פרוטוקול זה מספק הזדמנות ליצור הרמוניה בין מחקרים המשתמשים במודל פגיעה בנוזלים בלוד של פגיעה מוחית טראומטית בשילוב עם הקלטת EEG באמצעות טלמטריה אלחוטית. זה יכול לשמש כדי לחקור גורמים המשפיעים על אפילפטוגנזה פוסט טראומטית כדי לבדוק את הפוטנציאל הנוירוטרפי של התערבויות סמים, אשר עשוי למנוע התפתחות של אפילפסיה פוסט טראומטית. גישה זו מאפשרת הקלטת וידאו EEG לטווח ארוך של חולדות נעות בחופשיות ומאפשרת מניפולציה מתונה של בעלי חיים ללא הפרעה של הקלטת EEG.
הדגמת ההליך תהיה מתיו מקגווייר, סטודנט לדוקטורט מהמעבדה שלי. עיין בכתב היד הנלווה לפרוטוקול זה להליכים כירורגיים מפורטים. בצע חתך 1 1/2 כדי 2 1/2 ס"מ קו האמצע דרך העור והשרירים של הקרקפת באמצעות להב אזמל מספר 10.
יש לסגת מהעור ומהשריר כדי לחשוף את הגולגולת ולספק שדה כירורגי ברור. אלקטרוקוטריה שימושית להשגת קביים מהירים. לאחר מכן, לגלח את הרכס בצד השני של עצםקודית שמאל באמצעות קורט כירורגי לייצר חלקה, משטח שטוח, כך הבסיס של נקבה נקבה לוקר לנעול רכזת יכול לנוח סומק עם הגולגולת.
להשקות את פני השטח של הגולגולת ואת הרקמות שמסביב עם 2.0 מיליגרם לכל תמיסת ג'נטמיצין מיליליטר מלוחים סטריליים, כתם עודף פתרון עם ספוגיות סטריליות. לאחר מכן, להחיל 3% מי חמצן על הגולגולת כדי לייבש את העצם. בשלב זה, ליצור אתר craniectomy בקוטר חמישה מילימטר דרך עצםקודית שמאל.
לאחר מכן, להסיר את דש העצם עם קורט כירורגית מדפים רקמה חלקה. לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ סטריאו, להסיר בעדינות את השפה הדקה של העצם שנותרה עם מדפים רקמה חלקה, דואג לא לקרוע את הדורה. לאחר מכן, לנגב את הגולגולת עם 70% אתנול כדי להסיר את כל אבק העצם ולייבש את הגולגולת.
החל שכבה דקה של דבק cyanoacrylate סביב הקצה התחתון של רכזת מנעול לולר, ולאבטח אותו על הגולגולת מעל craniectomy מבלי לחסום את הפתח מבלי לאפשר הדבק ליצור קשר עם דורה. לאחר מכן, לאטום את מנעול לולר במקום עם שכבה דקה של דבק סביב הבסיס החיצוני של הרכזת. לאחר מכן, להכין תרחיף של מלט שיניים, ולהחיל את זה על פני השטח של הגולגולת סביב מעל הבסיס של רכזת מנעול לולר כדי לאבטח אותו במקום.
לאחר מכן, מלאו את רכזת המנעול Luer בתת פתרון סטרילי ללא חומרים משמרים המכיל אלקטרוליטים מרובים, באמצעות מזרק ומחט. בולוס קמור של מלוחים צריך להיראות מעל החלק העליון של השפה. לאחר מלט שיניים נרפא לחלוטין, להפסיק הרדמה גז ולהסיר את החולדה מן המסגרת הסטריאוטוקסית.
מניחים את החולדה על פלטפורמה ליד התקן פציעת כלי הקשה נוזלים ב recumbency עצם החזה. לאחר מכן, יש לאבטח צינורות לחץ באורך של 12 ס"מ עד לקצה הקצה המעוקל של המכשיר, כאשר הקצה הנגדי יסיים במחבר טוויסט של שני ס"מ, מנעול לור זכר. אבטח את החולדה למכשיר על-ידי חיבור הקצה הנשי של הרכזת בגולגולת החולדה למחבר הזכר.
בדוק שוב ושוב את החיה להחזרת רפלקס הנסיגה. ברגע שהעכברוש חוזר רפלקס הנסיגה אבל הוא עדיין מרומם, לשחרר את המטוטלת של המכשיר כדי לגרום דופק לחץ יחיד 20 אלפיות השניה ולגרום לפציעה. לאחר מכן, נתק מיד את החולדה ממכשיר ה- FPI, מקם אותה בעצם החזה, וספק חמצן משלים באמצעות חרוט האף עד שהנשימה הספונטנית תחזור.
