Bu eser İngiliz kalp Vakfı (PG/13/60/30406) ve Birmingham Üniversitesi tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan yordamları hayvan refah etik inceleme vücuda ve İngiltere'de Home Office (İngiltere, proje lisans 40/3745) tarafından kabul edildi. Fareler C57BL/6 arka plan, 8-12 hafta yaşlı, her iki cinsiyette 19-25 g vücut ağırlığını üzerinde kullanılır.
1. hayvan anestezi
<ol>
	<li>Bir fare bir indüksiyon odasına yerleştirin ve anestezi %5 isoflurane % 100 oksijen ile karışımı tarafından ikna etmek. Bir Debi 0,5 L/dk. bekleyin fare tamamen hareket etmeyi durdurana kadar kullanım ve nefes almak, sıklığını nadir olur.</li>
	<li>Fare odasından kaldırın ve karın bir elektrik kesme makinesi ile tıraş. Karın boşluğu kirlenmesini önlemek için mümkün olduğunca iyice karından tüylerden.</li>
	<li>Sırtüstü pozisyonda fareyi getirin ve fare burun anestezi sisteme bağlı bir koni içine yerleştirin. (Tam yüzde biraz hayvan hayvan farklı olabilir) % 2-3 isoflurane yüzde azaltın. Hayvan her zamanki ama kaçınarak soluyarak daha düşük olmak onun solunum ile uyuyor emin olun. Nefes nefese ortaya çıkarsa, isoflurane yüzde 0.5 oranında azaltmak.
	<ol>
		<li>Uygun anesthetization onaylamak ve olumsuz olursa ameliyat başlatmak için pedal refleks denetleyin. Veteriner merhem göze kuruluğu önlemek için geçerlidir.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Anti-bakteri yok edici bir çözüm uygulamak (%1 Hibitane) fare karın ve temizleme işlemi steril bir pamuk kullanarak alan bud bir şekilde (örneğin, içeride bir dairesel biçimde dışarı) cerrahi sitesinin potansiyel yeniden bulaşma hariç. 3 kez tekrarlayın.</li>
</ol>
2. uygulama IVC stenoz ve fare kurtarma
Not: Tüm aletleri de malzeme (pamuk tomurcukları, gazlı bez, serum vb) cerrahi alan temas geliyor steril olmalıdır. Işleç ameliyat öncesi fırçalayın ve işlem sırasında steril eldiven ve önlük giymek gerekir. Mikroskop kolları steril bir folyo alınmış.
<ol>
	<li>Fareler bir anti-ağrı tedavisi ameliyat öncesi ve sırasında bütün deneysel süre ver. Örneğin, buprenorfin 0.1 mg/kg subkutan 30 dk önce cerrahi ve ardından 12 hayvan euthanized kadar saatte kullanın. Bu yöntemde tromboz için steril iltihap benzer şekilde geliştikçe, anti-inflamatuar ilaçlar bir premedication kullanmaktan kaçının.</li>
	<li>Fare bir steril örtü ile kapak ve cerrahi sitesi ortaya çıkarmak için örtüsü içinde bir delik açın. Makas kullanarak, bir kesi karın orta hat, göğüs kemiğinin aşağı 1,5 cm boyunca olun. Pamuk tomurcukları kullanarak fare sol tarafına bağırsak exteriorize ve onları kurumasını önlemek için sıcak (37 ° C) Serum batırılmış steril gazlı bez ile kaplayın.</li>
	<li>IVC ve (0, 1 veya olabilir 2-in onları) yan dalları IVC sol renal ven ile füzyonu sitesinden Kaudal yönünde tanımlar. Tüm görünür yan dalları ile 7-0 etkisiz Prolene sütür IVC mümkün olduğunca yakın ligate.
	<ol>
		<li>Yan dalları Forseps ile doğrudan daha ziyade bir elinde Forseps ile onları çevreleyen yağ dokusu dayanabiliyor çek ve öte yandan Forseps ile şube altında bir tünel yapmak değil tutmak deneyin. Arka dalları yakın değil.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Çevre dokular Forseps ile tutarak, IVC yukarı ve gerginlik IVC ve aort tam olarak IVC ve sol renal ven arasında açıyla arasında küçük alanda üreten sola çekin. Aort IVC bile aşağıda 2-3 mm (Kaudal yönde) ayırmak neredeyse imkansız olduğunu dikkate almak.</li>
	<li>Sağ olun aorta ve IVC arasında bir delik ipuçlarında Forseps ile çeşitlenen hareketleri kullanarak. Unutmayın daha fazla hareketleri yaptı, gemi zarar yüksek şans. İdeal olarak, 3-5 için hareketleri sayısını en aza indirmek deneyin.</li>
	<li>7-0 etkisiz Prolene sütür 2 cm uzun bir parçası hazırlamak. Fare peritoneal kavite çevresinde IVC için işleç'ın sol tarafında yerleştirin.</li>
	<li>IVC kaldırın ve sol tekrar çekin. İpuçları IVC diğer tarafında görünecek şekilde değil forseps ipuçları arasında aorta ve IVC deliğe yerleştirin. Dikiş ve geri çekme delikten (şekil 3A) alın.</li>
	<li>Dikişi ile geçici bir düğüm yapın ama yakın değil. Bir kanca düğüm bükülmüş 30 G iğne ("ayırıcı") yerleştirin ve şimdi (şekil 3B) kapatın.</li>
	<li>Rondela (şekil 3C) kaldırın.</li>
	<li>Bağırsakların periton boşluğuna bir pamuk ile başa bud ve onları aynı derecede içinde dağıtmak döndürür.</li>
	<li>Karın zarını sürekli döngüler kullanarak 6-0 vicryl sütür ile kapatın. İlk ve son döngüler bir düğüm kapatın.</li>
	<li>Yakın deri metal zımba kullanarak.</li>
	<li>Fare ile 0.5 mL sıcak (37 ° C) enjekte subkutan organizmanın sıvı dengeyi yeniden glikoz salin.</li>
	<li>Bireysel bir kafes içinde bir sıcak (25 ° C) odası veya Oda fare yerleştirin ve yemek koymak ve kafes içinde su jel. Fare (genellikle, 1 s) tamamen iyileşti kadar gözlemlemek.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada, bir protokol kan akışı bozulma, DVT için önemli bir tetikleyici faktör taklit eden IVC Darlığının sunulur. IVC stenoz olu_umu 65-%100 48 saat içinde C57BL/6 farelerin ve 25-%50 2-6 h6,8,23 içinde farelerin gelişimine neden olmaktadır (Brill A, yayınlanmamış veriler, 2016). Bir büyük yönteminin kısa vadeli (6 h) ve uzun vadeli (48 saat) IVC stenoz sonra gözlenen trombüsü boyutu24 (şekil 4), değişkenlik kısıtlamasıdır. Böyle değişkenlik nedenlerle (aynı spacer gibi koşullar göz önüne alındığında bu anestezi vb kullanılır) karanlık kalır, ancak bir o anatomik spekülasyon (örneğin, genişlik IVC, numarası ve yan ve arka konumunu fareler arasında farklılıklar dalları) altında yatan bu olay. Değişkenlik trombüsü boyutunda ana sonucu tromboz yaygınlık (fareler bir trombüsü ile yüzde) yapar. Tromboz yaygınlık acil durum tablo ve Fisher'ın tam testi kullanılarak karşılaştırılabilir. Enjeksiyon podoplanin inhibe antikorların 7gözlenmiştir sonra aynı trombozu yaygınlık ile azaltılmış trombüsü boyutunu ayarlarken bir deney bir istisnaydı.
Bu yöntem özellikle yararlı olduğunda Venöz tromboz başlatma okudu. Damar duvarındaki hücrelerin, eninde sonunda tromboz için önde gelen işe alım gibi erken olayları soruşturma için izin verir. İlaçların Pro veya anti thrombotic etkileri trombozu yaygınlık birincil bir okuma olmak bu model kullanılarak değerlendirilebilir. Prothrombotic fenotip beklenen 6 h stenoz kullanılabilir stenoz 48 saat için bir anti-trombotik fenotip ortaya çıkarmak için geçerlidir. Histolojik analiz trombüsü ve çevresindeki IVC duvar da gerçekleştirilebilir.
Bakmaksızın olup yan dalları veya patent yaptı soru açık kalır. Bir grup ligasyonu yan dalı trombüsü boyutu artmaz ve yan dal IVC ligasyonu sitesine 1.5 mm daha yakın konumunu önemli ölçüde trombüsü geliştirme25bozar göstermiştir. Yan dallar kapatılması endotel hasarı onları ikna etmek ve ayrıca cerrahi26zaman artırmak. Bizim ellerde yan dal kapatma eksikliği önemli ölçüde tromboz yaygınlık (aşağı 10-%30 48 h stenoz sonra; azalır Brill, yayınlanmamış) ve bu nedenle tüm görünür yan dalları ligate.
İdeal olarak, fare, aynı arka plan üzerinde bile ama farklı kaynaklardan biraz farklı trombozu yaygınlık olabilir gibi littermate denetimleri kullanılmalıdır. DVT kendisi herhangi bir parametre üzerinde etkisi (örneğin, biyokimyasal) okudu, sham işletilen hayvan kullanılmalıdır. Sham çalışan fareler aynı yordamı tabi ama IVC etrafında bağ gevşek kapalı ve orada stenoz üretmeden yaptı.
Bu iletişim kuralı en sık hata (kritik adım) aorta ve genellikle kanama sonuçları IVC değil tam olarak, ama biraz daha düşük, gemiler arasındaki açı ayırmak için bir çabadır. Büyük bir kanama meydana geldiğinde, fare iyi kurtarma olası hale gelir ve bu denemeyi durdurup hayvan ötenazi önerilir. Normalde, fareler de kurtarmak, kafesin içinde hareket ve önemli ölçüde ağırlık kaybetmek değil. Biz kadın ve erkek için 20 g yukarıda fareler kullanmanızı öneririz ve hayvanlar (özellikle erkekler) bireysel kafeslerde ameliyattan sonra mücadele ve yaralanma önlemek için deneme sonuna kadar tutmak. Bu başka bir (elektrolitik) DVT modelinde erkek fareler kadın27daha büyük olu_umu üretmek bildirilmiştir. Bizim veri analizi önemli trombozu yaygınlık erkek ve dişi fareler (Brill, yayınlanmamış) arasındaki farkı ortaya değil. Bu nedenle, araştırmacılar IVC stenoz modelini kullanarak her iki cinsiyette fareler üzerinde deneyler yapmak için teşvik edilir.
Dikiş ve/veya zımba unravelling değil karar verdi özellikle uzun deneyler (bir hafta ve daha uzun). Böylece, fareler günde en az iki kez dikiş bütünlüğü için özel olarak denetlenmesi ve özel bir dikkat kafes yatak üzerinde kan lekesi görünümünü verilmesi gerekir.
Bu başka bir hayvan model gibi IVC stenoz sınırlamaları insanlar içine çeviri açısından sahip olması gerekmektedir. Örneğin, insan DVT Venöz vanalar içinde geliştirir, ancak fare IVCs Subaplar, yok. Ayrıca, insanlar bir önemli mekanizma hızlanan kan akımını damarları olmak kas pompası ile dikey spinal yönlendirme sahip. Buna ek olarak, fareler hiçbir rol yatay spinal yönlendirmeyle kan kalbe dönüş destekleyen kas pompa var. Bu sınırlamalar ne zaman fare veri insan hastalık için çeviri düşünülmelidir.

