Bu protokol, travmatik beyin hasarının sıçan lateral sıvı perküsyon yaralanma modelini kablosuz telemetri ile EEG kaydı ile birlikte kullanan çalışmaları uyumlu hale getirmek için bir fırsat sağlamaktadır. Travma sonrası epileptogenezi etkileyen faktörleri araştırmak ve post-travmatik epilepsi gelişimini engelleyebilecek ilaç müdahalelerinin nöroterapötik potansiyelini test etmek için kullanılabilir. Bu yaklaşım serbestçe hareket eden sıçanların uzun tern video EEG kayıt sağlar ve EEG kayıt kesintiye uğramadan hayvanların ılımlı manipülasyon sağlar.
Prosedürü gösteren Matthew McGuire, benim laboratuvarımdan bir MD-Doktora öğrencisi olacak. Ayrıntılı cerrahi işlemler için bu protokole eşlik eden el yazmasına bakın. 10 numaralı neşter bıçağı kullanarak kafa derisinin deri ve kas yoluyla 1 1/2 ila 2 1/2-santimetrelik orta hat kesi yapın.
Kafatası ortaya çıkarmak ve net bir cerrahi alan sağlamak için deri ve kas geri. Elektrokoter hızlı hemostaz ulaşmak için yararlıdır. Daha sonra, kadın-kadın Luer kilit merkezinin tabanı kafatası ile floş dinlenme böylece pürüzsüz, düz bir yüzey üretmek için bir cerrahi curette kullanarak sol parietal kemiğin lateral sırt aşağı tıraş.
Steril salinde mililitre gentamisin çözeltisi başına 2.0 miligram ile kafatası yüzeyini ve çevre dokuları sulayın ve steril bezlerle fazla çözeltiyi lekeleyin. Sonra, kemik kurulamak için kafatasına% 3 hidrojen peroksit uygulayın. Bu noktada, sol parietal kemik ile beş milimetre çapında kraniektomi sitesi oluşturun.
Daha sonra, cerrahi curette ve pürüzsüz doku forceps ile kemik flep çıkarın. Daha sonra, bir stereo mikroskop kullanarak, yavaşça pürüzsüz doku forceps ile kalan kemik ince jant kaldırmak, dura rüptürü değil dikkat. Sonra, herhangi bir kemik tozu kaldırmak ve kafatası kurutmak için% 70 etanol ile kafatası bezi.
Luer kilit göbeğinin alt kenarına ince bir siyanoakrilat tutkal tabakası uygulayın ve açıklığı engellemeden ve yapıştırıcının dura temas etmesine izin vermeden kafatasına sabitleyin. Daha sonra Luer kilidini, göbeğin dış tabanının etrafında ince bir tutkal tabakası ile kapatın. Daha sonra, diş çimentosu bir bulamaç hazırlamak ve yerinde güvenli luer kilit merkezinin tabanı etrafında ve üzerinde kafatası yüzeyine uygulayın.
Daha sonra Luer kilit merkezini, şırınga ve iğne kullanarak birden fazla elektrolit içeren steril koruyucu içermeyen bir solüsyonla doldurun. Kenarın üst kısmında bir ekspons bolus su verilmeli. Diş çimentosu tamamen iyileştikten sonra, gaz anestezisini durdurun ve fareyi stereotaksik çerçeveden çıkarın.
Kıç recumbency sıvı perküsyon yaralanma cihazı yanında bir platform üzerinde sıçan yerleştirin. Ardından, cihazın kavisli ucunun sonuna kadar 12 santimetrelik basınç borusu uzunluğunu sabitleyin ve karşı uç iki santimetrelik erkek Luer kilidi büküm konektöründe sonlandırın. Farenin kafatasındaki göbeğin dişi ucunu erkek konektöre bağlayarak fareyi cihaza sabitle.
Tekrar tekrar çekilme refleks ived etmek için hayvan kontrol edin. En kısa sürede sıçan çekilme refleksi kazanır ama hala sakinleştirilmiş, tek bir 20 milisaniyelik basınç darbesi neden ve yaralanmaya neden cihazın sarkaç bırakın. Sonra, hemen FPI cihazdan sıçan kesmek, sternal recumbency yerleştirin, ve spontan solunum dönene kadar bir burun konisi ile ek oksijen sağlamak.
