Primaquine iyi bilinen bir anti-sıtma ilaçtır. Biyolojik sıvılarda primaquine belirlenmesi genellikle farmakokinetiği değerlendirmek için gereklidir. Şu anda, Primaquine tayini için önemli teknikler HPLC dayanmaktadır.
HPLC prosedürleri oldukça karmaşık ve zaman alıcı olabilir. Yani bu yöntem Primaquine hızlı algılama için basit bir yol sunuyor. Bu Griess yöntemi potansiyel primaquine nicelleştirme için en basit ve maliyet-etkin yoludur.
Ayrıca, bu yöntem herhangi bir ekipman gerek kalmadan çıplak göz Primaquine algılama için olanaklar sunabilir. Serum ve idrar örneklerinin yanı sıra, bu yöntem farmasötik formülasyonlarda Primaquine'i kantitatif olarak belirlemek için de kullanılabilir, örneğin, üretim kalite kontrolü için tabletlerde Primaquine tayini. Prosedürü gösteren Bayan Wu Yalan ve Wu Shengjun, benim laboratuvar iki yüksek lisans öğrencisi olacaktır.
25 mililitrelik kahverengi alt şişede %5 fosforik asit çözeltisi olan 10 mililitreye 0.1 milimol aniline ve primaquine bifosfatı eriterek başlayın. Bir buz banyosu üzerine şişe koyun ve bir karıştırma çubuğu ekleyin. Sonra bir karıştırma plakası üzerine buz banyosu koyun.
6,9 miligram sodyum nitrat ve bir mililitre soğutulmuş suyu eritin ve şişeye ekleyin. Buz banyosunu çıkarın ve reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karıştırın. Elüent olarak bir diklorometan metanol karışımı kullanarak, bir silika jel kaplı, ince tabaka kromatografi veya TLC plaka ile reaksiyonu izleyin.
Azo ürün TLC plaka üzerinde renkli lekeler sergiler. PMQ lekeleri kaybolduğunda reaksiyonu durdurun. Reaksiyon karışımının pH'ını bir buz banyosuna sodyum hidroksit çözeltisi ekleyerek 10'dan fazlasına ayarlayın.
Daha sonra, ekstraksiyon başına etil asetat 20 mililitre ile karışımı üç kez ayıklamak için 50 mililitre ayırma hunisi kullanın. Bittiğinde, birleştirmek ve vakum altında organik faz konsantre bir döner evaporatör kullanarak. Normal basınç altında ters faz silika jel ile flaş kromatografikullanarak artıkları arındırın.
Daha sonra istenilen azo ürüne elde etmek için lyophilization ile çözeltiyi kurutun. UV vis emilim spektrumunu ölçmek için, saf azo'yu distile suda veya %5 fosforik asitte çözün ve oda sıcaklığında soğurma spektrumunu kaydetmek için spektrofotometreyi kullanın. PMQ emilimini ölçmek için, 200 milimolar aninin çözeltisi için 0,2 molar hidrojen klorür 4-methoxyaniline eriterek başlayın.
Sonra beş milimolar çözelti elde etmek için distile suda sodyum nitrit eritin. Çözümleri dört derecede tutun. 96 kuyulu bir tabağa 100 mikrolitre aniline çözeltisi ekleyin.
Daha sonra PMQ içeren numunenin 50 mikrolitresini ekleyin ve aniline karıştırın. Plakaya 50 mikrolitre sodyum nitrit çözeltisi ekleyin ve pipetleme ile içindekileri karıştırın. Plakayı oda sıcaklığında 15 dakika tutun, ardından çözeltinin emiciliğini 504 nanometrede ölçün.
Daha fazla analiz için verileri elektronik tablo dosyası olarak dışa aktarın. İdrar örneklerinde PMQ ölçümleri için bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için, sıfır, bir, iki, beş, 10, 20, 50, 100 ve 200 mikromolar konsantrasyonlarında sentetik idrarda PMQ çözeltileri hazırlayın. PMQ algılama reaksiyonu hazırlayın ve daha önce açıklandığı gibi emiciliği ölçün.