Derin Ven Trombozu (DVT) olduğunu olu_umu derin damarlarınızdaki gelişimi genellikle (ama sadece) bacaklarda. İçinde bağlaç ile pulmoner emboli (PE; birlikte Venöz tromboemboli, VTE olarak belirlenmiş) yaklaşık 900.000 Amerikalılar her yıl geliştirir ve ciddi sağlık sorunu ve ekonomik sorun1,2temsil eder. PE, DVT, bir komplikasyonu bir trombüsü başlangıç konumundan müstakil alır ve solunum yetmezliği ve ölüme neden olabilir akciğerlere ulaşır oluşur. Death toll gelen VTE mortalite AIDS, meme kanseri ve trafik kazaları, kombine3aşıyor.
DVT yanı sıra neden olan en büyük etken nedenleri, bilinen kanser veya travma gibi hareket eden 4,5olmaması. Bu ameliyatı (özellikle ortopedik), felç, uzun menzilli uçuşlar ya da başka nedenlerle neden olabilir. Damarlarında kan akımı kas pompa üzerinde bağlıdır ve bu nedenle uzuv immobilizasyon durgun kan sonuçlarında Venöz Subaplar, tromboz için bu da neden-akış. Böyle kan akışı bozulma6,7özetlemek için burada açıklanan yöntemi amacı budur. İnferior vena kava (IVC) kısmi akış kısıtlama oluşturulan insan Venöz vanalar ve sonuçları bir trombüsü oluşumunda insan olu_umu6' yapısında benzer koşullar taklit eder. Bir trombüsü büyük kısmı kırmızı ve kırmızı kan hücreleri, fibrin ve trombosit birleşmesiyle oluşur. Olu_umu küçük bir "beyaz kısmı"insan Venöz olu_umu açıklanan satırları Zahn"benzer (şekil 1), trombosit zenginleştirilmiş" si. Trombüsü her iki kesiminde de gelecekteki trombüsü6,9sitesinde işe ilk hücreleri arasında olan nötrofil8, içerir. Beyaz kısmı nötrofil ağları8yoksun olmak gibi görünüyor, ancak kırmızı bölümünde nötrofil nötrofil hücre dışı tuzakları (ağlar), sınırdışı. Aynı şekilde insan DVT için trombozu farelerde yüksek plazma D-dimer düzeyleri (Şekil 2) tarafından eşlik ediyor. Hastalarda, DVT profilaksi için kullanılan düşük molekül ağırlıklı heparin (enoxaparin), ayrıca tromboz farelerde engeller. Bu yöntemin önemli bir avantajı endotel denudation9, hangi insan DVT10özelliğidir bulunmamasıdır. Bu özellik IVC stenoz DVT daha klinik bir model daha, örneğin, tromboz indüksiyon sağlar ferrik klorid tarafından hangi ikna endotel denudation ve hangi olu_umu oluşur ağırlıklı olarak trombosit11, , 12,13. Tam koma halinde IVC modeli birkaç takım14,15,16tarafından tercih edilmektedir. Artık akış gemi içinde korunur stenoz, aksine Staz uygulanması tamamen akışı durur ve böylece trombozu sitesi sistemik yönetilen maddelere erişilebilirliğini sınırlar. Ayrıca, görünüşe göre stenoz ve Staz tarafından uyarılan trombozuna yatan mekanizmaları farklıdır: stenoz sonuçları yerel iltihap gelişiminde (endotel, serbest bırakmak-in Weibel Palade vücut içerik, işe alım bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu ve trombosit gemi duvara) durağanlık yerine trombozu ikna etmek gibi görünüyor, ancak "immunothrombosis"6,9,17, neden bağlı olarak, özellikle, doku faktörü ve diğer koagülasyon ve Fibrinolitik ile ilgili mekanizmalar18,19,20. Böylece, her ne kadar onların mekanizmalarını kesinlikle çakışabilir stenoz ve Staz modelleri Venöz trombüsü geliştirme, biraz farklı yönlerini yansıtır. Elektrolitik IVC modeli (EIM) DVT21,22 trombüsü yalnızca kısmen gemi duvar occluding neden olmaktadır. Bu nedenle, farklı ilaçların sistemik yönetim trombüsü büyüme üzerindeki etkilerini test etmek için uygundur. Bu model, ancak, bu mekanizma patofizyolojik alaka en az tartışılır hale elektrik akımı tarafından IVC duvar bütünlüğü (iğne ekleme) bozulma ve tromboz indüksiyon varsayar.