Apne yaralanma beklenen bir sonucu olduğunu unutmayın. Gerekirse, fare kendiliğinden kendi başına nefes başlayana kadar bir çanta vana maskesi ile periyodik manuel nefes sağlar. Sürekli olarak izleyin ve düzeltme refleksinin dönüş süresini kaydedin.
Yaralanmadan dört saat sonra, fareyi tekrar anestezi altına alın ve Luer kilit göbeği ni ve diş çimentosu çıkarmak için stereotaktik çerçeveye geri yerleştirin. Beş pilot delik delinecek yerlerin her birinde kafatasına %0,5 bupivacaine hidroklorür küçük bir damla uygulayın. Daha sonra, el yapımı 0.1 milimetrelik matkap ucuyla pilot deliklerini kafatasına doğru delin.
Sonra, paslanmaz çelik elektrot vidaları sabit. İlk olarak, lambda bir referans vida kaudal yerleştirin, beyincik üzerinde. Daha sonra, burada görüldüğü gibi dört yerde kayıt elektrotları yerleştirin.
Herhangi bir kemik tozu kaldırmak için% 70 etanol ile kafatası bezi emin olun. Sonra, maruz dura kapsayacak şekilde steril kemik balmumu ince bir tabaka ile kraniektomi site kapağı. Şimdi, renk kodlu elektrot telinin açık ucunu, belirlenmiş paslanmaz çelik elektrot vidasının etrafına sıkıca sararak bir elektrot dizisini beş EEG elektrotuna bağlayın.
Kaide altında bir bobin içine elektrot telleri toplamak ve kemik çimentosu ile yerine teller ve kaide güvenli. Kemik çimentosu iyileşene kadar kaideyi pozisyonda tutun. Son olarak, hayvanı stereotaktik çerçeveden çıkarmadan önce kablosuz vericiyi taze pillerle kaideye takın.
Yaralanma gününden itibaren, EEG üreticisinin toplama yazılımını kullanarak video EEG'yi sürekli olarak kaydedin ve her kablosuz vericiyi benzersiz bir frekans üzerinden belirli bir alıcıya bağla. Her farenin kendi kamerası saniyede 30 kare olarak kaydedilecek şekilde yapılandırılmış video kaydedin. Nöbet etkinliğini tanımlayan dizin olaylarını belirlemek için EEG kayıtlarını el ile tarayan.
Bu rakam, ılımlı bir TBI gününde toplanan tek taraflı, aralıklı delta yavaşlamagösterir. Burada, 2, 048 milisaniyelik seçilmiş EPOC FFT analizi ile bir sham-operated, yaralanmamış kontrol sıçan 90 saniyelik EEG iz görüyoruz. Sonra, burada orta derecede yaralı bir hayvanın EEG izini görüyoruz, bu da aralıklı, tek taraflı delta yavaşlama desenini ve 2, 048 milisaniyelik seçilmiş EPOC'un FFT analizini gösteriyor.
Bu rakam, aynı analiz tekniklerini kullanarak şiddetli bir TBI gününde toplanan ikili, sürekli delta yavaşlamasını göstermektedir. Burada, ağır yaralı bir hayvanın sürekli, ikili delta yavaşlama paternini gösteren 90 saniyelik bir EEG izi görüyoruz. Burada şiddetli TBI'den üç gün sonra toplanan konvülsif olmayan elektrografik nöbet aktivitesi görüyoruz.
Ameliyattan üç gün sonra bir kontrol faresinden alınan veriler, ağır yaralanma sonrası üç gün süren 90 saniyelik EEG izi ve 2, 048 milisaniyelik seçilmiş EPOC'un FFT analizi gösterilmiştir. Ve son olarak, bu rakam, bu hayvanın FFT analizi ile TBI'den dokuz gün sonra toplanan konvülsif elektrografik nöbet aktivitesini gösteriyor. Burada, zaman zaman aralıklı sinyal bırakma ve pil arızası nedeniyle sinyal kaybı temsili görüntüleri bakın.
Duranın bozulmadığından ve kraniektomiden sonra bozulmadığından ve Luer kilit merkezinin kafatasına güvenli bir şekilde mühürlenmesini sağlamak önemlidir. Elektrot tellerinin kafatasına yerleştirilen kayıt vidaları ile iyi temas etmesini sağlamak da önemlidir. Son olarak, kemik çimentosu uzun vadede kafa yapışır sağlamak için kafatası toz ve kuru olmadığından emin olun.