Daha sonra 504 nanometre emiciliği ve PMQ konsantrasyonlarını temel alan bir kalibrasyon eğrisi oluşturun. PMQ'suz örneklerin emicilik değerlerini test ölçümlerinden çıkarın ve doğrusal bir uyum gerçekleştirin, y'nin emilmesi ve tensity olduğu, x'in PMQ konsantrasyonu olduğu doğrusal bir denklem y artı b'ye eşittir. İnsan serum örneklerinde PMQ ölçümü için bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için, sıfır, bir, iki, beş, 10, 20, 50, 100 ve 200 mikromolar PMQ konsantrasyonları ile insan serumpmq çözümleri hazırlamak.
PMQ reaksiyonu hazırlayın. Emiciliği ölçün ve kalibrasyon eğrisini daha önce açıklandığı gibi inşa edin. 15 mililitrelik bir santrifüj tüppmq içeren serum iki mililitre içine yedi ila bir etil asetat heksan altı mililitre ekleyin.
Çıkarma sistemine 100 mikrolitre iki molar sodyum hidroksit çözeltisi ekleyin ve tüpü 30 saniye boyunca girdaplayın. Sonra, organik tabaka toplamak ve vakum altında bir döner buharlaştırıcı ile konsantre. 200 mikrolitre distile sudaki kalıntıyı çözün ve çözünmez lipid bileşenlerini çıkarmak için disk şeklinde, 220 nanometre gözenek büyüklüğünde bir membrandan süzün.
PmQ için kalibrasyon eğrisini distile suda yerleştirin, ardından daha önce açıklandığı gibi 96 kuyuluk bir plakada çıkarılan çözeltiyle bir algılama reaksiyonu hazırlayın ve emiciliği ölçün. Daha sonra, pmq konsantrasyonu kalibrasyon eğrisi doğrusal denklemine göre belirleyin. Reaksiyon koşulları Griess reaksiyonu ile PMQ ile çift çeşitli aniline kullanılarak optimize edildi.
Teorik hesaplamalar yapıldı ve sonuçlar optik ölçümlerle iyi bir uyum içindeydi. İyi performans ve reaksiyon oranı, ürün çözünürlüğü ve stabilitesi nedeniyle 4-methoxyaniline'ın PMQ algılama reaksiyonu için en uygun olduğu saptandı. Ayrıca, 4-methoxyaniline için azo ürün çıplak gözlerle ayırt etmek kolaydır renk, kırmızı.
pH'ın azo ürününün UV vis emilimi ve PMQ çözeltileri üzerindeki etkileri test edildi. PH'ı 1.0'dan 7.0'a çıkarmak absorbe sayılmayı değiştirmezken, temel pH'ın önemli bir etkisi vardır. İdrarda ve serum örneklerinde PMQ tespiti için kalibrasyon eğrileri oluşturuldu.
PMQ idrarda sıfırdan 200 mikromolar adede ve serumda 10 ila 200 mikromolar arasında değiştiğinde doğrusal bir ilişki bulunmuştur. Gerçek bir PMQ içeren serumu simüle etmek için 0, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mikromolar konsantrasyonlarda insan serumuna PMQ eklendi. Bu protokol kullanılarak, kurtarılan konsantrasyonların 0.02, 0.14, 0.44, 0.90 ve 1.78 mikromolar olduğu ve 0.5 mikromolar üzerindeki konsantrasyonların %90 oranında geri kazanıma yol açtıkları saptamıştır.
Reaksiyonun doymuş yoğunluğuna ulaşma zamanının ısıya bağlı olduğu unutulmamalıdır. Normalde, 10 ila 20 dakika 20 ila 30 santigrat derece arasındaki sıcaklık için yeterlidir. Ancak, primaquine algılama için Griess kimya örneği sonuçlandırmak için.
Benzer tasarım primaquine gibi benzer kimyasal reaktivite diğer ilgili moleküller için de uygundur.
