Kardiyovasküler arıza dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Burada sunduğumuz izole kalp modeli insan kardiyak dinamiklerine deneysel bir pencere görevi görebilir. Bu yaklaşım, klasik elektrofizyoloji çalışmasını transmembran voltajı ve hücreler arası kalsiyumun eşzamanlı optik haritalaması ile birleştirerek kalbin durumunu değerlendirir.
Bu metodoloji hastalık modelleme, farmakoloji ve toksikoloji çalışmalarına uygulanabilir. Örneğin, odak alanlarından biri kardiyak elektrofizyoloji üzerinde cam büyükleri etkilerini karakterize etmektir. Bu metodoloji teknik olarak daha küçük bir hayvan modeli kullanan bir protokolden daha zorlu olsa da, genel olarak, tüm parçalar yerleştirildikten sonra protokol nispeten basittir.
Bir görüntüleme ve perfüzyon sisteminin tüm bileşenlerini metinle tanımlamak zordur, bu nedenle bu sürecin görsel gösterimi başarılı bir hazırlık oluşturmada yardımcı olacaktır. Yükselen aort bozulmamış ile kalp izole sonra, buz gibi kardiyopleji içine excised organ dalma ve aort duvarKavrama hemostats bir çift kullanın. Kabı, kalbin yaklaşık 95 santimetre üzerinde asılı bir buz gibi kardiyopleji ortamına bağlı boruya bağlı nervürlü bir kanüle yerleştirin.
Damar damar girmesini herhangi bir kabarcıklar önlemek için damar taşana kadar sıvı aort doldurmak için izin verin ve kanül aort güvenli göbek bandı kullanın. Kanülden sarkandan sarkan kalbin ağırlığını taşıyacak hemostatları bağlayın ve soğuk ortamın kalbe 70 milimetrelik sabit bir cıva basıncında yer çekimiyle geriye doğru pergrat sağlamasına izin verin. Duymayı kanüle hava sokmadan 37 santigrat derecelik Langendorff sistemine aktarın.
Ve normal sinüs ritmi kalan kan ve kardiyopleji vaskülatür floş sağlar. Şok edilebilir aritmiler durumunda, organ defibrillate için kalbin apeks ve tabanına dış kürekler yerleştirin, beş joule tek bir şok teslim ve 50 joule kadar beş joule artışlarla artan, kardiyoversiyon, veya unshockable ritim elde edilir. Sonra, herhangi bir kan ve kardiyopleji kaldırmak için resirasyon olmadan modifiye Krebs-Henseleit orta en az bir litre ile kalp floş.
Orta kalp yoluyla açık çalıştığında, perfusate recirculate dolaşan döngü kapatın. Çalışma boyunca EKG'ye standart bir kurşun kaydetmek için, apekse yakın ventriküler epikardyuma 29 kalibrelik bir iğne elektrotu takın ve sağ atriyuma başka bir elektrot takın. Diferansiyel biyoamplifikatörün pozitif ve negatif girdilerini sırasıyla apeks ve sağ atriyuma bağlayın ve sağ atriyuma bir bipolar uyarıcı elektrot ve pacing amacıyla lateral sol ventriküle ikinci bir bipolar uyarıcı elektrot takın.
İlk akım diyastolik eşiğin iki katı ve bir milisaniyelik darbe genişliğine ayarlanmış bir elektrofizyoloji uyarıcı kullanarak kalbi hızlandırın. Pacing eşiğini belirlemek için, tutarlı bir uyarıcı yanıtı sağlamak için tanımlanmış pacing döngüsü uzunluklarında bir milisaniyelik darbe genişliği ile bir ila iki miliamper uyarıcı impulslar bir dizi uygulayın. S1, S1 veya S1, S2 pacing trenini kullanarak ekstra uyarıcı pacing yapın.
Pacing yakalamayı başaramayana kadar S2 pacing döngüsü uzunluğunu adım adım 10 milisaniye azaltın. Ardından, sondan bir önceki pacing döngüsü uzunluğuna kadar adım atın ve yakalama kaybından önce en hassas pacing döngüsü uzunluğunu belirlemek için döngü uzunluklarını milisaniye aralıklarla azaltın. Ventriküler etkili refrakter periyodu belirlemek için, s2 erken beat ventriküler depolarizasyon başlatır kısa S1, S2 aralığı belirlemek için lateral sol ventrikül üzerinde uyarıcı elektrot kullanın.
Wenckebach döngüsü uzunluğunu tanımlamak için, sağ atriyumdaki uyarıcı elektrodu kullanarak en kısa S1,S1 aralığını kullanın ve bire bir atriyoventriküler iletim normal iletim yolu üzerinden yayılır. Sinüs düğümü iyileşme süresini tanımlamak için sağ atriyumdaki uyarıcı elektrodu kullanarak S1, S1 tempolu treni uygulayın ve tempolu trendeki son itiş gücü ile spontan sinoatriyal düğüm aracılı aktivitenin geri kazanımı arasındaki zaman gecikmesini ölçün. Atriyoventriküler düğüm etkili refrakter dönemi kurmak için, sağ atriyum üzerinde uyarıcı elektrot kullanın.
