Bu yöntem, NIR-PIT'in torasik tümörler üzerindeki terapötik etkilerini klinik olarak ilgili bir tümör modelinde değerlendirmek için kullanılabilir. Plevral yayılımlı kanser modelini kullanan NIR-PIT işlemlerinin anlaşılması ve gerçekleştirilmesi kolaydır. Bir fare yayma modeli kurmak için, bir durdurucu yapmak için polistiren köpük kullanın ve% 70 etanol ile dezenfekte edin.
İğneyi, ucu stoperden beş milimetre uzatılarak stopere takın. 30 kalibrelik bir iğnenin ucunu temiz önps ile veya %70 etanol ile temizlenmiş sert bir nesneye karşı bükün ve bir şırıngayı 100 mikrolitre PBS'deki altı hedef tümör hücresine bir kere 10 ile doldurun. Uyuşturularak, 19 ila 21 gram, sekiz ila 12 haftalık, kadın, homozigot, athimik çıplak farede pedal refleksine tepki eksikliğini onaylayın.
Kaburgaların temas etmesini önlemek için iğneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek, iğneyi interkostal boşluktan göğsüne yerleştirin. Uç interkostal boşluktan geçtiğinde, şırınna fareye bastırıldığı şekilde konumlandırın ve hedef hücrelerin tüm hacmini enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, hücreleri torasik boşluğa yaymak için fareyi iki ila üç kez yuvarlayın ve fareyi tam iyileşmeye kadar izleyerek kafesine geri döndürün.
Hücre enjeksiyonundan 24 saat sonra ve bundan sonraki her gün, anestezi edilmiş tümör hücre enjeksiyonlu farelere mililitre başına 15 miligram D-luciferin başına 200 mikrolitre enjekte edin. 10 dakika sonra, fareleri bir biyolüminesans görüntüleyiciye yerleştirin ve görüntüleyici yazılımında Alım Kontrol Paneli'ni açın. Parlaklık, Fotoğraf ve Yer Paylaşımı'nın seçeneğini belirleyin.
Otomatik Pozlama Süresini, Binning'i Küçük'e, F/Stop'u Luminescent için bir ve Fotoğraf için sekize ve C'ye Görünüm Alanını ayarlayın.Biyolüminesansı görüntülemek için Edin'i tıklatın. Görüntü Biçimi'ni Radyan olarak ayarlayın ve Araç Paleti panelinde İlgi Alanı Araçları'ndan daireyi seçin. Yüzey biyolüminesansı yoğunluğunu ölçmek için İlgi Alanlarını Ölç'ü tıklatın ve denemeyle ilgili değerleri seçmek için Ölçümü Yapılandır'ı kullanın.
Bu veri tablosunu csv dosyası olarak verin. Ardından, dosyadaki biyolüminesan yoğunluk nicelemesi için toplam akı değerlerini kullanın. Tümör enjekte edilen farelerin kızılötesine yakın fototerapisini yapmadan önce, 690 nanometre dalga boyu lazerin ışık dozunu ölçmek için bir güç ölçer kullanın ve çıkışı santimetrekare başına 100 miliwatt'a ayarlayın.
Tedaviden 24 saat önce, tümör enjekte edilen hayvanın kuyruk damarı aracılığıyla 50 ila 200 mikrolitre PBS'de intravenöz olarak 100 mikrogram antikor ışığa duyarlılık konjugesi enjekte edildi. Fototerapi tedavisinin olduğu gün, anestezi konjuge enjekte edilmiş, tümör yüklü fareyi supine konumuna yerleştirin ve hedef olmayan bölgeleri alüminyum folyo ile siper edin. Tüm kalkanlar yerleştirildiğinde, torasik boşluğu yaklaşık 30 saniye boyunca kızılötesine yakın ışıkla ışınlamak için santimetrekare başına 100 joule lazer kullanın.
Işınlama tamamlandığında ve fare uyandığında, hayvanı kafesine geri döndürün ve gösterildiği gibi günlük biyolüminesansı ölçün. Bu temsili analizde, anti-podoplanin antikorunun IR700 ile konjugasyonu SDS-PAGE analizi ile doğrulanmıştır. Tümör hücre enjeksiyonundan sonra, hangi farelerin daha fazla çalışma için göğüs boşluğunda yeterli luciferaz aktivitesini ifade ettiğini belirlemek için biyolüminesans görüntüleme ve yaygın lüminesans görüntüleme tomografisi yapılmalıdır.
Enjeksiyondan sonraki beşinci günde, anti-podoplanin antikoru IR700 enjekte edilen fareler torasik tümörlerde yüksek IR700 floresan ve luciferaz aktivitesi gösterir ve bu da intravenöz olarak enjekte edilen IR700 konjuge antikorların yaygın plevral tümör bölgelerine ulaştığını gösterir. Özellikle, kızılötesine yakın fotoimmünoterapi ile tedavi edilen plevral yaygın fareler luciferaz aktivitesinde azalma gösterirken, kontrol grubundaki göreceli ışık birimleri yoğunlukta kademeli bir artış göstermektedir. Gerekli NIR ışınlama enerjisi hücre hattına ve antikorlara bağlı olduğundan, durumları önceden tüp bebek olarak kontrol etmeyi unutmayın.
