve başarılı bir şekilde multiphoton içinde vivogörüntüleme kullanmak daha fazla labs sağlayacak umuyoruz.
El probu en düşük ayarda titreşimle ayarlanır ve ACSF sabit bir oranda sulu olduğunu doğrulayın. ACSF sürekli uygulanması gereken buz soğuk veya bu kadar ısı ve beyin zarı zarar. Bulduğumuz ACSF en az 1 mL/her iki kullanım bir şırınga elinde tutulan veya yerleşik sulama yerine Peristaltik pompa el probu içinde kullanın dk. oranında uygulanması gerekir. El probu sulama sisteminde de zorla ACSF çıkarır ve görünürlüğünü önemli ölçüde zarar çok fazla türbülans üretir.

Kemirgenler multiphoton vivo içinde görüntüleme için hazırlamak için kafatası pencere ameliyat nörolojik önemli bir teknik haline gelmiştir. Kaldırma ya da kemiğin inceltme fare optik görüntüleme için multiphoton mikroskopla hazırlamak gereklidir. Bu ameliyat kemik alttaki dura1ortaya çıkarmak için bir bölümünü tamamen kaldırarak veya kemik dura2tam kaldırma olmadan bölge inceltme gerçekleştirilir. İnce kafatası yaklaşım daha az inflamasyon ve microglia3 aktivasyonu oluşturabilir ancak görüntüleme, daha küçük bir resim pencere boyutu (200 µm) ve sınırlı bir süre sırasında pencerenin kemik büyütme2 nedeniyle görüntüsü bir sığ derinlik sağlar . Cilalı ve güçlendirilmiş cam pencere (bağlantı noktaları) eklenmesi görüntüleme boyutunu ve görüntüleme süresini artırabilir ama4gerçekleştirmek zordur.
Geçerli her iki cerrahi bir yüksek hızlı döner tatbikat ince veya kafatasından kemik kaldırmak için kullanın. İnce kafatası tekniği bir neşter matkap sonra ilave ince kemik2için de kullanır. Bağlantı noktaları teknik yüksek hızlı kum4ile parlatma fazladan adım gerektirir. Yüksek bir hızda döner matkap, bir güç hava türbini veya elektrik motoru matkap yüksek bir hızda dönmeye neden olur. Döner matkaplar bölüm kemik ve yumuşak doku gibi beyin zarı zarar ve kan damarları temel riski vardır. Ameliyat başarısı cerrah yeteneklerinize bağlıdır. Mekanik cerrahi yöntemlerle hazırlanan bu windows ek olarak gelişmiş5,6optik farklı çözümler ile kafatası açıklığın kimyasal bir yöntem olmuştur. Piezoelektrik cerrahi cerrahi mekanik bir yöntemdir, ancak, bizim karşılaştırma diğer mekanik yöntemler sınırlı olabilir.
Piezoelektrik cerrahi cihazlar ultrasonik titreşimler mineralize kemik zarar verici temel yumuşak doku olmadan yıkmak için kullanmak ve böylece hızla kemik geniş bir alanda ince bir yaklaşım sunuyoruz. Piezoelektrik bir cerrahi el probu, türbin seramik diskler yığını tarafından değiştirilir ve akım uygulandığında, diskler ultrasonik frekansları titreşimle. Titreşimleri probundan olmadan zarar yumuşak doku, kemik doku türleri arasında ayırımcılık değil döner matkaplar üzerinde bir avantaj ile kesmek için kaplamalı ipuçları elmas için transfer edilir. Piezoelektrik cerrahi aslında insan olarak kullanılmak üzere Tomaso Vercellotti tarafından geliştirildi ve diş gelişmeler ve Kraniyo-maxilofacial ameliyat7,8,9,10,11 yol açmıştır .
Piezoelektrik cerrahi bir osteotomi de, Wistar fareler oluşturmak için kullanılan ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ve geleneksel diş matkap12' den önemli ölçüde daha az hasar üretmek için Histoloji tarafından bulundu. Yazarlar piezoelektrik ameliyat kemik yumuşak beyin dokusu yakınındaki kaldırmak için güvenli olduğu sonucuna vardı. Fareler, ancak, daha kolay zarar görmüş bir ince dura var ve bu çalışma windows kronik optik görüntüleme için hazırlamak değildi. Kronik görüntüleme kan damarları zarar görmediğinden ve kan pıhtıları pencerenin altındaki oluşturmaz gerektirir. Beyin zarı zarar yol açar penceresi bulut inflamasyon ve microglia ve reaktif astrocytes yayılması etkinleştirir. Burada piezoelektrik ameliyat fareler ince kafatası ve tam kemik kaldırma kafatası windows kronik görüntüleme için uygun oluşturmak için optimize edilmiş. Biz bir yüksek hızlı döner matkap ile hazırlanan kafatası pencere ameliyatları bu cerrahi tekniğe göre.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Piezosurgery Touch</td>
			<td>Mectron</td>
			<td>5120062</td>
			<td>Piezosurgery GP model has the same settings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular 4mm flat piezosurgery tip (# OT11)</td>
			<td>Mectron</td>
			<td>3370019</td>
			<td>This tip was ideal for our windows but there are many other tips of different sizes availible.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotax frame</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump for irrigation.</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WU-77120-42</td>
			<td>Makes it easier to irrigate and frees up the other hand to provide stability. Irrigation can be performed by hand with a syringe if necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avitene Ultrafoam</td>
			<td>Bard-Davol</td>
			<td>1050020</td>
			<td>Important to stop any minor bleeding instantly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C&#38;B Metabond</td>
			<td>Parkell</td>
			<td>S380</td>
			<td>Much stronger than regular dental acrylic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial cerebro spinal fluid (ACSF)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>3525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube opthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>JAX</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prairie Ultima multiphoton microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JRGECO1a (AAV9.Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40)</td>
			<td>UPENN Vector Core</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