<table style="border-collapse:collapse;width:536pt" width="715">
	<colgroup>
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:160pt" width="213" />
		<col style="width:89pt" width="119" />
		<col style="width:125pt" width="167" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">C57BL/6 mice</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Charles River</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66" style="width:125pt" width="167">8 - 10 weeks old, bothe genders</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">15922</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">14003</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Dumont 5/45 forceps</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">FST</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">11251-35</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">7-0 Prolene suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W8725</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">6-0 Vicryl suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W9981</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Cotton buds</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Spar</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Millswabs sterile&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Millpledge veterinary&#160;</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">611950</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Drapes</td>
			<td class="xl67">Kruuse</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">141765</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Glucose Saline-Aqupharm3</td>
			<td class="xl67">Animal Care</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">XVD589</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="46" style="height:34.5pt">
			<td class="xl63" height="46" style="width:162pt;height:34.5pt" width="216">Clear H20 HydroGel 98% sterile water&#160;</td>
			<td class="xl67">Clearh2o</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Buprenorphine</td>
			<td class="xl67">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Isoflurane vaporizer</td>
			<td class="xl67">General Anaesthetic Services</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:162pt;height:31.5pt" width="216">IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Sterilizer Steri350</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Inotech</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Microscope Olympus SZX10</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Olympus</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