Erken atriyal stimülasyonun ardından qrs kompleksini ortaya çıkaran ventriküler depolarizasyonu simgeleyen Hisbundle potansiyelinin takip edildiği en kısa S1, S2 bağlantı aralığını bulun. Transmembran gerilimi ve hücre içi kalsiyumun optik haritalaması için, önce yavaşça aort kanülüne beş mililitreye kadar taze hazırlanmış voltaj boyası proksimal ekleyin ve ardından taze hazırlanmış kalsiyum boyasının yavaş ilavesi. Ardından, görüntüleme donanımını uygun bir görüş alanına odaklanmak için yerleştirin ve kamerayı bir iş istasyonuna bağlayın.
5 ila iki milisaniye pozlama süresi ile seçili yazılımı kullanarak görüntüleri elde edin. İstenilen bölgeleri bölüp bindirmeye ve herhangi bir vurgu yanlış hizalamaya gri tonlama veya sözde renk eklemesi görüntüleyebilen yazılım yardımı ile görüntü hizalaması gerçekleştirin. Ortam aydınlatması en aza indirgenerek, sensörün derinliğinde belirtildiği gibi, tek tip ve maksimum epikardiyal aydınlatma sağlamak için LED ışıkları test edin.
Daha sonra, sinüs ritmi, ventriküler fibrilasyon veya dinamik pacing sol ventrikül üzerinde konumlandırılmış stimülasyon elektrodu kullanarak miyokardim görüntü, bir pacing döngüsü uzunluğu ile başlayan 350 milisaniye ve 10 ila 50 milisaniye azalan iade eğrileri oluşturmak için. Deneme boyunca optik bir kalite sinyalinin edinimini onaylamak için bir video dosyası açın, ilgi çekici bir bölge seçin ve zaman içinde ortalama floresan'ı çizin. Deneyin sonunda, kalp sistemden çıkarın ve perfusate drenaj.
Daha sonra, sistem boru ve odaları arıtılmış su ile durulayın. Rutin bakım için, gerektiğinde sistemi düzenli olarak deterjan solüsyonu ile durulayın. Bu temsili çalışmalarda, prosedür, gösterildiği gibi, vücut ağırlığı 2,5 ila 10,5 kilogram ve kalp ağırlığı 18-137 gram arasında değişen bozulmamış modeller üzerinde yapılmıştır.
Bir Langendorff sistemine izole kalp transfer sonra, kalp hızı defibrilasyon yaklaşık 10 dakika içinde dakikada yaklaşık 70 atım stabilize ve çalışma süresi boyunca sabit kalır. Dakikada yaklaşık 184 mililitre lik ortalama akış hızı genellikle ölçülür. Mekanik bir ayırıcı içeren ısıtılmış ortamla perfüzyon yaptıktan sonra dakikada 70 mililitreye kadar yavaşlar.
Kurşun iki EGs sinüs ritmi sırasında çalışma süresi boyunca veya elektrofizyolojik parametreleri ölçmek için dış pacing yanıt olarak kaydedilebilir. Optik haritalama deneyleri sinüs ritmi ve spontan ventriküler fibrilasyon sırasında da yapılabilir. Boya yüklü bir kalbin temsili görüntüleri, ilgili optik eylem potansiyelleri ile elde edilebilir.
Ve kalsiyum geçici epikardiyal yüzeyde ilgi iki bölgeden toplanabilir. Buna ek olarak, dinamik epikardiyal pacing içsel kalp hızlarında herhangi bir hafif farklılıkları normalleştirmek için optik haritalama deneyleri sırasında kullanılabilir. Ham sinyaller eylem potansiyel kalsiyum geçici bağlantı süresi, aktivasyon ve süre süresi ve elektrik ve kalsiyum iadesi tasvir etmek için kullanılabilir.
Kabarcıkların aorta girmesine izin vermemek, hayvandan sisteme geçiş süresini en aza indirmek ve daha büyük kalbi desteklemek önemlidir. Elektrofizyoloji ve optik sinyal verileri satın alma sonrası analiz edilebilir. Ayrıca, kalp histoloji, immünboyama veya gen ekspresyonu analizi için çalışmadan sonra korunabilir.
Bu tekniği, çocukça kardiyak gelişimi karakterize etmek ve çevresel maruziyetlerin kardiyak fizyoloji üzerindeki etkisini incelemek için kullanıyoruz. Hareketi en aza indirmek için kullanılan mekanik ayırıcılar ve albumin frothing adresiiçin kullanılan anti-köpük kimyasallar her ikisi de toksik, bu nedenle uygun kişisel koruyucu ekipman kullanarak kesinlikle gereklidir.
