Bu çalışma CKB için NIH (RO1 HL098228) bir hibe, kısmen desteklendi.

NOT: Bütün hayvan prosedürleri Nationwide Çocuk Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1.. Greft İmalat <ol><li> Bir davlumbaz altında 2 ml dioksan içerisinde 100 mg P (LA / CL) eklenerek ε-kaprolakton ve L-laktid kopolimeri P (LA / CL) çözeltisi olun. Bir girdap çözüm yerleştirin ve tamamen erimesi için 1-1.5 saat boyunca sürekli olarak karıştırınız. </li><li> Bu arada, (PGA) dondurucu hissettim poliglikolik asit tabakasını kaldırmak ve birkaç 5 x 8 mm bölümleri kesip. Ayrıca sadece filtrenin üstünde bir 0.1-10 ul pipet ucu kesilmiş. </li><li> Bir pipet ucunun uzak ucunda bir 19 G iğne (1.5 uzunluk) takın ve PGA mikro forseps kullanılarak iğnenin keçe sarın. </li><li> 19 G iğne içine takıldığında ise dikkatlice, lümen bir kör 18 G iğne kullanılarak, yakın kısmı daha düz bir pipet ucu, distal ucuna keçeyi itin. </li><li> Pipet40 ul P (CL / LA) üst ucu içine pipet çözeltisi. PGA çözümü ile hissetti doyurabilecek. Sonra pipet dağıtıcı kullanarak hava kabarcıkları dışarı itmek. Gerekirse bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Yer, 50 ml bir tüp içinde greft ve 20 dakika boyunca -80 ° C dondurucu içine yerleştirin. Iğnelerin baş aşağı doğru karşı karşıya olduğundan emin olun. </li><li> Bir liyofilizerde içine tüp transferi ve 24 saat için vakum. Hava akımı oluşturacak şekilde tüpün kapağını açmak için emin olun. </li><li> Greft dışarı atın ve iğnelerden çıkarın. A ~ 5 mm bölümünü terkeden greft iki ucunu kesme ve şeklini korumak için, iğnelerin üzerine geri koyun. Desikatörde greft tutun. </li><li> Bir biyogüvenlik kaput O / N önce hücre tohumlama UV ışık altında iskele yerleştirin. </li></ol> 2.. Kemik İliği Mononükleer Hücre Hasat ve İzolasyon <ol><li> Ketamin / ksilazin aşırı dozda (ketamin 200 mg / kg ketamin hidroklorid ve 20 mg / kg) ile fareler Euthanize. </li><li> Kaldır kemikler (femur bir10 cc RPMI sahip bir Petri kabındaki 10 greft implantasyonu ve yer 3 fareden d tibias). 3 cc RPMI ile yeni bir Petri kabı, bir 25 G iğnesi olan bir şırınga kullanılarak, kemik ve kemik iliği gömme iki ucunu kesin. 15 cc tüpte kemik iliği ve RPMI çözeltisi toplayın ve BM arasında kalan toplamak için ek 2 cc RPMI ile petri yıkayın. </li><li> Örnek (5-10 ul) alın ve bir otomatik hücre sayıcı veya hemasitometre kullanarak hücre saymak. Sonucu kaydedin. </li><li> 15 cc santrifüj tüpüne 5 cc Ficoll koyun ve kemik iliği ve RPMI çözüm ekleyin. Ficoll&#39;ün ile karıştırma önlemek için çok nazikçe çözüm ekleyin. </li><li> 24 ° C&#39;de &quot;HAYIR FRENİ&quot; ile 30 dakika boyunca 528 x g&#39;de santrifüj </li><li> Üst pembe katmanı kaldırın. MNC katmanı orta berrak tabaka Şekil 1, toplayın, ve PBS 01:01 ile sulandırmak. </li><li> 24 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 528 x g&#39;de santrifüj solüsyonu inceltilmiş MNC </li><li> Süpernatantı ve di kaldırud 5 ml PBS ile pelet. </li><li> 24 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 528 x g&#39;de topak çözeltisi santrifüj </li><li> Süpernatant kaldırmak. RPMI (~ 200 ul) uygun miktarda pelet seyreltin. </li><li> 5-10 ul örnek almak ve bir otomatik hücre sayıcı veya hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Sonucu kaydedin. Bir kez daha sayım hücreyi tekrarlayın ve ortalama hücre sayısını hesaplamak. </li><li> RPMI kullanarak ul 1.000.000 cells/10 hücre konsantrasyonu sulandırmak. </li></ol> 3.. Hücre Serpilmesi <ol><li> 5 dakika boyunca luminally 5 ul RPMI ilave edilerek ön ıslatılmış iskele, sonra RPMI çıkarın. </li><li> Iskele lümen Adım 2.12 RPMI 10 ul kemik iliğinden elde edilen mono nükleer hücreleri ekleyin ve 10 dakika hücreleri iskele üzerine takmak için izin için bekleyin. </li><li> 1 cm uzunluğunda bir 19 G iğne Kesme ve iskele şeklini korumak için, skafoldun lümeni içine iğne koydu. Bir 24-çukurlu plaka içindeki örnek yerleştirin. &lt;/ Li&gt; <li> Her kuyuya 1.000 ul RPMI ilave edin ve bir kuluçka makinesi içinde O / N inkübe edin. </li></ol> 4. Greft İmplantasyonu <ol><li> Ameliyat öncesi tüm cerrahi aletler otoklava sokun: ince makas, 3x mikro forseps, 2x mikro vasküler kelepçeler, 1x kelepçe uygulayarak forseps, 1x mikro iğne tutucu, 1x yaylı makas, 1x ekartörünü 1x. </li><li> 6-8 haftalık dişi C57BL / 6 doku mühendisliği damar grefti alıcı olarak kullanılır. Kafesinden fare çıkarın ve ağırlık, daha sonra bir ketamin / ksilazin kokteyl (ketamin 100 mg / kg ketamin hidroklorid ve 10 mg / kg) ile karnın alt sağ çeyrek dairesi içine bir intraperitoneal enjeksiyon yoluyla anestezi. Ketoprofen (5 mg / kg, IP) bir ön anestezi analjezik olarak kullanılır. </li><li> Masal sıkıştığı tarafından sedasyon seviyesini kontrol edin, sonra karın saç klibi. Steril Oftalmik merhem ile gözleri yağlayın ve bir yastık üzerinde bir dorsal recumbence pozisyonda fare yerleştirin. Betadine ve alkol pedleri ile karın dezenfekte edin. Costeril bir örtü ile fareyi ver ve sadece kesi alanı açığa. </li><li> Suprapubik bölgeye xiphoid aşağıdan bir orta hat laparotomi kesi yapmak ve bir öz-istinat ekartörünü yerleştirin. Tuzlu çözelti ile nemlendirilmiş gazlı bez bağırsakları sarın. Açık açık infrarenal aorta ve vena kava tanımlar. </li><li> Proksimal ve aort ve vena kava distal taraflarında iki mikro vasküler kelepçeler yerleştirin sonra açık açık vena kava transekt vena kava gelen aort ayrı. Gerekirse, konik iğne üzerinde 10-0 monofilament sütür ile abdominal aort dalları Arter. </li><li> Steril 10-0 sütür kullanılarak anastomoz sonuna yakın ve uzak ucu ile alt vena kava interpozisyonundan greft dikiniz. Fare anatomisine bağlı greft, genellikle 1-2 mm, Trim. Proksimal ve distal uçlarında hem bir tane dikiş greft elde edin ve greft diğer taraftan 4-5 stiches sürekli dikiş başlar. Ön tarafı bitirdikten sonra, kelepçeler ve greftler çevirmekdiğer tarafa ve greft arka tarafını dikin. Implantasyon sırasında, akut trombozu önlemek için sık sık heparin solüsyonu ile greft yıkayın. </li><li> Proksimal kelepçesini çıkarın ve bir topikal emilebilir steril hemostat ajanı uygulayarak kanamayı kontrol. Kanama tamamen durduğunda, distal kelepçesini çıkarın ve kanama aynı şekilde kontrol. Greft içinden emin kan akışları olun. </li><li> Dahil dişli bir iğne ile 6-0 siyah bir poliamid monofilament dikiş ile iki kat olarak abdominal kas ve deri kapatın. </li><li> 0.5 ml serum fizyolojik subkutan enjekte edilir ve fare tamamen mobil kadar bir ısınma pad üzerinde bir kurtarma kafes fare yerleştirin. Kurtarma üzerine, kağıt yatak ile yeni kafesine fareyi dönmek. 48 saat boyunca ağrı ilaç (ibuprofen, 30 mg / kg, içme suyu) ver. </li></ol>

