يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا الخلايا ، مثل ، ما مدى أهمية التوتر في إرضاء نقطة التفتيش المغزل ، وما هو الدور على مرفق المغزل في سلوك الكروموسوم في الميزوز؟ الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تقنية غير هتكية تسمح للمجرب بتطبيق التوتر على أو إعادة وضع الكروموسومات في خلية حية. للبدء، إعداد شريحة 75 في 25 ملليمتر مع ثقب دائري قطره 20 ملليمتر قطع من المركز.
ثم، تشغيل 25 في 25 ملليمتر عدد 1.5 غطاء شق من خلال لهب ناسخ bunsen لمدة ثانيتين. تطبيق الشحوم فراغ حول حافة الثقب في الشريحة الزجاجية. بعد ذلك، ضع زلة الغطاء فوق الحفرة واضغط عليها لتشكيل ختم محكم.
الوجه أكثر من الشريحة، وملء تشريح خلق حديثا جيدا مع زيت الهالوكربون. بعد الحصول على بعض الصرصار الذكور الكبار، واستخدام مقص تشريح لقطع من خلال سطح الظهر موازية للمحور الطويل من البطن، مباشرة وراء براعم الجناح. ثم، والضغط بلطف البطن لدفع الخصية من خلال قطع في الهيكل الخارجي.
باستخدام ملقط، ضع الخصيات المعزولة في تشريح جيدا. تحت المجهر تشريح، واستخدام ملقط دقيقة لافتا لتقسيم الخصيات إلى قطع أصغر، وإزالة أي الدهون. ثم، انتشار محتويات الخصيات تحت النفط على سطح فتحة الغطاء.
الاستمرار في نشر محتويات الخصية حتى جزء انتشار بالكاد مرئية للعين المجردة. ويمكن استخدام آبار تشريح إضافية محملة بالزيت إذا لزم الأمر. أولا، ضع نهاية أنبوب زجاجي في شعلة شعلة بونسن.
عقد نهاية أنابيب لإنشاء زاوية 150 درجة ومساحة ممتدة من أنابيب الزجاج الضيقة. كسر الأنابيب في منطقة رقيقة بحيث منطقة رقيقة تمتد من زاوية تم إنشاؤها سابقا هو ما يقرب من 10 ملليمترات طويلة. باستخدام الفروغ، تذوب غيض من إبرة الزجاج، وتشكيل زاوية 45 درجة بين الإبرة والأسلاك البلاتينية من microforge.
ثم، سحب الزجاج بعيدا عن السلك في حين إيقاف الحرارة في وقت واحد. ضع الشريحة المعدة مسبقًا على خشبة مسرح مجهر تباين المرحلة المقلوب. ثم، ابحث عن الخلايا المقسمة وتوسطها في مجال الرؤية باستخدام أقل التكبير الممكنة.
ضع المايكرويندل في حامل الإبرة من المايكروmanipulator. ثم، ضع الميكرون يدوياً في مسار الضوء من المجهر. التركيز على المجهر عدة طائرات التركيز فوق الطائرة التي تحتوي على الخلايا.
بعد ذلك، استخدم جهاز التحكم جويستيك لإعادة وضع microneedle عدة مرات للعثور على ظل الإبرة في محاور س وص. تعديل موقف إبرة حتى موقف من طرف مرئيا، ثم، وضبط موقف الإبرة على طول محور z حتى تلميح هو في التركيز. بعد ذلك، إعادة التركيز على الخلايا، والتركيز على المجهر فقط فوق مستوى الخلية.
ثم، إعادة ضبط موقف الإبرة بحيث تلميح هو في التركيز في هذه الطائرة البؤري. كرر هذه العملية باستخدام هدف التكبير الأعلى وإعداد حساسية أعلى. إعادة التركيز على الخلايا، وضبط موقفها، حتى أنها تبقى في وسط مجال الرؤية.
استخدم عصا التحكم للتحكم في المايكرويندلة كما أنه يدفع الكروموسومات حول داخل الخلية. تأكد من أن طرف الإبرة يبقى في الطائرة فوق الخلايا. لتحريك الكروموسوم، ركز على كروموسوم بالقرب من أعلى الخلية.
ثم، ضبط محور z على عصا التحكم لتحقيق تلميح إبرة في التركيز، وتحريك الإبرة مع عصا التحكم في س و ص. ضع طرف الإبرة مباشرة على الكروموسوم من الفائدة، ودفعها في الاتجاه المطلوب. تطبيق ما يكفي من التوتر لفصل الكروموسوم من المغزل.
وأخيراً، ضع الكروموسوم في أي مكان داخل الخلية. باستخدام هذا البروتوكول، فمن الممكن لإعادة وضع، وتطبيق التوتر على، وفصل تماما كروموسوم من المغزل باستخدام micromanipulation. في هذا المثال، تم الاحتفاظ باثنين من الكروموسومات التلاعب من إعادة ربط إلى المغزل من خلال دفع باستمرار مع إبرة micromanipulation.
مرة واحدة يتقن، يمكن إعداد العينات للتلاعب، ويمكن وضع micromanipulator في 15 إلى 20 دقيقة. يمكن أن تستغرق تجارب الميكرمانيبيشن في أي مكان من بضع ثوان إلى عدة ساعات. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تتلاعب بالصبغيات على جانب الخلية البعيدة عن زلة الغطاء.
بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال بيولوجيا الخلايا لاستكشاف نقطة تفتيش المغزل في الجنادب والصلاة.