piezo high accuracy surgical osteal removal (phasor): a technique for improved cranial window surgery in mice

Multiphoton mikroskobu nöronlar vivo içindegörüntüleme için yaygın olarak adapte edilmiş. Tekrarlanan görüntüleme implantasyon kafatası bir pencerenin veya tekrarlanan kafatası inceltme gerektirir. Kafatası pencere cerrahi genellikle yüksek hızlı döner matkap ile gerçekleştirilir ve birçok müfettişler matkap hassas dura ve kan damarları zarar önlemek için zor bulmak. Kapsamlı bir eğitim ve uygulama kemik alttaki dokuya zarar vermeden kaldırmak için gereklidir ve böylece kafatası pencere cerrahi zor, zaman alıcı ve doku hasarı üretmek. Çene ve diş cerrahi için yaygın olarak kullanılır, piezoelektrik ameliyat kemik yumuşak dokulara zarar vermeden kaldırmak için ultrasonik titreşimler kullanır. Kafatası pencere ameliyat multiphoton görüntüleme için hazırlık farelerde geliştirmek için Piezoelektrik cerrahi uygulama bir yöntem geliştirdik. Karşılaştırmalar laboratuarımızın içinde yöntemi daha az ameliyat süresi gerektirir ve daha düşük bir ortalama oranı dural kafatası pencere ameliyat döner bir matkapla kanama nedeniyle komplikasyonların vardır bulmak.