<ol>
	<li>Heart Association, A. m. e. r. i. c. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics&#8212;2012+Update.">Heart Disease and Stroke Statistics&#8212;2012 Update.</a> Circulation. 125, (2012).</li><li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+Of+Viable+Pulmonary+Artery+Autografts+Through+Tissue+Engineering.">Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 115, 536-546 (1998).</li><li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late-term+results+of+tissue-engineered+vascular+grafts+in+humans.">Late-term results of tissue-engineered vascular grafts in humans.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 139, 431-436 (2010).</li><li>Shin'oka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midterm+clinical+result+of+tissue-engineered+vascular+autografts+seeded+with+autologous+bone+marrow+cells.">Midterm clinical result of tissue-engineered vascular autografts seeded with autologous bone marrow cells.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 129, 1330-1338 (2005).</li><li>Brennan, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+vascular+grafts+demonstrate+evidence+of+growth+and+development+when+implanted+in+a+juvenile+animal+model.">Tissue-engineered vascular grafts demonstrate evidence of growth and development when implanted in a juvenile animal model.</a> Ann Surg. 248, 370-377 (2008).</li><li>Roh, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+an+autologous+tissue-engineered+venous+conduit+from+bone+marrow-derived+vascular+cells:+optimization+of+cell+harvest+and+seeding+techniques.">Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques.</a> Journal of Pediatric Surgery. 42, 198-202 (2007).</li><li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+vascular+grafts+form+neovessels+that+arise+from+regeneration+of+the+adjacent+blood+vessel.">Tissue-engineered vascular grafts form neovessels that arise from regeneration of the adjacent blood vessel.</a> The FASEB Journal. 25, 2731-2739 (2011).</li><li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+macrophages+in+neovessel+formation+and+the+development+of+stenosis+in+tissue-engineered+vascular+grafts.">A critical role for macrophages in neovessel formation and the development of stenosis in tissue-engineered vascular grafts.</a> The FASEB Journal. 25, 4253-4263 (2011).</li><li>Naito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+Natural+History+of+Extracellular+Matrix+Production+in+Tissue-Engineered+Vascular+Grafts+during+Neovessel+Formation.">Characterization of the Natural History of Extracellular Matrix Production in Tissue-Engineered Vascular Grafts during Neovessel Formation.</a> Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).</li><li>Naito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Burst+Pressure:+Initial+Evaluation+of+the+Natural+History+of+the+Biaxial+Mechanical+Properties+of+Tissue+Engineered+Vascular+Grafts+in+the+Venous+Circulation+Using+a+Murine+Model.">Beyond Burst Pressure: Initial Evaluation of the Natural History of the Biaxial Mechanical Properties of Tissue Engineered Vascular Grafts in the Venous Circulation Using a Murine Model.</a> Tissue Eng. Part A. 20, (2013).</li><li>Mirensky, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+vascular+grafts:+does+cell+seeding+matter.">Tissue-engineered vascular grafts: does cell seeding matter.</a> Journal of Pediatric Surgery. 45, 1299-1305 (2010).</li><li>Roh, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+vascular+grafts+transform+into+mature+blood+vessels+via+an+inflammation-mediated+process+of+vascular+remodeling.">Tissue-engineered vascular grafts transform into mature blood vessels via an inflammation-mediated process of vascular remodeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 4669-4674 (2010).</li><li>Mirensky, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+arterial+grafts:+long-term+results+after+implantation+in+a+small+animal+model.">Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model.</a> Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).</li><li>Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biaxial+mechanical+properties+of+the+inferior+vena+cava+in+C57BL/6+and+CB-17+SCID/bg+mice.">Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice.</a> Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

