Этот протокол дает возможность согласовать исследования, которые используют крысиной боковой жидкости ударной травмы модели черепно-мозговой травмы в сочетании с ЭЭГ записи с помощью беспроводной телеметрии. Он может использоваться для исследования факторов, влияющих на посттравматический эпилептогенез и проверить нейротерапевтический потенциал лекарственных вмешательств, которые могут предотвратить развитие посттравматической эпилепсии. Такой подход позволяет долго работать с видеоЭГ записи свободно движущихся крыс и позволяет для умеренной манипуляции животных без прерывания записи ЭЭГ.
Демонстрация процедуры будет Мэтью МакГуайр, MD-PhD студент из моей лаборатории. Смотрите рукопись, сопровождающую этот протокол для подробных хирургических процедур. Сделайте разрез средней линии от 1 1/2 до 2 1/2 сантиметра через кожу и мышцу кожи головы с помощью лезвия скальпеля номер 10.
Убирать кожу и мышцы, чтобы разоблачить череп и обеспечить четкое хирургическое поле. Электрокаутерия полезна для достижения быстрого гемостаза. Далее, побрить боковой хребет левой теменной кости с помощью хирургического кюрета для получения гладкой, плоской поверхности, так что основание женско-женского Luer замок концентратор может отдыхать заподлицо с черепом.
Орошать поверхность черепа и окружающие ткани с 2,0 миллиграммов на миллилитр раствора гентамицина в стерильных солевой раствор, и пятно избыток раствора с стерильными тампонами. Затем нанесите 3%перекиси водорода на череп, чтобы высушить кость. На данный момент, создать пять миллиметров диаметром черепно-мозговой сайт через левую темную кость.
Затем удалите костной лоскут хирургическим мюретом и гладкими ровными силами. Далее, используя стерео микроскоп, аккуратно удалите тонкий край кости, оставшийся с гладкими ткани миппы, заботясь, чтобы не разорвать дуру. Затем мазок черепа с 70%этанола, чтобы удалить любую костную пыль и высушить череп.
Нанесите тонкий слой клея цианоакрилата вокруг нижнего края концентратора замка Luer и закрените его к черепу над краниэктомией, не препятствуя открытию и не позволяя клею соприкасаться с дурой. Затем запечатайте замок Luer на месте тонким слоем клея вокруг внешнего основания концентратора. Затем приготовьте суспензию зубного цемента и нанесите ее на поверхность черепа вокруг и над основанием концентратора замка Luer, чтобы закрепить его на месте.
Затем заполните концентратор блокировки Luer стерильным без консервантов раствором, содержащим несколько электролитов, используя шприц и иглу. Над верхней частью обода следует видеть выпуклый болюс солевого раствора. После того, как зубной цемент полностью вылечить, прекратить анестезию газа и удалить крысу из стереотаксиаической рамы.
Поместите крысу на платформу рядом с устройством травмы жидкости ударных в стернальной лежачей комнате. Затем закрепим 12-сантиметровую длину трубки давления до конца изогнутого кончика устройства, а противоположный конец закончится в двухсемейном мужском разъеме Luer lock twist. Защитите крысу к устройству, подключив женский конец концентратора на черепе крысы к мужскому разъему.
Неоднократно проверяйте животное на наличие обратного рефлекса вывода. Как только крыса восстанавливает рефлекс вывода, но все еще поделась, отпустите маятник устройства, чтобы вызвать один 20-миллисекундный импульс давления и вызвать травму. Затем немедленно отсоедините крысу от устройства FPI, поместите ее в стернавую лежачую должность и обеспечьте дополнительный кислород через носовой конус до тех пор, пока не вернется спонтанное дыхание.
Обратите внимание, что апноэ является ожидаемым следствием травмы. При необходимости, обеспечить периодические ручные вдохи через маску клапана мешок, пока крыса начинает спонтанно дышать самостоятельно. Монитор непрерывно, и записывать время возвращения право рефлекс.
Через четыре часа после травмы, снова анестезировать крысу, и поместите его обратно в стереотаксическую рамку, чтобы удалить luer замок концентратор и зубной цемент. Нанесите небольшую каплю 0,5%bupivacaine гидрохлорид на череп в каждом из мест, где пять экспериментальных отверстий должны быть пробурены. Затем просверлите пилотные отверстия через череп с помощью портативного 0,1-миллиметрового бурового бита.
Затем закрелите электродовые винты из нержавеющей стали. Во-первых, поместите эталонный винт caudal к lambda, над мозжечок. Затем поместите запись электродов в четырех местах, как видно здесь.
Не забудьте мазок черепа с 70% этанола, чтобы удалить любую костную пыль. Затем накройте место краниэктомии тонким слоем стерильного костного воска, чтобы покрыть открытый дура. Теперь подключите электродный массив к пяти электродам ЭЭГ, обернув открытый конец цветной электродной проволоки плотно вокруг назначенного электродела из нержавеющей стали.
Соберите электродные провода в катушку под пьедесталом, и закрелите провода и пьедестал на место костным цементом. Держите пьедестал в положении до тех пор, пока костный цемент не вылечит. Наконец, прикрепите беспроводной передатчик со свежими батареями к пьедесталу, прежде чем удалить животное из стереотаксической рамы.
Начиная с дня травмы, используйте программное обеспечение для сбора ЭЭГ для непрерывной записи видеоЭГ, связывая каждый беспроводной передатчик через уникальную частоту с конкретным приемником. Запись видео каждой крысы со своей собственной камерой, настроенной для записи на 30 кадров в секунду. Вручную пройдите проверку записей ЭЭГ для определения индексных событий, определяющих активность захвата.
Эта цифра показывает одностороннее, прерывистое замедление дельты, собранное в день умеренного TBI. Здесь мы видим 90-секундный след ЭЭГ от фиктивной, невредимой контрольной крысы с анализом FFT 2, 048-миллисекундного выбранного EPOC. Затем мы видим след ЭЭГ раненного животного средней степени тяжести, который демонстрирует прерывистую, одностороннюю модель замедления дельты и анализ FFT 2, 048-миллисекунды выбранного EPOC.
Эта цифра показывает двустороннее, непрерывное замедление дельты, собранное в день тяжелого TBI, используя те же методы анализа. Здесь мы видим 90-секундный след ЭЭГ, который демонстрирует непрерывную двустороннюю дельтовую тенденцию замедления тяжелораненого животного. Здесь мы видим несудорожную электрографическую деятельность захвата, собранную в течение трех дней после тяжелой ТБИ.
Данные от контрольной крысы через три дня после операции показаны, а также 90-секундный след ЭЭГ три дня после тяжелой травмы, и FFT анализ 2, 048-миллисекунды выбранного EPOC. И, наконец, эта цифра показывает судорожную электрографическую активность захвата, собранную через девять дней после TBI, с анализом FFT от этого животного. Здесь мы также видим репрезентативные изображения случайного периодического отсева сигнала и потери сигнала из-за отказа батареи.
Важно обеспечить, чтобы дура не была нарушена и осталась нетронутой после черепно-мозговой операции и чтобы концентратор замка Luer надежно запечатан к черепу. Важно также, чтобы убедиться, что электродные провода сделать хороший контакт с записи винты, которые находятся в черепе. Наконец, убедитесь, что череп свободен от пыли и сухой, чтобы убедиться, что костный цемент придерживается головы в долгосрочной перспективе.