Piezoelektrik cerrahi ile devam etmeden önce herhangi bir kalıntı kapaklarini kafatasından kaldırın. Kafatası opak ve pürüzsüz bir kez (Şekil 1a), cerrah piezoelektrik cerrahi başlayabilir. Kemik titreşimli piezo ucu kaldırırken, bu kafatası buz ile sulamak için önemlidir soğuk ACSF. Alt uç 1 mm ACSF (Şekil 1b) batık zaman uygun sulama elde edilir. Uygun sulama kemik ısınmak ve beyin zarar. Kafatası cerrah tarafından seçilen istenen derinliğe inceltilerek sonra olabilir kan kemik bulunan gemiler artık bir kanama. Hızla tüm kanamayı durdurma, kollajen köpük bir küçük 1 mm parça uygulamak için alanı penceresi içinde ACSF batırılmış. Kollajen yaklaşık 30 için kafatası oturmak izin s (şekil 1 c). Kollajen köpük kaldırıldıktan sonra pencereyi yarı saydam, kan damarlarının açık görselleştirme dura içinde izin görünür. Beyin zarı önemli morarma olmadan olduğu gibi olacak. (Şekil 1 d). Beyin zarı kırmızı ve iltihaplı görüntülenirse, kırık kan damarları üzerinden ucuna kadar ameliyat sırasında uygulanan çok fazla baskı nedeniyle muhtemeldir. Yeni pencere korumak ve kronik görüntüleme için hazırlamak için bir cam coverslip alanın üzerinde yerleştirilmelidir. Düzgün uygulamalı cam coverslip yavaşça pencerenin üstüne oturur ve alanına herhangi bir zarar değil. Cam coverslip tüm pencereyi kapatmalı. Cam coverslip düzgün kafatası uygulanırsa, pencere saydam cam altında kalacaktır. Beyin zarı tüm kan damarlarının görülebilir (şekil 1e) olmaya devam eder. Diş akrilik kafatası yüzeye kalıcı olarak bağlı kalmak için cam coverslip etrafında uygulanması gerekir. Cam coverslip kenarlarını da diş akrilik (şekil 1f) kaplı olmalıdır.
Piezoelektrik cerrahi genellikle geleneksel bir kafatası penceresinden daha çok daha hızlı ameliyat (şekil 2A) yaklaşık 10-12 dk alarak bulundu. Ayrıca daha az komplikasyonlar nedeniyle morarma ve göz (2B rakam) tarafından gözlemlediği gibi kanama dura olduğunu bulduk. Düzgün hazırlanmış bir pencere floresan göstergelerin multiphoton görüntüleme kortikal nöronlar içinde vivoiçinde sağlayacaktır. Katman 4 kortikal nöronların hücre organlarında kırmızı kalsiyum göstergesi JRGECO1a görüntü seçtik (şekil 3A-3B). Bu hücre organları pencereden FAZÖR kullanılarak hazırlanan kalsiyum geçişler gözlemlemek.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig1.jpg"> Şekil 1: piezoelektrik ameliyat. (bir) düzgün FAZÖR için hazırlanmış olup sonra kafatası. Düzgün ve temiz bir yüzey bırakarak periosteal doku kaldırıldı. (b) FAZÖR temsilcisi bir görüntü devam ediyor. Alt cerrahi uç buzun içinde sular altında titreşimli, 1 mm soğuk ACSF. Sıvı 1 mL/dk hızında kafatası uygulanır. Hafif dairesel hareketlerle kafatası uygulanır ve kemik yolu ile ultrasonik titreşimler inceltilerek. (kafatası inceltilerek sonrac), 1 mm dairesel biteviye-in kolajen köpük soğuk ACSF kemik üzerinden herhangi bir mikro kanamaları durdurmak için pencerenin üzerinde dinlenmek için izin batırılmış. (d) A başarılı pencere saydam dura ile olduğu gibi kan damarlarının görüntüler. Görünür bir hasar veya beyin yüzeyine morarma var. (e) bir cam coverslip beyin yüzeyini korumak için penceresi üzerinde yer alıyor. (f) diş akrilik cam coverslip penceresi üzerinde kalıcı olarak düzeltmek için kafatasını uygulanır. Ölçek 1 mm tüm resimler bar.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig2.jpg"> Şekil 2. Başarı oranı eğitim FAZÖR veya diş karşılaştırılması cerrahi matkap. (A)cerrahi başına ortalama saat diş matkap ameliyatları FAZÖR için alt (p < 0,05, iki kuyruklu t Testi) n = grubu başına 30 ameliyatları ve 10 ameliyat cerrah başına ortalama. (B) başarılı ameliyatlar (dura hasar yok kanama veya görünür olarak 350 X zoom ayarlamak amacı cerrahın gözünden tarafından gözlenen olarak tanımlanan) yüzdesi diş matkap ameliyatları FAZÖR için daha yüksek (n = 30 ameliyat her grup için bir kuyruklu z testi). SD hata çubuklarını göster
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56172/56172fig3.jpg"> Şekil 3. Vivo kafatası bir pencereden görüntüleme multiphoton FAZÖR ile inceltilerek. (A)kalsiyum kırmızı kalsiyum göstergesiyle JRGECO1a gözlenen geçişler içinde fare motor korteks içinde vivokatman 4 piramidal nöronların görüntüsü. Ölçek çubuğu = 100 µm. (B) aynı pencerede ancak katman 4 motor korteksin farklı bölge. Headfixed fare FAZÖR ile hazırlanan 3 mm pencere ile. Ölçek çubuğu = 30 µm. yansıma multiphoton mikroskop ile 40 X amaç, 1040 nm uyarma dalga boyu.