TEVG fare modeli neotissue stenoz oluşumu ve geliştirilmesi hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için değerli bir araçtır. Tohumlanmış BM-MNC greft 11 tohumlanmış hücreleri hem histolojik ve SEM görüntüleri gösterilmiştir. Hücre Ekme etkinliği, bir DNA deneyi 7 ile gösterilmiştir. Bu model sistemi kullanarak biz cep tohumlama insan klinik deneme 3 başarısızlık birincil modu oldu TEVG stenoz, gelişiminin insidansını azalttığını göstermiştir. Tohumlanmış hücreleri hızla bir parakrin mekanizması 8,12 yoluyla etki uyguladığı düşündüren TEVG kayboldu. Ayrıca neoveseller formasyonu bir immün aracılı rejeneratif bir süreçtir ve neoveseller skafoldun lümen yüzeyi boyunca, komşu damar duvarından vasküler hücrelerde (EC ve SMC) içeri büyümesine kaynaklandığı gösterilmiştir. Ayrıca, normal makrofaj infiltrasyonu, damar neotissue oluşumu için gereklidirBu işlem fazla olduğu zaman ancak TEVG darlığı 7,8 gelişmesine yol açar. Bu sonuçlar, insan hastalığı için bu fare modeline alaka gösterir. Mikrocerrahi teknikleri damar grefti 13 ve venöz fistül için arter dahil olmak üzere diğer vasküler uygulamalara uyarlanabilir. Biz her yıl 1,000 VKİ grefti implantasyonu üzerinde işletmek ve ölüm oranı% 1&#39;den daha az olduğunu. Başarılı bir greft implantasyonu için, söz birkaç önemli nokta vardır. Bu anastomoz boyunca birkaç kez etrafında fare çevirmek için gerekli olduğu için İlk olarak, enjekte edilebilir bir anestezi Bu işlem için tercih edilir. Anestezinin etkisi genellikle bir saat civarında sürer ve yetenekli bir mikro cerrah için tüm cerrahi süresi ameliyatı tamamlamak için yeterli zaman sağlar, yaklaşık 30-45 dk vardır. Hayvan ameliyat sırasında uyanırsa, bir anestezi kokteyl 0.05-0.1 ml kas içine enjekte edilebilircularly. İkinci olarak, küçük bir aortik dalların en IVC ve karın bölgesinden aort ayıran aşırı kan kaybını önlemek için lige olması gerekiyordu. Ayrıca aort ayrıldığında IVC kesmemeye akılda tutmak. Greft dikildi Üçüncü olarak, her iki tarafta, ilk iki dikiş sürecin en önemli adımlardır. Dikkatle yerleştirilir değildir, bu IVC ön ve arka tabakaları ayırmak zordur. Katmanlar açıkça tespit değilseniz, yanlışlıkla onları bir araya dikmek için daha yüksek bir şans var. Greft IVC dikilmesi sırasında, bitti yırtılmasına neden olabilir IVC, germek için önemli değildir. Ayrıca greft aynı uzunlukta değiştirmek için çok IVC kesmek için değil emin olun. Genellikle IVC yaklaşık 1-2 mm nedeniyle IVC uzunlamasına germek için, 3-5 mm greft değiştirmek için uzaklaştırılmıştır. IVC aynı uzunlukta çıkarılırsa, o anastomoz yaparmosis son derece zorlu. Dördüncü, TEVG oluşumu ve darlık gelişmesi açısından varyasyonlar zorlanma önemli gerginlik vardır. Örneğin, giremeyen C57BL / 6 fareleri (vahşi tip) SCID / bg farelere göre stenoz çok daha yüksek bir oranı (bağışıklık yetersizliği olan farenin) 8,12 gösterdi. Buna ek olarak, deneyim, SCID / bg farenin nedeniyle daha sert IVC duvarı 14 C57BL / 6 farelerine kıyasla çalıştırmak için çok daha kolaydır. Farelerin yeni bir gerginlik üzerinde çalışırken aklınızda tutun. Greft üretim, BM-MNC hasat ve hücre tohumlama işlemleri bilincinde olması süreçlerin sadece bir çift vardır, yalındır vardır. İlk olarak, greft üretimi için, değil 18 G künt iğne kullanarak iterken, keçeyi &#39;demet&#39; için çok önemli. Biz aşağı pipet ipuçları uzak ucuna keçe itmek için farklı yöntemler denedim. Künt bir iğne ile greft iterek kadar, en iyi sonucu gösterdi. İçkünt iğnenin çapı, keçe etrafına sarıldığında iğnenin dış çapından biraz daha büyüktür. Bu nedenle, küçük iğne rahatça büyük bir kör iğne içine kayabilir ve keçe daha sonra her keçenin araya toplanmasının engelleyen keçe, çevresi etrafında eşit miktarda kuvvet ile aşağı doğru itilebilir. Biz daha önce demetler halinde greftler 2 hafta alt açıklığını gösterdiği görülmektedir. Kabarcıkları iskele yüzey ve kan delikler implantasyondan sonra delikten sızıntı neden olur, çünkü aynı zamanda, tüm kabarcıklarını çıkarmak için çok önemlidir. Kemikler BM-MNC hasat için ayrılmış İkincisi, çok fazla kas veya saç dahil kalmamak kemik mümkün olduğunca temizlemek için emin olun. Gerekirse, bu yoğunluk santrifüj işleminden önce bir doku süzgeç kullanılması önerilir. TEVG Bu model bir alçak basınç ve yüksek akış sistemi venöz dolaşımı, iyi çalıştı. Bununla birlikte, dolaşımda arter, biryüksek basınç ve yüksek akış sistemi, biz onun hızlı bozulma özelliğinden dolayı PGA greft ile rüptür oranları yüksek görülmektedir. Hangi neotissue arter basıncı direnmek için yeterli mukavemetini almadan greft yapısal gücünü kaybeder demektir. Biz Polilaktik asit (PLA) önceden greft kullanılan, ancak anevrizma oluşma sıklığının yüksek olduğunu göstermiştir. Ayrıca tamamen farelerin ömrü daha fazladır in vivo ve in PLA aşağılamak için en fazla 2 yıl sürer. Arteryel dolaşım aşı üretim teknikleri olarak, gelecekteki bir uygulama için, örneğin, bir electrospun aşı geliştirme aşamasındadır.

