Kısa DINeC olarak adlandırdığımız nötr SO2 kümelerinin indüklediği desorpsiyon iyonizasyonu yumuşak ve verimli bir desorpsiyon iyonizasyon yöntemidir. Biz peptidler ve proteinler gibi biyomoleküllerin kütle spektrometresi için diğerleri arasında kullanabilirsiniz. DINeC olarak, örnek yüzeylerinden bozulmamış desorpsiyon molekülleri, bu moleküllerdeki ince kimyasal değişiklikler kütle spektrumlarında kolayca tespit edilir.
İşlem aşağıdaki simülasyonda gösterilmiştir. Gelen kümeler küme-yüzey etkisi ile paramparça olur. Yüzey izotop dipeptid küme parçalarından birinde çözülür ve bu işlem tarafından desorpted.
Deneyde, SO2 kümelerinin ışını darbeli bir memeden süpersonik genişleme ile üretilir. Küme yüzeyi etkisi sırasında çözünmüş ve iyonize olan moleküller kütle spektrometresi için iyon tuzağına aktarılır. Tipik kütle spektrumları sadece bozulmamış molekülün MO kümesi değerlerinde zirveleri gösterir.
Prosedürü gösteren Karolin Bomhardt ve Pascal Schneider, benim laboratuvarda iki doktora öğrencisi olacaktır. Standart numuneler için, yaklaşık 0,5 ila bir milimetre kalınlığında silikon gofretlerden yüzeyleri bir santimetre kare lik parçalar halinde kesin. Silikon yüzeyleri her biri 15 dakika boyunca etanol ve aseton dan oluşan bir ultrason banyosunda temizleyin.
Kuru azot gazı akışında yüzeyleri kurutun. Daha sonra, substrat üzerinde örnek çözeltinin 5 ila 30 mikrolitre döküm bırakın. Çözücünün buhar basıncına bağlı olarak, numunenin ortam koşullarında veya kurutucuda kurumasına izin verin, tüm çözücü buharlaşana ve kuru bir film oluşana kadar.
En basit hazırlık planını düşünün. Örnek olarak, vurgulayıcı mürekkesinin araştırılması için, alt tabaka yüzeyine bir nokta çizmemem. Numuneleri yapışkan bant veya vidalarla sıkılmış kelepçelerle numune tutucuya monte edin.
Ayrıca numune tutucuya anjiyotensin II'nin mikrometre kalınlığındaki filmi gibi bir referans numunesi monte edin. Ardından, yük kilidi sistemini havalandırmak için Vent yük kilidine basın. Beş dakika bekleyin, ya da atmosfer basıncına ulaşılana kadar.
Yük kilidini açın ve numune tutucuyu monte edin. Yük kilidini kapatın ve yük kilidi odasını negatif beş milibar'a iki kez 10'un altındaki bir basınca pompalayın. Vanayı DINeC odasına açın ve transfer çubuğu yla numune tutucuyu ana manipülatöre aktarın.
Örnek tutucuyu manipülatöre takın. Transfer çubuğunu geri alın ve yük kilidi ile DINeC haznesi arasındaki vanayı kapatın. Gaz silindiri ve meme arasındaki vanayı açın.
Gaz karıştırma sisteminin ana hatlarında sülfür dioksit ve helyum gazı karışımının basıncını 15 bar'a ayarlayın. Manipülatörün konumunu referans örneğinin konumuna ayarlayın. Katyonik kütle spektrumlarını ölçmek için, numune yi ve ızgara önyargısını artı 40 volta ve artı yedi volta ayarlayın.
Darbeli nozulu ve iyon kapanı kütle spektrometresini sürmek için harici fonksiyon jeneratörü iki Hertz'e ayarlayın. Gecikme jeneratörü ile iyon kapanından gelen açık tuzak sinyali ile darbeli meme için tetikleme sinyali arasındaki zaman gecikmesini beş milisaniyeye ayarlayın. Bruker kontrol yazılımında, ana diyalog penceresinin Mod sayfasında, Tetkik modu için Gelişmiş Çözünürlük'ü seçin.
Aralık için Z 50 ile 3000 arasında M yazın, birikim süresi için 0,1 milisaniye yazın, ortalama 10 döngü yazın ve polarite için katyonik kütle spektrumlarının ölçümü için pozitif ve anyonik spektrumların ölçümü için negatif'i seçin. DINeC haznesinde negatif altı milibar için üç kez 10 altında bir basınç ulaşıldı ktan sonra, ölçüm e başlayın. Zamana bağımlı kromatogram sinyalini takip etmek için M üzerinde Z değerini ilgili kütleye ayarlayın.
Denetim yazılımında Çalıştır'a basın. Kaydet düğmesine basarak ölçümleri kaydetmeye başlayın. Test spektrumu, Anjiyotensin II gibi bir referans örneğinden yaklaşık 300 saniye ölçün.
Net tuzak sinyali ile darbeli nozülü tetikleyen sinyal arasındaki zaman gecikmesini ayarlayarak sinyal yoğunluğunu optimize edin. Gecikme en iyi duruma getirilmişken, manipülatörü ölçülecek numunenin konumuna taşıyın. İlgi süresi içinde kütle spektrumları elde etmek için Kayıt düğmesine tıklayın.
Ölçüm tamamlandıktan sonra, referans ölçümü için burada gösterildiği gibi Veri Analizi programındailgili veri kümesini yükleyin. Farenin sağ tuşu ile kromatogramdaki ilgi süresini seçin. Ortalama spektrum ayrı bir pencerede görüntülenir.
Spektrumu tercih edilen bir programda daha fazla işleme için veri dosyası olarak dışa aktarmak için ASCII dosyası olarak Dışa Aktar'ı tıklatın. Anjiyotensin II örneğinden DINeC kütle spektrumu zamanla değişti ve numune yaklaşık 140 santigrat dereceye ısıtıldı. Sıcaklık son değere ulaştığında, Z'nin üzerinde bulunan M'de saldırıya uğrayan protinated molekülün zirvesi 1047'ye denk geldi ve yeni zirveler gözlendi.
İşlem bu üç grafikte özetlenmiştir. M'de Z'nin 932, 1012 ve 1029'a eşit ek zirveleri iyi gözlemlenmiştir. Reaksiyon kinetiğinin analizi, 1029'a eşit olan M'li varlığın, yoğunluk arttıkça ve daha sonra azaldıkça daha küçük parçalara ayrıştırılan bir ara olduğunu göstermektedir.
DINeC'in en önemli özellikleri desorpsiyon sürecinin yumuşak yapısı, verimliliği ve yüksek yüzey hassasiyetidir. Hepsi numune hazırlama ile ilgili düşük gereksinimleri ile bir araya gelir. DiNeC böylece organik kabuk malzemelerinden alt-monolayer bölgesindeki karmaşık yüzey adsorbatlarına kadar çok çeşitli numunelere uygulanabilir.
Her durumda, tam kimyasal bilgi gerçek zamanlı olarak elde edilebilir.
