Bu yöntem akut safra pankreatitinde meydana gelen enflamatuar olayların yeniden üretilmesi için kullanılabilir. Pankreas dokusundaki değişiklikleri erken evrelerinde incelemek mümkündür, bu da klinikte genellikle mümkün değildir. Bu tekniğin temel avantajları, eğitimli bir araştırmacı için hızlı ve kolay üremesi ve insanlarda akut pankreatit ile benzer sonuçlar sunmasıdır.
Yöntem, pankreas ve bitişik organlardaki enflamatuar aracılık eden hücrelerin incelenmesine izin verdiğinden, ilaç moleküllerinin farmakolojik immün yanıtlarını ve diğer terapötik müdahaleleri incelemek için kullanılabilir. Bu protokolü denerken, organların yerini belirlemek ve cannülasyon bölgesini kurmak çok önemlidir. Organların yerini ezberle ve önce metilen mavisi gibi renkli bir çözelti kullanarak enjeksiyon uygulamasını yapın.
Anestezinin derinliğini bir ayak parmağı sıkışması ile kontrol ettikten sonra, uyuşturulmış bir farenin karın bölgesini% 5 povidon iyot çözeltisi ile temizleyin. Bir düzeltici kullanarak, göğüs ve alt karın arasındaki saçları çıkarın ve yaklaşık iki santimetrekarelik bir cerrahi bölgeyi% 70 alkolle temizleyin. Hayvanı cerrahi tahtada hareketsiz hale getirmek ve cildin beş milimetresini karnın üst kısmında ve xiphoid işleminin bir santimetre altında yatay olarak kesmek için makas kullanın.
Laparotomiyi boşluğun minimum maruziyetiyle gerçekleştirmek için periton üzerindeki kesimi tekrarlayın. Bir retraktör kullanarak, karaciğeri bağırsaktan yaklaşık bir santimetre uzaklıktaki başa doğru çekin ve pankreasın ve duodenumun bölgesini bulun. Kümesleri kullanarak karaciğeri hayvan kafasına doğru kaldırın.
İnce bağırsağın kısmını hafifçe çekerek, ortak safra kanalının distal kısmının daha iyi görülmesi için iki yanal ucu 6-0 polipropilen dikişle sabitlayın. Bir mikro damar klipsi kullanarak, proksimal ortak safra kanalını geçici olarak tıkayın. Organı karın boşluğundan dışarı maruz bırak.
Sonra distal ortak safra kanalının geçici bir tıkanıklığını 8-0 ile yapın Dikiş. Ortak safra kanalına erişmek için, ince bağırsağın duvarının beyazımsı bir parçası olarak görünen periampullary bölgesini delin. 0,54 milimetre polietilen tüpe bağlı 0,4 milimetrelik bir iğne ile, infüzyon pompasını üç dakika boyunca 10 gram vücut ağırlığı başına 10 mikrolitre sabit bir hızda% 2,5 sodyum taurokolat çözelti infüzyonu için başlatın.
İnfüzyondan sonra, mikro kap klipsini çıkarın, geçici 8-0 dikiş ve pankreas safra kanalından enjeksiyon iğnesi. Karnı 6-0 nonabsorbent monofilament polipropilen dikiş ile dikin. Laparotomi ile son dikiş arasındaki süre 30 dakikadan fazla olmamalıdır.
Ameliyattan sonra, hayvanları odun talaşları ve su ve yiyecek reklam libitum ile kaplı polietilen kutularda barındırın. Hayvanı deri geri çekilmiş olarak hafifçe tutun, göz küresinin hafif bir çıkıntısını teşvik edin ve hayvanı gözü yukarı bakacak şekilde konumlandırın. Hayvanın gözüne lokal anestezi içeren bir damla göz merhemi aşıla.
Kılcal bir tüpün ucunu gözün medial köşesine yerleştirin ve yaklaşık 30 ila 45 derecelik bir açıyla göz küresinin altına hafifçe yerleştirin. Kan akışı başlayana kadar kılcal boruyu döndürün. Koleksiyon bittikten sonra göz kapaklarını hafif sıkıştırma ile kapalı tutarak homeostazdan emin olun.
Daha sonra, 27 kalibrelik bir iğne kullanarak, farenin periton boşluğuna dört mililitre buz gibi PBS enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, yapışık hücreleri çıkarmak için peritona 10 saniye boyunca hafifçe masaj yapın. Makas ve cımbız kullanarak, iç deride 0,5 santimetrelik küçük bir kesim yapın ve karın boşluğunu ortaya çıkarmak için kas yapın.
Peritona bir ampul pipet yerleştirin ve yağ dokusunu aspire etmemeye dikkat ederek mümkün olduğunca fazla sıvı toplayın. Daha fazla işlem için pankreasın bir kısmını baş bölgeden toplayın. Toplanan sıvıyı buzda tutulan tüplere biriktirin.
Daha sonra periton sıvısını beş dakika boyunca 250 kez G'de santrifüjleyin ve interlökin-6 dosing için süpernatantı stoklayın. Serum elde etmek için, toplanan kan örneklerini 15 dakika boyunca 700 kez G'de santrifüjleyin ve amilaz ve interlökin-6 dosing için süpernatantı stoklayın. Akut pankreatit indüksiyonundan 12 saat sonra pankreas dokusunun analizi, sham grubundan alınan doku örneklerine kıyasla etkilenen organda yoğun iltihaplanma olduğunu gösterdi.
Sham ve APTA'dan alınan doku örneklerinin hematoksilin eozin lekelenimi sonrasında histolojik inceleme ile benzer sonuçlar temsil edildi. Kan serumunun analizi, AP grubunda serum amilaz ve interlökin-6 sitokin konsantrasyonunda sham grubuna göre anlamlı bir artış olduğunu gösterdi. Aynı zamanda AP grubunda periton kavite sıvısında interleukin-6 konsantrasyonu anlamlı olarak daha yüksekti.
Bu modeldeki pankreatitin şiddeti orantılı olarak konsantrasyona, infüzyonun hacmine ve basıncına ve akut pankreatit indüksiyon süresine bağlıdır. Bu tekniğin yardımıyla sürekli periton lavajının şiddetli akut pankreatit üzerindeki etkileri incelenebilir.