Konjenital kalp kusurları ABD&#39;de canlı doğumların yaklaşık% 8 etkileyen ciddi durumlardır. Konjenital kalp kusurları veya 2.4 1.000 canlı doğum olan bebeklerin yaklaşık% 25&#39;i, hayatlarının 1 ilk yıl invaziv tedavi gerektirir. Konjenital kalp hastalığı için en etkili tedavi rekonstrüktif cerrahi olduğunu. Ne yazık ki, mevcut vasküler kanalların kullanımından kaynaklanan komplikasyonlar ameliyat sonrası morbidite ve mortalitenin en önemli nedenidir. Bu sorunu çözmek için, klinik kullanım 2 için ilk doku mühendisliği vasküler greft (TEVGs) geliştirdi. TEVGs otolog kemik iliğinden elde edilmiş tek-çekirdekli hücreleri (BM-MNC) ile tohumlandı ve konjenital kalp ameliyatı venöz kanalları olarak implante edilen biyolojik olarak parçalanabilir polyester tüplerden inşa edilmiştir. Sonuçlar takipte 1-3 yıldır mükemmel açıklık oranları gösterdi, ama darlığının önemli insidansı <s&gt; 3,4 kadar. Bu vasküler neotissue oluşumu ve TEVG darlık gelişimini altında yatan mekanizmanın daha iyi anlaşılması gerektiği açıktı. Daha TEVGs gelişimini ve darlık gelişme mekanizmasını anlamak için, bir koyun bir model 5,6 oluşturuldu. Bu modelde, TEVGs başarılı bir şekilde canlı damarları içine transforme edildi ve morfolojisi ve ana damarlar fonksiyonu hem de benzerdi. Büyük bir hayvan modelinin bu kullanımı TEVGs klinik kullanımını destekli önemli klinik öncesi bilgi veren iyi bir ilk adım oldu. Ancak, büyük hayvan modelleri kullanılarak TEVGs vasküler neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmaları tam anlaşılması nedeniyle türlerin spesifik moleküler araçlar eksikliği nedeniyle vasküler hücre fenotipleri moleküler karakterizasyonu kısıtlamalar sınırlıdır. Bu eksikliklerin üstesinden gelmek için, TEVGs bir murin modeli fare genetik hızlı ilerleme ve geniş Molecula nedeni ile geliştirilmiştirdaha kısa bir zaman ölçek ilave avantajı ile r karakterizasyonu. Sıçangil modeli IVC araya girme sadık büyük hayvanlarda ve insanlarda meydana neoveseller oluşum sürecini değinmeyecek ama çok daha kısa bir zaman süreci boyunca 6-9. Burada, biyolojik olarak parçalanabilir yapı iskelesi kullanılarak küçük ölçekli aşı üretimi için ayrıntılı bir protokol, BM-MNC hasat ve izolasyon, bir platform üzerinde BM-MNC tohumlama ve bir murin modelinde greft tarif edilmiştir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:616px;" width="615">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Name</td>
			<td style="width:139px;">Company</td>
			<td style="width:133px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:168px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">polyglycolic acid (PGA) felt</td>
			<td>Biomedical Structures</td>
			<td></td>
			<td>Custome ordered</td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:176px;">&#603;-caprolactone and L- 
			lactide copolymer P(LA/CL)&#160;</td>
			<td>Gunze Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Custome ordered</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pipet tip, 0.1-10 &#956;l&#160;</td>
			<td>Fisher Sientific</td>
			<td>02-707-456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lyophilizer&#160;</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>7070020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RPMI medium 1604</td>
			<td>gibco</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Petri dish</td>
			<td>BD</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:176px;">24 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">15cc tube&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Ficoll</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10831-100ml</td>
			<td>Also called &#39;Histopaque&#39;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">DPBS</td>
			<td>gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:176px;">Littauer Bone Cutter 4.5&#34; Straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8480</td>
			<td>For BM harvesting</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:176px;">Forceps 4.5&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8120</td>
			<td>For BM harvesting</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Scissors 4.5&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5912</td>
			<td>For BM harvesting</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:176px;">Microscope</td>
			<td style="width:139px;">Leica</td>
			<td style="width:133px;">M80</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:176px;">C57BL/6J (H-2b), Female</td>
			<td style="width:139px;">Jackson Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:133px;">664</td>
			<td style="width:168px;">8-12 weeks</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:176px;">Ketamine Hydrochloride Injection</td>
			<td style="width:139px;">Hospira Inc.</td>
			<td style="width:133px;">NDC 0409-2053</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Xylazine Sterile Solution</td>
			<td style="width:139px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:133px;">NADA# 139-236</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:176px;">ketoprofen</td>
			<td style="width:139px;">Fort Dodge Animal Health</td>
			<td style="width:133px;">NDC 0856-4396-01</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:176px;">Ibuprofen</td>
			<td style="width:139px;">PrecisionDose</td>
			<td style="width:133px;">NDC 68094-494-59</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:176px;">Heparin Sodium</td>
			<td style="width:139px;">Sagent Pharmaceticals</td>
			<td style="width:133px;">NDC 25021-400</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:176px;">Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
			<td style="width:139px;">Hospira Inc.</td>
			<td style="width:133px;">NDC 0409-0138-22</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:176px;">0.9% Sodium Chloride Injection</td>
			<td style="width:139px;">Hospira Inc.</td>
			<td style="width:133px;">NDC 0409-4888-10</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:176px;">Petrolatum Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:139px;">Dechra Veterinary Products</td>
			<td style="width:133px;">NDC 17033-211-38</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Iodine Prep Pads</td>
			<td style="width:139px;">Triad Disposables, Inc.</td>
			<td style="width:133px;">NDC 50730-3201-1</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Alcohol Prep Pads</td>
			<td style="width:139px;">McKesson Corp.</td>
			<td style="width:133px;">NDC 68599-5805-1</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Cotton tipped applicators</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Sientific</td>
			<td style="width:133px;">23-400-118</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:176px;">Fine Scissor</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">14028-10</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Micro-Adson Forcep</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">11018-12</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:176px;">Clamp Applying Forcep</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">00072-14</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:176px;">S&#38;T Vascular Clamp</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">00396-01</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:176px;">Spring Scissors</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">15008-08</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Colibri Retractors</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">17000-04</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Dumont #5 Forcep</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">11251-20&#160;</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">11274-20</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td style="width:139px;">FST</td>
			<td style="width:133px;">11251-35</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Tish Needle Holder/Forceps</td>
			<td style="width:139px;">Micrins</td>
			<td style="width:133px;">MI1540</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:176px;">Black Polyamide Monofilament Suture, 10-0</td>
			<td style="width:139px;">AROSurgical Instruments Corporation</td>
			<td style="width:133px;">TI638402</td>
			<td style="width:168px;">For sutureing the graft</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;width:176px;">Black Polyamide Monofilament Suture, 6-0</td>
			<td style="width:139px;">AROSurgical Instruments&#160;</td>
			<td style="width:133px;">SN-1956</td>
			<td style="width:168px;">For musculature and skin closure</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Non-Woven Songes</td>
			<td style="width:139px;">McKesson Corp.</td>
			<td style="width:133px;">94442000</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Absorbable hemostat</td>
			<td style="width:139px;">Ethicon</td>
			<td style="width:133px;">1961</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:176px;">1 ml Syringe</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">309659</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:176px;">3 ml Syringe</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">309657</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:176px;">10 ml Syringe</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">309604</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">18G 1 1/2 in, Needle</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">305190</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">25G 1 in., Needle</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">305125</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">30G 1 in., Needle</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:133px;">305106</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Warm Water Recircultor</td>
			<td style="width:139px;">Gaymar</td>
			<td style="width:133px;">TP-700</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:176px;">Warming Pad</td>
			<td style="width:139px;">Gaymar</td>
			<td style="width:133px;">TP-22G</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:176px;">Trimmer</td>
			<td style="width:139px;">Wahl</td>
			<td style="width:133px;">9854-500</td>
			<td style="width:168px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation of inferior vena cava interposition graft in mouse model