שים לב כי דום נשימה הוא תוצאה צפויה של הפציעה. במידת הצורך, לספק נשימות ידניות תקופתיות באמצעות מסכת שסתום שקית עד החולדה מתחילה לנשום באופן ספונטני בכוחות עצמו. נטר ברציפות והזמן את זמן החזרה של רפלקס הזכות.
ארבע שעות לאחר הפציעה, שוב הרדמה את החולדה, והחזר אותה למסגרת הסטריאוטקית כדי להסיר את רכזת המנעול של לור ואת מלט השיניים. החל טיפה קטנה של 0.5% bupivacaine הידרוכלוריד על הגולגולת בכל אחד מהמקומות שבהם יש לקדוח חמישה חורי טייס. לאחר מכן, לקדוח חורי הטייס דרך הגולגולת עם קצת מקדחה 0.1 מילימטר כף יד.
לאחר מכן, אבטח את בורגי האלקטרודה מפלדת אל-חלד. ראשית, מניחים בורג התייחסות caudal ל lambda, מעל המוח הקטן. לאחר מכן, מקם אלקטרודות הקלטה בארבעת המקומות כפי שניתן לראות כאן.
הקפד לנגב את הגולגולת עם 70% אתנול כדי להסיר כל אבק עצמות. לאחר מכן, לכסות את האתר craniectomy עם שכבה דקה של שעווה עצם סטרילית כדי לכסות את דורה חשופה. עכשיו, לחבר מערך אלקטרודה לחמש אלקטרודות EEG על ידי עטיפת הקצה החשוף של חוט אלקטרודה מקודד בצבע בחוזקה סביב בורג האלקטרודה המיועד נירוסטה שלה.
לאסוף את חוטי האלקטרודה לתוך סליל מתחת לדוד, ולאבטח את החוטים ואת הידוד למקומם עם מלט עצם. החזק את הדום בעמדה עד מלט העצם נרפא. לבסוף, חבר את המשדר האלחוטי עם סוללות טריות לתוכך לפני הסרת החיה מהמסגרת הסטראוטקטית.
החל מיום הפציעה, השתמש בתוכנת האיסוף של יצרן EEG כדי להקליט באופן רציף וידאו EEG, קישור כל משדר אלחוטי באמצעות תדר ייחודי למקלט מסוים. הקלט וידאו של כל חולדה עם מצלמה משלה מוגדר להקליט ב 30 מסגרות לשנייה. הקרנה ידנית של הקלטות EEG לזיהוי אירועי אינדקס המגדירים פעילות תפיסה.
נתון זה מראה האטה חד-צדדית לסירוגין בדלתא שנאספה ביום של TBI מתון. כאן, אנו רואים עקבות EEG של 90 שניות מחולדת בקרה לא פצועה המופעלת על ידי זיוף עם ניתוח FFT של EPOC נבחר באורך 2, 048 אלפיות שנייה. לאחר מכן, כאן אנו רואים עקבות EEG של בעל חיים פצוע בינוני, אשר מדגים את לסירוגין, דלתא האטה דפוס וניתוח FFT של 2, 048 אלפיות שנייה נבחר EPOC.
נתון זה מראה האטה דו-צדדית ורציפה בדלתא שנאספה ביום של TBI חמור, תוך שימוש באותן טכניקות ניתוח. כאן, אנו רואים עקבות EEG 90 שניות, אשר מדגים את רציף, דלתא דו צדדית האטה דפוס של בעל חיים שנפצע קשה. כאן, אנו רואים פעילות התקפים אלקטרוגרפיים לא עוויתות שנאספו שלושה ימים לאחר TBI חמור.
נתונים של חולדת בקרה שלושה ימים לאחר הניתוח מוצג, כמו גם עקבות EEG 90 שניות שלושה ימים לאחר פציעה חמורה, וניתוח FFT של EPOC נבחר 2, 048 אלפיות שנייה. ולבסוף, נתון זה מראה פעילות התקפים אלקטרוגרפיים עוויתית שנאספו תשעה ימים לאחר TBI, עם ניתוח FFT מבעל חיים זה. כאן, אנו רואים גם תמונות מייצגות של נשירת אות לסירוגין מדי פעם ואובדן אות עקב כשל בסוללה.
חשוב לוודא שהדורה לא תפריע ותישמר שלמה לאחר כריתת הקרניקטום ושרכזת המנעול של לולר אטומה היטב לגולגולת. חשוב גם לוודא כי חוטי האלקטרודה ליצור קשר טוב עם ברגים הקלטה כי הם ממוקמים בגולגולת. לבסוף, ודא הגולגולת היא ללא אבק ויבש כדי להבטיח כי מלט העצם דבק הראש לטווח ארוך.