Derin Ven Trombozu (DVT) ve onun yıkıcı komplikasyon, pulmoner emboli, yüksek ölüm oranı ciddi sağlık problem. Venlerin trombüsü oluşumunda mekanizmalarının anlaşılması güç kalır. Hareketlilik (örneğin, cerrahi veya uzun menzilli uçuşlar sonra) eksikliği DVT için önde gelen ana faktörlerden biridir. Patofizyolojik hareketlilik eksikliği, kan akışı durgunluk içinde Venöz vanalar sonucudur. Burada, bir modeli böyle akışı rahatsızlık trombozu sürüş bir faktör olarak taklit eden açıklanmıştır. Bu modelde, kısmi akışını sınırlama (stenoz) inferior vena kava (IVC) içinde oluşturulur. 48 h IVC Lümen yaklaşık yüzde 90'ını kapatılması olu_umu insanlar ile yapısal olarak benzer gelişimi sonuçlanır. Benzerlikler: i) çoğu trombüsü cilt kırmızıdır, yani, kırmızı kan hücreleri ve fibrin, II) varlığı beyaz kısmı (Zahn hattı), endotel monolayer III) sigara-yalanlarım, IV) yükseltilmiş plazma D-Dimer düzeyleri ve önlemek için olasılık v) oluşur tarafından düşük molekül ağırlıklı heparin kan pıhtılaşması. Sınırlamaları içerir değişken boyutu olu_umu ve aslında bu farelerde vahşi-tip belli bir yüzdesi (0 - % 35) bir trombüsü üretmeyebilir. Görsel gözlem ve ölçüm ek olarak, olu_umu trombüsü gelişme dinamikleri izlenmesi için izin verir ultrasonografi gibi non-invaziv teknolojileri tarafından görüntülenmiştir. Daha kısa zaman noktalarda (1-6 h), intravital mikroskobu doğrudan olayları (örneğin, gemi duvar hücrelere alımı) gözlemlemek için uygulanabilir trombüsü oluşumu önceki. Dünyanın dört bir yanından birkaç takım tarafından bu yöntemin kullanılması DVT inisiyasyon temel mekanizmaları ortaya çıkarmak ve onun önlenmesi için yararlı olabilir potansiyel hedefleri belirlemek mümkün kıldı.