Kemik iliği mononükleer hücreler (BMCS) ile ekildi biyobozunur iskelelerinin genellikle doğumsal kalp anomalileri tedavi rekonstrüktif cerrahi için kullanılır. Uzun süreli klinik sonuçları darlık önemli insidans, ancak mükemmel açıklık oranları gösterdi. Vasküler neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmalarının araştırılması ve doku mühendisliği damar grefti (TEVGs) içinde darlık gelişimini önlemek için, biz yaklaşık 1 mm iç çapı ile greft bir fare modeli geliştirdi. İlk olarak, TEVGs bir poliglikolik asit dokunmamış imal edilmiş biyolojik olarak parçalanabilir boru şekilli iskeleler monte edilmiştir ε-kaprolakton ve L-laktid kopolimeri ile kaplanmış ağ hissetti. Iskeleler, daha sonra bir dondurarak kurutucuda yerleştirilen 24 saat boyunca vakumlu ve hücre tohumlama kadar bir desikatör içinde depolanmıştır. İkinci olarak, kemik iliği donör farelerden toplandı ve tek çekirdekli hücreler yoğunluk gradyan santrifüjü ile izole edilmiştir. Üçüncü olarak, yaklaşık bir milyon hücre idibir yapı iskeleti üzerine ekildi ve O / N inkübe Son olarak, tohumlanmış iskeleler sonra C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Implante greftler tromboembolik komplikasyonlar veya anevrizmal oluşum kanıt olmadan mükemmel açıklık (&gt;% 90) gösterdi. Bu fare modeli anlayış bize yardım ve TEVG içinde neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmaları miktarının olacaktır.

