Bu protokol önemli ve sürekli yaralanma ile sonuçlanan gelinciklerde inflamasyon duyarlı erken beyin hasarı ilk modelini sunuyor çünkü önemlidir. Bu teknik, prematüre insan bebeklerde görülen beyin yaralanmaları nın türlerine katkıda olduğu düşünülen tetikleyiciler ve biyokimyasal mekanizmaların çoğunu içeren uzun süreli hakaretler içerir. Beyin ölçüm prosedürünü gösteren Kylie Corry, laboratuarımızda bir araştırma bilim adamı ve Olivia White, bir lisans öğrencisi olacaktır.
Ameliyata başlamadan otuz dakika önce, yaralanma grubundaki kitlere kilogram başına üç miligram LPS IP ve hayvanları kontrol etmek için gram başına üç mikrolitre lik eşdeğer bir steril tuzluluk hacmi uygulayın. İşleme başlamadan önce, küçük hayvan makası kullanarak gelinciğin ventral boyun bölgesindeki tüm tüyleri dikdörtgen bir desenle temizleyerek, cildin çentiklenmesini veya ısı döküntüsü oluşturmasını önlemeye özen göstermektedir. Tıraş bölgesine lokal anestezi uygulayın ve üç alternatif povison iyot ve yüzde yetmiş etanol ile cildi dezenfekte edin.
Ayak çimdik tarafından sedasyon uygun bir düzeyde doğruladıktan sonra, boyun bölgesi ortaya steril, tek kullanımlık kesilmiş perdeler ile hayvan kapağı. Bilateral karotis arter ligasyonu için, boyun merkezinde 1,5 santimetrelik orta hat kesiyapmak için tek bir kullanım numarası on neşter bıçak kullanın ve sol karotid artere kadar ince hemostatlar ve kavisli forseps kullanın. Açığa çıkan arteri ilişkili nörovasküler paketten uzaklaştırın.
Ve arter altında steril 5 / 0 ipek dikiş döngülü on santimetre uzunluğunda geçmek için kavisli ince çifenerler bir çift kullanın. Dikişleri ikiye bölün ve atardamarı inkâr etmek için her iki dikiş uzunluğunu güvenli bir şekilde bağlayın ve düğümler arasında en az iki milimetre bırakın. Dikişler arasında sol karotis arter transect, sinir bozulmadan bırakmak ve sağda diseksiyon tekrar dikkat.
Tek bir steril 1/8 inç göbek bağı ile sağ karotis arteri ters çevirin. Ve yarayı cerrahi deri klipleriyle kapatın. Daha sonra, hipoksi önce izleme ile en az otuz dakika boyunca bir sıcaklık kontrollü su banyosunda kurtarmak için hayvan sağlar.
Sıralı hipoksi, hiperoksi ve hipoksi tedavisi için, bir su banyosu içinde hava geçirmez bir odada yaralanma grubunda hayvanları yerleştirin. En az bir nöbetçi hayvandaki rektal sıcaklığın yanı sıra oda içindeki oksijen konsantrasyonu sürekli olarak izleyin. Odayı nemlendirilmiş yüzde dokuz oksijen ve yüzde 91 azot ile temizleyin ve oda büyüklüğüne bağlı olarak dakikada 3-5 litre lik bir akış hızı koruyun.
Odadaki oksijen konsantrasyonu %9'a ulaştığında, otuz dakika boyunca teslimata devam edin. Hipoksi tedavisinin sonunda, gaz arzını yüzde 80 nemlendirilmiş oksijene ve yüzde 20 nitrojene çevirin. Hiperoksia otuz dakika sonra, daha hızlı normoksia ulaşmak için oda havası ile dengelemek için, oda mühürleme ve tekrar yüzde dokuz nemlendirilmiş oksijen ile yıkama önce oda açmak için oda açın.
Hipoksinin bu ikinci turunda tüm hayvanları sürekli olarak takip edin, bradikipne gösteren tüm hayvanları not alın. Odadaki oksijen konsantrasyonu %9'a ulaştığında hipoksi tedavisine otuz dakika devam edin. Tedavinin sonunda, sağ karotid arterden göbek bandı tanımlamak ve açmak için kavisli forceps kullanılır.
Yarayı cerrahi deri klipsleriyle tekrar kapatın. Sonra hemşirelik ve kurtarma için 60 dakika jills için tüm kitleri geri dönün. İyileşme süresinin sonunda, yaralı hayvanları 36 ila 37 santigrat derecerek rektal sıcaklıkları korumak için, gerektiği gibi su sıcaklığını ayarlayarak, altı saat boyunca 37 ila 40 santigrat derecedesu su banyolarına geri getirin.
Sonra, tekrar onların jills kitleri dönün. Uygun deneysel bitiş noktasında beyin hasat ve fiksasyon sonra, her yaralı ve yaralanmamış beynin yüksekliğini ölçmek için her beynin dorsal ve ventral yönlerini bir elektronik kaliper ipuçları yerleştirin. Her beynin genişliğini ölçmek ve her beyin tartmak için temporal lobların en lateral bölümlerinde kaliper ipuçlarıyerleştirin.
Uzunlamasına fissür ölçmek için kaliper kullanın, ilgili sulkus en belirgin bölümünün başından ve sonundan itibaren sulci tüm, ve her karşılık gelen girus en geniş açıdan gyri tüm. Daha sonra kaliperin bir ucunu uzunlamasına fissürün en arka noktasına, diğer ucunu ise serebellumun en arka kısmına yerleştirin. Bu çalışmada hakarete maruz kalan altı çöpten 34 hayvandan beşi orta derecede yaralanmış, dört hayvan ağır yaralanmış.
Artan yaralanma ile, temporal ve / veya oksipital loblarda gyri daralma gözlenir, ilişkili bir sulkül kısalma ve uzunlamasına çatlak ve en ağır yaralı hayvanlarda kistik doku kaybı daha büyük alanlarda genişleyen. Refleks test süresi boyunca, yaralı hayvanlar olumsuz geotaksis görev döndürmek için daha yavaş bir zaman görüntüler. Cliff Kaçınma görevinde kenardan uzaklaşmak için daha yavaş bir zaman ve sağa doğru daha yavaş bir zaman.
Podyumda, yaralı hayvanlar kontrollere benzer bir ortalama hız gösterirler ancak her koşu sırasında önemli ölçüde daha fazla hız değişimi gösterirler. Pençeleri ve arka pençeleri arasındaki ağırlık ayarlanmış mesafe, dört pençeleri aracılığıyla, birim pençe alanı başına uygulanan daha az basınç ile, yaralı hayvanlarda önemli ölçüde daha fazladır. Açık alanda, yaralı hayvanlar daha az toplam mesafe yi kaplar, daha sık durur ve alanın merkezinde önemli ölçüde daha fazla, köşelerde daha az zaman geçirirler.
Burada kontrol ve yaralı hayvanların temsili ısı haritaları görülebilir. Eşlik eden sinir arter uzak incelemek ve mümkün olan maksimum hipoksi süresi izin dikkat edin. Bu adımlar hayvanların çoğunun hayatta kalmasını sağlarken, aynı zamanda bir yaralanmaya da devam edecektir.
Bu prosedürü takiben, herhangi bir biyokimyasal, patolojik veya davranışsal sonuçlar değerlendirilebilir, normalde beyin hasarı kemirgen modelleri ile sınırlı değerlendirmeler de dahil olmak üzere.
