Bu yöntem hücre biyolojisinde, mil kontrol noktasını tatmin ederken gerilimin ne kadar önemli olduğu ve miosiste kromozom davranışında mil eki üzerindeki rolün ne olduğu gibi anahtar soruların yanıtlatımı na yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, deneycinin canlı hücredeki kromozomlara gerilim uygulamasına veya yeniden konumlandırılmasına olanak tanıyan öldürücü olmayan bir teknik olmasıdır. Başlamak için, merkezinden kesilmiş 20 milimetre çapında dairesel delik ile 75 tarafından 25 milimetrelik bir slayt hazırlayın.
Sonra, bir 25 ile 25 milimetre lik bir kapak 1.5 kapak iki saniye boyunca bir bunsen brülör alev ile yarık çalıştırın. Cam kaydıraktaki deliğin kenarına vakum yağı uygulayın. Daha sonra, kapağı deliğin üzerine yerleştirin ve sıkı bir mühür oluşturmak için bastırın.
Kaydırağı ters çevirin ve yeni oluşturulan diseksiyonu halokarbon yağıyla doldurun. Bazı yetişkin erkek kriket elde ettikten sonra, doğrudan kanat tomurcukları arkasında, karın uzun eksenine paralel dorsal yüzeyi kesmek için diseksiyon makas kullanın. Daha sonra, yavaşça dış iskelet içinde kesim yoluyla testisleri itmek için karın sıkmak.
Forceps kullanarak, diseksiyon kuyusu içine izole testisler yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında, testisleri daha küçük parçalara bölmek ve herhangi bir yağ çıkarmak için ince işaretleme forceps kullanın. Daha sonra, kapak yarık yüzeyinde yağ altında testislerin içeriğini yayıldı.
Yayılan kısmı ancak çıplak gözle görülebilir kadar testislerin içeriğini yaymaya devam edin. Gerekirse ek yağ yüklü diseksiyon kuyuları kullanılabilir. İlk olarak, bunsen brülör alev bir cam tüp sonuna yerleştirin.
150 derecelik bir açı ve dar cam boru uzun bir alan oluşturmak için boru ucunu tutun. Daha önce oluşturulan açıdan uzanan ince bölge yaklaşık 10 milimetre uzunluğunda olacak şekilde ince bölgede boru kırın. Mikroforge kullanarak, cam iğneucu eritin, iğne ve mikroforge platin tel arasında 45 derecelik bir açı oluşturan.
Daha sonra, aynı anda ısı kapatırken tel cam çekin. Önceden hazırlanmış slaytı ters faz kontrast mikroskobunun aşamasına yerleştirin. Ardından, bölünen hücreleri bulun ve mümkün olan en düşük büyütmeyi kullanarak görüş alanında ortalayın.
Mikroiğneyi mikromanipülatörün iğne tutucuya yerleştirin. Daha sonra mikroiğneyi mikroskobun ışık yoluna manuel olarak yerleştirin. Mikroskobu hücreleri içeren düzlemin üzerinde birkaç odak düzlemine odakla.
Daha sonra, x ve y eksenlerinde iğnenin gölgesini bulmak için mikroiğneyi birkaç kez yeniden konumlandırmak için joystick kumandasını kullanın. İpucunun konumu görünene kadar iğne pozisyonunu ayarlayın, ardından ucu nüz ekseni boyunca iğnenin konumunu noktalanana kadar ayarlayın. Sonra, hücrelere yeniden odaklanın ve mikroskobu hücre düzleminin hemen üstüne odakla.
Daha sonra, ucu bu odak düzleminde odak noktası olacak şekilde iğnenin konumunu yeniden. Daha yüksek büyütme amacı nı ve daha yüksek duyarlılık ayarını kullanarak bu işlemi tekrarlayın. Hücrelere yeniden odaklanın ve konumlarını ayarlayın, böylece görüş alanının merkezinde kalırlar.
Hücre içinde kromozomlar iter gibi mikroiğne kontrol etmek için joystick kullanın. İğne ucunun hücrelerin üzerindeki düzlemde kaldığından emin olun. Kromozomu hareket ettirebilmek için hücrenin üst kısmındaki bir kromozoma odaklanın.
Daha sonra, iğne ucunu odak haline getirmek için joystick üzerindeki z eksenini ayarlayın ve x ve y'deki joystick ile iğneyi hareket ettirin. İğnenin ucunu doğrudan ilgi kromozomunun üzerine yerleştirin ve istenilen yöne doğru itin. Kromozomu milden ayıracak kadar gerilim uygulayın.
Son olarak, kromozomu hücrenin herhangi bir yerine yerleştirin. Bu protokolü kullanarak, mikromanipülasyon kullanarak bir mili bir kromozom yeniden konumlandırmak, gerginlik uygulamak ve tamamen ayırmak mümkündür. Bu örnekte, manipüle edilmiş iki kromozom, mikromanipülasyon iğnesi ile sürekli olarak dürtülerek iğe tekrar bağlanmaktan uzak tutulmuştur.
Bir kez hakim, örnekler manipülasyon için hazırlanabilir ve mikromanipülatör 15 ila 20 dakika içinde yerolabilir. Mikromanipülasyon deneyleri birkaç saniye ile birkaç saat arasında sürebilir. Bu prosedürü denerken, hücrenin yan tarafındaki kromozomları kapak fişinden en uzak şekilde manipüle etmeyi unutmamak önemlidir.
Bu teknik, geliştirildikten sonra hücre biyolojisi alanında araştırmacıların çekirge ve peygamber devesindeki mil kontrol noktasını keşfetmelerinin önünü açmıştır.