TEVG implantasyonu şematik, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Kemik iliği, verici bir fare hasat edilmiştir ve mono nükleer hücreler yoğunluk santrifüj ile izole edildi ve daha sonra biyolojik olarak parçalanabilir bir yapı iskeleti üzerine ekildi. Numaralı seribaşı iskeleleri O / N bekletilir ve bir alt vena kava greft interpozisyonu gibi bir alıcı fareye implante edildi. Şekil 2, PGA-P (CL / LA) iskele taramalı elektron mikroskobu göstermektedir. Iç çapı yaklaşık 1 mm ve duvar kalınlığı yaklaşık olarak 0.17 mm idi. Toplam porozite% 78.5 idi ve gözenek boyutları 45.4 ± 17.6 mikron idi demek. C57BL / 6 farelerinin IVC içine yerleştirilen bir TEVG brüt görüntü implantasyon (A) ve implantasyonu (B) sonra, 2 hafta sonra, Şekil 3&#39;te. Doğru gösterilmiştir. (C) karşılaştırıldığında, bir nativ IVC brüt görüntüsünü gösterir. Bu açıktırgreft neotissue ile doluydu, ancak hala orijinal greft şeklini tuttu. Bizim önceki sonuç toplam greft bozulması 12 hafta 10 kadar sürdüğünü gösterdi. TEVG implante 2 hafta ultrason B-mod ve renkli Doppler görüntü implante greft açıklığını göstermek için 4A-B Rakamlar. Bir yerli IVC görüntü karşılaştırma (Şekil 4, C) için eklenmiştir. Hücre tohumlama önemli ölçüde greft açıklığını geliştirilmiş, dereceye giremeyen ve seribaşı greft için 2 hafta açıklıkları sırasıyla% 65 ve% 91 (p &lt;0.05, Fisher&#39;in kesin testi) vardır. Şekil 5, implantasyon 2 hafta sonra hücre infiltrasyonu ve TEVG hücre dışı matris birikmesini gösterir. H &amp; E boyaması ile boyanmış Eksplante greft iskele malzemesi (A) ve greft ve kalanlar boyunca neotissue oluşumunu gösterdi. Harts ve Masson trichrome leke IN elastin birikimini gösterditimal tabaka (B) ve orta katman (C) kolajen. Endotel hücre astar intimal tabaka (D) boyunca gözlendi ve sırasıyla CD31 ve αSMA boyamasıyla görüldüğü gibi birleşik yumuşak kas hücreleri özellikle astar EC (E) altında, TEVG boyunca mevcuttu edildi. F4/80 boyama (F) ile belirtildiği gibi implantasyon sonrası ikinci haftada, makrofaj infiltrasyonu, açıktı. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51632/51632fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51632/51632fig1.jpg" /> Şekil 1. TEVG implantasyonu şematik. Kemik iliği mono nükleer hücreler, bir verici fareden toplanan biyolojik olarak parçalanabilir bir yapı iskelesi üzerine ekildi ve bir alıcı fareye bir IVC araya girme greft olarak implante edildi. ince-page = &quot;Her zaman&quot;&gt; <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51632/51632fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51632/51632fig2.jpg" /> Bir iskele Şekil 2.. Taramalı elektron mikroskopisi ve görüntüler. Ortalama dış çap lümen çapı 1.1 mm olan, 1.45 mm, boyu 3 mm idi. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51632/51632fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51632/51632fig3.jpg" /> Şekil 3.. Implant TEVG 2 hafta ve yerli IVC&#39;da sonra. A) hemen implantasyondan sonra, karşılaştırma için B) 2 hafta implantasyonu sonrası, ve C) yerli IVC. fig4.jpg &quot;/&gt; Şekil 4. Ultrason görüntüleri 2 hafta ve yerli IVC. Karşılaştırma için 2 hafta. C) Yerli IVC sonra TEVG A) B-Mode ve B) renkli Doppler görüntü. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51632/51632fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51632/51632fig5.jpg" /> 2 hafta Şekil 5. Temsilcisi görüntüleri operatif TEVG gönderebilirsiniz. A) H &amp; E (iç lümen), B) Harts (pembe = elastin), C) Massion trikrom (mavi = kolajen), D) CD31 (kahverengi = endotelyal hücre), E) αSMA (kahverengi = düz kas hücresi), ve F ) F4/80 (kahverengi = makrofaj).

Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model at JoVE.com

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

implantation-of-inferior-vena-cava-interposition-graft-in-mouse-model

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.8K Görüntüleme.  Nationwide Children's Hospital.  Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında. 

Video: Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Tıp

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

Sıçanlarda Common Karotid Arter interpozisyon Harici Juguler Ven Greft: Gelişmiş Mikrocerrahi Tekniği Eğitimi

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Graft arteriosclerois (GA), also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over months to years in transplanted organs characterized by diffuse, circumferential stenosis of the entire graft vascular tree. The most critical component of GA pathogenesis is the proliferation of smooth muscle-like cells within the intima. When a human coronary artery segment is interposed into the infra-renal aortae of immunodeficient mice, the intimas could be expand in response to adoptively transferred human T cells allogeneic to the artery donor or exogenous human IFN-&gamma; in the absence of human T cells. Interposition of a mouse aorta from one strain into another mouse strain recipient is limited as a model for chronic rejection in humans because the acute cell-mediated rejection response in this mouse model completely eliminates all donor-derived vascular cells from the graft within two-three weeks. We have recently developed two new mouse models to circumvent these problems. The first model involves interposition of a vessel segment from a male mouse into a female recipient of the same inbred strain (C57BL/6J). Graft rejection in this case is directed only against minor histocompatibility antigens encoded by the Y chromosome (present in the male but not the female) and the rejection response that ensues is sufficiently indolent to preserve donor-derived smooth muscle cells for several weeks. The second model involves interposing an artery segment from a wild type C57BL/6J mouse donor into a host mouse of the same strain and gender that lacks the receptor for IFN-&gamma; followed by administration of mouse IFN-&gamma; (delivered via infection of the mouse liver with an adenoviral vector. There is no rejection in this case as both donor and recipient mice are of the same strain and gender but donor smooth muscle cells proliferate in response to the cytokine while host-derived cells, lacking receptor for this cytokine, are unresponsive. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, both models can be used to assess the effect of specific genes on GA progression. Here, we describe detailed protocols for our mouse GA models.

We describe protocols for our mouse graft arteriosclerois (GA) models which involve interposition of a mouse vessel segment into a recipient of the same inbred strain. By backcrossing additional genetic changes into the vessel donor, the model can assess the effect of specific genes on GA.

Greft damar sertliği için fare modelleri

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Patch Angioplasty in the Rat Aorta or Inferior Vena Cava

Pericardial patches are commonly used in vascular surgery to close vessels. To facilitate studies of the neointimal hyperplasia that forms on the patch, we developed a rat model of patch angioplasty that can be used in either a vein or an artery, creating a patch venoplasty or a patch arterioplasty, respectively. Technical aspects of this model are discussed. The infra-renal IVC or aorta are dissected and then clamped proximally and distally. A 3 mm venotomy or arteriotomy is performed in the infrarenal inferior vena cava or aorta of 6 to 8 week-old Wistar rats. A bovine pericardial patch (3 mm x 1.5 mm x 0.6 mm) is then used to close the site using a 10-0 nylon suture. Compared to arterial patches, venous patches show increased neointimal thickness on postoperative day 7. This novel model of pericardial patch angioplasty can be used to examine neointimal hyperplasia on vascular biomaterials, as well as to compare the differences between the arterial and venous environments.

We have established a model of pericardial patch angioplasty that can be used in either small-diameter veins or arteries. This model can be used to compare venous and arterial neointimal hyperplasia formation.