Watch this Scientific Journal Video about Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal PHASOR: A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice at JoVE.com

Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal PHASOR: A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice

Piezoelektrik cerrahi insan çene ve diş cerrahi gelişmeler yol açmıştır. Piezoelektrik ameliyat farelerde beyin pencere ameliyatı için en iyi duruma getirmek için bir protokol geliştirdik.

Piezo yüksek doğruluk cerrahi Osteal kaldırma (FAZÖR): Farelerde geliştirilmiş kafatası pencere ameliyat için bir teknik

Multiphoton microscopy has been widely adapted for imaging neurons in vivo. Repeated imaging requires implantation of a cranial window or repeated ...

piezo-high-accuracy-surgical-osteal-removal-phasor-technique-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal (PHASOR): A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice

10.6K Görüntüleme.  Columbia University Medical Campus. Piezoelektrik cerrahi insan çene ve diş cerrahi gelişmeler yol açmıştır. Piezoelektrik ameliyat farelerde beyin pencere ameliyatı için en iyi duruma getirmek için bir protokol geliştirdik.

Video: Piezo High Accuracy Surgical Osteal Removal PHASOR: A Technique for Improved Cranial Window Surgery in Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or thinned-skull 3 preparations. While the open-skull technique is very versatile, it is not optimal for studying microglia because it is invasive and can cause microglial activation. Even though the thinned-skull approach is minimally invasive, the repeated re-thinning of skull required for chronic imaging increases the risks of tissue injury and microglial activation and allows for a limited number of imaging sessions. Here we present a chronic thin-skull window method for monitoring murine microglia in vivo over an extended period of time using two-photon microscopy. We demonstrate how to prepare a stable, accessible, thinned-skull cortical window (TSCW) with an apposed glass coverslip that remains translucent over the course of three weeks of intermittent observation. This TSCW preparation is far more immunologically inert with respect to microglial activation than open craniotomy or repeated skull thinning and allows an arbitrary number of imaging sessions during a time period of weeks. We prepare TSCW in CX3CR1 GFP/+ mice 4 to visualize microglia with enhanced green fluorescent protein to &le;150 &mu;m beneath the pial surface. We also show that this preparation can be used in conjunction with stereotactic brain injections of the HIV-1 neurotoxic protein Tat, adjacent to the TSCW, which is capable of inducing durable microgliosis. Therefore, this method is extremely useful for examining changes in microglial morphology and motility over time in the living brain in models of HIV Associated Neurocognitive Disorder (HAND) and other neurodegenerative diseases with a neuroinflammatory component.

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

We describe a method for repeatedly visualizing murine microglia and circulating monocytes in vivo over hours, days or weeks using transcranial two-photon microscopy. We demonstrate how to prepare a thinned-skull window that allows intermittent observation of quiescent microglia that can be activated by adjacent stereotactic injection of the HIV-1 regulatory protein Tat.

