このプロトコルは、外傷性脳損傷のラット横体液打楽器モデルを使用する研究と、無線テレメトリを介した脳波記録を併用する研究を調和させる機会を提供する。これは、心的外傷後てんかん発生に影響を与える要因を調査し、外傷後てんかんの発症を妨げる可能性のある薬物介入の神経治療的可能性をテストするために使用することができます。このアプローチは自由に動くラットの長いアジサシのビデオEEGの記録を可能にし、EEG記録の中断なしで動物の適度な操作を可能にする。
この手順をデモンストレーションするのは、私の研究室のMD博士課程の学生、マシュー・マクガイアです。詳細な外科手術については、このプロトコルに添付された原稿を参照してください。10個のメスの刃を使用して、頭皮の皮膚と筋肉を通して1 1/2〜1/2センチメートルの正中線切開を行います。
皮膚と筋肉を引き込んで頭蓋骨を露出させ、明確な外科分野を提供する。エレクトロケーテリは、迅速な止止めを達成するのに有用である。次に、外科用キュレットを使用して左頭頂骨の側面尾根を剃り、女性女性のルアーロックハブのベースが頭蓋骨と一緒にフラッシュできるように滑らかで平らな表面を作り出します。
滅菌生理食塩水中の1ミリリットルのゲンタマイシン溶液あたり2.0ミリグラムで頭蓋骨表面および周囲組織を灌漑し、滅菌綿棒で余分な溶液をしみくすみます。次いで、骨を乾燥させるために頭蓋骨に3%過酸化水素を塗布する。この時点で、左頭頂骨を通して直径5ミリメートルのクラニエクトミー部位を作る。
次に、外科用キュレットと滑らかな組織鉗子で骨フラップを取り除きます。次に、ステレオ顕微鏡を用いて、滑らかな組織鉗子で残っている骨の薄い縁を静かに取り除き、硬膜を破裂させないように注意する。その後、頭蓋骨を70%エタノールで振りまき、骨粉を取り除き、頭蓋骨を乾燥させます。
ルアーロックハブの下端の周りにシアノアクリル酸接着剤の薄い層を適用し、開口部を妨げずに、接着剤が硬膜に接触させることなく、クラニエ切除術の上に頭蓋骨にそれを固定します。次に、ハブの外側のベースの周りに接着剤の薄い層で所定の位置にLuerロックを密封します。次に、歯科用セメントのスラリーを準備し、それを所定の位置に固定するために、Luerロックハブの基部の周りと上の頭蓋骨の表面にこれを適用します。
次に、ルアーロックハブに、注射器と針を使用して、複数の電解質を含む無菌防腐剤を含む溶液で充填します。生理食い物の凸のボーラスは、リムの上部の上に見える必要があります。歯科用セメントが完全に硬化したら、ガス麻酔を中止し、立体性フレームからラットを取り除きます。
胸骨の不備の流体パーカッション傷害装置の隣のプラットホームにラットを置きます。その後、2センチメートル、男性ルアーロックツイストコネクタで終端する反対側の端で、デバイスの湾曲した先端の端に圧力チューブの12センチメートルの長さを固定します。ラットの頭蓋骨のハブのメスの端をオスのコネクタに接続して、ラットをデバイスに固定します。
引き出し反射の戻りのために動物を繰り返しチェックする。ラットが離脱反射を取り戻すが、まだ鎮静されるとすぐに、単一の20ミリ秒の圧力パルスを引き起こすためにデバイスの振り子を解放し、傷害を誘発する。次に、すぐにFPI装置からラットを切断し、胸骨の不順に置き、自発的な呼吸が戻るまで鼻コーンを介して補足酸素を提供する。
無呼吸は怪我の予想される結果であることに注意してください。必要に応じて、ラットが自発的に自ら呼吸を始めるまで、バッグバルブマスクを介して定期的な手動呼吸を提供します。継続的に監視し、右反射の復帰時刻を記録します。
怪我の4時間後、再びラットを麻酔し、ルアーロックハブと歯科セメントを取り除くために立体性フレームに戻します。5つのパイロット穴を掘削する各場所の頭蓋骨に0.5%ブピバカイン塩酸塩の小さな滴を適用します。次に、パイロットの穴をハンド 0.1 ミリメートルドリルビットで頭蓋骨にドリルします。
次に、ステンレス電極ネジを固定します。まず、小脳の上にラムダに参照ネジを置きます。次に、ここで見られるように4箇所に記録電極を配置する。
骨粉を取り除くために70%エタノールで頭蓋骨を綿棒にしてください。次に、解剖学部位を、露出した硬膜を覆う無菌骨ワックスの薄い層で覆う。次に、指定されたステンレススチール製の電極ネジの周りに色分けされた電極ワイヤの露出端をしっかりと巻き付けて、電極アレイを5つのEEG電極に接続します。
電極ワイヤを台座の下のコイルに集め、骨セメントで配線と台座を所定の位置に固定します。骨セメントが治るまで、台座を所定の位置に保持します。最後に、立体フレームから動物を取り外す前に、新しい電池を備えたワイヤレス送信機を台座に取り付けます。
怪我の日から、EEGメーカーのコレクションソフトウェアを使用してビデオEEGを連続的に記録し、一意の周波数を介して各ワイヤレス送信機を特定の受信機にリンクします。毎秒30フレームで記録するように構成された独自のカメラで各ラットのビデオを録画します。EEG 記録を手動で画面表示して、差し押さえアクティビティを定義するインデックス イベントを識別します。
この図は、中程度のTBIの日に収集された一方的で断続的なデルタ減速を示しています。ここでは、2,048ミリ秒選択されたEPOCのFFT分析を用いた、シャム操作の無傷の対照ラットからの90秒のEEGトレースを見る。次に、中程度の負傷動物のEEGトレースが見られ、断続的で一方的なデルタ減速パターンと2,048ミリ秒選択されたEPOCのFFT分析を示しています。
この図は、同じ分析技術を使用して、重度のTBIの日に収集された両側の連続的なデルタ減速を示しています。ここでは、重傷を負った動物の連続的な両側デルタ減速パターンを示す90秒のEEGトレースが見られます。ここでは、重症TBI後3日間に収集された非痙攣電解電発作活性を見る。
手術の3日後にコントロールラットからのデータが示され、90秒の脳脳微量は重傷の3日後、および2,048ミリ秒選択されたEPOCのFFT分析が示された。そして最後に、この図は、この動物からのFFT分析を用いて、TBI後9日間収集された痙攣電解発作活性を示す。また、断続的な断続的な信号ドロップアウトとバッテリ障害による信号の損失の代表的な画像も表示されます。
硬膜が破壊されず、クラニエクトミー後もそのまま残り、ルアーロックハブが頭蓋骨にしっかりと密封されるようにすることが重要です。また、電極ワイヤが頭蓋骨に配置されている記録ねじと良好に接触するようにすることも重要です。最後に、骨セメントが頭部に長期間付着するように、頭蓋骨にほこりがなく乾燥していることを確認してください。