Sıçan Aort veya İnferior Vena Cava de Anjiyoplasti Patch

Pericardial patches are commonly used in vascular surgery to close vessels. To facilitate studies of the neointimal hyperplasia that forms on the patch, ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep learning curve. The introduction of the cuff technique for anastomosis of the portal vein (PV) and infrahepatic vena cava (IHVC) has significantly simplified the transplant procedure in rats. However, due to the short anterior wall of the recipients' suprahepatic vena cava (SHVC), the cuff technique is very difficult to use for the reconstruction of the SHVC. Most researchers in this field still use the hand-suture technique for SHVC reconstruction, which makes it the bottleneck step in rat orthotopic liver transplantation. The magnetic anastomosis technique (i.e., magnamosis) is a method of connecting two vessels using the attractive force between two magnets. Our recent study has shown that the magnetic anastomosis technique is superior to the hand-suture technique for SHVC reconstruction in rats. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using the novel magnetic anastomosis technique. In this model, the reconstruction of the PV and IHVC was performed by the standard cuff technique, while the reconstruction of the bile duct (BD) was performed by a stent technique. The hepatic re-arterialization was not performed. The magnetic anastomosis technique made SHVC reconstruction much easier and significantly shortened the anphepatic phase. After a reasonable learning curve, even researchers without advanced microsurgical skills can produce reliable and reproducible results using this rat model of OLT.

The reconstruction of the suprahepatic vena cava (SHVC) remains a difficult step in rat orthotopic liver transplantation. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using a novel magnetic anastomosis technique.

Orthotopic fare modeli bir roman manyetik anastomoz teknik Suprahepatic Vena kava imar için kullanılarak karaciğer nakli

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

A Rodent Model of The Ross Operation: Syngeneic Pulmonary Artery Graft Implantation in A Systemic Position

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding root replacement, the possible dilation of the pulmonary autograft and subsequent aortic regurgitation is described. Several animal models have been proposed. However, these are usually limited to ex-vivo models or in-vivo experiments with relatively expensive large animal models. In this study, we sought to establish a rodent model of pulmonary artery graft (PAG) implantation in a systemic position. A total of 39 adult Lewis rats were included. Immediately after euthanasia, the pulmonary root was harvested from a donor animal (n=17). Syngeneic recipient (n=17) and sham-operated (n=5) rats were sedated and ventilated. In the recipient group, the PAG was implanted with an end-to-end anastomosis in infra-renal abdominal aortic position. Sham-operated rats underwent only transection and re-anastomosis of the aorta. Animals were followed with serial ultrasound studies for two months and post-mortem histological analysis. The median PAG diameter in the native position was 3.20 mm (IQR=3.18-3.23). At follow-up, the median diameter of the PAG was 4.03 mm (IQR=3.74-4.13) at 1 week, 4.07 mm (IQR=3.80-4.28) at 1 month, and 4.27 mm (IQR=3.90-4.35) at 2 months (p&lt;0.01). Peak systolic velocity was 220.07 mm/s (IQR=210.43-246.41) at 1 week, 430.88 mm/s (IQR=375.28-495.56) at 1 month, and 373.68 mm/s (IQR=305.78-429.81) at 2 months (p=0.02) and did not differ from the sham-operated group at the end of the experiment (p=0.5). Histological analysis did not show any sign of endothelial thrombosis. This study showed that rodent models may allow for the evaluation of the long-term adaptation of the pulmonary root to a high-pressure system. A systemically placed syngeneic PAG implantation represents a simple and feasible platform for the development and evaluation of novel surgical techniques and drug therapies to further improve the outcomes of the Ross operation.

We demonstrate how to establish a murine model of pulmonary root implantation into the descending aorta to simulate the Ross procedure. This model enables the medium/long-term evaluation of pulmonary autograft remodeling in a systemic position, representing the basis of developing therapeutic strategies to promote its adaptation.

Ross Operasyonunun Kemirgen Modeli: Sistemik Pozisyonda Singeneik Pulmoner Arter Greft İmplantasyonu

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding ...

Image Acquisition Method for the Sonographic Assessment of the Inferior Vena Cava

Over the past several decades, clinicians have incorporated several applications of diagnostic point-of-care ultrasound (POCUS) into medical decision-making. Among the applications of POCUS, imaging the inferior vena cava (IVC) is practiced by a wide variety of specialties, such as nephrology, emergency medicine, internal medicine, critical care, anesthesiology, pulmonology, and cardiology. Although each specialty uses IVC data in slightly different ways, most medical specialties, at minimum, attempt to use IVC data to make predictions about intravascular volume status. While the relationship between IVC sonographic data and intravascular volume status is complex and highly context-dependent, all clinicians should collect the sonographic data in standardized ways to ensure repeatability. This paper describes standardized IVC image acquisition including patient positioning, transducer selection, probe placement, image optimization, and the pitfalls and limitations of IVC sonographic imaging.&#160;This paper also describes the commonly performed anterior IVC long-axis view and three other views of the IVC that can each provide helpful diagnostic information when the anterior long-axis view is difficult to obtain or interpret.

Point-of-care ultrasound evaluation of the inferior vena cava (IVC) is commonly utilized to identify, among other things, the volume status. Imaging should be performed systematically to ensure repeatability. This manuscript reviews the methods and pitfalls of sonographic IVC examination.