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

Nörobilim

Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, inflammatory and metabolic conditions, using in vivo fluorescence microscopy. A closed cranial window is placed over the left parieto-occipital cortex of the mice. Local microcirculation is recorded in real time through the window using epi and fluorescence illumination, and measurements of vessels diameters and red blood cell (RBC) velocities are performed. RBC velocity is measured using real-time cross-correlation and/or fluorescent-labeled erythrocytes. Leukocyte and platelet adherence to pial vessels and assessment of perfusion and vascular leakage are made with the help of fluorescence-labeled markers such as Albumin-FITC and anti-CD45-TxR antibodies. Microcirculation can be repeatedly video-recorded over several days. We used for the first time the close window brain intravital microscopy to study the pial microcirculation to follow dynamic changes during the course of Plasmodium berghei ANKA infection in mice and show that expression of CM is associated with microcirculatory dysfunctions characterized by vasoconstriction, profound decrease in blood flow and eventually vascular collapse.

Intravital microscopy to follow temporal and spatial hemodynamic and inflammatory events in the pial microcirculation.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

This experimental model was designed to assess the mouse pial microcirculation during acute and chronic, physiological and pathophysiological hemodynamic, ...

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can produce a rewarding effect that strengthens action-outcome associations and reinforces future behavior directed at obtaining these foods. Increasing evidence that the rewarding effects of energy-dense foods play a profound role in overeating and the development of obesity has heightened interest in studying the genes, molecules and neural circuitry that modulate food reward1,2. The rewarding impact of different stimuli can be studied by measuring the willingness to work to obtain them, such as in operant conditioning tasks3. Operant models of food reward measure acquired and voluntary behavioral responses that are directed at obtaining food. A commonly used measure of reward strength is an operant procedure known as the progressive ratio (PR) schedule of reinforcement.4,5 In the PR task, the subject is required to make an increasing number of operant responses for each successive reward. The pioneering study of Hodos (1961) demonstrated that the number of responses made to obtain the last reward, termed the breakpoint, serves as an index of reward strength4. While operant procedures that measure changes in response rate alone cannot separate changes in reward strength from alterations in performance capacity, the breakpoint derived from the PR schedule is a well-validated measure of the rewarding effects of food. The PR task has been used extensively to assess the rewarding impact of drugs of abuse and food in rats (e.g.,6-8), but to a lesser extent in mice9. The increased use of genetically engineered mice and diet-induced obese mouse models has heightened demands for behavioral measures of food reward in mice. In the present article we detail the materials and procedures used to train mice to respond (lever-press) for a high-fat and high-sugar food pellets on a PR schedule of reinforcement. We show that breakpoint response thresholds increase following acute food deprivation and decrease with peripheral administration of the anorectic hormone leptin and thereby validate the use of this food-operant paradigm in mice.

The present report details the protocol employed to measure the rewarding effects of high-fat food in mice using a progressive ratio operant conditioning task.

Aşamalı-oranı Farelerde Palatable Yüksek yağ ve yüksek şeker Gıda tepki

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT has been used extensively in ophthalmology, dermatology, and gastroenterology1-3. Using a thinned-skull cortical window (TSCW), we employ spectral-domain OCT (SD-OCT) modality as a tool to image the cortex in vivo. Commonly, an opened-skull has been used for neuro-imaging as it provides more versatility, however, a TSCW approach is less invasive and is an effective mean for long term imaging in neuropathology studies. Here, we present a method of creating a TSCW in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

We present a method of creating a thinned-skull cortical window (TSCW) in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği<em&gt; In Vivo</em&gt; Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Surgical Method for Virally Mediated Gene Delivery to the Mouse Inner Ear through the Round Window Membrane

Gene therapy, used to achieve functional recovery from sensorineural deafness, promises to grant better understanding of the underlying molecular and genetic mechanisms that contribute to hearing loss. Introduction of vectors into the inner ear must be done in a way that widely distributes the agent throughout the cochlea while minimizing injury to the existing structures. This manuscript describes a post-auricular surgical approach that can be used for mouse cochlear therapy using molecular, pharmacologic, and viral delivery to mice postnatal day 10 and older via the round window membrane (RWM). This surgical approach enables rapid and direct delivery into the scala tympani while minimizing blood loss and avoiding animal mortality. This technique involves negligible or no damage to essential structures of the inner and middle ear as well as neck muscles while wholly preserving hearing. To demonstrate the efficacy of this surgical technique, the vesicular glutamate transporter 3 knockout (VGLUT3 KO) mice will be used as an example of a mouse model of congenital deafness that recovers hearing after delivery of VGLUT3 to the inner ear using an adeno-associated virus (AAV-1).

