Bu protokol önemlidir, çünkü kornea iltihabını ve normal ve patolojik koşullar altında yara iyileşmesine katkısını incelemek için mükemmel bir modeldir. Bu tekniğin temel avantajı, bazal membranı ihlal etmeden hassas ve tekrarlanabilir bir epitel yarası oluşturmasıdır. Bu kornea yaralama modeli basit ve hızlı bir şekilde gerçekleştirilir.
Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora öğrencisi olan Prens Akowuah olacak. Başlamak için, bir mililitre steril salin veya PBS içinde 10 miligram sodyum floresein tuzu çözerek% 1'lik bir floresein çözeltisi hazırlayın. Daha sonra, anestezi için, iki mililitre ketamin, bir mililitre ksilazin ve yedi mililitre steril PBS karıştırarak 10 mililitre ketamin-ksilazin kokteyli hazırlayın.
8-12 haftalık C57 siyah 6 vahşi tip fareyi uyuşturduktan sonra, ayak parmağını sıkıştırdıktan sonra pedal refleksini değerlendirerek anestezi derinliğini değerlendirin. Epitel kornea yarası oluşturmak için, anestezi uygulanan fareyi diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Sadece sağ veya sol gözü sarın ve fareden fareye geçerken yaralanan gözle tutarlılığı koruyun.
Göz kapaklarını başparmak ve işaret parmağı ile tutarak gözü tamamen açık tutun. Daha sonra, iki milimetre çapında steril bir trefin kullanarak, korneanın merkezini sınırlayın ve kornea epiteli üzerinde bir izlenim bırakmak için trefin'i yavaşça döndürün. Aşırı basınç uygulamayın, çünkü bu kornea perforasyonuna neden olabilir.
Daha sonra, steril künt golf sopası püskürtülmesini kornea yüzeyinden yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutarak, spud'u kullanarak sınırlandırılmış alanda dikkatli ve sürekli kazıma ile epiteli debride debride edin. Aşırı kuvvet uygulamayın ve gerekirse steril PBS kullanarak hidrasyon sağlayın. Yara kapanmasını ve yeniden epitelizasyonu izlemek için, yaralı yüzeye 1 ila 1,5 mikrolitre% 1 floresein çözeltisi pipet yerleştirin ve mavi ışık kaynağına sahip dijital bir mikroskop kullanarak korneayı görüntüler.
Yaralı korneayı yaraladıktan sonra belirli zamanlarda görüntüleyin. Çözeltinin çevredeki epitele yayılmasını önlemek için floresan çözeltisinin ilk dakikasında görüntü alın, bu da yara boyutunun abartılmasına neden olabilir. Daha sonra, bir görüntü analiz yazılımı kullanarak, yara alanını izleyin ve her zaman noktasında yara alanını, sıfır saatte orijinal yara alanının bir yüzdesi olarak ifade edin.
Kornea yarasının iletim elektron mikrografisi, epitel bazal membranının yaralanmadan sonra bile bozulmadan kaldığını göstermektedir. 8 ila 12 haftalık vahşi tip farelerde, yara kapanması yaralanmadan 24 saat sonra tamamlanır. Yaralanmaya inflamatuar yanıt, limbusta hücre görüntüleme ile karakterizedir.
Burada ekstravasküler nötrofillere sahip yaralanmamış bir korneanın limbal vaskülatürü ve aşınmadan 30 saat sonra ekstravasküler trombositler ve nötrofiller ile yaralı bir korneanın vaskülatürü gösterilmektedir. Bu protokolü başarılı bir şekilde yeniden üretmek için, her fare aralığında aynı gerinim kullanılmalı ve yara boyutu ve derinliği açıklandığı gibi oluşturulmalıdır.