Burada, DVT IVC akışı bozulma tarafından indüklenen bir model açıklanmıştır. İndüksiyon Darlığının IVC içinde bozulma başlatır ve durgunluk kan akımı ve (Bu durumda, 48 s) bir süre sonra bir trombüsü, yapısal olarak benzer insan DVT gelişiminde olu_umu (şekil 1A) sonuçlanır. Bir trombüsü IVC içinde görsel olarak kolayca detectable varlığıdır (şekil 1B). İnsan DVT ve model arasında önemli bir benzerlik yüksek plazma D-dimer düzeyleri (Şekil 2) için. D-dimer fibrin bozulması, ürünü ve etkin bir trombotik işlem oluyor varlığını kan öneriyor.
Model şekil 3A-Colarak adım adım sunulmaktadır. IVC dikkatle maruz, IVC ve aort damarı arasında bir delik açtık ve dikiş (7-0 Prolene) IVC altındaki delikten çekilir. O zaman IVC dikiş tarafından ayırıcı (30 G iğne, şekil 3D), üzerinde spacer kaldırılır sonra bakmaksızın. Bu yordam için % 90'ı verir kalan %10 patent bırakarak IVC Lümen kapatılması. Bu kan akışı durgunluk sonunda tromboz için önde gelen sağlar.
Şekil 4 model, değişken trombüsü boyutu büyük dezavantajı gösterir. Tüm bu olu_umu aynı deneyde elde edildi vahşi erkek farelerde tip aynı kökenli, yaş ve benzer vücut ağırlığı üzerinde gerçekleştirilen. Tüm fareler olu_umu (tromboz yaygınlığı % 100) üretilen rağmen büyüklükleri açıkça geniş bir aralıkta değişir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Şekil 1: Sonra 48 saat kısıtlama/stenoz temsilcisi trombüsü. (A) 48 h IVC sonra tipik bir trombüsü stenoz. Not kırmızı (kırmızı kan hücresi zenginleştirilmiş) ve beyaz (trombosit zenginleştirilmiş) parçalar. (B) IVC (sol) veya (sağ) bir trombüsü olmadan. Ölçek çubukları 2 mm. = <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Resim 2 : Yüksek plazma D-dimer düzeyleri IVC stenoz uygulamadan sonra. Fareler IVC stenoz için tabi tutuldu. Kan belirtilen süre zamanlarda alınan, stabilize 1:9 % 3.8 sodyum sitrat, plazma ile Santrifüjü (2300 x g, 5 min) tarafından hazırlanan ve D-dimer düzeyleri bir ELISA kiti üreticinin yönergelerine uygun olarak belirlenmiş kullanılıyordu. Daireler sham çalışan fareler belirlemek, haçlar IVC stenoz belirlemek. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Şekil 3: Akış kısıtlama/stenoz DVT, Inferior Vena kava (IVC) modeli farelerde. Model ardışık aşamalarında sunulmaktadır. (A)bir delik IVC ve aort damarı arasında yapılır ve dikiş içinden IVC çekilir. (B) bir düğüm üzerinde bir spacer (30 G iğne) kapalıdır. (C) spacer kaldırılır: cerrah fare kapatmadan önce gördüğü son görünümü. Kesikli Sarı çizgi IVC demarcates. Irv sol renal ven için duruyor. Ölçek çubukları 0.2 mm. (D) Rondela (30 G iğne) =. Ölçek çubukları 2 mm. = <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Şekil 4 . Değişkenlik trombüsü boyutu. Fareler 48 h IVC stenoz için tabi tutuldu. Sunulan olu_umu aynı deneyde elde edilir. Ölçek barlar 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Burada Derin Ven Trombozu fare modeli olarak stenoz inferior vena kava içinde açıklayın. Bu model kan akışını kısıtlama, bir Venöz tromboz insanlarda büyük tetikler beyannamedir.