The described post-auricular surgical approach allows rapid and direct delivery into the mouse cochlear scala tympani while minimizing blood loss and animal mortality. This method can be used for cochlear therapy using molecular, pharmacologic and viral delivery to postnatal mice through the round window membrane.

Yuvarlak Pencere Membran aracılığıyla Fare İç Kulak için virally ve Gen Teslimat Cerrahi Yöntemi

Gene therapy, used to achieve functional recovery from sensorineural deafness, promises to grant better understanding of the underlying molecular and ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of motor and cognitive disabilities. Its high prevalence poses a serious health burden, as stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1. Recovery of neuronal function is, in most cases, only partial. So far, treatment options are very limited, in particular due to the narrow time window for thrombolysis2,3. Determining methods to accelerate recovery from stroke remains a prime medical goal; however, this has been hampered by insufficient mechanistic insights into the recovery process. Experimental stroke researchers frequently employ rodent models of focal cerebral ischemia. Beyond the acute phase, stroke research is increasingly focused on the sub-acute and chronic phase following cerebral ischemia. Most stroke researchers apply permanent or transient occlusion of the MCA in mice or rats. In patients, occlusions of the MCA are among the most frequent causes of ischemic stroke4. Besides proximal occlusion of the MCA using the filament model, surgical occlusion of the distal MCA is probably the most frequently used model in experimental stroke research5. Occlusion of a distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA branch typically spares the striatum and primarily affects the neocortex. Vessel occlusion can be permanent or transient. High reproducibility of lesion volume and very low mortality rates with respect to the long-term outcome are the main advantages of this model. Here, we demonstrate how to perform a chronic cranial window (CW) preparation lateral to the sagittal sinus, and afterwards how to surgically induce a distal stroke underneath the window using a craniotomy approach. This approach can be applied for sequential imaging of acute and chronic changes following ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Surgical occlusion of a distal middle cerebral artery branch (MCAo) is a frequently used model in experimental stroke research. This manuscript describes the basic technique of permanent MCAo, combined with the insertion of a lateral cranial window, which offers the opportunity for longitudinal intravital microscopy in mice.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar<em&gt; İn Vivo</em&gt; Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central nervous system and thus, can be used to analyze the diseased state of the brain or spinal cord without directly accessing these tissues. However, in mice it is difficult to obtain from the cisterna magna due to its closeness to blood vessels, which often contaminate samples. The area for CSF collection in mice is also difficult to dissect to and often only small samples are obtained (maximum of 5-7 &#181;L or less). This protocol describes in detail a technique that improves on current methods of collection to minimize contamination from blood and allow for the abundant collection of CSF (on average 10-15 &#181;L can be collected). This technique can be used with other dissection methods for tissue collection from mice, as it does not impact any tissues during CSF extraction. Thus, the brain and spinal cord are not affected with this technique and remain intact. With greater CSF sample collection and purity, more analyses can be used with this fluid to further aid neuroscience research and better understand diseases affecting the brain and spinal cord.

This protocol describes an improved technique for the abundant collection of cerebrospinal fluid (CSF) with no contamination from blood. With greater sample collection and purity, more analyses can be performed using CSF to further our understanding of diseases that affect the brain and spinal cord.

Beyin omurilik sıvısı imzalat fareler gelen topluluğu için geliştirilmiş bir yöntem

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Functional MRI in Conjunction with a Novel MRI-compatible Hand-induced Robotic Device to Evaluate Rehabilitation of Individuals Recovering from Hand Grip Deficits

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is a non-invasive magnetic resonance imaging technique that images brain activation in vivo, using endogenous deoxyhemoglobin as an endogenous contrast agent to detect changes in blood-level-dependent oxygenation (BOLD effect). We combined fMRI with a novel robotic device (MR-compatible hand-induced robotic device [MR_CHIROD]) so that a person in the scanner can execute a controlled motor task, hand-squeezing, which is a very important hand movement to study in neurological motor disease. We employed parallel imaging (generalized auto-calibrating partially parallel acquisitions [GRAPPA]), which allowed higher spatial resolution resulting in increased sensitivity to BOLD. The combination of fMRI with the hand-induced robotic device allowed precise control and monitoring of the task that was executed while a participant was in the scanner; this may prove to be of utility in rehabilitation of hand motor function in patients recovering from neurological deficits (e.g., stroke). Here we outline the protocol for using the current prototype of the MR_CHIROD during an fMRI scan.

We performed functional MRI using a novel MRI-compatible hand-induced robotic device to evaluate its utility for monitoring hand motor function in individuals recovering from neurological deficits.

El Kavrama Açıklarından Kurtulan Bireylerin Rehabilitasyonunun Değerlendirilmesinde Yeni MRI Uyumlu El Kaynaklı Robotik Cihazla Birlikte Fonksiyonel MRG

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is a non-invasive magnetic resonance imaging technique that images brain activation in vivo, using endogenous ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) remain unclear. In order to adequately study the attributes of endolymphatic hydrops, such as the origins of low-frequency hearing loss, a reliable model is needed. The guinea pig is a&#160;good model because it hears in the low-frequency regions that are putatively affected by endolymphatic hydrops. Previous research has demonstrated that endolymphatic hydrops can be induced surgically via intradural or extradural approaches that involve drilling on the endolymphatic duct and sac. However, whether it was possible to create an endolymphatic hydrops model using an extradural approach that avoided dangerous drilling on the endolymphatic duct and sac was unknown. The objective of this study was to demonstrate a revised extradural approach to induce experimental endolymphatic hydrops at 30 days post-operatively by obliterating the endolymphatic sac and injuring the endolymphatic duct with a fine pick. The sample size consisted of seven guinea pigs. Functional measurements of hearing were made and temporal bones were subsequently harvested for histologic analysis. The approach had a success rate of 86% in achieving endolymphatic hydrops. The risk of cerebrospinal fluid leak was minimal. No perioperative deaths or injuries to the posterior semicircular canal occurred in the sample. The presented method demonstrates a safe and reliable way to induce endolymphatic hydrops at a relatively quick time point of 30 days. The clinical implications are that the presented method provides a reliable model to further explore the origins of low-frequency hearing loss that can be associated endolymphatic hydrops.

This article demonstrates an extradural approach to obliterate the guinea pig endolymphatic sac and injure the endolymphatic duct with a fine pick in order to induce experimental endolymphatic hydrops.

Kobayda Endolenfatik Hidrops İndüklemek için Gözden Geçirilmiş Cerrahi Yaklaşım

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their activity in vivo in behaving mice. This paper describes a method for the implantation of a chronic cranial window to allow for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice. In combination with genetic strategies and viral injections, it is possible to label specific cells and regions of interest with structural or physiological markers. This protocol demonstrates how to combine viral injections to label neurons in the vicinity of GCaMP6-expressing astrocytes in the cortex for simultaneous imaging of both cells through a cranial window. Multiphoton imaging of the same cells can be performed for days, weeks, or months in awake, behaving animals. This approach provides researchers with a method for viewing cellular dynamics in real time and can be applied to answer a number of questions in neuroscience.

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

Presented here is a protocol for the implantation of a chronic cranial window for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice.

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their ...

Piezo yüksek doğruluk cerrahi Osteal kaldırma (FAZÖR): Farelerde geliştirilmiş kafatası pencere ameliyat için bir teknik

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo Görüntüleme