Inferior Vena kava stenozu: Derin Ven Trombozu fare modeli

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.7K Görüntüleme.  University of Birmingham. Burada Derin Ven Trombozu fare modeli olarak stenoz inferior vena kava içinde açıklayın. Bu model kan akışını kısıtlama, bir Venöz tromboz insanlarda büyük tetikler beyannamedir.

Video: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

Murin Model B hücreleri CD40 aktivasyonu

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently shown that UPEC have an important role in the initiation of chronic pelvic pain2, a feature of Chronic prostatitis/Chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS)3,4. Infection of the prostate by clinically relevant UPEC can initiate and establish chronic pain through mechanisms that may involve tissue damage and the initiation of mechanisms of autoimmunity5.
A challenge to understanding the pathogenesis of UPEC in the prostate is the relative inaccessibility of the prostate gland to manipulation. We utilized a previously described intraurethral infection method6 to deliver a clinical strain of UPEC into male mice thereby establishing an ascending infection of the prostate. Here, we describe our protocols for standardizing the bacterial inoculum7 as well as the procedure for catheterizing anesthetized male mice for instillation of bacteria.
CP/CPPS is primarily characterized by the presence of tactile allodynia4. Behavior testing was based on the concept of cutaneous hyperalgesia resulting from referred visceral pain8-10. An irritable focus in visceral tissues reduces cutaneous pain thresholds allowing for an exaggerated response to normally non-painful stimuli (allodynia). Application of normal force to the skin result in abnormal responses that tend to increase with the intensity of the underlying visceral pain. We describe methodology in NOD/ShiLtJ mice that utilize von Frey fibers to quantify tactile allodynia over time in response to a single infection with UPEC bacteria.

Infection of the prostate may be a contributing factor in mediating pelvic pain in chronic prostatitis. We describe the procedure for preparation of standardized bacterial inoculum, instillation of bacteria into the urethra of male mice and methodology for measuring tactile allodynia in mice over time.

Bakteriyel Prostatit bir fare modelinde Dokunsal allodini Ölçümü

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

Derin Ven Trombozu Staz farelerde yüksek frekans Ultrasonografi tarafından izlenen tarafından indüklenen

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various pathologies such as cancer, atherosclerosis and diabetes. We have previously shown that dysfunction of the Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2)/ Kelch-like erythroid cell-derived protein 1 (Keap1) signaling pathway leads to extreme ROS imbalance during cutaneous wound healing in diabetes. Since ROS levels are an important indicator of progression of wound healing, specific and accurate quantification techniques are valuable. Several in vitro assays to measure ROS in cells and tissues have been described; however, they only provide a single cumulative measurement per sample. More recently, the development of protein-based indicators and imaging modalities have allowed for unique spatiotemporal analyses. L-012 (C13H8ClN4NaO2) is a luminol derivative that can be used for both in vivo and in vitro chemiluminescent detection of ROS generated by NAPDH oxidase. L-012 emits a stronger signal than other fluorescent probes and has been shown to be both sensitive and reliable for detecting ROS. The time lapse applicability of L-012-facilitated imaging provides valuable information about inflammatory processes while reducing the need for sacrifice and overall reducing the number of study animals. Here, we describe a protocol utilizing L-012-facilitated in vivo imaging to quantify oxidative stress in a model of excisional wound healing using diabetic mice with locally dysfunctional Nrf2/Keap1.

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

We describe a non-invasive in vivo imaging protocol that is streamlined and cost-effective, utilizing L-012, a chemiluminescent luminol-analog, to visualize and quantify reactive oxygen species (ROS) generated in a mouse excisional wound model.

Vivo Reaktif oksijen türleri içinde bir fare görüntüleme modeli yara

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the lymph nodes where cellular debris and antigens can be surveyed. We are very interested in understanding how the lymphatic vasculature might be involved in inflammation and immune cell function within the liver. However, very little has been published establishing digestion protocols for the isolation of lymphatic endothelial cells (LECs) from the liver or specific markers that can be used to evaluate liver LECs on a per cell basis. Therefore, we optimized a method for the digestion and staining of the liver in order to evaluate the LEC population in the liver. We are confident that the method outlined here will be useful for the identification and isolation of LECs from the liver and will strengthen our understanding of how LECs respond to the liver microenvironment.

The goal of this protocol is to identify lymphatic endothelial cell populations within the liver using described markers. We utilize collagenase IV and DNase and a gentle mincing of tissue, combined with flow cytometry, to identify a distinct population of lymphatic endothelial cells.

Lenfatik endotel hücreleri akış sitometrik çözümlenmesi için fare karaciğer sindirim

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically modified strains, the vast number of analyses that can be performed on harvested soft and hard tissues. However, many of these systems are subject to procedural criticisms. As an alternative, the ligature-induced model of periodontal disease, driven by the localized development and retention of a dysbiotic oral microbiome, can be employed, which is rapidly induced and relatively reliable. Unfortunately, the variants of ligature-induced murine periodontitis protocol are isolated to focal regions of the periodontium and subject to premature avulsion of the installed ligature. This minimizes the amount of tissue available for subsequent analyses and increases the number of animals required for study. This protocol describes the precise manipulations required to place extended molar ligatures with improved retention and usage of a novel rinse technique to recover oral neutrophils in mice with an alternative approach that mitigates the aforementioned technical challenges.

This article presents a protocol for establishing a ligature-induced model of murine periodontitis involving multiple maxillary molars, resulting in larger areas of the involved gingival tissue and bone for subsequent analysis as well as reduced animal usage. A technique to assess oral neutrophils in a manner analogous to human subjects is also described.

Oral Nötrofillerin Değerlendirilmesinde Mürin Periodontitin Sağlam Ligatür Kaynaklı Modeli

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...